PLoS ONE: isocitratdehydrogenase af Helicobacter pylori Potentielt inducerer humorale immunrespons i Patienter med mavesår sygdom og Gastritis

Abstrakt

Baggrund

H. pylori
forårsager gastritis og mavesår og er en risikofaktor for udvikling af gastrisk karcinom. Mange af de proteiner, såsom urease, poriner, flagellins og toksiner, såsom lipo-polysaccharider er blevet identificeret som potentielle virulensfaktorer som inducerer proinflammatoriske reaktion. Vi rapporterer immunogene potentialer isocitratdehydrogenase (ICD), en vigtig hus holder protein af H. pylori
.

Metode /vigtigste resultater

Amino-sekvenserne af H. pylori
ICD blev udsat for i silico
analyse for regioner med forudsigeligt høje antigene indekser. Også, datamodellering af H. pylori
ICD som sammenstillet til E. coli
ICD blev udført for at bestemme niveauet af struktur lighed og tilgængeligheden af ​​overfladeeksponerede motiver, hvis nogen. ICD
genet blev klonet, udtrykt og oprenset til en meget høj homogenitet. Humoralt respons rettet mod H. pylori
ICD blev detekteret gennem et enzymbundet immunosorbentassay (ELISA) i 82 mennesker bestående af 58 patienter med H. pylori
associeret gastritis eller mavesår og 24 asymptomatiske raske kontroller. H. pylori
ICD fremkaldte potentielt høje humorale immunrespons og afslørede høje antistoftitre i sera svarende til endoskopisk-bekræftet gastritis og mavesår sygdom fag. Men urea-ånde-test negative sund kontrolprøver og asymptomatiske kontrolprøver ikke afsløre nogen påviselige immunreaktioner. ELISA for proinflammatoriske cytokin IL-8 udviste ikke nogen signifikant proinflammatorisk aktivitet af ICD.

Konklusioner /Signifikans

ICD af H. pylori
er et immunogen som interagerer med værtens immunsystem efter en mulig autolytisk-frigivelse og dermed betydeligt fremkalder humorale reaktioner i individer med invasive H. pylori
infektion. Imidlertid kunne ICD ikke signifikant stimulere IL8 induktion i en dyrket makrofag cellelinie (THP1) og derfor ikke kan være en bemærkelsesværdig proinflammatorisk middel

Henvisning:. Hussain MA, Naveed SA, Sechi LA, Ranjan S, Alvi A, Ahmed I, et al. (2008) isocitratdehydrogenase af Helicobacter pylori
Potentielt inducerer humorale immunrespons i Patienter med mavesår sygdom og Gastritis. PLoS ONE 3 (1): e1481. doi: 10,1371 /journal.pone.0001481

Academic Redaktør: Keertan Dheda, University College London, England

Modtaget: August 29, 2007; Accepteret: December 24, 2007; Udgivet: 23 januar 2008

Copyright: © 2008 Hussain et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Finansiering fra CDFD Core Tilskud (Dept. of Biotechnology, Indiens regering)

konkurrerende interesser:. forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

Helicobacter pylori
er en Gram negativ, buet bakterie, der etablerer kroniske infektioner i menneskelige mave. Det er et vigtigt patogen, som menes at have co-udviklet med mennesker [1], [2]. Der lever omkring halvdelen af ​​verdens befolkning og betragtes som en potentiel risikofaktor for udvikling af gastrisk adenocarcinom [3]. H. pylori
er en anerkendt årsag til kronisk gastritis, mavesår sygdom, gastrisk karcinom, og slimhinde-associerede lymfoide væv (MALT) lymfom. Adskillige mekanismer er blevet foreslået til at forklare dens rolle i patogenesen af ​​tarmen. Trods høje kolonisering satser kun en lille delmængde af smittede oplever H. pylori
associeret sygdomme [2]. Sammenslutninger af H. pylori
med sygdomsspecifikke faktorer har været mere eller mindre gådefulde selvom genom sekvenser blev tydet næsten et årti siden [2].

En af de mest karakteristiske træk ved H. pylori
er den genetiske diversitet mellem kliniske isolater opnået fra forskellige patientpopulationer [3]. Omarbejdning af genomet er normen med denne bakterie, skaber derved en masse allel og fase variation [3], udgør vanskeligheder i udviklingen af ​​diagnostik og vacciner.

Når der er opnået, fortsætter infektionen i år og, fremkalder påviselige immunresponser i inficerede personer [4], [5] karakteriseret ved forhøjede niveauer af specifikt IgG og IgA i serum og forøgelse af sekretorisk IgA og IgM i maven [6]. Derfor blev noninvasive serologiske tests anbefales og udviklet til diagnose af H. pylori
infektion. Blandt disse er enzymbundet immunosorbentassay (ELISA) er en af ​​de mest udbredt anvendt, fordi det er forholdsvis overkommelig, hurtig, enkel at udføre, og let kunne vedtages til screening stort antal prøver [7]. Udforskning for anti H. pylori
antistoffer er ofte ordineres før endoskopi eller inden behandling. Selv på grund af immunologisk hukommelse, kan serodiagnose ikke foretrækkes at tjekke succes eller resultatet af udryddelse behandling, er det stadig et valg som en følsom metode sandsynligvis på grund af sin ikke-invasiv art [8].

I øjeblikket er der har ikke været en enkelt "gyldne standard" antigen, der entydigt kan bruges på tværs af alle befolkningsgrupper. En af de vigtige årsager til dette kan være den ekstraordinære mangfoldighed til stede i H. pylori
[9] - [13] og også dens særlige tilpasning i forskellige værter [12], [13]. Selvom proteiner, såsom katalase, gro
EL, og flagellin er stærkt immunogene, de giver ikke-specifikke krydsreaktioner med andre gramnegative bakterier og nærmere bestemt Campylobacter jejuni
[14], [15]. I modsætning hertil virulens forbundne antigener, såsom CagA eller VacA, viser en ganske høj grad af sekvensvariabilitet, som der eksisterer H. pylori
stammer, som er genetisk afvigende og fænotypisk variabel for en eller begge antigenerne [16] - [18]. På trods af dette, har tilfredsstillende associationer mellem serum antistoffer og invasiv sygdom blevet beskrevet [19].

Husholdning gener af H. pylori
er blevet brugt for nylig at spore befolknings- vandringer og viste sig at være stabil i genomet tværs århundreder [20]. Husholdning proteiner imidlertid ikke blevet testet i det store og for deres anvendelse i diagnostik eller vacciner. De metaboliske enzymer synes at være en god kandidat til at blive inkluderet i en immuno-diagnostik, da de ofte ikke krydsreagerer med sera fra raske kontroller [21]. Også på grund af deres husholdning funktion, de er meget konserveret blandt forskellige H. pylori
stammer uanset deres genotyper og dermed kan tjene som ideelle immun-diagnostiske kandidater.

Proteiner, der frigives fra bakterier i slutningen af ​​logaritmisk vækstfase, såsom superoxiddismutase og isocitratdehydrogenase (ICD), er beskrevet som autolyse markører [22] - [24], og nogle af dem har vist sig at være fremragende diagnostiske antigener. F.eks ICD på M. tuberkulose
er blevet beskrevet som en potentiel antigen til at diskriminere lungetuberkulose patienter fra raske kontroller [24]. Men tidligere sammenligninger af de antigene mønstre af H. pylori
proteiner (herunder nogle af de husholdning proteiner) anerkendt af patient sera viste ingen sammenslutning af specifik H. pylori
antigener med sager af særlig gastroduodenal patologi [21].

Denne undersøgelse viser interaktion af værtens immunsystem med H. pylori
ICD i form af betydelige humorale reaktioner ses i sygdom fag. Endvidere beskriver vi H. pylori
ICD-antigen til at skelne patienter mavesår sygdom og gastritis fra inficerede sunde individer.

Resultater

I silico modellering, ekspression og oprensning af H. pylori ICD protein

proteinsekvens af ICD af H. pylori
blev analyseret for at forudsige dets immunogenicitet baseret på antigene indeks, hydrofilicitet og overfladesandsynlighed. Figur 1A viser i silico
antigene profiler af ICD genereres ved hjælp af Protean software (DNAStar Inc. USA). Kort fortalt blev adskillige spor svarende til immunreaktive aminosyremotiver med forudsigeligt højere antigene indeks (~3.4) identificeret. H. pylori
ICD dermed viste store antigene strækninger (figur 1A) at spørge os til at se på det som en formodet immunogent protein. Antigeniciteten indekser for ICD var sammenlignelige med dem, der tidligere er rapporteret for en PPE antigen Rv2430c af mycobakteriel oprindelse, som blev yderligere vist sig at være en immundominant antigen [25]. E. coli
ICD blev også analyseret på lignende måde og viste sig at være formodet immunogent; var der en klar forskel findes i forhold til H. pylori
ICD, med hensyn til overflod og positionen af ​​antigene rester. Senere, vi konstrueret en homologi model af H. pylori
ICD baseret på krystalstrukturen af ​​ E. coli
ICD (PDB kode 1AI2) og var i stand til at skildre rygrad organisering af H. Pylori
(26.695) ICD sammen med, at af E. coli
. De to ICD'er fandtes at være signifikant lighed (RMS Afvigelse 0,45) Endnu afveg med hensyn til 3 vigtig overfladeeksponerede loop regioner, som sandsynligvis vil udgøre områderne strukturelle forskelle svarende til de formodede antigene epitoper, eventuelt bibringe differential antistofreaktioner (figur 1B )

overudtrykte N-terminale His-mærket ICD blev oprenset til >. 95% homogenitet på en nikkel affinitet søjle (figur 2). Den molekylære masse af det rekombinante ICD blev bestemt til at være 47 kDa. Proteinoprensning blev udført under native betingelser med et udbytte på 2,0 mg protein pr 500 ml starte kulturen.

Interaktion af H. pylori ICD med det humane immunsystem

humorale immunresponser rettet mod H. pylori
ICD blev sammenlignet blandt patienter med H. pylori
infektion (gastritis, NUD, DU og GC) og raske kontroller (figur 3). Immunoreaktiviteten data blev statistisk analyseret og sammenlignet med tilslutning til både inficerede og sundt sera. Disse data viste, at sera fra alle de inficerede patienter tilhører gastritis og ulcus duodeni (DU) kategorier udført statistisk signifikant ( P
< 0,0001) Anti ICD-antistofniveauer sammenlignet med dem af de raske kontroller. ICD-proteinet, som har en tilsyneladende vigtig metabolisk rolle, blev således fundet at være i stand til at fremkalde et stærkt humoralt respons hos individer med gastritis og DU. Men i tilfælde af manglende mavesår dyspepsi (NUD) og gastrisk cancer (GC), blev reduceret humorale respons set. Givet disse observationer, er det sandsynligt, at frigivelsen af ​​ICD-protein er associeret med aktiv, H. pylori
infektion. I modsætning til observerede humorale responser, det rekombinante, H. pylori
ICD inducerede ikke nogen væsentlige cellulære immunrespons som det fremgår af mangel på sekretion af IL-8 fra humane makrofager induceret med rekombinant, H. pylori
ICD in vitro
(figur 4). Derfor, antyder, at ICD exciterer kun det humorale rum og kan ikke bidrage til gastrisk patologi eller cytokin-inducerede ændringer i gastrisk fysiologi.

Discussion

Identifikation og karakterisering af særdeles immunogene H. pylori
proteiner er et obligatorisk krav for udvikling af serologiske tests baseret på rekombinante oprensede antigener. Kombineret med urea udåndingsluften, serologi er en noninvasiv metode til at opdage H. pylori
infektion, og flere serologiske testkit baseret på mange forskellige H. pylori
antigener er kommercielt tilgængelige. Selvom det humorale immunrespons på H. pylori
synes at være ganske variabel, kan kombinationer af ofte anerkendte antigener vise sig nyttige til diagnostiske formål [21]. De metaboliske enzymer såsom ICD synes at være gode kandidater til at blive udnyttet til serologisk test kit udvikling hovedsageligt fordi de ikke krydsreagerer med sera fra ikke-inficerede eller raske personer [24].

Betydningen af ​​mange immunogene proteiner af H. pylori
herunder nogle metaboliske enzymer er ikke blevet værdsat meget i kliniske prøver i en tidligere proteomics baseret undersøgelse [21]. Vores undersøgelse blev imidlertid rettet mod evaluere oprenset, rekombinant, H. pylori
ICD for sine immunologiske egenskaber i forskellige klasser af H. pylori
inficeret syre peptisk patienter sygdom. Vi har forsøgt systematisk at undersøge tilstedeværelsen og nytten af ​​immunreaktioner fremkaldt af ICD protein i H. pylori
inficerede patienter.

Vores analyse ved hjælp af rekombinant ICD af H. pylori
afslørede væsentligt høje antistoftitere blandt peptiske patienter ulcussygdom og gastritis, sammenlignet med NUD og kræftpatienter (figur 3). Vi spekulere, at immunresponset set i mavesår tilfælde og gastritis måske kunne skyldes høje belastninger af bakterier forbundet med invasiv patologi og dermed et større antal autolyserede patogener eller patogener, der udgør ICD på overfladen. Dette kan muligvis forklare den forholdsvis høje antistofrespons i invasive kategori patienter.

H. pylori
antigener er beskrevet til at blive frigivet i det ekstracellulære rum via flere mekanismer, såsom specifikke sekretion veje, autolyse, og dannelse af membranvesikler [23] og de overfladeegenskaber H. pylori
er blevet foreslået at være unik ved at tillade adsorption /overflade lokalisering af sådanne proteiner [26]. ICD er traditionelt kendt som markører for autolyse [22], [24], [27], udgivet i slutningen af ​​logaritmiske fase. Det ekstracellulære frigivelse af proteiner potentielt kunne være forekommende kun under in vitro
vækst på H. pylori
. Men in vivo
eksistensen af ​​sådanne mekanismer, hvis demonstreret, kunne være i stand til at forklare betydningen af ​​forskellige udskilte proteiner i molekylær patologi mavesår. Punktet af H. pylori
proteiner i den gastriske submukøse rummet kan have vigtige funktionelle konsekvenser såsom fremme af proinflammatoriske og kemotaktiske reaktioner gennem frigivelse af cytokiner fra aktiverede makrofager. Også, kan den ekstracellulære frigivelse og eller adsorption eller overflade lokalisering [26] af potentielt immunogene proteiner understøtte en bakteriel strategi til omdirigering af en effektiv lokal immunreaktion [23]. Holde disse flere mekanismer i tankerne, vi kontrolleres proinflammatoriske potentialer ICD med hjælp af en IL-8 ELISA-assay. I vores observation, havde ICD ikke signifikant inducerer IL-8 sekretion i differentierede, dyrkede makrofager. Men da vi ikke analysere rolle ICD som hensyn til induktion af andre proinflammatoriske cytokiner såsom TNF-α og IL1-β, vil det være for tidligt at rette udelukke sit engagement i gastrisk betændelse.

Efter at have vist at H. pylori
ICD fremkalder en humoral reaktion, undersøgte vi grundlaget for immun specificitet af dette protein som afspejlet ved struktur baseret modellering. Vores sekvensanalyser og molekylær modellering af H. pylori
E. coli
ICD'er afslørede ikke alle strukturelle overlapninger mellem de to (figur 1); flere regioner i strukturelle forskelle blev skelnes der muligvis svarer til de formodede antigene epitoper i H. pylori
ICD. Bortset fra de spørgsmål, der er forbundet med strukturel bevarelse eller mangfoldighed, vi hypotesen, at højere reaktivitet af H. pylori
ICD i forhold til ICD af (kommensale) E. coli
med værtens immunsystem in vivo
kunne være forbundet med en) forskellig invasivitet af H. pylori
E. coli
2) forskellige størrelser af bakteriel belastning, omsætning og autolyse 3) anderledes repertoire af antigen præsenterende celler (makrofager versus dendritiske celler) involveret, og deres relative forekomst 4) tilgængeligheden af ​​overfladevand eksponerede epitoper i H. pylori
ICD (som dem fremhævet i figur 1 B), og 5) tilstedeværelse af aktive læsioner af kronisk inflammation, mucosal skade og kemotaktiske virkninger af den anden H. pylori
proteiner i milieu
.

Mens overvejer mulige krydsreaktivitet fra andre invasive bakterier såsom C. jejuni
testede vi H. pylori
ICD mod 8 prøver af C. jejuni
enteritis patient sera og fandt, at det ikke krydsreagerer signifikant (data ikke vist). H. pylori
gratis status for vores C. jejuni
positive patienter blev bestemt baseret på fravær af symptomer på fordøjelsesbesvær, mavesmerter og halsbrand osv Men da vi brugte kun begrænsede serumprøver fra C. jejuni
patienter, er vi ikke tilbøjelige til at mærke H. pylori
ICD som en standalone diagnostisk antigen. Ikke desto mindre, C. jejuni
ikke altid omfatte en meget konkurrencedygtig baggrund medmindre C. jejuni
patienterne selv er klinisk koloniseret af H. pylori
eller omvendt.

Endelig de lovende resultater, vi opnåede i form af betydelige humorale reaktioner på H. pylori
ICD kan ikke opfattes som umiddelbart gælder for feltniveau diagnose. Ikke desto mindre er det muligt, at vores resultater giver et solidt fundament for udviklingen af ​​en serum-diagnostisk test til H. pylori
associeret gastroduodenale patologier. Vi foreslår potentialet i denne antigen og dets epitop specifikke peptider kan yderligere analyseres ved hjælp af en stor batteri af serumprøver repræsenterer forskellige sygdomstilstande fag. Tilsvarende status og betydningen af ​​krydsreagerende antistoffer i sera svarende til sygdomme forårsaget af bakterier, såsom Salmonella spp., Shigella spp. og andre invasive enteropatogener kan også bestemmes. Det vil være umagen værd at udforske i dybden inddragelse af ICD i signalering aktiviteter i det submukøse rummet, specielt dens samspil med de aktiverede makrofager og lymfocytter. På grund af meddelelsens vigtig rolle i tricarboxylsyrecyklen og fraværet af glyoxylat shunt i H. pylori
[27], evaluering af ICD som en mulig interventionel mål udgør en spændende forslag.

Materialer og metoder

I silico antigenicitet af forudsagt H. pylori ICD (HP0023)

Nukleotidsekvens af H. pylori ICD
(ORF HP0023) og tilsvarende aminosyresekvens blev opnået fra Pylorigene database (http://genolist.pasteur.fr) og blev underkastet analyse ved DNAStar pakke (DNAStar Inc. Madison, USA). Aminosyresekvensen af ​​ICD blev underkastet kontrol for eventuelle antigene determinanter ved hjælp Protean program i DNAStar pakken. Parametre såsom hydrofilicitet, overfladesandsynlighed og antigent indeks blev beregnet for hele proteinet ved hjælp af denne software. Antigene indeks viser mere end 2 toppe på > 3,0 skalaer blev betragtet som signifikant mere antigen

Computational modellering af ICD struktur

Brug Modeller-6, en molekylær modellering program, der implementerer en automatiseret metode. sammenlignende proteinstruktur modellering af tilfredshed rumlige begrænsninger [28] blev anvendt til at bestemme den tredimensionelle model af H. pylori
ICD. ICD model af H. pylori
blev genereret baseret på E. coli
ICD skabelon 1A12 som deler samlet 68% sekvens identitet med H. pylori
ICD.

Produktion af rekombinant H. pylori ICD

ORF svarende til H. pylori ICD
(HP0023, 1,275 kb) blev amplificeret ved PCR fra det genomiske DNA fra en H. pylori
patient isolere MS8. Det rekombinante ICD protein var over udtrykkes i E. coli
og oprenset til homogenitet (figur 2) ifølge de tidligere beskrevne ved Banerjee metoder et al
[24]. Høsten af ​​oprenset protein blev standardiseret op til 2,0 mg oprenset protein pr 500 ml udgangsmateriale kultur af rekombinant E. coli
. Det oprensede rekombinante protein blev dialyseret mod 20 mM Tris-HCI, pH 7,5, med 100 mM NaCl og 3% glycerol. Endvidere blev det rensede protein behandlet med polymixin B at udelukke virkninger af enhver LPS forurening. Den oprensede rekombinante ICD blev frysetørret og straks opbevaret frossen til downstream brug i klinisk diagnose.

Patienter og humane serumprøver

Undersøgelsen population ( n
= 82) omfattede 58 H. pylori
inficeret patientprøver (for nærmere oplysninger om antallet af tilfælde analyseret i hver kategori, se figur 3) opnået fra de tilfælde, rapportering primært Deccan College of Medical Sciences og allierede Hospitaler, (DCMS), Hyderabad, og 24 klinisk sunde donorer. Den sunde kontrolgruppe bestod af 18 bevist H. pylori
negative sager testet med Urea Breath Assay (UBA) og 6 asymptomatiske individer, der blev bekræftet H. pylori
negativ som testet af kommercielt tilgængeligt ELISA-kit (Pyloriset EIA-GIII, Orion, Espoo, Finland). I alle de patientgrupper, blev diagnosen mavesår eller mavekatar bekræftes eller udelukkes ved endoskopi af den behandlende gastroenterolog. Tilstedeværelsen af ​​ H. pylori
i syge fag indgår i denne undersøgelse blev allerede bekræftet Grams farvning, en hurtig urease test (RUT), 16S rRNA og KAG
Et gen baserede PCR'er og kultur [29]. Undersøgelsen befolkning havde ingen køn eller alder bias. Skriftligt informeret samtykke blev opnået fra alle patienter og raske kontrol ved de respektive centre.

ELISA for humorale reaktioner

ELISA-assay blev udført for at kontrollere det humorale immunrespons i mennesker mod rekombinant ICD. Kort fortalt blev 96-brønds mikrotiterplader overtrukket med ~500 ng rekombinant ICD-protein. De coatede plader blev inkuberet natten over ved 4 ° C, vasket tre gange med PBS-T (0,05% Tween 20 i 1 × PBS) og to gange med PBS. Pladerne blev derpå blokeret med 100 pi blokeringspuffer (2% BSA i 1 × PBS) ved 37 ° C i 2 timer. Pladerne blev vasket tre gange med vaskebuffer PBS-T og to gange med PBS. H. pylori
-inficerede humane sera tilhører forskellige kliniske grupper blev serielt fortyndet (1:50, 1:100, 1:200 og 1:400) i blokerende buffer (1% BSA i PBS), at opnå optimale titere. Fortyndede sera [50 pi 1:200 fortyndede sera] blev tilsat til antigen-coatede brønde og inkuberet i 1 time ved 37 ° C. Pladerne blev skyllet tre gange med PBS-T og to gange med PBS og yderligere inkuberet med anti-humant IgG-peberrodsperoxidase (Sigma) ved 37 ° C i 1 time. Peberrodsperoxidase-aktivitet blev detekteret ved anvendelse af et chromogent stof, o
phenylendiamin tetrahydrochlorid (Sigma) i citrat-phosphatpuffer (pH 5,4) og H _{2O 2 som 1 pl /ml. Reaktionerne blev stoppet ved anvendelse af 0,5 M H 2SO 4, og absorbansen blev målt ved 492 nm i en ELISA-læser (Bio-Rad). Hver ELISA blev gentaget mindst to gange med alle kliniske sera isolater. Studerendes t
test blev udført for at beregne s
værdier baseret på de hjælp af serum antistoftiter svarende til sunde og inficerede klasser ved at bruge online videnskabelige regnemaskine af GraphPad (www.graphpad.com_quickcalcs_ttest1 .cfm). P
værdier mindre end 0,05 blev betragtet som statistisk signifikant.}

ELISA for proinflammatoriske cytokin IL-8

THP-1 celler (human Monocyt, ATCC TIB 202) blev dyrket og opretholdt i RPMI 1640 (Invitrogen) suppleret med 10% føtalt bovint serum, 2 mM glutamin og 1% antibakteriel og anti-mykotiske opløsning (Gibco). For makrofaglignende fase, ca. 1 × 10 ^{-6 celler /brønd blev differentieret under anvendelse af 5 ng /ml Phorbol-12-myristat 13c acetat (PMA, Sigma). Efter 24 timer blev cellerne vasket en gang med RPMI 1640-medier og stimuleret ved anvendelse af 10 ug /ml rekombinant ICD. En proinflammatoriske protein, HP940, af H. pylori
[30], oprenset under lignende betingelser blev anvendt som en positiv kontrol (1 ug /ml). Celler blev inkuberet i 24 timer i en fugtig atmosfære ved 37 ° C. Celler uden protein behandling (ustimulerede celler) tjente som negativ kontrol. Dyrkningssupernatant opsamlet efter 24 timer, blev anvendt til estimering af IL-8 ved anvendelse af kommercielt tilgængelige optEIA ELISA Kit (BD Biosciences). Assay blev udført ifølge instruktion af fabrikanten og cytokinniveauer blev beregnet under anvendelse af rekombinante standard følger med kittet. Følsomhed af IL-8 var 3,1 pg /ml. Værdier blev udtrykt som middel ± SD.}

Tak

Vi er taknemmelige for Seyed E. Hasnain og Sharmistha Banerjee til diskussioner. Vi takker vores samarbejdspartnere CM Habibullah og Barik A Salih om hjælp på patientmateriale og information. Også tak til Francis Megraud til at stille forskellige kontrol serumprøver. NA er den tilsvarende Fellow europæiske Helicobacter Study Group (EHSG).

• PLoS ONE: Bakteriel mikrobiota Profilering i Gastritis uden Helicobacter pylori infektion eller ikke-steroide anti-inflammatorisk lægemiddel Brug
• PLoS ONE: Associerede Faktorer af atrofisk gastritis diagnosticeret af Double-Contrast øvre gastrointestinale Barium X-Ray radiografi: En tværsnitsundersøgelse Analyse 6.901 raske personer i Japan