IL-1β sukeltos aktyvavimo p38 skatina metastazių skrandžio adenokarcinoma per ląstelę AP-1 /c-fos, MMP2 ir MMP9

IL-1β sukeltos aktyvavimo p38 skatina metastazių skrandžio adenokarcinoma per ląstelę AP-1 /c-fos, MMP2 ir MMP9 pervežimas tezės
Background
Interleukinas-1β (IL-1β) buvo padariusiu skrandžio adenokarcinoma progresavimas (GA); Tačiau molekulinius mechanizmus veiksmų IL-1β GA prastai būdinga. P38 ir JNK yra pagrindiniai MAPK šeimos nariai, kurie reguliuoja IL-1β signalizacijos kelius. Čia mes tyrė tiek p38 ir JNK IL-1β sukeltos GA ląstelių migracija, invazija ir metastazavusiu potencialo vaidmenį.
Metodai
IL-1β sukeltos p38 ir JNK aktyvinimo GA ląstelių poveikį, buvo nustatytas naudojant in vitro Transwell migracija ir invazija tyrimai apie MKN-45 ir AGS ląstelių arba in vivo metastazių tyrimo nuogas pelių. IL-1β sukeltas p38 signalinio kelio buvo besiskiriantis tuo, GA ląstelių. Aktyvinimas IL-1β /p38 signalizacijos keliu taip pat buvo tiriama žmogaus pirminių GA audinių imunohistocheminiu.
Rezultatai
IL-1β sukeltos aktyvavimo p38 padidėjo GA ląstelių migraciją ir invazija in vitro ir skatino metastazavusiu potencialo GA ląstelėse in vivo; Šie poveikiai buvo sumažintos p38 siRNA ar p38 inhibitorių SB202190. MMP2 arba MMP9 siRNAs ir MMP2 /9 inhibitorius PKP taip pat slopinamas IL-1β sukeltas GA ląstelių migraciją ir invazija in vitro. IL-1β sukeltos p38 aktyvacijos gerokai padidėjo MMP2 ir MMP9 mRNR ir baltymų ekspresiją ir veiklą. Liuciferazės Reporter tyrimai parodė, kad aktyvatorius baltymų-1 (AP-1) ir AP 1 įrišimo aikštelių MMP9
promotoriaus (-670 /MMP9) buvo aktyvuota IL-1β sukeltos p38 aktyvacijos. PHOSPHO-p38 buvo žymiai aktyvinama žmogaus GA audinių (palyginti su suderintų ne navikinių audinių) ir reikšmingai susijęs su limfmazgių metastazių ir invazijos anapus serosa. Išraiška fosfo-P38 reikšmingai koreliuoja su IL-1β, MMP2, MMP9 ir C-fos išraiška tiek žmogaus GA audinių ir ląstelių GA metastazių į nuogas pelių plaučiuose. IL-1β taip pat buvo galima aktyvinti JNK GA ląsteles, bet aktyvacija JNK nebuvo susijęs su GA ląstelių migracijos ir invazijos. Todėl, IL-1β sukeltos migracijos ir invazija GA ląstelių buvo reguliuojami p38, bet ne JNK.
Išvadas
IL-1β sukeltos p38 aktyvavimo ir IL-1β /p38 /AP-1 ( c-FOS) /MMP2 & MMP9 kelias vaidina svarbų vaidmenį metastazių GA; tai kelias gali teikti naujoviškas gydomąjį tikslą GA.
Raktiniai žodžiai
IL-1β p38 Skrandžio adenokarcinoma MMP2 ir MMP9 AP-1 Metastazė faktai
daugėja įrodymų rodo, kad navikai yra skatinamas ir palaikomas uždegiminių signalus iš naviko mikroaplinka ir navikas mikroaplinka vaidina svarbų vaidmenį vėžio skatinimo [1, 2]. Citokinai, ypač citokinai išskiriami vėžinių ląstelių, yra esminiai naviko mikroaplinka. Auglio nekrozės faktoriaus alfa (TNF-α), interleukino-1β (IL-β) ir IL-6 yra dauguma gerai, charakterizuojamos citokinai, kurie buvo įrodyta, būti glaudžiai susiję su vėžio progresavimo. Daugybė tyrimų daug parodė, kad uždegimas sukeltas citokinų vaidina svarbų vaidmenį skrandžio [3] vėžio išsivystymo. Ji yra gerai nustatyta, kad infekcijos, ypač tuos, kuriuos sukelia Helicobacter pylori,
gali indukuoti skrandžio gleivinės uždegiminių atsakymus, todėl ląstelę IL-1β, kuris savo ruožtu gali skatinti uždegimą-susijęs kancerogenezės [4]. Tačiau pagrindinės molekulinius mechanizmus, dėl IL-1β signalizacijos vaidmens skrandžio kancerogenezėje daugiausia lieka nežinoma, ir šiuo metu palūkanų.
P38 yra iš mitogenu aktyvinto proteino kinazės (MAPK) superfamily narys. Į MAPK signalizacijos keliai buvo gerai ištirtas, ir yra sudaryta iš ne mažiau kaip trijų superfamilies apie MAPKs, reglamentuojančių įvairias ląstelių veiklą [5]. Ji yra gerai žinoma, kad p38 MAPK yra pajėgi reguliuoti ląstelinių atsakymų daug į citokinų ir stresas, įskaitant IL-1β [6]; Tačiau pastaruoju duomenys parodė, kad p38 yra taip pat glaudžiai susijusi su įvairių tipų žmogaus vėžio išsivystymo per savo gebėjimo gilesnio vėžinių ląstelių migraciją ir invazija reaguojant į įvairių dirgiklių, įskaitant uždegiminių veiksnių [6]. Be to, p38 taip pat dalyvauja ląstelių diferenciacijos ir apoptozės reglamentą. Keturi izoformų p38 iki šiol identifikuojamos: P38-alfa, P38-atomo, pažymėto P38-gama, ir p38-δ [7]. Nors aminorūgščių sekos šių p38 MAPKs yra daugiausia vienodi, išraiška modelis kiekvieno izoformos skiriasi [8]. P38-α yra pagrindinis p38 MAPK ir yra išreiškiamas ubiquitously, p38-β yra daugiausia išreikštas smegenų, kadangi p38γ yra gausiai išreikštas skeleto raumenų [9] ir p38-δ yra daugiausia išreikštas endokrininių liaukų [10]. Daugelis tyrimų, taip pat parodė, kad p38 dalyvauja IL-1β signalizacijos kaskadomis į ląstelių tipų rinkinys, ypač pelės embriono fibroblastų (JDF) ląstelių ir makrofagų ląstelių [11, 12]; Tačiau, labai mažai žinoma apie IL-1β-aktyvintomis p38 funkcija skrandžio vėžio.
c-birželis N-terminalas kinazės (JNK) yra dar vienas MAPK šeimos narys, kuris taip pat yra žinoma, kad vaidina svarbų vaidmenį reguliavimo IL-1β signalizacijos kelias [13]. Be dalyvavimo reglamentavimas uždegimo signalo keliu, JNK atlieka keletą kitų svarbių ląstelių funkcijas, įskaitant reguliavimo ląstelių augimo, diferenciacijos, išlikimo ir apoptozės. Be to, naujausi tyrimai rodo, kad JNK dažnai per išreiškiami įvairiais vėžio audiniuose ir iki reguliavimą JNK gali būti glaudžiai susijęs su vėžio invazijos [14]; Tačiau, ar JNK dalyvauja reguliuojant IL-1β sukelta skrandžio vėžio ląstelių migracijos ir invazijos iš esmės išlieka nežinoma
skrandžio adenokarcinoma (GA) yra labiausiai paplitusi neoplazminė auglys skrandyje.; Todėl, mes sutelktas į GA šiame tyrime. Čia, mes tyrė p38 ir JNK aktyvinimo reaguojant į IL-1β, ir jų poveikis IL-1β sukeltas metastazavęs potencialas GA ląstelėse in vitro arba in vivo.
Be to, į fosfo-p38 išraiška (p- p38) GA, jo santykiai su clinicopathologic bruožų GA, o tarp IL-1β ir p-p38 išraiškos koreliacija buvo tiriamas žmogaus parafino įterptųjų GA audinių naudojant imunohistocheminis. Galiausiai, mes taip pat pasižymi molekulinius mechanizmus, kurie reguliuoja IL-1β sukeltas p38 tarpininkaujant metastazavusiu potencialą GA ląsteles.
Rezultatai
IL-1β sukeltos aktyvavimo p38 skatina GA ląstelių migraciją ir invazija in vitro
Pirma, mes ištirti, ar IL-1β galėjo aktyvuoti p38 signalizacijos GA ląsteles. Kaip parodyta 1 paveiksle, aktyvavimo p38 (P-p38) buvo aptikta abiejuose GA ląstelių linijas (AGS ir MKN-45 ląstelių) po gydymo su IL-1β 30 min; IL-1β sukeltos aktyvavimo p38 buvo slopinamas p38 inhibitorių SB202190 (1a pav.) 1 pav IL-1β skatina GA ląstelių migraciją ir invazija aktyvuojant p38. A: Vakarų dėmės patvirtino, kad P-p38 gali būti sukeltas 30 min stimuliacijos IL-1β į AGS ir MKN-45 ląstelių linijų; apie p38 aktyvacijos IL-1β buvo slopinamas p38 inhibitorių SB202190. B transfekciją p38 siRNA nuvertė p38 išraišką tiek dviejų GA ląstelių linijų. C F gydymas GA ląstelių su IL-1β padidėjo ląstelių migraciją ir invazija in vitro; Šie poveikiai buvo nuslopintos p38 siRNA ar p38 rūšyse inhibitorių SB202190. ** P
< 0,05 vs peštynės siRNR (Valdymo siRNR) -transfected ląstelės stimuliuojamos IL-1β; △△ P
< 0.05 vs untransfected ląstelių (laukinio tipo ląsteles) skatino su IL-1β. Barai nurodyti vidurkis ± SD ląstelių skaičius matymo lauke skaičių (× 400 priartinimas) Atsižvelgiant migracijos ir invazija tyrimai. G:. Reprezentacinės šviesos mikroskopu, vaizdai AGS ir MKN-45 ląstelių migracijos ir invazijos į Transwell tyrimų
P38 gali skatinti migracijos ir invazija įvairių vėžinių ląstelių [15]. Ištirti, ar IL-1β gali skatinti migracijos ir invazija GA ląstelių per įjungiant p38 signalizacijos, GA ląstelės Transfekuoti su plakta siRNA (valdymo siRNA) arba p38 siRNA, ar GA ląstelių anksto apdorotas arba be p38 rūšyse inhibitorių SB202190 buvo Stimuliuojant IL-1β. Transwell migracija ir invazija tyrimai parodė, kad IL-1β stimuliacija išaugo migracijos ir invazija abiejų AGS ir MKN-45 ląstelių; Tačiau IL-1β sukeltos GA ląstelių migracija ir invazija buvo žymiai sumažintos triuškinantis ir P38 naudojant siRNA (1b pav G) arba pirminio gydymo SB202190 (1c paveikslas G). Kartu šie duomenys aiškiai rodo, kad IL-1β skatinamas GA ląstelių migracija ir invazija tarpininkaujant p38.
IL-1β sukeltos aktyvavimo p38 upregulates MMP2 ir MMP9 išraišką ir veiklą GA ląstelių
MMP2 ir MMP9 turi įrodyta, vaidina svarbų vaidmenį vėžio ląstelių invazija ir metastazių [16]. Ištirti, ar MMP2 ir MMP9 taip pat dalyvauja IL-1β sukeltos p38 reguliuojama metastazavusiu potencialo GA ląsteles, AT-PGR, imunocitocheminiais ir Confocal mikroskopija ir zymography tyrimas buvo atliekamas siekiant nustatyti MMP2 ir MMP9 išraišką ir veiklą GA ląstelių linijų transfektuotose valdymo siRNA ar p38 siRNA arba gydytiems su arba be p38 inhibitorių SB202190, tada apdorotos su arba be IL-1β. Kaip ir tikėtasi, MMP2 ir MMP9 išraiška ir veikla buvo padidėjęs atsakas į IL-1β gydymo (2a pav C). Nokdaunas p38 naudojant siRNA arba apdorojimo su p38 inhibitorių SB202190 gerokai sumažėjo "Il-1β sukeltas MMP2 ir MMP9 iRNR raiška ir veikla tiek GA ląstelių linijas (2a pav C). 2 pav IL-1β upregulates MMP2 ir MMP9 išraišką ir veiklą suaktyvinant p38. A: AT-PGR analizė parodė, kad MMP2 parsisiųsti ir MMP9
iRNR buvo aktyvinama tiek AGS ir MKN-45 ląstelių atsakas į gydymą IL-1β; Šis poveikis buvo užblokuotas p38 siRNA ar p38 inhibitorių SB202190. B: kiekybinis iš MMP2
ir MMP9
mRNR ekspresijos normalizuojamas GAPDH
mRNR. ** P
< 0.05 vs kepti plaktą siRNA-perkeltų ląstelių Stimuliuojant IL-1β. △△ P
< 0.05 vs untransfected ląstelės stimuliuojamos IL-1β. C: gelis zymography parodė, kad MMP2 ir MMP9 veikla buvo aktyvinama tiek AGS ir MKN-45 ląstelių atsakas į gydymą IL-1β; Šis poveikis buvo užblokuotas p38 siRNA ar p38 inhibitorių SB202190. D: imunocitocheminiam dažymo ir Confocal mikroskopija patvirtino, kad IL-1β padidėjo aktyvavimo p38 (raudona) ir MMP2 ir MMP9 (žalias) išraiška MKN-45 GA ląstelių; Šie poveikiai buvo užblokuotas p38 siRNA ar p38 inhibitorių SB202190.
imunocitocheminiais ir Confocal mikroskopija parodė, kad P-p38 buvo silpnai išreikšti neapdorotų MKN-45 ląstelių, kurios taip pat pareiškė labai žemą MMP2 ir MMP9. Po stimuliacijos IL-1β, gerokai padidėjusiu p-P38, MMP2 ir MMP9 buvo aptikta MKN-45 ląstelių; Šie IL-1β sukeltos pasekmės buvo nuslopintos p38 siRNA ir SB202190 (2d pav). Kartu paėmus, šie rezultatai stipriai
rodo, kad IL-1β per p38 sukeltos invazija ir migracijos GA ląstelių tarpininkaujant per p-P38 gebėjimą upregulate MMP2 ir MMP9 išraišką ir veiklą. IL-1β sukeltas aktyvavimą p38 upregulates MMP2 ir MMP9 aktyvuojant AP-1-priklausomą rašybą GA ląstelių
Jis yra gerai dokumentuota, kad transkripcijos faktorius aktyvatorius baltymų-1 (AP-1), gali reguliuoti MMP2 ir MMP9 [17], ir aktyvacijos išraiška p38 gali reguliuoti AP-1 aktyvavimo [18]. Siekiant patikrinti, ar IL-1β sukeltos p38 tarpininkaujant padidėjusi MMP2 ir MMP9 išraiška ir veikla priklauso nuo AP-1 d AP-1-priklausomo transkripcijos aktyvavimo buvo tiriamas GA ląstelių gydomi arba be IL-1β, kad buvimas ar nebuvimas p38 slopinimo, naudojant AP-1 liuciferazės reporterio testą. IL-1β padidėjo AP-1 veiklą tiek GA ląstelių linijų (3A pav); Tačiau slopinimas p38 naudojant p38 siRNA arba gydytiems ląsteles p38 inhibitorių SB202129 sumažėjo IL-1β sukeltas AP 1 veiklą abiejose GA ląstelių linijas (3A pav.) Šie rezultatai rodo, kad IL-1β sukeltas, p38 tarpininkaujant išraiška MMP2 ir MMP9 priklauso nuo AP-1. 3 pav IL-1β aktyvuoja AP-1 aktyvumą per p38 keliu. Atsakymas: Abu GA ląstelės buvo pernešta su AP 1 reporteris plazmidžių arba AP-1 reporteris plazmidžių kartu su peštynės siRNA ar p38 siRNA. AP 1 liuciferazė reporteris genų aktyvumas buvo žymiai padidėjęs IL-1β stimuliacijos tiek AGS ir MKN-45 ląstelių; šis poveikis buvo žymiai slopinamas p38 siRNA priklausomai nuo dozės priklausomu būdu ir taip pat trukdo tai, kad p38 inhibitorių SB202190. ** P
< 0,05 vs valdymas siRNR (peštynės siRNR) + AP-1 LUC-perkeltų ląstelių Stimuliuojant IL-1β; ΔΔP
< 0,05 vs AP-1 Luc-perkeltų ląstelių skatino su IL-1β; santykinis liuciferazė veikla buvo normalizuotas B-gal. B: IL-1β sukeltos p38 tarpininkaujant aktyvavimo MMP9
vykdytojų priklauso AP-1-jungimosi vietų. ** P
< 0,05 vs perkeltų -670 /MMP9 + Valdymo siRNA ląsteles Stimuliuojant IL-1β; ΔΔP
< 0,05 vs perkeltų -670 /MMP9 ląsteles Stimuliuojant IL-1β; ▼▼ P
< 0,05 vs perkeltų -570 /MMP9 ląsteles Stimuliuojant IL-1β; santykinis liuciferazė veikla buvo normalizuotas B-gal.
Siekiant toliau patvirtina AP-1 vaidmenį IL-1β sukeltos p38 keliu, liuciferazės reporteris genų vektorių, kurių sudėtyje yra AP-1 aikštelių MMP9
promotoriaus regionai buvo pernešta į GA ląsteles. Pagal AP-1 genas reporteris tyrimus, liuciferazės veikla -670 /MMP9
promotoriaus regione (susidedantis iš dviejų AP-1 privalomus svetaines [-533 ir -79] ir vienas NF-КB privalomas puslapis [-600 ] [19-21]) žymiai padidėjo IL-1β stimuliuojamos ląstelės (3b pav.) Transfekcijq ląstelių su p38 siRNA arba gydytiems ląstelių su p38 inhibitorių SB202129 sumažėjo IL-1β sukeltos liuciferazės veikla -670 /MMP9
rengėjas reporterio geno (3b pav.) Liuciferazės veikla MMP9
promotoriaus (/MMP9 pervežimas -571) nebuvo pakeista išbraukiant iš NFκB privalomos vietoje (-600). Be to, kai AP 1 svetainės (-79 ir -533) iš MMP9
rengėjas buvo ištrinti (-73 /MMP9
mutantai), liuciferazės veikla reporterio geno gerokai sumažėjo, palyginti su atitinkamu gamtoje -type kontrolės Reporter genai (3b pav.) Bendrai, šie duomenys aiškiai rodo, kad IL-1β skatina aktyvavimą p38 signalizacijos keliu, kuris skatina invazija ir migracijos GA ląstelių per AP-1-priklausomo ląstelę MMP2 ir MMP9 saviraiškos ir veiklos.
Triuškinantis iš MMP2 ar MMP9 mažėja IL-1β sukelta migracija ir invazija GA ląstelių
pat patvirtinkite, kad IL-1β sukeltos GA ląstelių migraciją ir invazija yra susiję su ląstelę MMP2 ir MMP9, AGS ir MKN-45 ląstelių buvo pernešta su siRNAs prieš MMP2
arba MMP9
arba išvalytos su arba be MMP2 /MMP9 inhibitorių PKP, tada skatino su IL-1β. Į Transwell migracija ir invazija tyrimai parodė, kad IL-1β sukelta migracija ir invazija GA ląstelių buvo žymiai sumažintos triuškinantis iš MMP2
arba MMP9,
arba taikant paruošiamąjį apdorojimą PKP, palyginti su kontroline ląsteles (4A pav C). Todėl ląstelę MMP2 ir MMP9 yra labai svarbūs IL-1β sukeltos GA ląstelių migracijos ir invazijos. 4 pav triuškinantis iš MMP2 ar MMP9 ar apdorojimo su MMP2 /9 inhibitorių PKP slopina IL-1β sukeltas GA ląstelių migraciją ir invazija in vitro. A: AT-PGR patvirtino MMP2 ar MMP9 siRNAs, kuris gerokai sumažino MMP2
arba MMP9
išraišką, atitinkamai, iki daugiau nei 75% efektyvumą. B: IL-1β padidėjo GA ląstelių migraciją ir invazija in vitro; Šie poveikiai buvo nuslopintos MMP2 ar MMP9 siRNA arba MMP2 /9 inhibitorių PKP. ** P
< 0,05 vs peštynės siRNR (kontrolė siRNR) -transfected ląstelės stimuliuojamos IL-1β. Barai yra vidurkis ± SD kartų keičia normalizuotas kontroliuoti grupę migracijos ir invazija tyrimai. C: Reprezentacinės šviesos mikroskopijos vaizdai AGS ir MKN-45 ląstelių migracijos ir invazija Transwell migracijos ir invazija tyrimų
IL-1β sukeltos aktyvavimo JNK nedalyvauja reguliavimo GA ląstelių migracijos ir invazijos
. jis yra gerai žinoma, kad nariai MAPK vaidina svarbų vaidmenį reguliuojant ląstelių atsaką į citokinų ir stresas, ir P38 ir JNK yra pagrindiniai MAPK šeimos nariai, kurie reguliuoja IL-1β signalizacijos kelius. Suprasti, ar JNK taip pat yra susijęs su IL-1β-sukeltos GA ląstelių migracija ir invazijos, Western blot analizė buvo atlikta siekiant nustatyti, ar JNK aktyvinimo reaguojant į IL-1β. Kaip eksponuojama 5A pav, p-JNK buvo aptikta abiejų AGS ir MNK-45 ląstelių linijų po stimuliacijos IL-1β 30 min. Tačiau abiejų Transwell migracijos ir invazija tyrimų rezultatai parodė, kad padidėjo migracija ir invazija į abiejų AGS ir MKN-45 ląstelių, kurias sukelia IL-1β stimuliacijos nebuvo sumažintos triuškinantis JNK su siRNA nei sumažintos slopinimo JNK keliu su JNK inhibitoriaus SP600125 nei (pav 5B-D);; Perkelta ir invazinių ląstelių skaičius beveik nebuvo parodė, pakeitimus, prieš arba po to, kai transfekciją su siRNA su JNK (p > 0,05) arba su arba be iš anksto apdorotas su JNK inhibitoriaus SP600125 (P > 0,05). JNK nebuvo susijęs su IL-1β skatinamas GA ląstelių migracija ir invazija juos dar labiau patikrinti AP 1 liuciferazė reporterio testą. Kaip tiekėjų kinazės c-jun (kito svarbaus komponento AP-1), JNK gali įjungti AP-1, ir AP-1 aktyvacija JNK yra glaudžiai susijęs su JNK s funkcijai reguliavimo įvairių korinio reakcijos taip pat ir vėžio ląstelių migracija ir invazija [22]; Tačiau IL-1β sukeltos AP 1 aktyvavimo tiek AGS ir MKN-45 ląstelių nebuvo slopinamas JNK siRNA nei JNK inhibitoriaus SP600125 nei (5e paveikslą). Visi kartu šie duomenys aiškiai rodo, kad padidėjo GA migracija ir invazija skatinamas IL-1β nereglamentuoja JNK. 5 pav JNK aktyvinimas nėra susijęs su IL-1β sukeltos GA ląstelių migracijos ir invazijos. A: P-JNK buvo aptikta 30 min stimuliacijos IL-1β į AGS ir MKN-45 ląstelių linijų. B transfekciją JNK siRNA nuvertė JNK raiška abiejose dviejų GA ląstelių linijų. C D: Gydymas GA ląstelių su IL-1β padidintą ląstelių migracijos ir invazijos in vitro; šis poveikis nebuvo slopinamas JNK siRNA nei JNK inhibitoriaus SP600125 rūšyse. ** P
< 0.05 vs kepti plaktą siRNA-perkeltų ląstelių Stimuliuojant IL-1β; △△ P
< 0.05 vs untransfected ląstelių (laukinio tipo ląsteles) skatino su IL-1β; ## Arba ●● ne reikšmingai skyrėsi tarp šių dviejų grupių buvo aptikta (P
> 0,05). Barai nurodė vidurkis ± SD ląstelių skaičius matymo lauke į migracijos ir invazija tyrimų skaičių. D: Reprezentacinės šviesos mikroskopu, vaizdai AGS ir MKN-45 ląstelių migracijos ir invazija Transwell tyrimus. El: Abu GA ląstelės buvo pernešta su AP 1 reporteris plazmidžių arba AP-1 reporteris plazmidžių kartu su peštynės siRNA ar JNK siRNA. AP 1 liuciferazė reporteris genų aktyvumas buvo žymiai padidėjęs IL-1β stimuliacijos tiek AGS ir MKN-45 ląstelių; šis poveikis nebuvo slopinamas JNK siRNA nei slopina JNK inhibitoriaus SP600125 nei. ** P
< 0,05 vs valdymas siRNR (peštynės siRNR) + AP-1 LUC-perkeltų ląstelių Stimuliuojant IL-1β; ΔΔP
< 0,05 vs AP-1 Luc-perkeltų ląstelių skatino su IL-1β; ## Arba ●● ne reikšmingai skyrėsi tarp šių dviejų grupių buvo aptikta (P
> 0,05). Santykinis liuciferazė veikla buvo normalizuotas B-gal.
Phospho-p38 yra aktyvinama ir koreliuoja su IL-1β išraiškos, MMP2, MMP9 ir C-fos žmonėmis GA audinių
p-P38 ekspresiją serija 105 GA audinių ir suporuotas ne navikinių skrandžio audinių išnagrinėjo imunohistocheminis (IHC). Iš 105 vėžio mėginių, 53 atvejais Ga audinių (50.48%) eksponuojamų per-išraiškos p-P38, palyginti su suporuotas ne neoplastinių skrandžio audinių (P
< 0,05; 6A pav). Teigiamas P-p38 išraiška buvo dažnai pastebėta tiek GA ląstelių citoplazmoje ir branduolyje. 6 pav fosforilinamos p38 ekspresija žmogaus GA, o p-p38 raiška teigiamai koreliuoja su IL-1β, MMP2, MMP9 ir C-fos išraiška GA audiniuose. A: Padidėjusi p-p38 buvo dažnai stebimas GA audinių, palyginti su suporuotas ne neoplastinių skrandžio audiniuose. A, p-p38 nebuvo aptikta arba tik silpnai išreikštas ne neoplastinių skrandžio audiniuose. B-E: įvairaus intensyvumo pozityviosios P-p38 raiškos GA audiniuose. B išraiška p-P38 teigiamai koreliuoja su IL-1β, MMP2, MMP9 ir C-fos išraiška žmogaus GA audiniuose. GA audinio mėginio eksponuoti stipresnį IL-1β raišką ir didesnį p-p38, MMP2, MMP9 ir C-fos išraiška; ir silpnesni IL-1β išraiška ir silpnas P-p38, MMP2, MMP9 ir C-fos išraiška. C: suma balai teigiamą dažymo intensyvumo IHC P-p38. ** P
< . 0,05 vs suporuotas nesusijusių neoplastiniq skrandžio audinius
nėra reikšmingas asociacijas buvo pastebėtas tarp raiškos p-P38, o pacientų amžių (< 50 arba ≥ 50 metų), lytis, naviko dydis (< 3 cm arba ≥ 3 cm), histologinis tipas, arba rūšies diferenciacija. Tačiau, raiškos p-p38 pavaizduotose reikšmingai susiję su limfmazgių metastazių (P
< 0,05), ir invazija už serosa (P
< 0,05). Šie duomenys rodo, kad padidėjusi p-P38 yra susijęs su metastazėmis į žmogaus GA.
Kaip eksponuojami 6B paveikslas, p-P38 išraiškos parodė gerą correlativity su IL-1β, MMP2, MMP9 ir AP-1 kiekis (c-fos) į GA audinio, o koreliacija tarp padidėjusi p-p38 saviraiškos ir ląstelę IL-1β, MMP2, MMP9 ir c-fos GA audinio (r = 0,72, p < 0,01; r = 0,63, p < 0,01; r = 0,58, p < 0,05 ir r = 0,69, p < 0,01) buvo aptikta, kai analizuojami Spearman metodą
sumos balų teigiamą dažymo intensyvumo IHC p-p38 abiem 105 atvejais GA. audiniai ir suporuoti neturintys navikiniai skrandžio audiniai buvo eksponuojami 6C pav.
invazija tyrimą nuogas Pelės
MKN-45 ląstelių perkeltų su plakta siRNA arba p38 siRNA buvo švirkščiamas į uodegos venos BALB /c nu /nu peles; IL-1β arba PBS taip pat buvo į pilvo ertmę įpurškiamas iš užtikrinta, kad ląstelės dieną buvo suleistos 14 dienų. 1 grupė buvo suleistas su PBS ir plakta siRNA perkeltų MKN-45 ląstelių; 2 grupė buvo suleistas su IL-1β ir plakta siRNA perkeltų MKN-45 ląstelių; ir 3 grupė buvo suleistas su p38 siRNR-perkeltų MKN-45 ląstelių ir IL-1β
45 dienų po injekcijos ląstelės, visi gyvūnai. (6/6; 100%), kad IL-1β-gydytų pacientų grupėje buvo sukurtas plaučių metastazių (pav 7A d) (2 grupė; vidurkis metastazavusiu židinių ir 6 plaučių skyriuose buvo 14 procentų plaučių). Priešingai, mažiau gyvūnai (2 /6,33.33%) kontrolinės grupės, kurios nebuvo sušvirkšta IL-1β sukūrė plaučių metastazių (1 grupė; vidutiniškai 6 metastazių į 6 plaučių skyriuose per plaučius). Kadangi tik du gyvūnai p38 siRNR plius IL-β-gydytoje grupėje sukurta plaučių metastazių ir metastazių plaučiuose skaičių šioje grupėje buvo žymiai mažesnis (3 grupė, vidutiniškai 4 metastazių į 6 plaučių skyriuose per plaučius) ir gerokai mažesnės nei, kad atitinkamo gydytos grupės su IL-1β (2 grupė) (pav 7A-d). 7 pav IL-1β stimuliacija padidina metastazavusiu potencialą GA ląstelėse in vivo per p38 priklauso nuo mechanizmo. A: Atstovas metastazių plaučių susiformavo skirtingos grupės pele. B: Barai nurodomas gyvūnų skaičius sukurta metastazes plaučiuose. C: Reprezentacinės rezultatai JE dažymo metastazių plaučiuose. D: Barai nurodė vidurkis ± SD išplitusiam židinių skaičių 6 plaučių skyriuose /per plaučių pelėms, kuriems atsirado metastazių plaučiuose. △△ P
< 0,05 vs sušvirkšta peštynės siRNA perkeltų ląstelių plius IL-1β stimuliacijos. El: AT-PGR analizė p38, MMP2, MMP9
ir C-Fos
iRNR išraiškos plaučių metastazių įvairių pelių. F: IHC analizė p-P38, MMP2, MMP9 ir C-FOS baltymų raiškos metastazių plaučiuose; IL-1β sukeltas padidėjęs p-p38, MMP2, MMP9 ir C-fos baltymo ekspresiją.
Pat patvirtinkite, ar p38, MMP2 ir MMP9 dalyvauja IL-1β sukeltas plaučių metastazės GA ląstelių, ir nustatyti, ar šis procesas reglamentuoja AP-1 mRNR ekspresijos lygis p38, MMP2, MMP9
ir c-Fos
(vienu esminiu komponentu AP 1) metastazių plaučiuose buvo kiekybiškai RT-PGR, ir p-p38 , MMP2, MMP9 ir c-FOS baltymų ekspresija plaučių skyriuose buvo tiriama naudojant IHC. Kaip parodyta 7 pav E ir F, ekspresijos lygis p-P38, MMP2, MMP9 ir C-fos plaučių metastazių židinių buvo padidėjęs atsakas į IL-1β. Aktyvinimas p38 ir iRNR arba baltymų ekspresijos lygis p38, MMP2, MMP9 ir C-fos buvo mažesnis metastazių, kurias sudaro ląstelių transfektuotose p38 siRNA plius IL-beta gydytų grupėje (GROUP3) arba kontrolinės grupės (1 grupės ), palyginti su metastazėmis suformuotų peštynės siRNA plius IL-β-gydytoje grupėje (2 grupė) (7E ir F pav.) Kartu paėmus, in vivo duomenys dar kartą patvirtina, kad IL-1β sukeltos GA ląstelių metastazės yra sąlygotas p38 signalizacijos per AP 1 priklausomo ląstelę MMP2 ir MMP9.
Diskusijos
Daugybė tyrimų parodė, kad IL 1β gali aktyvinti p38 ir JNK [11, 12], o p38 ir JNK vaidina svarbų vaidmenį vėžio ląstelių migracijos ir invazijos [14, 23-26]. Taigi, mes iškėlė hipotezę, kad IL-1β gali prisidėti prie G. ląstelių invazija ir metastazių per įjungiant p38 ir JNK kelius. Ištirti šią galimybę, mes įvertino IL-1β gebėjimas aktyvuoti p38 ir JNK, ir skatinti migracijos ir invazija GA ląsteles. Mūsų rezultatai parodė, kad IL-1β gali aktyvuoti tiek p38 ir JNK ir padidinti GA ląstelių migraciją ir invazija, ir kad šis poveikis gali būti slopinamas p38 siRNA ar p38 inhibitorių SB 202.190, bet ne JNK siRNA ar JNK inhibitoriaus SP600125. Tai pirmasis įrodymą, kad IL-1β gali sukelti GA ląstelių migraciją ir invazija suaktyvinus p38; Tačiau šie molekuliniai mechanizmai, kuriais IL-β-tarpininkaujant p38 signalizacijos reglamentuoja metu skrandžio kancerogenezėje daugiausia lieka nežinoma.
vienas potencialus mechanizmą, pagal kurį p38 gali padidinti invazija ir migracijos vėžinių ląstelių yra iškeldamas MMP lygius [ ,,,0],27]. Jis yra gerai nustatyta, kad sekrecijos MMP su už tarpląsteliniame (ECM) degradacijos talpa yra metastazių vėžinių ląstelių [28] funkcija. MMP2 ir MMP9 yra du labiausiai gerai būdinga MMP ir yra glaudžiai susijęs su vėžio invazijos ir metastazių, nes jų stipri proteolitus veiklos ECM [29]. Mes pranešti čia pat pirmą kartą, kad tikėtina molekulinės mechanizmas, pagal kurį IL-1β skatina GA ląstelių migraciją ir invazija gali būti IL-1β /p38 /AP-1 (c-fos) /MMP2 & MMP9 signalizacijos kelią. Mes parodė, kad tiek MMP2 ir MMP9 buvo aktyvinama GA ląstelių atsakas į IL-1β stimuliacija; Šie poveikiai buvo nuslopintos siRNAs prieš p38, MMP2
arba MMP9
, kad p38 inhibitorių SB202190, ir MMP2 /9 inhibitorių PKP. Be to, triuškinantis ir MMP2
arba MMP9 pervežimas naudojant siRNAs arba slopina MMP2 /9 aktyvumo naudojant PKP, žymiai IL-1β sukeltas GA ląstelių migraciją ir invazija sumažėjo. Kaip serino /treonino proteinkinazės, p38 yra pajėgi indukuoti aktyvavimą transkripcijos veiksnio AP-1 [30]. Mes Be to, nustatyta, kad IL-1β-sukeltas, p38-tarpininkaujant ląstelę MMP2 ir MMP9 buvo AP-1-priklauso. IL-1β buvo tik galės aktyvuoti MMP9
promotoriaus regionuose, kuriuose yra AP-1 svetaines transkripciją, o šis poveikis buvo sumažintos p38 siRNA ir p38 inhibitorių SB202190. Be to, IL-1β sukeltos aktyvavimo AP-1-priklausomo transkripcija buvo slopinamas p38 siRNA.
PHOSPHO-p38 (p-p38), aktyvintas forma P38, gali būti aptikta beveik 50% žmonių GA išbandyti IHC metodu audinio mėginiai, ir išraiška p-p38 buvo reikšmingai susijęs su limfmazgių metastazių ir invazijos anapus pacientams, sergantiems GA serosa. Be to, išraiška IL-1β teigiamai koreliuoja su p-P38, MMP2, MMP9 ir C-fos išraiška klinikinių GA egzempliorių. Be to, ir in vivo bandymų duomenys, iš metastazių tyrimo parodė, kad plaučių metastazavusiu židinių GA ląstelių ir P38 /pervežimas p-P38, MMP2, MMP9 ir C-fos iRNR ir baltymų raiškos formavimas plaučių metastazių židinių buvo padidėjusi iki IL-1β ir sumažinta injekcijos ląstelių transfektuotose p38 siRNA. Kartu šie duomenys aiškiai rodo, kad IL-1β sukeltos GA ląstelių migracija ir invazija atsirasti per aktyvavimo p38 signalizacijos keliu, kuris veda į AP 1 aktyvinimo ir ląstelę MMP2 ir MMP9. Todėl p38 vaidina svarbų vaidmenį IL-1β sukeltos metastazių GA.
JNK yra dar vienas svarbus MAPK būti gerai žinoma, vaidina svarbų vaidmenį Reglamente IL-1β signalizacijos keliais skirtingais ląstelių [14, 31]. Tačiau šiame tyrime, JNK buvo nustatyta, kad nėra susijęs su Reglamento IL-1β sukeltos GA ląstelių migracijos ir invazijos. JNK siRNR ir JNK inhibitoriaus nebuvo sušvelninti IL-1β sukeltas GA ląstelių migraciją ir invazija, nei sušvelninti aktyvavimo AP-1 sukeltas IL-1β. Todėl, IL-1β skatinamas GA ląstelių migracija ir invazija yra reguliuojamos p38, bet ne JNK.
Apibendrinant, mes nustatėme pirmą kartą, kad IL-1β yra funkciškai įtraukti į metastazių reguliavimo GA per aktyvavimo p38. Tai molekulinės mechanizmas apima p38 tarpininkaujant AP-1-priklausomą ląstelę tiek MMP2 ir MMP9; ir šis tyrimas aiškiai rodo, kad IL-1β /p38 /AP-1 (c-fos) /MMP2 & Visi autoriai skaityti ir patvirtino galutinį rankraštį.

• Gastroparezę susijęs su gastroptosis Pristatydamas kaip apatinės pilvo sumaišymo masės vaikas: atvejo ataskaitą
• Įtaka IL17A polimorfizmas ant nukrypusiu nuo normos metilinimo DAPK ir CDH1 į nevėžinės skrandžio mucosa