PLOS ONE: Virus de Epstein Barr y el Helicobacter pylori Co-Infección Positivamente se asocian con gastritis aguda en pacientes pediátricos

Extracto

Antecedentes

H. pylori
infección se adquiere durante la infancia y causa una respuesta inflamatoria crónica en la mucosa gástrica, que se considera el factor de riesgo principal para adquirir el cáncer gástrico (GC) más tarde en la vida. Más recientemente, la infección por el virus de Epstein-Barr (EBV) también se han asociado con GC. El papel del VEB en las respuestas inflamatorias tempranas y su relación con H. pylori
la infección sigue siendo poco estudiada. A continuación, se evaluó si la infección por VEB en niños correlacionados con la etapa de la gastritis y si la coinfección con H. pylori
afectó a la gravedad de la inflamación.

Metodología /Principales conclusiones

333 pacientes pediátricos con dolor abdominal crónico fueron estudiados. De ellos, se tomaron biopsias gástricas e inflamación clasifican de acuerdo con el sistema de Sydney; sangre periférica fue dibujado y anticuerpos contra EBV (IgG e IgM anti-VCA) y H. pylori
(bacterias anti-IgG enteros y anti-CagA) se midieron en el suero. Se encontró que los niños infectados por el VEB sólo se presentan leves mononucleares (MN) y la infiltración de células polimorfonucleares ninguno (PMN), mientras que los infectados por H. pylori
presentó MN moderada y leve PMN. Por el contrario, los pacientes coinfectados con ambos patógenos se asociaron significativamente con la gastritis severa. Es importante destacar que la co-infección de H. pylori CagA +
/VEB + tuvo una asociación más fuerte con MN severa (PR 3.0) y las células PMN (PR 7,2) que en los casos con un solo H. pylori CagA +
infección.

Conclusiones /Importancia

Co-infección con EBV y H. pylori Hoteles en pacientes pediátricos está asociado con la gastritis severa. Incluso las infecciones simples con H. pylori CagA + cepas
están asociados con leve a moderada infiltración de argumentar a favor de un efecto cooperativo de H. pylori
y EBV en la mucosa gástrica y revelando un papel crítico para EBV previamente no apreciado. Este estudio señala la necesidad de estudiar ambos patógenos para entender el mecanismo detrás de un daño severo de la mucosa gástrica, lo que podría identificar a los niños con mayor riesgo de presentar lesiones más graves más adelante en la vida

Visto:. Cárdenas-Mondragón MG , Carreón-R Talavera, Camorlinga Ponce-M, Gómez-Delgado a, Torres J, Fuentes-panana EM (2013) Virus de Epstein Barr y Helicobacter pylori &Co-Infección están positivamente con gastritis severa en pacientes pediátricos . PLoS ONE 8 (4): e62850. doi: 10.1371 /journal.pone.0062850

Editor: Yoshio Yamaoka, Veterans Affairs Medical Center (111D), Estados Unidos de América

Recibido: 26 Diciembre, 2012; Aceptado: March 26, 2013; Publicado: 24 Abril 2013

Derechos de Autor © 2013 Cárdenas-Mondragón et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan

Financiación:. Este estudio fue parcialmente apoyado por beca FIS /IMSS /PROT /G2011 /941 (MG Cárdenas-Mondragón) del Fondo de Investigación en Salud (FIS) -IMSS y subvenciones 178.199 (al MGC-M) y 69450 (a J. Torres ) del CONACYT. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito

Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia

Introducción

Las infecciones persistentes a menudo conducen a la inflamación crónica, un factor de riesgo de cáncer bien documentado. El cáncer gástrico (CG) generalmente comienza con un proceso inflamatorio asociado principalmente con la infección por Helicobacter pylori gratis ( H. pylori
) [1]. GC es el cuarto tipo de cáncer más común y la segunda causa de muerte por cáncer en todo el mundo, que afecta en particular los países de Asia y América Latina [2]. Más recientemente, GC también se ha asociado con el virus de Epstein-Barr (EBV), pero el papel de la infección viral en las respuestas tempranas gástricas inflamatorias sigue siendo poco estudiada.

H. pylori
infecta a más del 50% de la población mundial, con una mayor prevalencia en los países en desarrollo. La infección se adquiere generalmente temprano en la vida; en México, alrededor del 50% de los niños están infectados por la edad de 10 años [3]. La inflamación después de la infección en los niños se asocia generalmente con un bajo nivel de polimorfonucleares (PMN) y células mononucleares (MN) la infiltración de la mucosa gástrica [4]. Se ha sugerido que el anterior la infección, mayor es el riesgo de presentar GC más tarde en la vida, concebible debido a una larga duración (décadas) reacción inflamatoria crónica a la infección [5].

Sólo una fracción de H. pylori
individuos infectados desarrollan la enfermedad gastroduodenal: < 15% de la úlcera péptica, < 3% GC y < 1% linfoma MALT [6]. El resultado de H. pylori
la infección depende también del medio ambiente, factores del huésped y bacterianas. Entre los más importantes factores de virulencia bacteriana es la isla de patogenicidad (cagPAI), que codifica un sistema de secreción tipo IV (T4SS) que transpone al CagA proteína efectora en células epiteliales [7]. CagA activa múltiples vías de señalización de disparo fenotipos celulares asociados con la transformación oncogénica [7]. Por otra parte, los ratones transgénicos que expresan CagA desarrollan adenocarcinomas del tracto digestivo. Sobre la base de estos datos, CagA ha sido reconocida como la oncoproteína bacteriana primero conocido [8], [9].

infección por EBV se ha asociado sistemáticamente con varios tipos de linfoma, carcinoma nasofaríngeo (NPC) [10], [11] y más recientemente a GC [12], [13], [14]. la infección por VEB también se produce en la primera infancia y por lo general persiste en las células B, con la mayoría de los individuos infectados que llevan el virus de forma asintomática en una etapa latente en estas células. No está claro cuando EBV infecta la mucosa gástrica y si la infección induce una reacción inflamatoria, como se observa con H. pylori
. EBV reactivación de células B infectadas se ha propuesto para facilitar la infección de la cara basolateral del epitelio [15]. En ese escenario, se ha propuesto el título de anticuerpos anti-EBV contra proteínas estructurales que se correlaciona con el nivel de la reactivación viral y como marcador pronóstico en NPC [10], [16], [17].

Hasta donde sabemos, ningún estudio ha abordado con anterioridad si la infección por VEB en niños se asocia con inflamación en la mucosa gástrica o si existe un efecto cooperativo entre EBV y H. pylori
en correlación con la gravedad de la reacción inflamatoria. En este estudio, se analizaron los anticuerpos contra el VEB y el H. pylori
en el suero de los pacientes pediátricos con dolor abdominal crónico. Nuestros resultados sugieren fuertemente que la infección por EBV ya sea sola o por H. pylori
se asocia con una leve a moderada respuesta inflamatoria en la mucosa gástrica; Sin embargo, la coinfección por ambos patógenos se asoció significativamente con la gastritis severa. Incluso la infección por H. pylori
cagA + cepas no está asociada con las respuestas inflamatorias graves en la ausencia de EBV. Estos datos abogan por un papel crítico hasta ahora desconocido de la infección por VEB en la inducción de una respuesta inflamatoria en la mucosa gástrica de los niños.

Materiales y Métodos

Ética Declaración

La Comité de Ética de Investigación Nacional del IMSS aprobó este proyecto. Los padres o tutores de los pacientes fueron informados sobre la naturaleza del estudio y de las personas que participan firmado un consentimiento informado por escrito antes de la toma de la muestra.

Información general del

Estudio de la población.

el estudio incluyó a 333 pacientes pediátricos (0-17 años) asistieron a causa de dolor abdominal recurrente en la unidad de Gastroenterología, hospital de pediatría del Centro Médico Nacional SXXI, Instituto Mexicano del Seguro Social (IMSS), en la Ciudad de México, entre septiembre de 1994 y octubre de 2001. Los niños fueron sometidos a endoscopia y biopsia gástrica se tomaron de antro y cuerpo para el diagnóstico histopatológico. La sangre periférica también se elaboró ​​y los sueros fueron almacenados a -80 ° C hasta su análisis para determinar anticuerpos. recogieron

Datos.

Los datos sociodemográficos e información clínica fue registrada en los cuestionarios en el momento de la inclusión. La información recogida incluyó la edad, el sexo, los síntomas clínicos y el diagnóstico clínico basado en la endoscopia, histología y la presentación clínica. Los pacientes con antibióticos, inhibidores de la bomba de protones o antiácidos tratamientos de tres semanas anteriores a la recogida de muestras fueron excluidos del estudio.

Métodos de Laboratorio

El examen histopatológico.

Se obtuvieron dos muestras de biopsia a partir de antro y dos del cuerpo gástrico. Una biopsia se utilizó para H. Francia culture pylori y el segundo se utilizó para su examen histológico. Una biopsia del antro y uno del corpus fueron fijadas en formalina, embebido en parafina y teñidas con hematoxilina y eosina (HE). La respuesta inflamatoria se clasificó de acuerdo con el sistema de Sydney [18] por un único patólogo experimentado. Los parámetros evaluados fueron H. pylori
positividad, polimorfonucleares y mononucleares de infiltración de células, que se clasifica la comparación con los diagramas publicados (escalas analógicas). Infiltración de células polimorfonucleares y mononucleares se clasificó estar ausentes o severa en ambos corpus y el antro, y el sitio con la mayor infiltración fue considerado como el resultado final.

Colección de sangre.

Una muestra de la sangre venosa (4 ml) se obtuvo de todos los pacientes. muestras de suero almacenados se utilizaron para analizar los anticuerpos IgG e IgM contra EBV proteína de la cápside viral (VCA), así como anticuerpos IgG contra H. pylori
extractos de células enteras y contra la proteína CagA por inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA).

Determinación de anticuerpos anti-EBV VCA.
se determinaron

Los anticuerpos anti-EBV VCA utilizando ELISA kits comerciales (HUMANA; Wiesbaden, Alemania), para IgG anti-VCA (catálogo 51204) y para IgM anti-VCA (catálogo 51104) siguiendo las instrucciones del fabricante. Brevemente, 100 l de la dilución de suero paciente apropiado (1: 100 para IgM y 1:20 para IgG) se depositaron en el correspondiente pocillo con el antígeno VCA ya unido, y se incubaron durante 1 hora (IgG) o 30 min (IgM ) a 25 ° C. A continuación, los pocillos se lavaron cuatro veces con tampón de lavado, y se añadieron y se incubaron durante 30 min a 25 ° C 100 l de IgG anti-humana conjugada con peroxidasa o anticuerpo de conejo IgM. Después las placas se lavaron cinco veces y 100 l de reactivo de sustrato - se añadieron y se incubaron durante 15 min a 25 ° C en la oscuridad (3,3 ', 5,5' tetramethylbenzidin (TMB) de peróxido de hidrógeno). Después, la reacción se detuvo con 100 l de solución de parada (ácido sulfúrico 0,5 mol /L) y las placas se leyeron en un lector de ELISA (Thermoscientific, ascenso multiskan) a una absorbancia de 450 nm. El valor informado es la media de dos ensayos independientes. Un subgrupo de las muestras se realizó por cuadruplicado utilizando diferentes lotes del kit de ELISA para comprobar la reproducibilidad. Los cálculos para los títulos de anticuerpos se realizaron de acuerdo con las instrucciones del fabricante y los valores se presentan como HU unidades /ml. Un paciente fue considerado VEB seropositivos cuando los sueros dio positivo por cualquiera de los anticuerpos IgM IgG y /o.

Determinación de anticuerpos anti-toda H. pylori
extractos y anti-CagA.

anticuerpos IgG contra H. Opiniones y pylori CagA se determinaron mediante pruebas ELISA previamente validado en una población mexicana [19]. Los pocillos se recubrieron ya sea con un extracto sonicado de una mezcla de tres H. pylori
cepas aisladas de pacientes mexicanos (0,5 mg /pocillo en 100 l de tampón de carbonato pH 9,6) o con CagA recombinante (0,1 mg /pocillo en mismo tampón como anteriormente) y se incubaron a 4 ° durante la noche. A continuación, las placas se bloquearon con 200 l de PBS-gelatina (0,1%) para H. pylori
todo el extracto y con PBS-leche (2,5%) para CagA y se incubaron a 4 ° durante la noche. Los sueros se diluyeron 1: 1000 para H. pylori
y 1: 200 para CagA y 100 l se añadieron por pocillo y se incubaron durante una hora a 37 ° C. El cien por l de una dilución 1: 1000 del anticuerpo anti-IgG humana de anticuerpo conjugado con fosfatasa alcalina se añadieron y las placas se incubaron durante 30 min a temperatura ambiente, seguido de 100 l de sustrato de p-nitrofenilfosfato (Sigma; St. Louis MO EE.UU.. Nº 2770) en tampón de glicina-MgCl2-ZnCl. Las placas se leyeron en un lector de ELISA a una absorbancia de 405 nm. Todas las muestras se analizaron por duplicado y cada placa incluye cuatro positivos y cuatro muestras de suero negativas. Los pacientes fueron considerados positivos para H. pylori anticuerpos
cuando las unidades de ELISA fueron ≥1.0, y para CagA cuando las unidades de ELISA fueron ≥1.5, de acuerdo con los puntos de corte validados [19].

Análisis estadístico

Las diferencias estadísticas de las variables continuas entre los grupos de pacientes se determinaron con t
test de Student o la prueba de Mann-Whitney para las variables no distribuidas normalmente. Las diferencias entre los tres o más variables continuas se compararon mediante ANOVA de una vía, seguido del test de Bonferroni, o por la prueba de una vía de Kruskal-Wallis, seguido de la prueba de Mann-Whitney. Se estimaron las diferencias entre las variables categóricas mediante la chi cuadrado ( X ^{2
) prueba con corrección de continuidad de Yate o la prueba exacta de Fisher para muestras pequeñas. Las variables con más de dos categorías fueron analizados mediante el Mantel-Haenszel X 2
con tendencia lineal. La significación estadística se fijó en p = 0.05. La fuerza de las asociaciones entre los grupos del grado y la inflamación IgG anti-VCA se calcula utilizando las razones de prevalencia (RP) y los intervalos de confianza del 95% (IC).}

Resultados

Características de los pacientes estudiados

se estudiaron 333 muestras gástricas de pacientes pediátricos con dolor abdominal crónico, 197 (59,2%) eran mujeres y 136 (40,8%) varones con una edad media y la mediana de 10,1 ± 3,7 (media ± dE) y 10 años , respectivamente ( Tabla
1

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