PLOS ONE: Virus Epstein Barr e Helicobacter pylori Co-Infecção Positivamente está associada à gastrite grave em pacientes pediátricos

Abstract

Fundo

H. pylori
é adquirido durante a infância e provoca uma resposta inflamatória crônica na mucosa gástrica, que é considerado o principal fator de risco para adquirir câncer gástrico (GC) mais tarde na vida. Mais recentemente, a infecção pelo vírus Epstein-Barr (EBV), também têm sido associadas com GC. O papel do EBV nas respostas inflamatórias precoces e sua relação com a H. pylori
permanece pouco estudada. Aqui, nós avaliamos se a infecção por EBV em crianças correlacionados com o estágio de gastrite e se co-infecção com o H. pylori
afetou a gravidade da inflamação.

Metodologia /Principais Achados

333 pacientes pediátricos com dor abdominal crônica foram estudados. A partir deles, biópsias gástricas foram tomadas e inflamação classificados de acordo com o sistema de Sydney; sangue periférico foi tirado e anticorpos contra o EBV (IgG e IgM anti-VCA) e H. pylori
(IgG anti-bactérias inteiras e anti-CagA) foram medidos em soros. Descobrimos que crianças infectadas somente pelo EBV apresentado mononuclear leve (MN) e infiltração de células nenhum polimorfonucleares (PMN), enquanto os infectados pelo H. pylori
apresentado MN moderada e PMN suave. Em contraste, os pacientes co-infectados com ambos os patógenos foram significativamente associados com gastrite grave. É importante ressaltar que a co-infecção de H. pylori
CagA + /EBV + teve uma forte associação com MN severa (PR 3.0) e células PMN (PR 7,2) do que os casos com um único H. pylori
CagA + infecção.

Conclusões /Significado

Co-infecção com EBV e H. pylori
em pacientes pediátricos está associado com gastrite grave. Mesmo infecções simples com H. pylori
CagA + cepas são associadas com ligeira a moderada infiltração argumentando para um efeito cooperativo de H. pylori Comprar e EBV na mucosa gástrica e revelando um papel crítico para o EBV previamente un-apreciado. Este estudo aponta para a necessidade de estudar ambos os patógenos para entender o mecanismo por trás danos graves da mucosa gástrica, o que poderia identificou crianças com risco aumentado de apresentar lesões mais graves mais tarde na vida

Citation:. Cárdenas-Mondragón MG , Carreón-Talavera R, Camorlinga-Ponce M, Gomez-Delgado a, Torres J, Fuentes-panana eM (2013) Virus Epstein Barr e Helicobacter pylori
Co-Infecção estão associados positivamente com gastrite grave em pacientes pediátricos . PLoS ONE 8 (4): e62850. doi: 10.1371 /journal.pone.0062850

editor: Yoshio Yamaoka, Veterans Affairs Medical Center (111D), Estados Unidos da América

Recebido: 26 Dezembro, 2012; Aceito: 26 de março de 2013; Publicação: 24 de abril de 2013

Direitos de autor: © 2013 Cárdenas-Mondragón et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este estudo foi parcialmente apoiado pela FIS concessão /IMSS /PROT /G2011 /941 (para MG Cárdenas-Mondragón) do Fondo de Investigación en Salud (FIS) -IMSS, e concede 178199 (para MGC-M) e 69450 (J. Torres ) de CONACYT. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

infecções persistentes muitas vezes levam à inflamação crónica, um fator de risco de câncer bem documentada. O câncer gástrico (GC) geralmente começa com um processo inflamatório, principalmente associada à infecção pelo Helicobacter pylori
( H. pylori
) [1]. GC é o quarto tipo de câncer mais comum ea segunda causa de morte por câncer de países em todo o mundo, afetando particularmente asiáticos e latino-americanos [2]. Mais recentemente, a GC também tem sido associada com o vírus de Epstein-Barr (EBV), mas o papel da infecção viral em respostas inflamatórias gástricas inicial permanece pouco estudada.

H. pylori
infecta mais de 50% da população mundial, com maior prevalência nos países em desenvolvimento. A infecção é geralmente adquirida no início da vida; no México, cerca de 50% das crianças são infectadas pela idade de 10 [3]. A inflamação após a infecção nas crianças é normalmente associada com um baixo nível de polimorfonucleares (PMN) e células mononucleares (MN) infiltração na mucosa gástrica [4]. Tem sido sugerido que o anterior a infecção, maior o risco de apresentar GC mais tarde na vida, porque concebível de uma longa duração (décadas) reacção inflamatória crónica a infecção [5].

Apenas uma fracção H. pylori
indivíduos infectados desenvolvem a doença gastroduodenal: < 15% úlcera péptica, < 3% GC e < 1% linfoma MALT [6]. O resultado da H. pylori
depende também do ambiente, do hospedeiro e fatores bacterianos. Entre os mais importantes fatores de virulência bacteriana é a ilha de patogenicidade (cagPAI), que codifica um sistema de secreção do tipo IV (T4SS), que efectua a translocação do CagA proteínas efetoras em células epiteliais [7]. CagA activa múltiplas vias de sinalização que desencadeiam fenótipos celulares associados com transformação oncogénica [7]. Além disso, os ratinhos transgénicos que expressam CagA desenvolver adenocarcinomas do tracto digestivo. Com base nestes dados, CagA foi reconhecido como o primeiro oncoproteína bacteriana conhecida [8], [9].

a infecção por VEB tem sido consistentemente associada com vários tipos de linfoma, carcinoma nasofaríngeo (CNP) [10], [11] e, mais recentemente, a GC [12], [13], [14]. infecção por EBV também ocorre no início da infância e geralmente persiste nas células B, com a maioria dos indivíduos infectados que transportam o vírus assintomaticamente num estágio latente nestas células. Não é claro quando EBV infecta a mucosa gástrica e se a infecção induz uma reacção inflamatória, tal como observado com H. pylori
. Reactivação de EBV a partir de células B infectadas tem sido proposto para facilitar a infecção da face basolateral do epitélio [15]. Neste cenário, tem sido proposta a título de anticorpos anti-EBV contra as proteínas estruturais correlacionar-se com o nível de reactivação virai e, como um marcador de prognóstico na NPC [10], [16], [17].

para nosso conhecimento, não há estudos têm abordado anteriormente se a infecção por EBV em crianças está associada com inflamação na mucosa gástrica ou se existe um efeito cooperativo entre EBV e H. pylori
correlacionando-se com a severidade da reacção inflamatória. Neste estudo, foram analisados ​​os anticorpos contra EBV e H. pylori
em soros de pacientes pediátricos com dor abdominal crônica. Nossos resultados sugerem fortemente que a infecção única por qualquer EBV ou H. pylori
está associado com uma ligeira a moderada resposta inflamatória na mucosa gástrica; No entanto, a co-infecção com ambos os agentes patogénicos está significativamente associado com gastrite grave. Mesmo infecção com o H. pylori
cag + estirpes não está associada com respostas inflamatórias graves na ausência de EBV. Estes dados argumentar a favor de um papel crítico previamente desconhecida de infecção EBV na indução de uma resposta inflamatória na mucosa gástrica de crianças.

Materiais e Métodos

Ética Declaração

A Comissão de Ética Nacional IMSS aprovado este projeto. Os pais ou responsáveis ​​pelos pacientes foram informados sobre a natureza do estudo e aqueles dispostos a participar assinaram um termo de consentimento informado antes da coleta da amostra.

Visão geral

População do estudo.

o estudo incluiu 333 pacientes pediátricos (0-17 anos de idade) participaram causa de recorrentes dores abdominais na unidade de Gastroenterologia, Hospital pediátrico do Centro Medico Nacional SXXI, Instituto Mexicano del Seguro social (IMSS), na Cidade do México, entre setembro 1994 e outubro de 2001. As crianças foram submetidas a endoscopia e anatomia patológica foram retirados do antro e do corpo para o diagnóstico histopatológico. sangue periférico também foi elaborado e os soros foram armazenadas a -80 ° C até serem testados para detecção de anticorpos.

Os dados coletados.

Os dados sociodemográficos e informação clínica foi registrado em questionários no momento da inclusão. As informações coletadas foram: idade, sexo, sintomas clínicos e diagnóstico clínico baseado na endoscopia, histologia e apresentação clínica. Pacientes com antibiótico, inibidor de bomba de próton ou tratamentos antiacid três semanas anteriores à coleta das amostras foram excluídos do estudo.

métodos laboratoriais

O exame histopatológico.

Duas amostras de biópsia foram obtidos a partir de antro e duas do corpo gástrico. Uma biópsia foi usado para H. pylori
cultura ea segunda foi utilizada para exame histológico. Uma biópsia do antro e um do corpus foram fixados em formol e coradas com hematoxilina e eosina (HE) embebidos em parafina. A resposta inflamatória foi classificada de acordo com o sistema de Sydney [18] por um único patologista experiente. Os parâmetros avaliados foram H. pylori
infiltração de células positividade, polimorfonucleares e mononucleares, que foram classificados comparando com diagramas publicados (escalas analógicas). Infiltração por polimorfonucleares e mononucleares foi graduada de ausente a severa em ambos corpo e antro, eo site com a infiltração maior foi considerado como o resultado final.

Recolha de sangue.

Uma amostra de sangue venoso (4 ml) foi retirada de todos os pacientes. armazenadas amostras de soro foram usadas para analisar os anticorpos IgG e IgM contra a proteína da cápside virai do EBV (VCA), bem como anticorpos de IgG contra o H. pylori
extractos de células completas e contra a proteína CagA por ensaio imunossorvente ligado a enzima (ELISA).

Determinação de anticorpos anti-EBV VCA.

os anticorpos anti-EBV foram determinados utilizando VCA ELISA comercial (HUMANO; Wiesbaden, Alemanha), para IgG anti-VCA (catálogo 51204) e de IgM anti-VCA (catálogo 51104) seguindo as instruções do fabricante. Resumidamente, 100 ul de uma diluição adequada de soro do paciente (1: 100 para IgM e IgG para 1:20) foram depositadas na cavidade correspondente com o antigénio VCA já ligado, e incubou-se durante 1 hora (IgG) ou 30 min (IgM ) a 25 ° C. Em seguida, as cavidades foram lavadas quatro vezes com tampão de lavagem e foram adicionados e incubados durante 30 min a 25 ° C 100 ul de IgG anti-humana conjugada com peroxidase de coelho ou um anticorpo IgM. As placas foram depois lavadas cinco vezes e 100 ul de reagente de substrato (3,3 ', 5,5' tetrametilbenzidina (TMB) - peróxido de hidrogénio) foram adicionados e incubados durante 15 min a 25 ° C no escuro. A reacção foi então parada com 100 uL de solução de paragem (ácido sulfúrico 0,5 mol /L) e as placas foram lidas num leitor de ELISA (Thermoscientific, Multiskan Ascent) a uma absorvância de 450 nm. O valor registado é a média de dois ensaios independentes. Um subgrupo de amostras foi feito em quadruplicado utilizando-se diferentes lotes do kit ELISA para verificar a reprodutibilidade. Cálculos para títulos de anticorpo foram efectuados de acordo com as instruções do fabricante e os valores são reportados como HU unidades /ml. Um paciente era considerado EBV seropositivos quando soros foram positivos para ambos os anticorpos IgG IgM e /ou.

Determinação de anticorpos anti-toda H. pylori
extratos e anti-CagA.

anticorpos IgG contra H. pylori Comprar e CagA foram determinados utilizando ELISA previamente validado em uma população mexicana [19]. Os poços foram revestidas quer com um extracto de uma mistura sonicada de três H. pylori
estirpes isoladas a partir de pacientes mexicanos (0,5 ug /alvéolo em 100 ul de tampão carbonato, pH 9,6) ou com CagA recombinante (0,1 ug /poço no mesmo tampão como acima) e incubou-se a 4 ° durante a noite. Em seguida, as placas foram bloqueadas com 200 ul de PBS-gelatina (0,1%) para H. pylori
todo o extracto e com PBS-leite (2.5%) para CagA e incubadas a 4 ° durante a noite. Os soros foram diluídos 1: 1000 para H. pylori
e 1: 200 para CagA e 100 uL foram adicionados por poço e incubados durante uma hora a 37 ° C. Cem ul de uma diluição 1: 1000 do anticorpo anti-IgG humana com fosfatase alcalina foram adicionados e as placas foram incubadas durante 30 min à temperatura ambiente, seguido de 100 ul de substrato de p-nitrofenilfosfato (Sigma conjugado anticorpo-; St. Louis MO EUA. 2770) em tampão de glicina-MgCl 2-ZnCl. As placas foram lidas num leitor de ELISA a uma absorvência de 405 nm. Todas as amostras foram analisadas em duplicado e cada placa incluía quatro positivos e quatro amostras de soro negativas. Os pacientes foram considerados positivos para H. pylori
quando as unidades de ELISA foram ≥1.0, e por CagA quando as unidades de ELISA foram ≥1.5, de acordo com os pontos de corte validados [19].

Análise Estatística

As diferenças estatísticas de variáveis ​​contínuas entre os grupos de pacientes foram determinados com t
teste de Student ou com o teste de Mann-Whitney para variáveis ​​não distribuídos normalmente. As diferenças entre os três ou mais variáveis ​​contínuas foram comparadas por ANOVA de uma via, seguido pelo teste de Bonferroni, ou pelo teste de uma forma de Kruskal-Wallis, seguido do teste de Mann-Whitney. As diferenças entre as variáveis ​​categóricas foram estimadas usando o qui-quadrado ( X ^{2
) teste com correção de continuidade de Yate ou o teste exato de Fisher para pequenas amostras. As variáveis ​​com mais de duas categorias foram analisados ​​utilizando Mantel-Haenszel X 2
com tendência linear. A significância estatística foi fixado em p ≤ 0,05. A força das associações entre os grupos do grau de inflamação e IgG anti-VCA foram estimadas usando razões de prevalência (RP) e intervalos de confiança de 95% (IC).}

Resultados

Características dos pacientes estudados

333 amostras gástricas de pacientes pediátricos com dor abdominal crônica foram estudados, 197 (59,2%) eram do sexo feminino e 136 (40,8%) do sexo masculino com idade média e mediana de 10,1 ± 3,7 (média ± SD) e 10 anos , respectivamente ( Table
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