Angiotenzino II receptorių raiška ir santykis su Helicobacter pylori infekcijos, atsižvelgiant į mongolų gerbil

angiotenzino II receptorių ekspresijos ir susijusių skrandžio į Helicobacter pylori
-infection atsižvelgiant į Mongolijos smiltpelės skrandžio pervežimas tezės
Fono
renino-angiotenzino sistemą skrandžio fiziologijos ir ligų vaidmuo dar buvo retai ištirta. Pirmasis tikslas buvo ištirti pradinis buvimą ir vietą angiotenzino II receptorių (AT1R ir AT2R) Atsižvelgiant į Mongolijos smiltpelės skrandį. Antrasis tikslas buvo išsiaiškinti, ar H. pylori
infekcijos buvimas yra susijęs su pokyčiais šių receptorių ekspresiją.
Metodai
H.pylori
neigiamojo ir H. pylori-
užsikrėtę (padermė SS1 arba TN2GF4) buvo tiriami vyrai Mongolijos smiltpelės. Į skrandžiai buvo išnagrinėti šešis arba 12 mėnesių po skiepijimo iki imunohistocheminiu, Vakarų dėmė ir mikroskopinių MORFOMETRIJA naudojimui.
Rezultatai
AT1R ir AT2R buvo įsikūręs ląstelių įvairovė į Smiltpelės skrandžio sienos, įskaitant pogrupį endokrininės ląstelės antralinių gleivinės ir uždegiminės ląstelės patekę H. pylori
-infected skrandžius. infekuotų su SS1 kamieno Smiltpelės parodė žymiai didesnį antralinių AT1R baltymo ekspresija ir padidėjęs infiltrating polimorfonuklearinių leukocitų skaičius (PMNs) bent 12 mėnesių. Į AT1R baltymo ekspresija koreliuoja su PMNs skaičiaus ir antralinių išraiška myeloperoxidase.
Išvados
angiotenzino II receptorių yra esančių langelių skrandžio sienelės Mongolijos smiltpelės įvairovė. Rezultatai rodo, kad įtakos priklausoma nuo H. pylori
kamieno dėl skrandžio AT1R išraiškos ir tarp skrandžio AT1R saviraiškos ir gleivinės PMNs infiltracijos santykius.
Background Viesbutis The renino-angiotenzino sistemą, vaidmenį (anksčiau) skrandžio fiziologijos ir ligos kaip dar retai ištirta. Kai kurie tyrimai angiotenzino II (Ang II) veiksmus gleivinės kraujotaka, rūgšties sekreciją ir lygiųjų raumenų susitraukimą [1-3]. Kiti susijęs su anksčiau įtaką streso sukeltos skrandžio žalos ir išemija /reperfuzijos pažeidimo skrandžio gleivinės [4, 5].
Klasikinės endokrininės pobūdis anksčiau yra gerai žinomas dėl savo poveikio hemodinamikos reguliavimo ir kūno skysčio homeostazę. Mažiau žinoma apie reguliavimo poveikio audinio vietinio anksčiau, kad buvo įrodytas įvairiuose organuose, pvz smegenys, kasos, stemplės ir storosios žarnos [6-8]. Intersticinis gamyba Ang II gali pasireikšti vietinės gamybos angiotenzinogeno (AGT), AKF ir renino, arba per alternatyvias galimybes, įskaitant skilimo cirkuliuojančių AGT kitų lokaliai išreikštų fermentų, pavyzdžiui, katepsino D ir chimazės [9]. Ang II veikia daugiausia per du receptorių, paskirta Ang II 1 tipo receptorius (AT1R) ir Angas II 2 tipo receptorius (AT2R). Todėl kartografavimo išraišką ir vietą Ang II receptorių yra labai svarbūs tiriant galimą Ang II signalizacijos įvairių fiziologinių ir patologinių nustatymus. Pastaraisiais metais anksčiau buvo įrodyta, kad būti įtraukti į įvairių patologinių būklių, tokių kaip uždegimas, žaizdų gijimą ir kancerogenezės [10, 11]. Epidemiologiniai tyrimai taip pat parodė, asociacijas tarp Ras susijusių genų polimorfizmo (SNP) ir pepsinė opa plėtros ir skrandžio vėžio [12, 13]. Tačiau nebuvo pranešta asociacijos tarp audinių išraiška Ang II receptorių ir Helicobacter pylori
infekcijos. Ras potencialas moduliuoti vietinės uždegiminės reakcijos daro jį sudominti ištirti jos ryšį su gerai apibrėžta gastritas prisiminė H. pylori pervežimas.
Šiame tyrime mes išnagrinėjo Ang II receptorių ekspresija Neinfekuotiems ir H. pylori
-infected mongolų Smiltpelės. Tai gyvūnas modelis yra įdomus, nes jis gali būti lengvai užsikrėtę H. pylori pervežimas, suteikiant lėtinis aktyvus kepenų uždegimas su patologinių pokyčių, kurie imituoja dauguma pažeidimų randama žmogaus organizme, įskaitant skrandžio opos, skrandžio žarnyno metaplazijos ir skrandžio vėžio panašaus nuotrauka [14]. Ar vien H.pylori
infekcija sukelia skrandžio vėžį mongolų smiltpelėms lieka diskusijų [15].
Pirmas Tyrimo tikslas buvo ištirti pradinis buvimą ir vietą AT1R ir AT2R į skrandį mongolų Smiltpelės. Antrasis tikslas buvo išsiaiškinti, ar H. pylori
infekcijos buvimas yra susijęs su pokyčiais šių receptorių ekspresiją.
Metodai
Gyvūnai
Eksperimentai patvirtino Etikos komiteto eksperimentus su gyvūnai, Geteborgo universitetas. Trisdešimt konkretūs patogenais neužkrėsti (SPF) vyrai Mongolijos smiltpelės (Charles River Upsala, Švedija), septyni savaičių amžiaus, buvo naudojami. Jie buvo atsitiktinai suskirstyti į tris grupes vienodo dydžio, sudaryta iš vieno kontrolinės grupės ir dvi grupes, kurios turėjo būti užkrėstas H. pylori
. Penki gyvūnai buvo laikomi kiekvieno narvo ir kambarys buvo reguliuojama, atsižvelgiant į temperatūros (18-22 ° C), drėgmės (apie 55%) ir šviesos /tamsos ciklo (12/12 h). Į smiltpelės turėjo laisvą prieigą prie maisto (2016F, Harlan Tek. Lab, Erškėčių, Anglija) ir geriamojo vandens. prieš sėjant jiems buvo leista vieną savaitę aklimatizacijos.
bakterijų padermių ir skiepą
du skirtingi H. pylori
kamienai buvo naudojami suleistas, The TN2GF4 padermės [16] ir Sidnėjus padermės 1 (SS1) [ ,,,0],17]. Abu kamienai yra žinoma, kad sukelti lėtinį aktyvų uždegimą Smiltpelės skrandžio antralinių ir fizines gleivinę. Bakterijos buvo auginami Columbia plokščių. tada šių kultūrų buvo naudojami sėjama 500 ml Brucella sultinio, kuriame yra 5% naujagimis serumas iš veršiuko, 10 mikrogramai /ml vankomicinu ir 5 mikrogramai /ml trimetoprimui. Kolbos buvo inkubuojamos 24 valandas pagal mikro aerobinėmis sąlygomis, esant 37 ° C temperatūroje. Bakterijos išnagrinėjo fazinio kontrasto mikroskopu, prieš duodamas gyvūnams. Į smiltpelės buvo užsikrėtę 0,5 ml bakterijų suspensija ar Brucella sultinio tik (kontrolė), naudodami maitinimo adatą. Gyvybingų bakterijų kiekis buvo padaryta sustabdymo nustatyti tikruosius infekcinių dozių, kurios buvo 7 × 10 7 vienetų ir 4 × 10 7 vienetai, SS1 ir TN2GF4, atitinkamai.
Laikui bėgant ir pasiaukojimo
po 24-hr badavimo laikotarpiui nemokamą prieigą prie geriamojo vandens, penki gyvūnai iš kiekvienos grupės buvo paaukota šešis arba 12 mėnesių po skiepijimo. Gyvūnai buvo anestezuoti pagal injekciją į pilvą iš medetomodin (0,5 mg /kg kūno svorio) ir ketamin (75 mg /kg). Vidurinę buvo atlikta laparotomija ir tada skrandžiai buvo pašalinta ir atidarytas išilgai pagrindinės kreivės. Pusė buvo naudojamas kultūros, ir jis buvo paimtas kita pusė histologinei analizės ir Western Blot analizės. Gyvūnai buvo numarinamos širdies pjūvį. Histopatologiniai išvados ir bakteriologinis statusas buvo pranešta anksčiau [14].
Imunohistocheminis
Visą sienų pavyzdžiai (Ertmė ir tekstynų) buvo surinkti iš karto po to, kai skrandžiai atidarymo, nustatytą Histofix (Histolab Products AB, Geteborgas, Švedija ) kambario temperatūroje (RT) per naktį ir tada nuplauti PBS 24 valandas. Mėginiai buvo vėliau dehidratuoti, įdėta į parafiną, supjaustyti 5 mkm
storio sekcijų ir montuojamas ant stikliukų. Prieš immunohistocemical dažymo, skyriai buvo deparaffinized ir virti citrinų rūgšties buferio (0,01 M, pH 6,0, 10 min.) Immunocruz TM Dažymo sistema (Santa Krusas Biotechnologijos, Santa Krusas, Kalifornija, JAV), buvo naudojamas imunohistocheminis protokolą. Po to, kai slopinimo endogeninio peroksidazės aktyvumo, ne specifiškai surišantis antrinių antikūnų buvo užblokuotas inkubacijos su normaliu ožkų serume 30 min kambario temperatūroje. Toliau du polikloniniai pirminiai antikūnai, skiedinius ir inkubavimo laikai tada naudojamas: triušis prieš AT1R (N-10, Santa Cruz Biotech ", 1: 100 PBS, 2 val kambario temperatūroje) ir triušio prieš AT2R (H-143, Santa cruz Biotech ", 1: 100 PBS, 2 val kambario temperatūroje). Po inkubacijos su pirminių antikūnų, skyriai tris kartus buvo plaunamos PBS ir tyrinėjo su biotinilintu antrinio antikūno; Teritorijoje buvo aptiktas naudojant krienų peroksidazės (HRP) -streptavidin ir spalva buvo sukurtas naudojant 3,3'-diaminobenzidinas (DAB).
netikėtas, stiprus dažymo ląstelių su tipiškas išvaizdą endokrininių ląstelių buvo pastebėtas po imunohistocheminį dažymo su šio peroksidazės pagrįsto metodo. Immunoflourescens ženklinimas buvo padaryta toliau atmesti galimybės, kad tai dažymo buvo endogeninio biotino, endogeninio peroksidazės aktyvumo ar neapibrėžtas privalomas antrinio antikūno rezultatas. Šis protokolas buvo naudojamas: po verdant citrinos rūgšties buferio, ne konkretus privalomas antrinių antikūnų buvo užblokuotas inkubacijos su normaliu ožkų kraujo serume (SC-2043, Santa Cruz Biotech) 30 min kambario temperatūroje. Dalys buvo inkubuotos su pirminių antikūnų, kaip nurodyta aukščiau. tada skaidres tris kartus buvo plaunamos PBS ir tyrinėjo su antriniu antikūno pagal Alexa Miltai 488 konjuguoto ožkos anti-triušio IgG (A-11034, molekuliniai Zondai Inc ", Eugenijus, OR, JAV), praskiestas santykiu 1: 400 PBS 1 val kambario temperatūroje. Skaidrės buvo šalia triskart plaunami PBS ir sumontuoti su fluorescencijos montavimo terpės (DakoCytomation, Glostrup, Danija), po kurio nuotraukos buvo nufotografuotos su fluorescencijos mikroskopu. Norėdami patvirtinti AT1R vietą endokrininių ląstelių, dukart imunodažymu buvo atliekama naudojant pirmiau aprašytą peroksidazės remiantis protokolą AT1R ir pirmiau aprašytą immunoflorescens ženklinimo protokolą pirminės antikūną prieš Chromogranin A (C-20, Santa Cruz Biotech, 1: 100 PBS, 2 val kambario temperatūroje). Ne konkretus privalomas antrinio antikūno (Alexa Miltai 568 konjuguoto asilas kovos su ožkos IgG A-11057, Molekulinė Zondai Inc ", 1: 800 PBS, 1 val kambario temperatūroje) buvo užblokuotas inkubacijos su normaliu asilas serume (SC-2044 Santa Cruz Biotech "). Preabsorpion su daugiau nei (5 ×) blokuoja peptidų (SC-1173P, Santa Cruz Biotech ") buvo atliktas kaip už AT1R antikūnų specifiškumo kontrolės, o pirminis antikūnas buvo praleista dėl AT2R.
Smiltpelės AT1R ir AT2R turi > 90% aminorūgščių homologija sekos identiškumą su žmogaus, žiurkių ir pelių Ang II receptorių [18, 19]. Į smiltpelių, kaip į žiurkių ir pelių, yra du AT1R potipių (AT1aR ir AT1bR), kad yra koduojami skirtingi genai bet su 95% aminorūgščių sekos homologiją. Šie receptorių potipių yra žinoma, kad būti atskirtinai lokalizuota ir reguliuojamos, bet turi panašią afinitetu Ang II. Dėl didelio aminorūgščių seką Homologijos tarp smiltpelės AT1aR ir AT1bR, mes laikoma lygi afinitetas prie AT1R potipių už AT1R antikūnų naudojamas šiame tyrime. Be to, antikūnai naudojami dažymo Ang II receptorių yra įsteigta pelėms, žiurkėms ir žmonėms gamintojas. Todėl, siekiant patvirtinti šių antikūnų smiltpelėms specifiką, skyriai iš parafino įdėta blokų normalus smiltpelės ir žmogaus antinksčių buvo tamsintas, kaip nurodyta pirmiau (išskyrus tai, kad abiejų pirminių antikūnų buvo sumažintą 1:50 PBS) ir platinimo modelių Ang II receptorių antikūnų buvo tirta. Antinksčių pasiskirstymo tyrimai parodė, kad anti-AT1R antikūnų daugiausia Dėmėti antinksčių žievės ląstelės glomerulinės (dažymo kapsulės aplink liauką, kraujagyslių lygiųjų raumenų ląstelių (VSMCs) ir endotelio ląstelės buvo taip pat pažymėjo,) tiek smiltpelės ir žmogaus skyriuose. Anti-AT2R antikūnų tamsintas antinksčių šerdinės ląstelės ir ląstelės glomerulinės į smiltpelės ir žmogaus antinksčių (dažymo VSMCs ir endotelio ląstelių buvo taip pat pažymėjo, naudojant šią antikūnus). Šie rezultatai sutinku su anksčiau pranešta tyrimų [20], o stiprus panašumas dažymo modelių ir smiltpelės ir žmogaus antinksčių remti bendrą naudingumą antikūnų į Smiltpelės audiniuose.
Vakarų dėmė
Atidarius skrandžius, pilnas storis antralinių sienų mėginiai buvo nedelsiant surinkti, užšaldomos skystame azoto ir saugomi -70 ° C temperatūroje. Egzemplioriai buvo homogenizuoti ant ledo (Polytron PT-MR 2100, Kinematica, Šveicarija) buferyje A (10% glicerolis, 20 mM Tris-HCl, pH 7,3, 100 mm NaCl 2 mm fenilmetilsulfonilfluoridą fluoridas, 2 mm EDTA 2 nm EGTA , 10 mM natrio orthovanadate, 10 mikrogramai /ml leupeptiną ir 10 mikrogramai /ml aprotinino) [21] ir centrifuguojamas 30,000 g 30 min, esant 4 ° C temperatūroje. Granulės buvo resuspenduotos buferio B (1% NP-40 [Sigma-Aldrich, Stokholmas, Švedija] buferiniame tirpale A) ir maišomas, esant 4 ° C temperatūroje 1 val iki centrifuguojant 30,000 g 30 min, esant 4 ° C temperatūroje. Supernatantq buvo analizuojamos baltymų kiekį Bradfordo [21] metodą ir saugomi -70 ° C temperatūroje, kol tolesnei analizei. Mėginiai buvo praskiestas SDS buferio ir šildytas 70 ° C temperatūroje 10 min prieš pakraunant ant NuPage 10% BisTris gelio (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Vienas Lane buvo pakrautas su prestained molekulinės masės standartai (SeeBlue ™, Invitrogen AB, Lidingo, Švedija), ir visą ląstelių fragmentai iš PC-12 (už AT1R; sc-2250, Santa Cruz Biotech), HEP G2 (už AT2R; sc- 2227, Santa Cruz Biotech ") ir HL60 (už myeloperoxidase (MPO); 12-354, Šiaurinė Lake Placid, Niujorkas, JAV) buvo naudojami kaip teigiamos kontrolės. Polyvinyldifluoride membranos ( "Amersham, Buckinghamshire, JK) buvo inkubuojami su polikloniniais triušių antikūnai nukreipti prieš AT1R (N-10, Santa Cruz Biotech), AT2R (H-143, Santa Cruz Biotech) arba MPO (07-496, pietūs). Šarminės fosfatazės konjuguoto ožkos anti-triušio antikūnai (SC-2007, Santa Cruz Biotech "už AT1R ir AT2R antikūnų, ir IgG 12-448, Šiaurinė, už MPO antikūnų) CDP-Star substratas (Tropix Bedford, MA, JAV ) buvo naudojami siekiant nustatyti imunoreaktyvių baltymus chemiluminescense. Vaizdai buvo užfiksuoti šaldomą CCD kamera (LAS-1000; "Fujifilm", Tokijas, Japonija). Ir pusiau kiekybinis buvo padaryta lyginant mėginius į teigiamą kontrolę naudojant matuoklis 3.3 programinę įrangą (Fujifilm, Tokijas, Japonija)
Mikroskopinis morfometrija
Audinių mėginiai iš antralinių sienos buvo nustatytos Histofix (Histolab produktai AB) ir įdėta į parafiną. Keturių mkm
storio sekcijos buvo montuojamas ant koduotų stikliukų ir nuolat dažomos hematoksilinu /eozinu (H & E). Iš gleivinės vienbranduoliniq ir polimorfonuklearinių leukocitų laipsnis buvo tiriamas šviesos mikroskopu. Plono sluoksnio Propria bus linkusios didinti tūrio kaip uždegiminių ląstelių antplūdžio rezultatas. Todėl santykinis tūris plonų sluoksnių Propria buvo įvertintas MORFOMETRIJA atspindėti abiejų vienabranduolėse ir polimorfonuklearinių leukocitų infiltracija. Tai buvo atlikti H.F.H. į šviesos mikroskopu, su 10 × 10 kvadratinių grotelių ir dėti į okuliarą ir × 25 objektyvu. Naudojant skaičiavimo temperatūros nustatymo metodas [22], tūris tankis plonų sluoksnių Propria buvo nustatomas ir išreiškiamas procentais vartoti per gleivinę, (šiuo atveju apibrėžiamas kaip tarp gleivinės paviršių ir liaukų apačioje regione). Gleivinės tūris čia apibrėžiamas kaip epitelio sluoksnio + plonų sluoksnių Propria. Gleivinės infiltracija polimorfonuklearinių leukocitų (PMNs) buvo įvertintas P.H. į šviesos mikroskopu, su 10 × 10 kvadratinių grotelių ir dėti į okuliarą A × 50 alyva pakrovimas objektyvu (N.A. 1,4) ir naftos pakrovimas viršų objektyvo kondensatoriaus (N.A. 1.4). PMNs buvo identifikuoti kaip maždaug apvalių ląstelių plonų sluoksnių Propria su tamsiai tamsintas multilobulated arba bilobulated branduolį. buvo apskaičiuotas PMNs kvadratinės regione vartoti per gleivinę, numeris, kaip buvo, kad bendras skaičius kvadratų daugiau nei plonų sluoksnių Propria; iš PMNs skaičius yra išreiškiamas už 1 mm 2 plonų sluoksnių Propria. Skaičiavimo pradėjo nuo liaukos apačioje ir baigėsi po vertinimo vienos iki septynių visą plotus gleivinės, todėl iš 0,077 mm 2lamina Propria analizuojami vienam skyriuje. Sistemingai imami mėginiai su atsitiktine pradžioje buvo naudojamas atrankos srityse turi būti tiriamas abiejų analizių. Vietos, kuriose limfinių folikulų nebuvo įtraukti.
Statistinė analizė
Kruskal-Wallis testas ir Mann-Whitney U testo vertinama reikšmę baltymų raiškos skirtumus tarp valdiklio, TN2GF4 užsikrėtę ir SS1 užsikrėtę grupės. Mann-Whitney U testas vertinamas reikšmę skirtumų gleivinės infiltracija uždegiminėmis ląstelėmis tarp TN2GF4 infekuotų ir SS1 infekuotų smiltpelėms. Tiesinė priklausomybė tarp AT1R-baltymų ir PMNs ir tiesinė priklausomybė tarp AT1R ir ln (MPO) į antralinių gleivinę, buvo bandomi su Pearson koreliacijos. Visi bandymai buvo du-tailed ir statistinis reikšmingumas buvo nustatytas p < 0,05. Visi statistinės analizės buvo atliktos naudojant SPSS versija 15.0 (SPSS Inc., Chicago, Illinois).
Rezultatai
lokalizacijos AT1R ir AT2R baltymų
reaktyvumas į AT1R ir AT2R baltymų buvo pastebėtas visose Smiltpelės egzempliorių mokėsi, ir ne dažymo buvo pastebėtas kontrolės skyriuose. AT1R antikūnai paprastai sukėlė daugiau atskirą dažymo nei AT2R antikūnų.
Keletas audinių kupė tiek tekstyno ir antralinėje dalyje, nepriklausomai nuo buvimo ar nebuvimo H. pylori
infekcijos, eksponuojami reaktyvumas tiek iš Ang II receptorių potipių (1 lentelėje pateikta rezultatų ir 1 figūroje reprezentatyvių sekcijų apžvalgą. taip pat žiūrėkite Papildoma failas 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 ir 15 didelės skiriamosios gebos vaizdus). Tokiu būdu, reaktyvumas tiek AT1R ir AT2R buvo rasta endotelio ląstelių laivų, esančių plonų sluoksnių Propria, submucosa (1B pav) ir muscularis Propria, taip pat kaip ir lygiųjų raumenų ląstelės muscularis gleivinės ir muscularis Propria (pav 1C ir 1G), o kai kuriais mezenchiminių ląstelių, esančių plonų sluoksnių Propria ir submucosa. Silpnas dažymo abiejų receptorių taip pat buvo pažymėta, daugiausia, bazinio dalis labiausiai epitelio ląstelių. nebuvo pastebėta skiriasi dažymo vidines neuroninių struktūrų. Reaktyvumas tik AT1R buvo pastebėtas kraujagyslių lygiųjų raumenų ląstelių laivų submucosa, kad muscularis Propria ir tiek tekstyno ir antralinių dalių skrandį (1a ir 1G paveikslas) serosa. Įdomu tai, kad stipri imunodažymu už AT1R pasirodė ląstelių pogrupyje daugiausia atsižvelgiant į antralinių liaukų bazę. Šios ląstelės parodė tipiškas endokrininės ląstelės išvaizdą, t.y. jie buvo gana mažas, su ląstelių telkinių arti pamatinės membranos; siauras eilutė citoplazmoje buvo pastebėtas kai kuriais atvejais (pav 1G 1H ir 1i). Pavyzdžiui AT1R dažymo negali būti rasta endokrininės sistemos kaip ląstelių oxyntic gleivinę. Dvivietis imunodažymu už AT1R ir už visos endokrininės persekiotoją Chromogranin A [23] patvirtino AT1R vietą iš endokrininių ląstelių Smiltpelės antralinių gleivinės (1M ir 1N paveikslas) .table 1 lokalizacijos AT1R ir AT2R baltymų skrandžio pogrupį siena Mongolijos smiltpelės
Audinių skyrius

kūneliai
AT1R

AT2R
gleivinės
Epitelinis audinys
Dauguma epitelio ląstelių
+ daugiausia bazinių dalių
+ daugiausia BASAL dalys MarketBook.lt mažųjų epitelinių ląstelių liaukų bazę
+++ kai, pavyzdžiui, ląstelių endokrininės į antralinėje dalyje
ne
lamina Propria
kraujagyslėse
+ in endotelio
+ in endotelio
nervų struktūros
jokios
ne
mezenchiminių ląstelės
++ kai ląstelėse;
++ į leukocitų H. pylori
-infected
+ kai ląstelėse;
++ į leukocitų H. pylori
-infected
Muscularis gleivinės
lygiųjų raumenų ląstelių
++
+
Submucosa
kraujagyslėse
+ in endotelio;
++ į VSMCs
+ in endotelio;
nėra į VSMCs
nervų struktūrų
jokios
nėra
mezenchiminių ląstelės
++ kai ląstelėse;
++ į leukocitų H. pylori
-infected
+ in kai kurios ląstelės;
++ į leukocitų H. pylori
-infected
Muscularis Propria
lygiųjų raumenų ląstelių
++
+
kraujagyslėse
+ in endotelio;
++ į VSMCs
+ in endotelio;
nėra į VSMCs
Nervų struktūros
n.o.
n.o.
serosa
kraujagyslėse
n.o. į endotelio;
++ į VSMCs
jokios
nėra: nenustatyta (arba neapibrėžtas) reaktyvumas
+: silpnas reaktyvumas, bet su atskira vieta
++: lengvai atpažįstamas reaktyvumas
+ ++: stiprus reaktyvumas
VSMCs: kraujagyslių lygiųjų raumenų ląstelių
1 pav Įrodžius imunohistocheminės vietą AT1R ir AT2R į Mongolijos smiltpelės skrandį. A-F rodo skirsnius iš antralinių regione yra SS1 infekuotus smiltpelės, 12 mėnesių po skiepijimo. A), kraujagyslių lygiųjų raumenų ląstelių (VSMC) į arteriją, esančio serosa dėmių teigiamas AT1R baltymų (žalia spalva). B) endotelio ląstelių (pabaiga) ir neatpažintų mezenchiminių ląstelių (m) esančių submucosa rodo reaktyvumas už AT2R baltymų. C) lygiųjų raumenų ląstelių, esantys raumenų sluoksnio muscularis própria dėmių teigiamas AT2R baltymų. D) neigiamas kontrolė (eilės į A skirsnyje) preabsorbed su blokavimo peptido už AT1R antikūnų, rodo geltona autofluorescencija nuo eritrocitų. E & F) Neigiami kontroliniai mėginiai, dėl AT2R antikūnų, eilės prie B &skyriuose; C, atitinkamai. G, H rodo atkarpą nuo antralinių regione kontrolės gyvūno 6 mėnesių po inokuliacijos, o į (I) skyriuje yra iš TN2GF4-užkrėstas smiltpelės, 12 mėnesių po inokuliacijos. Stiprus imunodažymu už AT1R buvo rastas ląstelių su tipiškas išvaizdą endokrininių ląstelių (e). Muscularis gleivinės (mm), muscularis Propria (MP) ir kraujagyslių lygiųjų raumenų ląstelių (VSMC) taip pat tamsintas teigiamas AT1R. Fosfatazės pagrįstas metodas (rudos spalvos) buvo naudojamas dažymui AT1R į G, H ir imr.rnofluorescencija (žalia spalva) buvo naudojamas dažymui AT1R (I). J K L), paeiliui skyriai iš antralinių regionui, TN2GF4 infekuotus smiltpelės, praėjus 6 mėnesiams po suleistas. J) imunodažymu už AT1R (žalia spalva) rodo visumų leukocitų (lėjos) ekspresuojančiam AT1R baltymų. K) neigiamas kontrolinis į J skirsnyje, rodoma geltona autofluorescencija nuo eritrocitų. L) eilės atkarpa į K skyriuje, nuolat tamsintas su H & E, patvirtinantis, kad agregatai leukocitai. M ir N kategorijų rodo dvigubą imunodažymu už AT1R (rudos spalvos M) ir už visos endokrininės persekiotoją Chromogranin A (raudona spalva n) yra antralinių skyriuje valdymo gyvūno. Balta rodyklė M ir N kiekis ne tuo atveju, jei antralinių liaukos bazę ląstelė, tamsintas teigiamas tiek AT1R ir Chromogranin A. Keletas Chromogranin teigiamą ląstelių nebuvo imunoteigiamų į AT1R. O sekcija demonstruoja neutrofilų (PMNs) į antralinių gleivinės Kurių SS1 infekuotus smiltpelės, 12 mėnesių po skiepijimo.
Intensyvumą bei paskirstymą pirmiau aprašytą reaktyvumas neatrodė skirtis tarp Helicobacter pylori
neigiamojo ir H. pylori
-infected gyvūnus arba tarp gyvūnų paaukota šešis arba 12 mėnesių po skiepijimo. Tačiau vienas akivaizdus skirtumas buvo pažymėta tarp H. pylori
negative ir H. pylori
-infected gyvūnų: skirtingai nei sveikų smiltpelėms, iš tiek antralinėje dalyje ir corpus infekuotų gyvūnų skyriai parodė uždegiminių ląstelių gausa į plonų sluoksnių Propria su reaktyvumas į tiek AT1R ir AT2R. Viename iš TN2GF4 infekuotų gyvūnų paaukota šešių mėnesių, užpildai uždegiminių ląstelių, taip pat buvo vertinamas atsižvelgiant į muscularis Propria (pav 1J, 1K ir 1L). buvo pastebėtas nėra akivaizdūs skirtumai dažymo modelių ar intensyvumo tarp užsikrėtusių su TN2GF4 kamieno ar SS1 kamieno gyvūnų, arba tarp gyvūnai paaukoti bent šešis ar 12 mėnesių po skiepijimo.
kiekybiniai analizės AT1R ir AT2R baltymų ir palyginti su uždegiminių ląstelių
dėl panašaus imunohistocheminio išvaizdos angiotenzino II receptorių tekstyno ir antralinėje dalyje (su iš AT1R išreiškiant pogrupis minėtų endokrininių ląstelių išimtis) abiejose šešių ir 12 mėnesių, kiekybiniai vertinimai buvo tik antralinių egzempliorių po 12 mėnesių po skiepijimo .
Abi AT1R ir AT2R baltymai buvo identifikuojama Imunoblotingo visuose mėginiuose (2 paveikslas). Po 12 mėnesių nuo infekcijos, The AT1R baltymo ekspresija buvo reikšmingai didesnis SS1 infekuotų gyvūnų nei kontrolės, tuo metu (3 paveikslas). Nerastas nei reikšmingų skirtumų AT2R baltymų raiškos tarp skirtingų grupių smiltpelėms (nerodomas). 2 pav pavyzdinę įvaizdį Vakarų dėmės. Į viršų skydelis: reaktyvumas prieš AT1R 41 kDa į PC 12 ląstelių lizate (teigiama kontrolė) ir antralinių pilno sienų pavyzdžių. Apačia skydelis: reaktyvumas prieš AT2R rodo silpną grupę 44 kDa į Hep G2 (teigiama kontrolė) ir juostų antralinių pilno sienų pavyzdžių
3 paveikslas Boxplot rodo AT1R baltymo ekspresiją 12 mėnesių po skiepijimo infekuotų H. pylori smiltpelėms. padermės TN2GF4 ir SS1 ir kontrolės. AT1R baltymo ekspresija buvo gerokai didesnė SS1 infekuotų gyvūnų, lyginant su kontrole (Kruskal-Wallis testo ir Mann-Whitney U testas). Baltymų lygiai yra pateikiami kaip optinis tankis (OT). Mediana vertės žymimos skersine linija per langelį, interkvartilinis plotis iki vertikalus dėžutės ir visos sritį, ūsai.
Turint omenyje, kad H. pylori
-infected gyvūnai rodė AT1R gausa išreikšti uždegimo ląstelės savo skrandžio gleivinės ir padidėjusios antralinių AT1R išraiška, buvo atlikta kiekybinė analizė uždegiminių ląstelių gleivinės įvertinti, ar up-reguliavimas AT1R baltymų SS1 infekuotų smiltpelėms buvo susijęs su gleivinės infiltracija uždegiminėmis ląstelėmis.
iš gleivinės infiltracija abiejų vienabranduolėse ir polimorfonuklearinių leukocitų (atsispindėjusi tūrio tankis plonų sluoksnių Propria) laipsnis nesiskyrė SS1 infekuotų ir TN2GF4 infekuotų smiltpelėms. Tačiau gleivinės infiltracija polimorfonuklearinių leukocitų (PMNs) buvo gerokai didesnė SS1 infekuotų gyvūnų nei TN2GF4 infekuotų gyvūnų per 12 mėnesių po skiepijimo (2 lentelė). Į H. pylori
-infected gleivinės PMNs sudarė beveik išimtinai neutrofilų (1o paveikslą); tik nedaugelis eozinofilinė ir jokių bazofilinės ląstelės gali būti identifikuojami microscope.Table 2 kiekybinės analizės uždegiminių ląstelių Smiltpelės antralinių gleivinės po 12 mėnesių nuo Helicobacter pylori
infekcijos

kontrolės
TN2GF4
SS1
Gleivinės vienbranduoliniq ir polimorfonuklearinių leukocitų (atspindi tūrio tankis (%) lamina Propria)
26,7 ± 2,4
47,1 ± 2,2
41,3 ± 2,4
Gleivinės infiltracija polimorfonuklearinių leukocitų (PMNs /mm2 lamina Propria)
198 ± 37
1892 ± 169
4166 ± 275 * *
Vertybės yra vidurkis ± standartinė paklaida vidutiniškai
** p. < 0,01, SS1 palyginti TN2GF4. Mann-Whitney U testas
tiesinė priklausomybė (r = 0,75, p < 0,01) buvo pastebėtas tarp AT1R baltymų ekspresijos į antralinėje dalyje ir polimorfonuklearinių leukocitų skaičiaus antralinių gleivinės po 12 mėnesių nuo H. pylori
infekcija (4 paveikslas). Šis santykis buvo palaikoma logaritminė koreliacijos tarp antralinių išraiška AT1R ir myeloperoxidase išraiškos (r = 0,58, p < 0,05) (5 pav). Myeloperoxidase (MPO) yra fermentas, kuris yra gausiai išreikštas neutrofilų ir mažesniu mastu monocitų ir tam tikrų tipų makrofagų [24]. Taigi, audinio lygiai MPO tarnavo kaip baltymų žymenų neutrofilų infiltracija šiame tyrime. Jei išskirčių vertės pažymėtos 5 paveiksle trikampyje pašalinti iš analizės (nebus rodomas atskirame paveiksle) tarp AT1R ir MPO santykiai tampa pastebimai stipresnis (r = 0,86 ir p < 0,01). 4 pav Ryšys tarp AT1R reikšti savo mintis antralinėje dalyje ir skaičiaus polymorphnuclear leukocitų (PMNs) į antralinių gleivinės po 12 mėnesių nuo H. pylori infekcija.
5 paveikslas Sąryšis tarp AT1R saviraiškos ir myeloperoxidase (MPO) išraiška antralinių gleivinės po 12 mėnesių H. pylori infekcija. Jei išskirčių vertės pažymėtos trikampiu pašalinami iš analizės (neparodytas) tarp AT1R ir MPO santykiai tampa pastebimai stipresnis (r = 0,86 ir p < 0,01).
Diskusijos
šiame tyrime ištirti bazinio lygio buvimas ir vieta angiotenzino II receptorius antralinių ir fizines sienos Mongolijos smiltpelės ir parodė, kad AT1R ir AT2R išreiškė langelių įvairovė. Iš ypatingos svarbos išvada, kad endokrininių ląstelių subpopuliacija į antralinių gleivinės parodė didelį išraišką AT1R. Kaip panaudotų šiame tyrime imunohistocheminio procedūros galiojimo buvo patvirtinta įvairiais būdais. Ang II receptorių antikūnų buvo nustatyta naudojant du skirtingus metodus, o iš pirminių antikūnų naudojamų tiek Imunoblotingo ir imunohistocheminiu specifiškumas buvo tikrinami lyginant dažymą modelius ir smiltpelės su žmogaus antinksčių ir preabsorption su blokavimo peptidas ( AT1R).
visur platinimas Ang II receptorių skrandžio čia ataskaitinį yra nuoseklūs, kas buvo pranešta anksčiau dvitaškis [7]. Autoradiografavimas žiurkės skrandžio taip pat nurodė, kad AT1R, ir žemos numeriai AT2R, yra visuose nuo [4] skrandžio sluoksnių. Tačiau tiksli vieta AT1R ir AT2R skrandyje buvo dar tik buvo retai ištirta. Macuo kt
. Naudota imunohistocheminis rasti AT1R žmogaus antralinėje dalyje ir nustatė, kad kraujagyslių lygiųjų raumenų ląstelių (VSMCs), mezenchiminių ląstelių ir lygiųjų raumenų ląstelių raumenų sluoksnius gleivinės ir muscularis Propria [25]. Be to, Bregonzio kt
.

• Helicobacter pylori infekcija sukelta skrandžio vėžiu; anksto skrandžio kamieninių ląstelių moksliniams tyrimams ir likusių uždavinių
• Vertinimas ir klinikinė reikšmė skrandžio amžiaus modelio įvertinti senėjimą skrandžio-a daugiacentrio tyrimo Kinijoje