PLoS One: izocitrát dehidrogenáz Helicobacter pylori Potenciálisan indukál humorális immunválasz alanyoknál peptikus fekélybetegség és Gastritis

absztrakt katalógusa

Háttér katalógusa

H. pylori
okoz gyomorhurut és a peptikus fekélyek és kockázati tényező a fejlesztési gyomorrák. Sok a fehérjék, mint például ureáz, porinok, flagellins és toxinok, például lipo-poliszacharidok azonosítottak, mint potenciális virulencia tényezők, amelyek indukálják proinflammatorikus reakciót. Beszámolunk immunogén potenciáljának izocitrát dehidrogenáz (ICD), fontos ház vezetése fehérjét H. pylori katalógusa.

Módszertan /fő eredményei katalógusa

aminosavszekvenciáit H. pylori katalógusa ICD voltak kitéve in silico katalógusa elemzés régiók kiszámíthatóan magas antigén indexek. Továbbá, számítógépes modellezés, a H. pylori
ICD mint egymás mellé a E. coli
ICD végeztük szint meghatározásához szerkezet hasonlósága és a rendelkezésre álló felület kitett motívumok, ha van ilyen. A ICD
gént klónoztuk, expresszáltattuk és tisztítottuk, hogy nagyon magas homogenitás. Humorális válasz ellen H. pylori
ICD detektáltuk keresztül egy enzimmel kapcsolt immunoszorbens assay (ELISA), a 82 emberi alanyok tartalmazó 58 betegek H. pylori
járó gyomorhurut vagy fekélybetegség és 24 tünetmentes egészséges kontroll. A H. pylori
ICD kiváltott potenciálisan magas humorális immunválaszt, és kiderült, magas antitest titerek szérumban megfelelő endoszkópos megerősített gyomorhurut és a fekélybetegség tárgyak. Azonban a karbamid-lélegzet-teszt negatív, egészséges kontroll minták és tünetmentes kontroll minták nem mutattak semmilyen kimutatható immunválaszt. Az ELISA gyulladáskeltő citokin, az IL-8 nem mutatott semmilyen jelentős gyulladáskeltő aktivitása ICD. Katalógusa

Következtetések /Jelentés katalógusa

ICD a H. pylori
immunogén, amely kölcsönhatásba lép a gazdaszervezet immunrendszere követően egy lehetséges autolítikus-leadású és ezáltal jelentősen vált ki humorális válaszok egyének invazív H. pylori fertőzés
. Azonban ICD nem fontos ösztönző IL8 indukciós kulturáltan makrofág sejtvonal (THP1), és ezért nem lehet egy jelentős gyulladáskeltő anyag. Katalógusa

Citation: Hussain MA, Naveed SA, Sechi LA, Ranjan S, Alvi A, Ahmed I., et al. (2008) izocitrát dehidrogenáz Helicobacter pylori
Potenciálisan indukál humorális immunválasz alanyoknál peptikus fekély és gyomorhurut. PLoS ONE 3 (1): e1481. doi: 10,1371 /journal.pone.0001481 katalógusa

Akadémiai Kiadó: Keertan Dheda, University College London, Egyesült Királyság katalógusa

Beérkezett: augusztus 29, 2007; Elfogadva: december 24, 2007; Megjelent: január 23, 2008 katalógusa

Copyright: © 2008 Hussain és munkatársai. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra. Katalógusa

Forrás: Támogatás a CDFD Core Grants (Dept. of Biotechnology, az indiai kormány) hotelben

Érdekütközés: A szerzők kijelentették, hogy nem ellentétes érdekek léteznek. katalógusa

Bevezető katalógusa

Helicobacter pylori
egy Gram-negatív, ívelt baktérium, amely létrehozza a krónikus fertőzések emberi gyomorban. Ez egy fontos patogén, amely úgy gondolják, hogy együtt fejlődtek az emberekkel [1], [2]. Ez él mintegy fele a világ népességének és úgy, mint egy potenciális kockázati tényező a fejlesztés a gyomor adenokarcinóma [3]. H. pylori
elismert oka a krónikus gyomorhurut, gyomorfekély-betegség, gyomor karcinóma, és a nyálkahártya-asszociált limfoid szövet (MALT) limfóma. Számos mechanizmust javasoltak elmagyarázni szerepét patogenezisében a bélben. Annak ellenére, hogy a magas árak kolonizáció csak egy kis részét a fertőzött emberek megtapasztalják H. pylori
-asszociált betegségek [2]. Társulásai H. pylori
a betegség-specifikus tényezők többé-kevésbé rejtélyes, bár a genom szekvenciák megfejtett csaknem egy évtizeddel ezelőtt. [2] katalógusa

Az egyik megkülönböztető jegyei H. pylori katalógusa a genetikai sokféleség közötti klinikai izolátumok, amelyek a különböző betegcsoportokban [3]. Az átdolgozás a genom a norma az ilyen baktérium, ami ezáltal sok allél és a fázis változása [3], nehézségeket okoz a fejlesztés diagnosztika, védőoltások. Katalógusa

Ha megszerezte, a fertőzés nem szűnik évekig, vált ki kimutatható immunválaszt a fertőzött személyek [4], [5] jellemzi megnövekedett specifikus IgG és IgA szérum és dúsításának szekretoros IgA és IgM gyomor [6]. Ezért nem invazív szerológiai tesztek ajánlották és fejlesztették a diagnózis a H. pylori fertőzés
. Ezek között, az enzim-kötött immunszorbens vizsgálattal (ELISA) az egyik legszélesebb körben használt módszer, mivel ez viszonylag megfizethető, gyors, egyszerű elvégzésére, és könnyen lehetett elfogadni szűrésére nagyszámú minta [7]. Feltárása anti H. pylori katalógusa antitestek gyakran írják előtt endoszkópia vagy a kezelés megkezdése előtt. Bár miatt immunológiai memóriát, serodiagnosis nem lehet előnyös, hogy ellenőrizze a siker vagy kimenetele eradikáció marad a választás, mint egy érzékeny módszer valószínűleg azért, mert a nem-invazív jellegű. [8] katalógusa

Jelenleg nem volt egyetlen "gold standard" antigén, amely egyértelműen alkalmazható az összes populáció. Az egyik fontos oka az lehet a rendkívüli sokszínűség jelen H. pylori katalógusa [9] - [13], valamint az adaptáció különböző házigazdák [12], [13]. Bár a fehérjék, mint például kataláz, GRO
EL, és flagellin erősen immunogének, adnak nemspecifikus keresztreakciókat más Gram-negatív baktériumok, és különösen, Campylobacter jejuni katalógusa [14], [15]. Ezzel szemben, a virulencia kapcsolódó antigének, mint például CagA vagy VacA mutatnak elég nagyfokú szekvencia variabilitás, mivel léteznek H. pylori
törzsek, amelyek genetikailag változatos és fenotípusosan változó az egyik vagy mindkét antigének [16] - [18]. Ennek ellenére, a megfelelő összefüggést a szérum antitestek és az invazív betegséget írtak le [19]. Katalógusa

Háztartás gének H. pylori
volna használni a közelmúltban, hogy nyomon népességvándorlásra, és azt találtuk, hogy stabil a genomban évszázadokon keresztül [20]. Takarítás fehérjék azonban nem tesztelt és nagy a felhasználásra diagnosztika vagy vakcinák. A metabolikus enzimek tűnik, hogy egy jó jelölt, hogy bekerülhessen immun diagnosztikai teszt kit, hiszen sokszor nem kereszt-reakcióba lépnek szérumok egészséges kontroll [21]. Továbbá, folytán takarítás funkció, ezek erősen konzervált a különböző H. pylori
törzsek függetlenül azok genotípusok és így szolgálhat ideális immun-diagnosztikai jelöltek.

fehérjék, amelyek felszabadulnak a baktériumok a késői logaritmikus növekedési fázisban, például a szuperoxid-diszmutáz és az izocitrát dehidrogenáz (BNO), vannak le autolízisre markerek [22] - [24] és néhány közülük már kiválónak bizonyult diagnosztikus antigének. Például ICD a M. tuberkulózis
már le, mint egy potenciális antigén megkülönböztetést tüdő tuberkulózis betegek egészséges kontroll [24]. Azonban a korábbi összehasonlítását antigén minták H. pylori katalógusa fehérjék (köztük a háztartás fehérjék) által elismert szérumban nem mutatott egyesület konkrét H. pylori katalógusa antigének esetek különösen gyomor- patológia [21]. katalógusa

Ez a tanulmány azt mutatja, kölcsönhatása a gazda immunrendszer H. pylori
ICD formájában jelentős humorális válaszok látható betegség egyénekben. Továbbá leírjuk H. pylori katalógusa ICD antigén megkülönböztetni fekélybetegség és gyomorhurut betegek fertőzött egészséges egyének. katalógusa

Eredmények katalógusa

In silico modellezési, expressziója és tisztítása H. pylori ICD fehérje katalógusa

protein szekvenciáját ICD a H. pylori katalógusa elemezték megjósolni immunogenitásának alapján antigén index, hidrofil jelleget és felületi valószínűsége. 1A mutatja in silico katalógusa antigén profilok ICD felhasználásával előállított próteuszi szoftver (DNAStar Inc. USA). Röviden, számos nyomok megfelelő immunreaktív aminosav motívumok kiszámíthatóan magasabb antigén indexek (~3.4) azonosítottak. A H. pylori katalógusa ICD így jelenik fő antigén szakaszokon (1A) kéri számunkra, hogy nézd meg a vélt immunogén fehérjét. Az antigenitás indexei ICD összehasonlíthatók voltak a korábban közölt egy PPE antigén Rv2430c mikobakteriális eredetű, melyet további bizonyult egy immundomináns antigén [25]. A E. coli
ICD is elemeztük hasonló módon, és úgy tűnt, hogy feltehetően immunogén; volt egyértelmű különbség talált képest H. pylori
ICD, tekintettel a bőség és helyzetét antigén aminosavakból. Később, már épített egy homológ modellt a H. pylori
ICD alapuló kristályszerkezete E. coli katalógusa BNO (PDB kód 1AI2), és képesek voltak ábrázolni gerincét szervezése H. Pylori katalógusa (26695) ICD együtt, hogy a E. coli katalógusa. A két ICD-k találták, hogy szignifikánsan hasonló (RMS-eltérést 0,45), mégis különbözött tekintetében 3 Fontos kitett felületen hurok régiók, amelyek valószínűleg alkotják a területeken a szerkezeti különbségek megfelelő feltételezett antigenikus epitópok, esetleg közlésével eltérés antitest válaszokat (1B ).

A overexpresszált N-terminális His-jelölt ICD tisztítjuk, > 95% -os homogenitást egy nikkel affinitás oszlopon (2. ábra). A molekulatömege a rekombináns ICD határoztuk meg 47 kDa. Fehérje tisztítást hajtottunk végre natív körülmények, a hozam 2,0 mg fehérje per 500 ml-start kultúra.

kölcsönhatása a H. pylori ICD az emberi immunrendszer

A humorális immunválaszt ellen H. pylori katalógusa ICD összehasonlították betegek körében H. pylori
fertőzés (gastritis, NUD, DU és GC) és az egészséges kontrollokban (3. ábra). A immunreaktivitás adatokat statisztikailag analizáltuk és összehasonlítottuk kapcsolat mind a fertőzött és egészséges szérumok. Ezek az adatok igazolták, hogy szérumában az összes fertőzött betegek tartozó gyomorhurut és nyombélfekély (DU) kategóriák hajtjuk statisztikailag szignifikáns ( p
< 0,0001) anti ICD antitest szintje, összehasonlítva az egészséges kontrollokban. Az ICD fehérje, amely egy látszólag fontos metabolikus szerepet, tehát találták, hogy képes kiváltani egy erős humorális válasz alanyokban gyomorhurut és a Du. Olyan esetekben azonban, a nem fekélyes diszpepszia (NUD) és a gyomorrák (GC), csökkent humorális válasz volt látható. Mivel ezek a megfigyelések, akkor valószínű, hogy a kibocsátás a ICD fehérje társított aktív, H. pylori fertőzés
. Ezzel szemben a megfigyelt humorális válasz, a rekombináns, H. pylori
ICD nem indukált semmilyen jelentős celluláris immunválaszt amint hiányával szekréciót IL-8 a humán makrofágok által indukált a rekombináns, H. pylori katalógusa ICD in vitro katalógusa (4. ábra). Ezért azt sugallják, hogy az ICD gerjeszti csak a testnedvek, és nem járulnak hozzá a gyomor patológiás vagy citokin indukálta változások gyomor fiziológia. Katalógusa

Vita katalógusa

azonosítása és jellemzése erősen immunogén H. pylori katalógusa fehérjék kötelező követelmény a fejlesztési szerológiai vizsgálatok alapján rekombináns tisztított antigéneket. Együtt a karbamid kilégzési teszt, szerológiai nem invazív megközelítés felismerni H. pylori fertőzés
, és számos szerológiai teszt készletek alapján különböző H. pylori
antigének kaphatók a kereskedelemben. Bár a humorális immunválasz H. pylori
úgy tűnik, hogy nagyon változatosak lehetnek, kombinációk gyakran felismert antigének hasznosnak bizonyulhat diagnosztikai célokra [21]. A metabolikus enzimek, például ICD úgy tűnik, hogy jó jelöltek hasznosítani a szerológiai teszt kit fejlesztés elsősorban azért, mert nem a határokon reagálni szérumával nem fertőzött, illetve az egészséges egyének [24]. Katalógusa

A jelentősége sok immunogén fehérjét H. pylori
köztük néhány metabolikus enzimek nem értékelik sok klinikai mintákat egy korábbi proteomikai alapuló tanulmány [21]. Tanulmányunk azonban irányul, hogy értékelje a tisztított, rekombináns, H. pylori
ICD annak immunológiai tulajdonságai különböző osztályaiba H. pylori
fertőzött sav gyomorfekély kóros betegeknél. Megpróbáltunk szisztematikusan vizsgálja a jelenlétét és hasznosságát immunválasz által kiváltott ICD fehérje H. pylori
fertőzött betegeknél. katalógusa

Az elemzés rekombináns ICD a H. pylori
szignifikánsan magas antitest titert között peptikus fekély és gyomorhurut betegek, összehasonlítva NUD és rákos betegek (3. ábra). Úgy gondoljuk, hogy az immunválasz látható gyomorfekély esetekben és gyomorhurut talán az oka, hogy nagy terhelések a baktériumok társított invazív patológia, és ezáltal nagyobb számú Autolizált patogének vagy patogének bemutató ICD a felszínen. Ez esetleg magyarázatot a viszonylag magas antitest-reakció invazív kategóriában betegeknél. Katalógusa

H. pylori katalógusa antigéneket le kell engedni az extracelluláris térből, több mechanizmus például speciális váladék utak, autolízis, és membránvezikulák [23] és a felületi tulajdonságainak H. pylori
már javasolták, hogy egyedülálló, hogy lehetővé teszik az adszorpciós /felület lokalizációját ilyen fehérjék [26]. Az ICD-k hagyományosan ismert markerek autolízisét [22], [24], [27], megjelent a kései logaritmikus fázisban. Az extracelluláris felszabadulását fehérjék potenciálisan előforduló csak a in vitro katalógusa növekedés H. pylori
. Azonban in vivo katalógusa ilyen jellegű mechanizmusok, ha bizonyított, lehet, hogy ismertesse a szerepe a különböző szekretált fehérjék molekuláris patológia fekélybetegség. A bejegyzést az H. pylori katalógusa fehérjéket a gyomor nyálkahártya alatti térben lehetnek fontos funkcionális következményekkel, mint promóciós gyulladáskeltő és kemotaktikus válaszok révén citokinek aktivált makrofágok. Továbbá, a sejten kívüli felszabadulását és vagy adszorpció vagy felszíni lokalizáció [26], potenciálisan immunogén proteinek lehet támogatni egy bakteriális stratégiát eltérítő egy hatékony helyi immunválaszt [23]. Hogy ezeket többféle mechanizmus szem előtt tartva, megnéztük gyulladáskeltő lehetőségeit ICD segítségével egy IL-8 ELISA vizsgálattal. A mi megfigyelés, ICD szignifikánsan nem indukált IL-8 szekréció differenciált, tenyésztett makrofágok. Azonban, mivel mi nem elemeztük szerepét ICD tekintetében az indukciós egyéb gyulladáskeltő citokinek, mint a TNF-α és IL-1-β, akkor korai igazságosan zárja ki, hogy részt vesz a gyomor gyulladása. Katalógusa

Miután kimutatták hogy H. pylori katalógusa ICD humorális válasz vizsgáltuk alapján immunrendszer sajátossága ez a fehérje tükrözik szerkezet alapú modellezés. A szekvencia analízis és molekuláris modellezése H. pylori katalógusa és E. coli katalógusa ICD nem mutattak teljes szerkezeti átfedések a két (1. ábra); számos régiójában strukturális eltéréseket is felismerte, amelyek esetleg megfelelnek a feltételezett antigén epitópok H. pylori
ICD. Eltekintve a kapcsolódó kérdések szerkezeti megőrzése és sokféleség, mi feltételezzük, hogy nagyobb reaktivitása H. pylori
ICD képest ICD a (kommenzalista) E. coli katalógusa a gazdaszervezet immunrendszere in vivo katalógusa összefüggésbe hozható 1) különböző invazivitásának H. pylori katalógusa és E. coli katalógusa 2) különböző erősségű bakteriális terhelés, forgalom és autolízisre 3) más repertoárral antigén bemutató sejtek (makrofágok versus dendritikus sejtek) részt és relatív bősége 4) a rendelkezésre álló felület kitett epitópok H. pylori
ICD (mint azok kiemelt 1B ábra), és 5) jelenlétében aktív léziók a krónikus gyulladás, nyálkahártya-károsodás és kemotaktikus hatást a többi H. pylori katalógusa fehérjék a miliő katalógusa.

Figyelembe véve lehetséges keresztreakciót más invazív baktériumok, mint a C. jejuni katalógusa megvizsgáltuk H. pylori
ICD ellen 8 mintákat C. jejuni
bélgyulladás beteg szérumában, és úgy találták, hogy nem lép keresztreakcióba szignifikánsan (az adatokat nem mutatjuk be). A H. pylori
szabad státusa C. jejuni katalógusa pozitív betegek alapján határoztuk meg a tünetek hiányában az emésztési zavar, hasi fájdalom és gyomorégés stb Azonban, mivel mi csak korlátozott sera mintákat C. jejuni katalógusa beteg, nem vagyunk hajlandók márka H. pylori
ICD önálló diagnosztikai antigént. Ennek ellenére, C. jejuni katalógusa nem mindig tartalmaznak egy sokkal versenyképesebb háttér hacsak C. jejuni katalógusa maguk a betegek klinikailag gyarmatosították H. pylori
vagy fordítva. katalógusa

Végül az ígéretes eredményeket kaptunk szempontjából jelentős humorális válaszok H. pylori katalógusa ICD nem értelmezhető úgy, mint azonnal alkalmazni a terepi szinten diagnózist. Mindazonáltal lehetséges, hogy a megállapítások szilárd alapot fejlesztésének szérum-diagnosztikában a H. pylori
járó gyomor- megbetegedések. Javasoljuk, hogy a potenciális ezt antigén és epitóp specifikus peptidek tovább elemezzük a nagy akkumulátor sera reprezentáló különböző szenvedő egyéneknél. Hasonlóképpen, az állapot és jelentősége keresztreagáló ellenanyagok szérumában megfelelő által okozott betegségek baktériumok, mint a Salmonella spp., Shigella spp. és egyéb invazív enteropatogének azt is meg kell határozni. Érdemes lesz felfedezni mélyreható bevonásával ICD jelátviteli tevékenységek submucosalis térben, különösen a kölcsönhatás az aktivált makrofágok és limfociták. Továbbá, mivel az fontos szerepet trikarbonsavciklus és nincs glioxilát sönt H. pylori katalógusa [27], az értékelés ICD mint lehetséges beavatkozási cél jelent izgalmas javaslatot. katalógusa

Anyagok és módszerek katalógusa

In silico antigenitására megjósolt H. pylori BNO (HP0023)

a nukleotid szekvenciája H. pylori ICD
(ORF HP0023) és a megfelelő aminosav-szekvenciát kapunk Pylorigene adatbázis (http://genolist.pasteur.fr), és vetjük alá elemzés DNAStar (DNAStar Inc. Madison, USA). Aminosavszekvenciája ICD vetettük alá ellenőrzéssel bármely antigén determinánsok segítségével Protean program keretében a DNAStar csomagot. Paraméterek, mint a hidrofil felület valószínűség és antigén index számoltuk a teljes fehérjét szoftver használatával. Antigén indexek mutatja több mint 2 csúcsokat > 3,0 skálák tekintettük szignifikánsan több antigén. Katalógusa

Számítógépes modellezés ICD szerkezet katalógusa

A Modellező-6, a molekuláris modellező program, amely megvalósítja az automatikus megközelítés az összehasonlító fehérje szerkezetének modellezése által megelégedésére térbeli korlátozások [28] használtuk meghatározására háromdimenziós modellt H. pylori
ICD. Az ICD modellje H. pylori katalógusa keletkezett alapján E. coli katalógusa ICD sablon 1A12 amely megosztja összességében 68% -os szekvencia azonosságot mutat a H. pylori
ICD. katalógusa

A rekombináns H. pylori ICD katalógusa

Az ORF megfelelő H. pylori ICD
(HP0023, 1.275 KB) amplifikáltuk PCR-rel a genomi DNS egy H. pylori katalógusa beteg izolálása MS8. A rekombináns fehérje ICD fölött volt kifejezett E. coli
és homogenitásig tisztítjuk (2 ábra) módszerek szerint korábban leírt által Banerjee és munkatársai katalógusa [24]. Az aratás a tisztított fehérje standardizált legfeljebb 2,0 mg tisztított fehérjét tartalmaz 500 ml kiinduló kultúra rekombináns E. coli katalógusa. A tisztított rekombináns fehérjét szemben dializáltuk 20 mM Tris-HCI, pH = 7,5, 100 mM NaCl-t és 3% glicerint tartalmaz. Továbbá, a tisztított fehérje kezeltük polimixin B-, hogy zárja ki hatását, LPS szennyeződés. A tisztított rekombináns ICD liofilezzük és azonnal fagyasztva tárolni későbbi felhasználásra klinikai diagnózis. Katalógusa

A betegek és humán szérum minták katalógusa

A vizsgálati populáció ( n katalógusa = 82) tartalmaz 58 H. pylori
fertőzött betegek mintáit (a részleteket az esetek száma elemzett minden kategóriában, lásd a 3. ábrát) nyert esetek jelentési elsősorban a Dekkán College of Medical Sciences and Allied kórházak, (DCMS), Hyderabad, és 24 klinikailag egészséges donorok. Az egészséges kontroll csoport alkotta 18 bizonyított H. pylori katalógusa negatív esetben vizsgáltak karbamid kilégzési teszt (UBA) és 6 tünetmentes egyének, akik megerősítették H. pylori
negatív, mint a vizsgált kereskedelmi forgalomban kapható ELISA kit (Pyloriset EIA-GIII, Orion, Espoo, Finnország). Az összes betegcsoport diagnózisa fekély vagy gyomorhurut megállapították, vagy kizárta endoszkópia a kezelő gasztroenterológus. A jelenléte H. pylori
a beteg alanyok ebben a vizsgálatban korábban megerősítette Gram-festés, gyors ureáz teszt (RUT), 16S rRNS és CAG katalógusa A gén alapú PCR és kultúra [29]. A vizsgálati populáció nem nemtől és kortól elfogultság. Tájékoztatás után írásos hozzájárulást szereztünk be az összes betegek és egészséges kontrollok az illető központokban.

ELISA humorális válaszok

ELISA assay-t végeztünk, hogy ellenőrizze a humorális immunválasz emberekben ellen rekombináns ICD. Röviden, a 96-lyukú mikrotiter lemezeket vontunk be -500 ng rekombináns ICD fehérje. A bevont lemezeket egy éjszakán át inkubáltuk 4 ° C-on, háromszor mossuk PBS-T (0,05% Tween 20 1 × PBS-ben), majd kétszer PBS-sel. A lemezeket ezután blokkoljuk 100 ul blokkoló puffert (2% BSA-t tartalmazó 1 × PBS-ben) 37 ° C-on 2 óra hosszat. A lemezeket háromszor mossuk mosópufferrel PBS-T és kétszer PBS-sel. A H. pylori
-fertőzött humán szérumok tartozó különböző klinikai csoportokat sorozatban hígítottuk (1:50, 1:100, 1:200 és 1:400) blokkoló pufferben (1% BSA PBS-ben), hogy megkapjuk az optimális titereket. Hígított sera [50 ul 1:200 hígított szérumokat] adtunk antigénnel bevont üregekhez, és inkubáltuk 1 órán át 37 ° C-on. A lemezeket háromszor mostuk PBS-T és kétszer PBS-sel, és tovább inkubáljuk anti-humán IgG-torma-peroxidáz (Sigma), 37 ° C-on 1 óra hosszat keverjük. Torma-peroxidáz-aktivitást kimutatni egy kromogén anyag, O
feniléndiamin tetrahidroklorid (Sigma) citrát-foszfát-pufferben (pH = 5,4) és a H _{2 O 2 mint 1 ul /ml legyen. A reakciókat úgy állítjuk le, 0,5 M H 2SO 4, és az abszorbancia értékeket mértük 492 nm-en ELISA-leolvasóban (Bio-Rad). Mindegyik ELISA-t legalább kétszer megismételjük az összes klinikai sera izolátum. Student t katalógusa tesztet végeztünk kiszámításához p katalógusa értékek alapján az eszközei a szérum antitest titer megfelelő egészséges és fertőzött osztályokat használja az online tudományos számológép a GraphPad (www.graphpad.com_quickcalcs_ttest1 .cfm-re végződik). P katalógusa értékek 0,05-nél kisebb statisztikailag szignifikánsnak tekintettük. Katalógusa}

ELISA gyulladáskeltő citokin, az IL-8 katalógusa

THP-1 sejtek (humán monocita, ATCC TIB 202) neveltünk és fenn RPMI 1640 tápközegben (Invitrogen), kiegészítve 10% magzati borjúszérummal, 2 mM glutaminnal és 1% anti-bakteriális és anti-mikotikus oldattal (Gibco). A makrofág mint a szakaszban, körülbelül 1 × 10 ^{-6 sejt /lyuk megkülönböztetése 5 ng /ml forbol-12-mirisztát-13C-acetát (PMA, Sigma). 24 óra elteltével a sejteket egyszer mossuk RPMI 1640 tápközegben és stimuláltunk, 10 ng /ml rekombináns ICD. A gyulladáskeltő fehérje, HP940, a H. pylori
[30], tisztított hasonló feltételek mellett használtuk pozitív kontrollként (1 ug /ml). A sejteket 24 órán keresztül inkubáltuk párásított atmoszférában 37 ° C-on. Nélküli sejtek fehérje kezelés (stimulálatlan sejtek) szolgáltak negatív kontrollként. Kultúra felülúszót összegyűjtjük 24 óra után használtuk a becsléshez az IL-8, kereskedelmi forgalomban beszerezhető optEIA ELISA Kit (BD Biosciences). Assay szerint végeztük az utasítást a gyártó és a citokin szintek alkalmazásával számoltuk a rekombináns szabvány a készletben. Érzékenység az IL-8 3,1 pg /ml. Az értékeket átlag ± SD. Katalógusa}

Köszönetnyilvánítás katalógusa

Hálásak vagyunk Seyed E. Hasnain és Sharmistha Banerjee megvitatását. Köszönetet mondunk együttműködők CM Hamidullah és Barik A Salih segítséget a betegek anyagi és információkat. Köszönet, hogy Francis Megraud biztosító különböző kontroll szérumok mintákban. NA-e a megfelelő munkatárs európai Helicobacter Study Group (EHSG). Katalógusa

• PLoS One: Bakteriális Microbiota profilalkotás gyomorhurut nélkül Helicobacter pylori fertőzés vagy nem-szteroid gyulladáscsökkentő szer használata
• PLoS One: Associated tényezői az atrophiás gastritis diagnosztizált duplán Contrast felső gasztrointesztinális Bárium X-Ray Radiography: A keresztmetszeti vizsgálatban elemezve 6901 egészsé…