PLoS ONE: isocitrat dehydrogenase av Helicobacter pylori Potensielt induserer humoral immunrespons hos pasienter med mavesår og Gastritis

Abstract

Bakgrunn

H. pylori
forårsaker gastritt og peptisk ulcus og er en risikofaktor for utvikling av gastrisk karsinom. Mange av proteiner, slik som urease, poriner, flagelliner og toksiner slik som lipo-polysakkarider er blitt identifisert som mulige virulensfaktorer som induserer proinflammatorisk reaksjon. Vi rapporterer immunogene potensial isocitrat dehydrogenase (ICD), en viktig huset protein fra H. pylori
.

metodikk /hovedfunnene

aminosyresekvenser H. pylori
ICD ble utsatt for i silico
analyse for regioner med forutsigbart høye antigene indekser. Også, beregningsorientert modellering av H. pylori
ICD som sidestilt til E. coli
ICD ble utført for å bestemme nivåer av struktur likhet og tilgjengeligheten av overflate utsatt motiver, hvis noen. ICD
genet ble klonet, uttrykt og renset til en meget høy homogenitet. Humoral respons rettet mot H. pylori
ICD ble detektert ved en enzymbundet immunosorbent assay (ELISA) i 82 forsøkspersoner som består av 58 pasienter med H. pylori
assosiert gastritt eller ulcus sykdom og 24 asymptomatiske friske kontroller. H. pylori
ICD fremkalte potensielt høy humoral immunrespons og avdekket høye antistofftitre i sera tilsvarer endoskopisk bekreftede gastritt og ulcussykdom fag. Men gjorde urea-pust-test negative sunt kontrollprøver og asymptomatiske kontrollprøver viste ingen påvisbare immunresponser. ELISA for proinflammatorisk cytokin IL-8 viste ikke noen signifikant proinflammatory aktivitet av ICD.

Konklusjon /Betydning

ICD av H. pylori
er en immunogen som samhandler med vertens immunsystem etter at en eventuell autolyse-release og dermed vesentlig utløser humorale responser hos individer med invasiv H. pylori
infeksjon. Men ICD kunne ikke signifikant stimulere IL8 induksjon i en kultivert makrofagcellelinjen (THP1) og kan derfor ikke være en bemerkelsesverdig proinflammatoriske middel

Citation. Hussain MA, Naveed SA, Sechi LA, Ranjan S, Alvi A, Ahmed I, et al. (2008) isocitrat dehydrogenase av Helicobacter pylori
Potensielt induserer humoral immunrespons hos pasienter med magesår og gastritt. PLoS ONE 3 (1): e1481. doi: 10,1371 /journal.pone.0001481

Academic Redaktør: Keertan Dheda, University College London, Storbritannia

mottatt: 29 august 2007; Godkjent: 24 desember 2007; Publisert: 23 januar 2008

Copyright: © 2008 Hussain et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres

Finansiering:. Finansiering fra CDFD Kjerne Grants (Institutt for bioteknologi, Government of India)

konkurrerende interesser:. forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer

Innledning

Helicobacter pylori
er en Gram negativ, buet bakterie som etablerer kroniske infeksjoner i menneskelige magen. Det er en viktig patogen som er antatt å ha utviklet seg sammen med mennesker [1], [2]. Det holder til omtrent halvparten av verdens befolkning, og er ansett som en potensiell risikofaktor for utvikling av adenokarsinom i ventrikkel [3]. H. pylori
er en anerkjent årsak til kronisk gastritt, magesår sykdom, mage karsinom, og slimhinne-assosiert lymfoid vev (MALT) lymfom. Flere mekanismer har blitt foreslått for å forklare dens rolle i patogenesen av tarmen. Til tross for høye koloniseringsrate bare en liten del av infiserte mennesker opplever H. pylori
-associated sykdommer [2]. Sammenslutninger av H. pylori
med sykdomsspesifikke faktorer har holdt seg mer eller mindre gåtefull selv om genomsekvenser ble dechiffrert nesten et tiår siden [2].

En av de mest karakteristiske trekk ved H. pylori
er det genetiske mangfoldet mellom kliniske isolater hentet fra ulike pasientpopulasjoner [3]. Omstøping av genomet er normen med denne bakterien, og skaper derved en rekke allelisk og fasevariasjon [3], utgjør vanskeligheter ved utvikling av diagnostikk og vaksiner.

Når ervervet, fortsetter infeksjon i flere år og, utløser detekterbare immunresponser hos infiserte personer [4], [5], karakterisert ved økte nivåer av spesifikk IgG og IgA i serum og styrking av sekretorisk IgA og IgM i magen [6]. Derfor ble ikke-invasiv serologiske tester anbefalt og utviklet for diagnostisering av H. pylori
infeksjon. Blant disse er den enzymbundet immunosorbent assay (ELISA) er en av de mest brukte metode som det er forholdsvis rimelig, rask og enkel å utføre, og kan lett bli tilpasset for screening av store antall prøver [7]. Utforske for anti H. pylori
antistoffer er ofte foreskrevet før endoskopi eller før oppstart av behandling. Selv om det på grunn av immunologisk hukommelse, kan serodiagnosis ikke være foretrukket å kontrollere den suksess eller utfallet av utrydding behandling, er det fortsatt et valg som en følsom metode sannsynligvis på grunn av dets ikke-invasive karakter [8].

For tiden er der har ikke vært noen enkel "gullstandard" antigen, som entydig kan brukes på tvers av alle befolkningsgrupper. En av de viktigste årsakene til dette kan være den ekstraordinære mangfold stede i H. pylori product: [9] - [13], og også dens spesifikke tilpasning i ulike verter [12], [13]. Selv om proteiner, slik som katalase, gro i El, og flagellin er sterkt immunogene, gir de ikke-spesifikke kryssreaksjoner med andre Gram-negative bakterier, og mer spesielt, Campylobacter jejuni product: [14], [15]. I kontrast, virulens knyttet antigener som CagA eller Vaca, viser en ganske høy grad av sekvens variasjon, som det finnes H. pylori
stammer som er genetisk forskjellige og fenotypisk variabel for en eller begge antigenene [16] - [18]. Til tross for dette, har tilfredsstillende assosiasjoner mellom antistoffer og invasiv sykdom blitt beskrevet [19].

Rengjøring gener av H. pylori
har blitt brukt til å spore nylig populasjons migreringer, og ble funnet å være stabil i genomet over hundre år [20]. Rengjøring proteiner har imidlertid ikke blitt testet i det store og for deres bruk i diagnostikk eller vaksiner. De metabolske enzymer synes å være en god kandidat til å bli inkludert i en immun-diagnostisk test kit, siden de ofte ikke kryssreagerer med serum fra friske kontroller [21]. Også, på grunn av deres rengjøring funksjon, de er sterkt konservert blant ulike H. pylori
stammer uavhengig av deres genotyper og dermed kan tjene som ideelle immuno-diagnostiske kandidater.

Proteiner som er frigjort fra bakterier i slutten av logaritmisk vekstfase, slik som superoksid dismutase og isocitrat dehydrogenase (ICD), er rives som autolyse markører [22] - [24] og noen av dem har vist seg å være gode diagnostiske antigener. For eksempel, ICD av M. tuberkulose
har blitt beskrevet som en potensiell antigen å diskriminere lungetuberkulosepasienter fra friske kontroller [24]. Men tidligere sammenligninger av de antigene mønstre av H. pylori
proteiner (inkludert noen av renhold proteiner) gjenkjent av pasientsera viste ingen sammenheng med spesifikke H. pylori
antigener med saker av særlig gastroduodenal patologi [21].

Denne studien viser samspillet av vertens immunsystem med H. pylori
ICD i form av betydelige humorale responser sett i sykdoms fag. Videre beskriver vi H. pylori
ICD antigen å skille sår sykdom og gastritt pasienter fra uinfiserte friske individer.

Resultater

I silico modellering, uttrykk og rensing av H. pylori ICD protein

protein sekvens av ICD av H. pylori
ble analysert for å forutsi dens immunogenisitet basert på antigene indeksen, hydrophilicity og overflate sannsynlighet. Figur 1A viser i silico
antigene profiler av ICD generert ved hjelp Protean programvare (DNAStar Inc. USA). Kort fortalt ble flere spor som tilsvarer immunoreactive aminosyre motivene med forutsigbart høyere antigene indekser (~3.4) identifisert. H. pylori
ICD vises dermed store antigene strekninger (figur 1A) tilskynder oss til å se på det som en putatively immunogen protein. Antigenisiteten indekser av ICD var sammenlignbare med de som tidligere er rapportert for en PPE antigen Rv2430c av mykobakterielle opprinnelse, som ble ytterligere viste seg å være en immunodominant antigen [25]. E. coli
ICD ble også analysert på en lignende måte og viste seg å være putatively immunogenisk; Det var en klar forskjell finnes, sammenlignet med H. pylori
ICD, med hensyn til den mengde og plassering av antigene rester. Senere, vi bygget en homologi modell av H. pylori
ICD basert på krystallstrukturen til E. coli
ICD (PDB kode 1AI2) og var i stand til å skildre ryggrad organisering av H. Pylori product: (26695) ICD sammen med at E. coli
. De to ICDs ble funnet å være vesentlig lik (RMS avvik 0,45), men var forskjellig med hensyn til tre viktige overflate eksponerte sløyfeområdene som er egnet til å utgjøre de områdene av strukturelle forskjeller som svarer til de mulige antigene epitoper, muligens bibringe differensialantistoffresponsen (figur 1B )

Den over-uttrykt N-terminal His-merket ICD ble renset til >. 95% homogenitet på en nikkel affinitetskolonne (figur 2). Den molekylære massen av det rekombinante ICD ble bestemt til å være 47 kDa. Protein rensing ble utført under innfødte forhold med en yield på 2,0 mg protein per 500 ml start kultur.

Samspill H. pylori ICD med menneskets immunsystem

humorale immunresponser rettet mot H. pylori
ICD ble sammenlignet blant pasienter med H. pylori
infeksjon (gastritt, NUD, DU og GC) og friske kontroller (figur 3). Immunoreaktiviteten verdier ble statistisk analysert og sammenlignet med forbindelse til både infiserte og sunn sera. Disse dataene viste at sera av alle de infiserte pasienter som tilhører gastritt og magesår (DU) kategorier gjennomført statistisk signifikant ( P
< 0,0001) anti ICD antistoffnivåer i forhold til de av friske kontroller. ICD-proteinet, som har en tilsynelatende viktig metabolsk rolle, ble således funnet å være i stand til å fremkalle en sterk humoral respons hos pasienter med gastritt og DU. Imidlertid, i tilfeller av ikke-ulcer dyspepsi (NUD) og mage kreft (GC), ble redusert humoral respons sett. Gitt disse observasjoner, er det sannsynlig at frigjøringen av ICD-proteinet er assosiert med aktiv, H. pylori
infeksjon. I motsetning til observerte humorale responser, rekombinant, H. pylori
ICD induserte ikke noen vesentlig cellulære immunresponser som dokumentert fra mangel på sekresjon av IL-8 fra humane makrofager indusert med rekombinant, H. pylori
ICD in vitro plakater (figur 4). Vi vil derfor foreslå at ICD hisser bare humoral rommet og kan ikke bidra til mage patologi eller cytokin indusert forandringer i gastrisk fysiologi.

Diskusjoner

Identifisering og karakterisering av svært immunogen H. pylori
proteiner er et obligatorisk behov for utvikling av serologiske tester basert på rekombinante rensede antigener. Kombinert med urea pusteprøve, er serologi en ikke-invasiv metode for å påvise H. pylori
infeksjon, og flere serologiske testsett basert på mange forskjellige H. pylori
antigener er kommersielt tilgjengelige. Selv om humoral immunrespons på H. pylori
synes å være ganske variabel, kan kombinasjoner av ofte anerkjente antigener være nyttig for diagnostiske formål [21]. De metabolske enzymer slik som ICD ser ut til å være gode kandidater til å bli brukt for serologisk test kit utvikling hovedsakelig fordi de ikke kryssreagerer med sera fra ikke-infiserte eller friske individer [24].

Betydningen av mange immunogene proteiner av H. pylori
inkludert noen metabolske enzymer er ikke verdsatt mye i kliniske prøver i et tidligere proteomikk basert studie [21]. Vår studie ble imidlertid rettet for å evaluere renset, rekombinant, H. pylori
ICD for sine immunologiske egenskaper i ulike klasser av H. pylori
smittet syre peptic sykdom pasienter. Vi forsøkte å systematisk undersøke tilstedeværelse og nytten av immunresponser fremkalt av ICD protein i H. pylori
infiserte pasienter.

Vår analyse ved hjelp av rekombinant ICD av H. pylori
avslørte betydelig høye antistofftitere hos magesår sykdom og gastritt hos pasienter, sammenlignet med NUD og kreftpasienter (figur 3). Vi spekulerer i at immunresponsen sett i magesår tilfeller og gastritt kan kanskje være på grunn av høy belastning av bakterier assosiert med invasiv patologi og dermed et høyere antall autolyserte patogener eller patogener presentere ICD på overflaten. Dette kan muligens forklare den forholdsvis høyt antistoffrespons i invasive kategori pasienter.

H. pylori
antigener er beskrevet skal settes ut i det ekstracellulære rom via flere mekanismer som bestemte sekresjon trasé, autolyse og dannelse av membranblærer [23] og overflateegenskapene til H. pylori
har blitt foreslått å være unik i å la adsorpsjon /overflate lokalisering av slike proteiner [26]. ICD er tradisjonelt kjent som markører for autolyse [22], [24], [27], utgitt på slutten av logaritmisk fase. Den ekstracellulære frigjøring av proteiner kan potensielt være forekommende bare under in vitro
vekst av H. pylori
. Men in vivo
eksistensen av slike mekanismer, hvis demonstrert, kan være i stand til å forklare hvilken rolle ulike utskilte proteiner i molekylær patologi ulcus. Oppføringen av H. pylori
proteiner inn i submucosal mage plass kan ha viktige funksjonelle konsekvenser som promotering av proinflammatoriske og kjemotaktiske respons gjennom frigjøring av cytokiner fra aktiverte makrofager. Dessuten kan den ekstracellulære frigjøring og eller adsorpsjon eller overflate lokalisering [26] av potensielt immunogene proteiner støtte en bakteriell strategi for å avlede en effektiv lokal immunrespons [23]. Å holde disse flere mekanismer i tankene, sjekket vi proinflammatoriske potensialer av ICD ved hjelp av en IL-8 ELISA-analysen. I vår observasjon, gjorde ICD ikke signifikant indusere IL-8 sekresjon i differensierte, kultiverte makrofager. Men siden vi ikke analysere rollen ICD som hensyn til induksjon av andre proinflammatoriske cytokiner som TNF-α og IL1-β, vil det være for tidlig å rette utelukke sitt engasjement i mage betennelse.

Etter å ha vist at H. pylori
ICD utløser en humoral respons, undersøkte vi grunnlag av immun spesifisitet av dette protein som reflekteres av struktur basert modellering. Vår sekvens analyser og molekylær modellering av H. pylori Hotell og E. coli
ICDs avdekket ikke komplett strukturelle overlappinger mellom de to (figur 1); flere regioner av strukturelle ulikheter ble skjelnet som muligens tilsvarer de antatte antigene epitoper i H. pylori
ICD. Bortsett fra problemene knyttet til strukturelle bevaring eller mangfold, hypotese vi at høyere reaktivitet av H. pylori
ICD forhold til ICD av (commensal) E. coli
med vertens immunsystemet in vivo
kan være assosiert med en) forskjellig invasivitet av H. pylori Hotell og E. coli
2) forskjellige størrelsene av bakteriemengde, omsetning og autolyse 3) forskjellig repertoar av antigenpresenterende celler (makrofager versus dendrittiske celler) som er involvert og deres relative overflod 4) tilgjengelighet av overflate utsatte epitoper i H. pylori
ICD (som de som er fremhevet i figur 1B), og 5) tilstedeværelse av aktive lesjoner av kronisk betennelse, slimhinneskade og kjemotaktiske virkninger av den andre H. pylori
proteiner i milieu
.

Selv vurderer mulige kryssreaksjoner fra andre invasive bakterier som C. jejuni
, testet vi H. pylori
ICD mot 8 prøver av C. jejuni
enteritt pasientsera og funnet ut at det ikke kryssreagerer signifikant (data ikke vist). H. pylori
gratis status for vår C. jejuni
positive pasienter ble fastsatt basert på fravær av symptomer på dårlig fordøyelse, magesmerter og halsbrann etc. Men siden vi brukte bare begrensede seraprøver fra C. jejuni
pasienter, er vi ikke tilbøyelig til å merke H. pylori
ICD som en frittstående diagnostisk antigen. Likevel, C. jejuni
kan ikke alltid omfatte en mye konkurranse bakgrunn med mindre C. jejuni
pasientene selv er klinisk kolonisert av H. pylori
eller vice-versa.

Til slutt, de lovende resultatene vi oppnådde i form av betydelige humorale responser til H. pylori
ICD kan ikke tolkes som umiddelbart gjeldende for feltnivå diagnose. Likevel er det mulig at våre funn gir et solid fundament for utvikling av en sero-diagnostisk test for H. pylori
forbundet gastroduodenalsår patologier. Vi foreslår at potensialet i dette antigenet og dets epitop spesifikke peptider kan videre analyseres ved hjelp av et stort batteri av seraprøver som representerer forskjellige sykdoms fag. Tilsvarende status og betydningen av kryssreagerende antistoffer i sera svarer til sykdommer forårsaket av bakterier som Salmonella spp., Shigella spp. og andre invasive enteropathogens kan også bestemmes. Det vil være verdt å utforske i dybden involvering av ICD i signale aktiviteter i submucosal plass, spesielt sin interaksjon med de aktiverte makrofager og lymfocytter. Også gitt sin viktige rolle i trikaboksylsyre syklus og fravær av glyoxylate shunt i H. pylori product: [27], evaluering av ICD som en mulig intervensjons mål utgjør et spennende forslag.

Materialer og metoder

I silico antigenevne av forventet H. pylori ICD (HP0023)

Nukleotidsekvensen H. pylori ICD
(ORF HP0023) og den tilsvarende aminosyre-sekvens ble oppnådd fra Pylorigene database (http://genolist.pasteur.fr) og ble underkastet analyse ved hjelp av DNAStar pakke (DNAStar Inc. Madison, USA). Aminosyresekvensen av ICD ble utsatt for gransking for eventuelle antigene determinanter ved bruk av Protean programmet i DNAStar pakken. Parametere som hydrophilicity, overflate sannsynlighet og antigen-indeksen ble beregnet for hele protein bruker denne programvaren. Antigene indekser som viser mer enn 2 topper på > 3,0 skalaer ble ansett som vesentlig mer antigene

Computational modellering av ICD struktur

Ved hjelp Modeller-6, en molekylær modellering program som implementerer en automatisert tilnærming. til sammenlignende proteinstruktur modellering ved tilfredsstillelse av romlige begrensninger [28] ble anvendt for å bestemme den tredimensjonale modell av H. pylori
ICD. ICD modell av H. pylori
ble generert basert på E. coli
ICD mal 1A12 som deler samlet 68% sekvensidentitet med H. pylori
ICD.

Produksjon av rekombinant H. pylori ICD

ORF tilsvarer H. pylori ICD plakater (HP0023, 1,275 kb) ble forsterket av PCR fra genomisk DNA fra en H. pylori
pasient isolere MS8. Det rekombinante ICD protein var over uttrykt i E. coli
og renset til homogenitet (figur 2) i henhold til metodene tidligere beskrevet av Banerjee et al product: [24]. Innhøstingen av renset protein ble standardisert til 2,0 mg renset protein per 500 ml starter kultur av rekombinant E. coli
. Det rensede rekombinante protein ble dialysert mot 20 mM Tris-HCl, pH 7,5, med 100 mM NaCl og 3% glycerol. Videre, det rensede protein ble behandlet med polymiksin B for å utelukke effektene av enhver LPS forurensning. Den rensede rekombinante ICD ble frysetørket og umiddelbart lagret frosset for nedstrøms bruk i klinisk diagnose.

Pasienter og humane serumprøver

Studiepopulasjonen ( n
= 82) omfattet 58 H. pylori
smittet pasientprøver (for detaljer om antall tilfeller analysert i hver kategori, se figur 3) hentet fra saker som rapporterer hovedsakelig til Deccan College of Medical Sciences og allierte Sykehus, (DCMS), Hyderabad, og 24 klinisk friske donorer. Den friske kontrollgruppen besto av 18 bevist H. pylori
negative tilfellene testet med Urea Breath analyse (UBA) og 6 asymptomatiske individer som ble bekreftet H. pylori
negativ som testet av kommersielt tilgjengelige ELISA kit (Pyloriset EIA-GIII, Orion, Espoo, Finland). I alle pasientgrupper, ble diagnosen magesår eller gastritt bekreftet eller utelukket med endoskopi av behandlende gastroenterolog. Tilstedeværelsen av H. pylori
i syke deltakere inkludert i denne studien ble tidligere bekreftet av Gram er flekker, en rask urease test (RUT), 16S rRNA og CAG
Et gen basert PCR og kultur [29]. Studiepopulasjonen hadde ingen kjønn eller alder bias. Skriftlig informert samtykke ble innhentet fra alle pasienter og friske kontroller ved de respektive sentrene.

ELISA for humorale responser

ELISA-analysen ble utført for å sjekke humoral immunrespons hos mennesker mot rekombinant ICD. I korthet ble 96-brønners mikrotiterplater belagt med rundt 500 ng av rekombinant ICD protein. De belagte plater ble inkubert over natten ved 4 ° C, vasket tre ganger med PBS-T (0.05% Tween 20 i 1 x PBS) og to ganger med PBS. Platene ble så blokkert med 100 ul blokkeringsbuffer (2% BSA i 1 x PBS) ved 37 ° C i 2 timer. Platene ble vasket tre ganger med vaskebuffer PBS-T og to ganger med PBS. H. pylori
-infected humane sera som tilhører forskjellige kliniske grupper ble serielt fortynnet (1:50, 1:100, 1:200 og 1:400) i blokkeringsbuffer (1% BSA i PBS), for å oppnå optimale titer. Fortynnede sera [50 ul fortynnet serum 1:200] ble tilsatt til antigen-belagte brønner og inkubert i 1 time ved 37 ° C. Platene ble vasket tre ganger med PBS-T og to ganger med PBS og så inkubert med anti-human IgG-pepperrot-peroksidase (Sigma) ved 37 ° C i 1 time. Pepperrot-peroksidase-aktivitet ble påvist ved anvendelse av en kromogen substans, o
fenylendiamin tetrahydroklorid (Sigma) i citrat-fosfatbuffer (pH 5,4) og H _{2o 2 som en ul /ml. Reaksjonene ble stanset ved anvendelse av 0,5 M H 2SO 4, og absorbansen ble målt ved 492 nm i en ELISA-avleser (Bio-Rad). Hver ELISA ble gjentatt minst to ganger med alle kliniske isolater sera. Elevens t
testen ble utført for å beregne p
verdier basert på hjelp av serum antistofftiter tilsvarende friske og infiserte klasser ved hjelp av online vitenskapelig kalkulator av GraphPad (www.graphpad.com_quickcalcs_ttest1 .cfm). P
verdier mindre enn 0,05 ble ansett som statistisk signifikant.}

ELISA for proinflammatorisk cytokin IL-8

THP-1 celler (human Monocyte, ATCC TIB 202) ble dyrket og opprettholdt i RPMI 1640 (Invitrogen) supplert med 10% føtalt bovint serum, 2 mM glutamin og 1% anti-bakterielle og anti-mykotisk oppløsning (Gibco). For makrofag-lignende stadiet, ca. 1 x 10 ^{-6-celler /brønn ble differensiert ved anvendelse av 5 ng /ml Phorbol-12-myristat 13C-acetat (PMA, Sigma). Etter 24 timer ble cellene vasket en gang med RPMI 1640 medium og stimulert ved hjelp av 10 pg /ml rekombinant ICD. En proinflammatory protein, HP940, av H. pylori product: [30], renset under lignende betingelser ble anvendt som en positiv kontroll (1 pg /ml). Celler ble inkubert i 24 timer i en fuktig atmosfære ved 37 ° C. Celler uten protein behandling (ustimulerte celler) tjente som negativ kontroll. Kultursupernatanten oppsamlet etter 24 timer ble anvendt for estimering av IL-8 ved anvendelse av kommersielt tilgjengelige optEIA ELISA Kit (BD Biosciences). Analysen ble utført i henhold til instruksjon av produsent og cytokin nivåer ble beregnet ved bruk av rekombinant standard i settet. Følsomheten av IL-8 var 3,1 pg /ml. Verdier ble uttrykt som gjennomsnitt ± SD.}

Takk

Vi er takknemlige til Seyed E. Hasnain og Sharmistha Banerjee for diskusjoner. Vi takker våre samarbeidspartnere CM Habibullah og Barik En Salih for hjelp på pasientmateriale og informasjon. En takk også til Francis Megraud for å tilby ulike kontrollseraprøver. NA er det tilsvarende Fellow of European Helicobacter Study Group (EHSG).

• PLoS ONE: Bakterie Microbiota Profilering i gastritt uten Helicobacter pylori infeksjon eller ikke-steroide antiinflammatoriske legemidler bruk
• PLoS ONE: Tilknyttet Faktorer av atrofisk gastritt diagnostisert av Double-Contrast øvre gastrointestinal barium X-Ray radiografi: En tverrsnittsundersøkelse Analysere 6,901 friske personer i Japan