Az angiotenzin-II-receptor expresszióját és kapcsolatban a Helicobacter pylori-fertőzés a gyomorban a mongol gerbil

angiotenzin-II-receptor expresszióját és kapcsolatban Helicobacter pylori
-infection a gyomorban a mongol futóegér
Abstract
alapon
a szerepe a renin-angiotenzin rendszer gyomor fiziológia és a betegség jelenleg még nem ritkán tárni. Az első vizsgálat célja az volt, hogy vizsgálja meg a kiindulási jelenlétét és helyét angiotenzin-II receptor (AT1R és AT2R) a gyomorban a mongol futóegér. Egy második cél volt annak tisztázása, hogy a H. pylori jelenlétének katalógusa fertőzés elváltozásokkal társult a kifejezés a ezekhez a receptorokhoz.
Módszerek
H. pylori
-negatív és H. pylori
fertőzött (törzs SS1 vagy TN2GF4) hím mongol futóegér vizsgáltuk. A gyomrot vizsgált hat vagy 12 hónapig a beoltás után a használata immunhisztokémia, Western blot és mikroszkópos morfometriai.
Eredmények
AT1R és AT2R voltak elhelyezve a különböző sejtek a versenyegér gyomor fal, beleértve a szubpopuláció endokrin sejtek a antrum nyálkahártyában és a gyulladásos sejtekben infiltráló H. pylori
-fertőzött gyomrot. Futóegerek fertőzött SS1 törzs szignifikánsan megnövekedett antrális AT1R fehérje expresszióját és megnövekedett számú infiltráló polimorfonukleáris leukociták (PMN) 12 hónap elteltével. Az AT1R fehérje expressziója korrelál a számát PMN és antrális expresszióját mieloperoxidáz.
Következtetések
Az angiotenzin II receptorok jelen vannak a különböző sejtek a gyomor falon a mongol futóegér. Az eredmények azt mutatják befolyásolja függ a H. pylori
megterheli a gyomor AT1R kifejezés és egy közötti kapcsolat gyomor AT1R expresszió és nyálkahártya PMN infiltráció.
Alapon
A szerepe a renin-angiotenzin rendszer (RAS) a gyomor fiziológia és a betegség jelenleg még nem ritkán tárni. Egyes tanulmányok arról számoltak be, az angiotenzin II (Ang II) a nyálkahártya véráramlását, savkiválasztás és simaizom-összehúzódást [1-3]. Mások játszanak a befolyása a RAS stressz által indukált gyomor sérülések és ischaemia /reperfúziós sérülés a gyomornyálkahártya [4, 5].
A klasszikus endokrin jellegét RAS jól ismert a hatása a hemodinamikai szabályozás és a test folyadék homeosztázis. Kevésbé ismert, a szabályozási hatása a szövet alapú helyi RAS hogy már kimutatták számos szervek, például az agy, a hasnyálmirigy, a nyelőcső és a vastagbél [6-8]. Az intersticiális termelés Ang II követően előfordulhat helyi termelés angiotenzinogén (AGT), az ACE és a renin, vagy alternatív utak, beleértve a hasítást a keringő Agt más helyileg kifejezve enzimeket, például katepszin D és kimáz [9]. Ang II működik elsősorban két receptor kijelölt Ang II 1-es típusú receptor (AT1R) és az Ang II 2-es típusú receptor (AT2R). Következésképpen feltérképezése expresszióját és helyét az Ang II receptorok nagy jelentősége van a feltárása potenciális Ang II jelátviteli különböző fiziológiás és patológiás beállításokat. Az utóbbi években a RAS kimutatták, hogy részt vesznek a különféle kóros állapotok, például gyulladás, sebgyógyulás és a karcinogenezis [10, 11]. Epidemiológiai vizsgálatok azt is bemutatták, összefüggést RAS kapcsolódó gén polimorfizmus (SNP-k), valamint a fejlesztés a gyomorfekély és a gyomorrák [12, 13]. Azonban összefüggést szöveti expressziója Ang II receptorok és a Helicobacter pylori fertőzés katalógusa nem számoltak be. A potenciális RAS modulálni helyi gyulladásos reakció teszi az érdeke, hogy vizsgálja meg annak kapcsán, hogy a jól definiált gyomorhurut által kiváltott H. pylori katalógusa.
A jelen tanulmányban kifejeződését vizsgáltuk az Ang II receptorok nem fertőzött és a H. pylori-fertőzött katalógusa mongol futóegér. Ez az állat modell azért érdekes, mert könnyen lehet fertőzött a H. pylori katalógusa, ami egy krónikus aktív gyulladás patológiás változásokat, amelyek utánozzák leginkább a léziók talált emberben, beleértve a gyomorfekélyt, gyomor- bél metaplázia és gyomorrák-szerű kép [14]. Akár H. pylori fertőzés önmagában katalógusa okoz gyomorrák mongol futóegér is vita tárgyát képezi [15].
Első vizsgálat célja az volt, hogy megvizsgáljuk a kiindulási jelenlétét és helyét az AT1R és a AT2R a gyomorban a mongol futóegér. A másik cél az volt annak tisztázására, hogy a H. pylori jelenlétének katalógusa fertőzés elváltozásokkal társult a kifejezés ezen receptorok. Katalógusa Módszerek
állatok katalógusa A kísérletek által jóváhagyott Etikai Bizottsága Kísérletek állatok, University of Göteborg. Harminc specifikus kórokozóktól mentes (SPF) hím mongol futóegér (Charles River, Uppsala, Svédország), hét hetes korban, használtunk. Ezeket véletlenszerűen szét három csoportba egyenlő méretű, amely egy kontrollcsoport és a két csoport, amelyek fertőzött H. pylori katalógusa. Öt állatot tartottunk minden ketrecben, és a szoba szabályozták a hőmérsékletet tekintve (18-22 ° C), a páratartalom (körülbelül 55%) és a világos /sötét ciklus (12 /12H). A futóegér szabad hozzáférése volt az élelemhez (2016F, Harlan Tek. Lab, kökény, Anglia) és az ivóvíz. Engedtük egyhetes akklimatizáció, mielőtt a beoltás.
Baktériumtörzsek és beoltás
Két különböző H. pylori
törzseket beoltáshoz használt, a TN2GF4 törzs [16] és a Sydney törzset 1 (SS1) [ ,,,0],17]. Mindkét törzs okoznak krónikus aktív gyulladás a versenyegér gyomor antrális és testi nyálkahártyát. A baktériumokat növesztjük Columbia lemezeken. Ezeket a tenyészeteket azután oltunk 500 ml Brucella táplevesben, amely 5% újszülött borjú szérumot, 10 ug /ml vankomicint és 5 ng /ml trimetoprim. A lombikokat 24 órán át inkubáljuk szerinti mikro aerob körülmények között 37 ° C-on. A baktériumokat vizsgáltuk fáziskontraszt mikroszkóppal, mielőtt beadjuk az állatoknak. A futóegér fertőztünk 0,5 ml baktérium-szuszpenzióval, vagy Brucella táplevesben csak (kontrollok) egy etetés tűt. Életképes baktériumok került sor a felfüggesztés határozza meg a tényleges fertőző dózisban, amelyek 7 × 10 7 egység és 4 × 10 7 egység SS1 és TN2GF4, ill.
Időbeni és feláldozni katalógusa miután egy 24 HR éhezési periódus szabad hozzáféréssel az ivóvízhez, öt állatot mindegyik csoportból leöltük hat vagy 12 hónapig a beoltás után. Az állatokat elaltattuk intraperitoneális injekcióval medetomodin (0,5 mg /kg) és ketamin (75 mg /kg). Egy középvonali laparotomiát végeztünk, és a gyomrukat eltávolítottuk, és kinyitotta mentén a nagyobb görbület. Az egyik felét használják a kultúra és a mintákat gyűjtöttünk a másik fele a szövettani vizsgálatok és Western blot analízis. Az állatokat leöljük kardiális bemetszés. Kórszövettani vizsgálatok eredményei és a bakteriológiai állapot már korábban leírták [14]. Katalógusa immunhisztokémiai katalógusa A teljes fal példányok (antrumban és corpus) gyűjtöttük után azonnal megkezdik a gyomrot, rögzített Histofix (Histolab termékek AB, Göteborg, Svédország ) szobahőmérsékleten (RT) egy éjszakán át, majd PBS-sel öblítjük 24 órán át. Mintákat ezt követően víztelenített, paraffinba ágyaztuk, vágjuk 5 μ
vastag metszeteket és üveg tárgylemezekre. Mielőtt immunohistocemical festés, metszeteket paraffint és forraljuk citromsav pufferben (0,01 M, pH = 6,0, 10 perc). A Immunocruz TM Staining Rendszer (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA) alkalmaztunk az immunhisztokémiai protokoll. Miután gátlását az endogén peroxidáz aktivitás, a nem specifikus kötődés a másodlagos antitestek által blokkolt inkubálás normál kecske szérummal 30 percig szobahőmérsékleten. A következő két poliklonális primer antitesteket, hígítások és inkubációs idők ezután alkalmaztuk: nyúl anti-AT1R (N-10, Santa Cruz Biotech, 1: 100 PBS-ben, 2 óra szobahőmérsékleten), és nyúl anti-AT2R (H-143, a Santa Cruz Biotech, 1: 100 PBS-ben, 2 óra szobahőmérsékleten). Inkubálás után primer antitestekkel, metszeteket háromszor mostuk PBS-ben, és próbaként egy biotinilált másodlagos antitestet; a komplex detektáltuk torma-peroxidáz (HRP) -streptavidin, és a szín felhasználásával fejlesztették 3,3'-diaminobenzidin (DAB).
Egy váratlan, erős festődést a sejteknek egy tipikus megjelenése endokrin sejtek után észlelték, immunhisztokémiai festéssel ezzel peroxidáz módszerrel. Immunoflourescens címkézés történt további zárja ki annak lehetőségét, hogy ez a festés volt az eredménye endogén biotin, az endogén peroxidáz vagy nem specifikus kötődés másodlagos ellenanyagot. A következő protokollt alkalmaztuk: a forralás után citromsav pufferben, a nem specifikus kötődés a másodlagos antitestek által blokkolt inkubálás normál kecske szérummal (SC-2043, Santa Cruz Biotech), 30 percig szobahőmérsékleten. Metszeteket elsődleges antitestekkel, mint fent. A lemezeket ezután háromszor mostuk PBS-ben, és próbaként egy másodlagos antitesttel Alexa Flour 488 konjugált kecske anti-nyúl IgG-t (A-11034, Molecular Probes Inc., Eugene, OR, USA), 1: 400 PBS-ben 1 óra hosszat szobahőmérsékleten. A tárgylemezeket következő háromszor mostuk PBS-sel és szerelt fluoreszcens beágyazó közeg (DakoCytomation, Glostrup, Dánia), amely után kép készített fluoreszcens mikroszkóp. Annak igazolására, a helyét a AT1R az endokrin sejtekben, kettős immunfestést végeztünk a fent ismertetett peroxidázt alapú protokoll AT1R és a fent leírt immunoflorescens címkézés protokoll egy primer antitest elleni chromogranin (C-20, Santa Cruz Biotech, 1: 100 PBS-ben, 2 óra szobahőmérsékleten). A nemspecifikus kötődést a másodlagos antitest (Alexa Flour 568-konjugált szamár anti-kecske IgG, A-11057, Molecular Probes Inc, 1: 800 PBS-ben, 1 óra szobahőmérsékleten) által blokkolt inkubálás normális szamár-szérum (SC-2044 santa Cruz Biotech). Preabsorpion feleslegben (5 ×) blokkoló peptid (SC-1173P, Santa Cruz Biotech) végeztük, mint a kontrollként a specificitását a AT1R antitest, míg a primer antitestet kihagytuk a AT2R.
A futóegér AT1R és AT2R van > 90% -os aminosavszekvencia-homológia szekvencia azonosságot mutat a humán, patkány és egér Ang II receptorok [18, 19]. A futóegér, mint a patkányok és egerek, két AT1R altípus (AT1aR és AT1bR), amelyek amelyeket eltérő gének kódolnak, de 95% -os aminosavszekvencia-homológia. Ezek a receptor altípus ismert, hogy különbségi módon lokalizált és szabályozni, de van egy hasonló affinitása az Ang II. Mivel a magas aminosav-szekvencia közötti homológia a versenyegér AT1aR és AT1bR azt feltételeztük, egyenlő affinitással a AT1R altípusok a AT1R ellenanyag használható a jelen tanulmányban. Továbbá, az ellenanyagok festésére alkalmazzák Ang II receptorok a gyártó által megállapított egerekben, patkányokban és emberekben. Ezért, hogy erősítse meg a specifitását ezek az antitestek a futóegér, metszeteket paraffinba ágyazott blokkok normál gerbil és humán mellékvesék megfestjük, mint fent (kivéve, hogy mind az elsődleges antitesteket 1:50 arányban hígítottunk PBS-ben), és az eloszlás minták az Ang II receptor antitestek vizsgáltunk. A mellékvese eloszlási vizsgálatok azt mutatták, hogy az anti-AT1R antitest túlnyomórészt festődő mellékvese kéreg sejteket a zona glomerulosa (festés a kapszula körül a mirigy, a vaszkuláris simaizomsejtek (VSMC-k) és az endoteliális sejtek is megjegyezték) mindkét versenyegér és az emberi szakaszokat. Az anti-AT2R antitest festett mellékvese velő sejtek és a zona glomerulosa a futóegér és humán mellékvese (festése VSMC és endothel sejtek is megjegyezték, ezzel a antitest). Ezek az eredmények megegyeznek a korábban közölt tanulmány [20], valamint a nagyfokú hasonlósága festési minták a futóegér és az emberi mellékvese támogatása általános hasznosságát antitestek futóegér szövetekben. Katalógusa Western blot katalógusa megnyitása után a gyomor, teljes vastagsága antrális fal mintákat azonnal összegyűjtjük, folyékony nitrogénben lefagyasztottuk, és -70 ° C-on. A mintákat homogenizáltuk jégen (Polytron, PT-MR 2100 Kinematica, Svájc) A pufferben (10% glicerin, 20 mM Tris-HCI pH = 7,3, 100 mM NaCi, 2 mM fenil-metil-fluorid, 2 mM EDTA, 2 nM EGTA , 10 mM nátrium-ortovanadátot, 10 ng /ml leupeptin és 10 ug /ml aprotinin) [21] és centrifugáltuk 30000 g-vel 30 percig 4 ° C-on. Az üledéket B pufferben (1% NP-40 [Sigma-Aldrich, Stockholm, Svédország] A pufferben) és az elegyet 4 ° C-on 1 óra hosszat, mielőtt centrifugálással 30,000 g-vel 30 percig 4 ° C-on. A felülúszókat elemeztük fehérjetartalomra által Bradford módszerével [21], és -70 ° C-on, amíg a további elemzéshez. A mintákat hígítottuk SDS pufferben, és 70 ° C-on 10 percig, mielőtt felvittük egy analizáljuk, NuPAGE 10% bisz-gélen (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Egy sáv tele volt megfestett molekulatömeg standardok (SeeBlue ™, Invitrogen AB, Lidingo, Svédország), és teljes sejtlizátum PC-12 (az AT1R; sc-2250, Santa Cruz Biotech), HEP G2 (az AT2R; SC- 2227, santa Cruz Biotech) és HL60 (fOR myeloperoxidáz (MPO); 12-354, Upstate Lake Piacid, NY, amerikai Egyesült Államok) alkalmaztunk pozitív kontrollként. Polyvinyldifluoride membránokat (Amersham, Buckinghamshire, Egyesült Királyság) inkubáltuk poliklonális nyúl elleni antitestekkel AT1R (N-10, Santa Cruz Biotech), AT2R (H-143, Santa Cruz Biotech) vagy MPO (07-496, Upstate). Egy alkalikus foszfatázzal konjugált kecske anti-nyúl antitesttel (SC-2007, Santa Cruz Biotech a AT1R és AT2R antitestek és az IgG 12-448, Upstate, az MPO antitest) és a CDP-Star szubsztrát (Tropix, Bedford, MA, USA ) alkalmaztunk azonosítására immunreaktív fehérjék chemiluminescense. A képeket egy hűtött CCD kamera (LAS-1000; Fujifilm, Tokió, Japán) és a félig számszerűsíthető összehasonlításával végezzük minták pozitív kontrollok felhasználásával Gauge 3.3 szoftver (Fujifilm, Tokió, Japán). Katalógusa mikroszkópos morfometriai
Tissue egyedeire antrális fal fixáltuk Histofix (Histolab Products AB) és paraffinba ágyaztuk. Négy μ
vastag metszeteket szerelt kódolt üveg tárgylemezre, és rutinszerűen megfestettük hematoxilin /eozin (H &E). A mértéke nyálkahártya beszivárgása mononukleáris és polimorfonukleáris leukociták vizsgáltuk fénymikroszkóppal. A lamina propria, hogy nagyobb lesz a mennyiség eredményeként a beáramló gyulladásos sejtek. Ezért a relatív hangerő a lamina propria értékeltük morfometria, hogy tükrözze a beszivárgása mind mononukleáris és polimorfonukleáris leukociták. Ezt végeztük H.F.H. egy könnyű mikroszkóp, 10 × 10-négyzetrács helyezünk a szemlencse és a × 25 objektív lencse. A pont számlálási módszer [22], a térfogat sűrűsége a lamina propria meghatároztuk, és százalékban kifejezve a nyálkahártya (ebben az esetben definíció szerint a régió között a nyálkahártya felületén és az alján a mirigyek). Nyálkahártya-mennyiség itt azt hámréteg + lamina propria. A nyálkahártya beszivárgása a polimorf leukociták (PMN) értékelték P. H. a fénymikroszkóp, egy 10 × 10-négyzethálós helyezünk a szemlencse, a × 50 olaj immerziós objektívvel (N. A. 1,4) és egy olaj immerziós fedőlencséhez a kondenzátor (N. A. 1,4). PMN azonosítottak durván kerek sejtek lamina propria a sötéten festett multilobulated vagy bilobulated mag. A számú PMN egy négyzet régióban a nyálkahártya meghatároztuk, ahogy a teljes száma négyzetek felett a lamina propria; száma PMN fejezzük 1 mm 2 lamina propria. A számlálás indult az alján a mirigyek és végül értékelését követően 1-7 teljes rendet a nyálkahártya, ami legalább 0,077 mm 2lamina propria elemezni egy rész. Szisztematikus mintavétel véletlenszerű kezdéssel használták kiválasztása területeket kell tanulmányozni mindkét elemzésben. Területeken nyiroktüszők nem került bele. Katalógusa Statisztikai analízis katalógusa A Kruskal-Wallis tesztet és a Mann-Whitney U-teszt értékelte jelentősége a különbség a fehérje expresszió a vezérlő, a TN2GF4 fertőzött és az SS1-fertőzött csoportok. A Mann-Whitney U-teszt értékelte jelentősége különbségek nyálkahártya gyulladásos sejtek közötti TN2GF4-fertőzött és a SS1-fertőzött futóegér. Között lineáris kapcsolat AT1R-fehérje és PMN-ek, és lineáris összefüggés AT1R és ln (MPO) az antrális nyálkahártya, vizsgáltak Pearson korreláció. Minden vizsgálatot kétfarkú, és a statisztikai szignifikancia p < 0.05. Az összes statisztikai elemzést végeztünk SPSS 15.0 (SPSS Inc. Chicago, Illinois). Katalógusa eredményei katalógusa lokalizálása AT1R és AT2R fehérje katalógusa immunreaktivitása az AT1R és a AT2R fehérjék figyelték meg az összes futóegér példányok tanulmányozták, és nem a festés volt megfigyelhető a kontroll szakaszok. Az AT1R ellenanyag általában indukált egy több különböző festési, mint a AT2R ellenanyag.
Több szövetmintát rekeszek mind a corpus és antrum, függetlenül a jelenléte vagy hiánya a H. pylori katalógusa fertőzés, mutatott immunreaktivitás mind a Ang II receptor altípusok (lásd 1. táblázat áttekintést az eredményeket, és az 1. ábrán a reprezentatív szakaszok. lásd még a további fájl 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 és 15 nagyméretű kép). Így immunreaktivitás mind a AT1R és a AT2R találtak endoteliális sejtekben hajók található a lamina propria, a submucosa (1B ábra), és a muscularis propria, valamint simaizom sejtek a muscularis nyálkahártya és muscularis propria (ábra 1C és 1G), és bizonyos mesenchymalis sejtek található a lamina propria és a nyálkahártya alatti szövetre. Gyenge festődés mindkét receptor is megjegyezték, főként a bazális része a legtöbb hámsejtek. Eltérő festés intramurális idegszerkezetek nem volt megfigyelhető. Immunreaktivitás csak AT1R volt megfigyelhető a vaszkuláris simaizomsejtek hajók a nyálkahártya alatti, a muscularis propria és a serosa mind a corpus és antrum részei a gyomor (1A és 1G). Érdekes, hogy egy erős immunfestés AT1R megjelent egy részhalmazát sejtek főként a bázis a antrum mirigyek. Ezek a sejtek mutattak tipikus endokrin sejt megjelenése, azaz voltak egészen kicsi, a sejttestek közel az alapmembrán; keskeny sor citoplazma figyelték meg néhány esetben (ábra 1G, 1H és 1I). Az ilyen AT1R festődés nem volt található az endokrin-szerű sejtek a corpus típusú nyálkahártya. Dupla immunfestés AT1R és a pán-endokrin marker chromogranin [23] megerősítette a helyét a AT1R egy szubpopuláció endokrin sejtek a futóegér antrális nyálkahártya (ábra 1 M és 1 M) .table 1 lokalizálása AT1R és AT2R fehérje a gyomor fal a mongol futóegér katalógusa Tissue rekesz Matton katalógusa Cellatípus Matton AT1R katalógusa
AT2R Matton nyálkahártya katalógusa hámszövet
legtöbb hámsejtek katalógusa + főként bazális alkatrészek katalógusa + főként bazális alkatrészek katalógusa Kis hámsejtek a bázis mirigyek katalógusa +++ néhány endokrin szerű sejtek antrumban katalógusa nincs katalógusa lamina propria katalógusa érrendszer katalógusa + in endothelium katalógusa + in endothelium katalógusa Nerve struktúrák
nem katalógusa nincs
mesenchymalis sejtek
++ egyes sejtekben; katalógusa ++ leukocitákban H. pylori katalógusa-fertőzött katalógusa + egyes sejtekben; katalógusa ++ leukocitákban H. pylori katalógusa -fertőzött katalógusa muscularis nyálkahártyák katalógusa simaizomsejtek katalógusa ++ katalógusa + katalógusa submucosát katalógusa érrendszer katalógusa + in endothelium; katalógusa ++ -ban VSMC katalógusa + in endothelium; katalógusa nincs a VSMC katalógusa Nerve struktúrák
nem katalógusa nincs katalógusa mesenchymalis sejtek
++ egyes sejtekben; katalógusa ++ leukocitákban H. pylori katalógusa-fertőzött katalógusa + in egyes sejtek
++ leukocitákban H. pylori katalógusa-fertőzött katalógusa muscularis propria katalógusa simaizomsejtek katalógusa ++ katalógusa + katalógusa érrendszer katalógusa + in endothelium;
++ a VSMC katalógusa + in endothelium; katalógusa nincs a VSMC katalógusa Nerve struktúrák katalógusa N.O. katalógusa N.O. katalógusa savóshártyát katalógusa érrendszer katalógusa N.O. az endothel; katalógusa ++ -ban VSMC
nem katalógusa no: nem figyeltek meg (vagy nem specifikus) immunreakció katalógusa +: gyenge immunreakciót de külön helyszínen katalógusa ++: könnyen felismerhető immunreakciót katalógusa + ++: erős immunreakciót katalógusa VSMC: vaszkuláris simaizomsejtek
1. ábra kimutatása immunhisztokémiai helyét AT1R és AT2R a gyomorban a mongol futóegér. A-F mutatja szakaszok a antrális régió egy SS1-fertőzött futóegér, 12 hónap után a beoltás. A) vaszkuláris sima izom sejteket (VSMC) az artéria található, a serosa folt pozitív a AT1R fehérje (zöld színű). B) Az endothel sejtek (vége) és azonosítatlan mesenchymalis sejtek (m) található, a nyálkahártya alatti mutató immunreakciót a AT2R fehérje. C) simaizomsejtek izomrétegének a muscularis propria folt pozitív a AT2R fehérje. D) A negatív kontroll (egymást követő a szakasz A) proteázgátlók blokkoló peptid az AT1R antitest, amely sárgán autofluoreszcenciája származó vörösvértestek. E & F) A negatív kontrollok a AT2R antitest, egymást követő, hogy a szakaszok a B & C, ill. G, H mutatja szakaszok a antrális régió egy kontroll állat 6 hónappal a beoltás után, és a szakaszt, az (I) egy TN2GF4-fertőzött futóegér, 12 hónap után a beoltás. Erős immunfestés AT1R találtak sejteket egy tipikus megjelenése endokrin sejtek (E). Muscularis nyálkahártyák (mm), a muscularis propriát (MP) és a vaszkuláris simaizom sejtek (VSMC) szintén pozitívan festődnek a AT1R. A peroxidáz alapú módszer (barna szín) használtuk festéssel AT1R G, H és immunfluoreszcens (zöld színű) használtunk festésére AT1R az (i). J, K és L) egymást követő szakasz a antrális régióban egy TN2GF4-fertőzött futóegér, 6 hónap a beoltás után. J) immunológiai festése AT1R (zöld színű) mutatja aggregátumok leukociták (leu) kifejező AT1R fehérje. K) A negatív kontroll a szakasz J, amely sárgán autofluoreszcenciája származó vörösvértestek. L) Az egymást követő szakaszban a szakasz K, rutinszerűen festettük H &E, megerősítve, hogy az aggregátumok leukociták. M és N mutatja kettős immunfestés AT1R (barna szín m-ben), valamint a pán-endokrin marker chromogranin (piros szín N) egy antrális részén egy kontroll állat. A fehér nyíl M és N pontok egy cellát a bázis egy antrális mirigy, amely festett pozitív mind AT1R és kromogranin A. Számos chromogranin pozitív sejteket nem immunpozitívak AT1R. Szakasz O bizonyítja neutrofil (PMN) a antrális nyálkahártya egy SS1-fertőzött futóegér, 12 hónapos oltás után.
Intenzitása és eloszlása ​​immunreaktivitására fentiek nem úgy tűnik, hogy a különböző a H. pylori katalógusa -kizáró és a H. pylori-fertőzött
állatok között, vagy a leölt állatok hat vagy 12 hónapos oltás után. Azonban az egyik nyilvánvaló különbség volt megfigyelhető a H. pylori katalógusa -kizáró és H. pylori-fertőzött állatok katalógusa: ellentétben a nem fertőzött futóegér, a szakaszok mind a antrumból és corpus fertőzött állatok mutatott rengeteg gyulladásos sejtek a lamina propria a immunreaktivitás mind a AT1R és a AT2R. Az egyik TN2GF4-fertőzött állatok leöltük hat hónap, aggregátumok gyulladásos sejteket is látható a muscularis propria (ábra 1J, 1K és 1 I). Nem nyilvánvaló különbségek a festési minták vagy intenzitása látták között fertőzött állatokat a TN2GF4 törzs vagy az SS1 törzs között vagy leölt állatok hat vagy 12 hónapos oltás után. Katalógusa számszerűsítése AT1R és AT2R fehérje és kapcsolatban gyulladásos sejtek
Mivel a hasonló immunhisztokémiai megjelenése az angiotenzin II receptorok a corpus és antrum (kivéve a AT1R expresszáló szubpopuláció endokrin sejtek fent említett) mindkét hat és 12 hónap, a mennyiségi értékelés arra korlátozódik, antrális próbadarabok után 12 hónappal a beoltás .
Mindkét AT1R és AT2R fehérjéket azonosítottak Western-blottal az összes mintában (2. ábra). 12 hónap után a fertőzés, a AT1R fehérje expresszió szignifikánsan magasabb volt SS1-fertőzött állatok, mint a kontrollcsoportban akkoriban (3. ábra). Nincs szignifikáns különbség a AT2R fehérje expressziós találtak a különböző csoportok között a futóegér (nem látható). 2. ábra példaként kép a nyugati blot. Felső panel: immunreaktivitása ellen AT1R 41 kDa PC-12 sejt-lizátum (pozitív kontroll) és a antrális teljes fal mintákon. Alsó panel: immunreaktivitása ellen AT2R jelezve egy halvány sávot 44 kDa Hep G2 (pozitív kontroll) és a sávok antrális teljes fal mintákat.
3. ábra box-plot-mutató AT1R fehérje expresszió után 12 hónappal a beoltás a versenyegereknél fertőzött H. pylori törzsek TN2GF4 és SS1 és a kontroll. Az AT1R fehérje expressziója szignifikánsan magasabb volt az SS1-fertőzött állatok a kontrollokhoz képest (Kruskal-Wallis teszt és Mann-Whitney U teszt). Fehérje szint van bemutatva, mint az optikai sűrűség (OD). Medián értékei jelzik a keresztirányú vonal a dobozon belül, az interkvartilis tartomány a függőleges kiterjedése a doboz és a teljes körű a bajuszát.
Tekintettel arra, hogy a H. pylori-fertőzött állatok katalógusa mutatott rengeteg AT1R kifejező gyulladásos sejtek a gyomor nyálkahártyáját, és fokozott antrális AT1R kifejezés, mennyiségi elemzését a gyulladásos sejtek a nyálkahártya tette annak megállapítását, hogy a fel-szabályozása AT1R fehérje SS1-fertőzött futóegér kapcsolódik a nyálkahártya gyulladásos sejtek.
a mértéke nyálkahártya beszivárgása mind mononukleáris és polimorfonukleáris leukociták (tükrözi a térfogat sűrűsége a lamina propria) nem különbözött SS1-fertőzött és TN2GF4 fertőzött futóegér. Azonban a nyálkahártya beszivárgás a polimorfonukleáris leukociták (PMN) szignifikánsan magasabb volt az SS1-fertőzött állatok, mint a TN2GF4-fertőzött állatok 12 hónapos beoltás után (2. táblázat). A PMN a H. pylori-fertőzött katalógusa nyálkahártya szinte kizárólag a neutrofil sejtek (ábra 1O); csak néhány eosinophil, és nem bazofil sejtekben lehetett azonosítani a microscope.Table 2 mennyiségi elemzése gyulladásos sejtek versenyegér antrum nyálkahártyában 12 hónap után a Helicobacter pylori
fertőzés
katalógusa Ellenőrző Matton TN2GF4 Matton SS1 Matton Nyálkahártya beszivárgása mononukleáris és polimorfonukleáris leukociták (tükrözi a térfogat sűrűség (%) a lamina propria)
26,7 ± 2,4 47,1 ± 2,2 katalógusa katalógusa 41,3 ± 2,4 katalógusa Nyálkahártya beszivárgása a polimorf leukociták (PMN /mm2 lamina propria) hotelben 198 ± 37 katalógusa 1892 ± 169 katalógusa 4166 ± 275 * *
az értékek átlag ± standard hiba átlaga.
** p < 0,01, SS1 versus TN2GF4. Mann-Whitney U-teszt
egy lineáris összefüggés (r = 0,75, p < 0,01) volt látható a AT1R fehérje expresszióját az antrumban száma és a polimorfonukleáris leukociták az antrális nyálkahártya 12 hónap után a H. pylori
fertőzés (4. ábra). Ezt az összefüggést támogatta a logaritmikus összefüggés a antrális expresszióját AT1R és a kifejezés a mieloperoxidáz (r = 0,58, p < 0,05) (5. ábra). Myeloperoxidáz (MPO) egy enzim, amely bőségesen fejezik ki a neutrofil és kisebb mértékben a monocitákban és bizonyos típusú makrofágok [24]. Ezért, szöveti szintje MPO szolgált fehérje markerek a neutrofil infiltráció ebben a vizsgálatban. Ha a kiugró érték egy háromszög jelöli az 5. ábrán van zárva az elemzés (nem látható az egy külön ábra) közötti kapcsolat AT1R és az MPO válik észrevehetően erősebb (r = 0,86 és p < 0,01). 4. ábra közötti kapcsolat AT1R kifejezés az antrumban és száma polymorphnuclear leukociták (PMN) a antrális nyálkahártya 12 hónap után a H. pylori fertőzés.
5. ábra közötti kapcsolat AT1R kifejezés és mieloperoxidáz (MPO) kifejezést az antrális nyálkahártya után 12 hónap a H. pylori fertőzés. Ha a kiugró érték egy háromszög jelöli ki van zárva az elemzés (nem látható) közötti kapcsolatot AT1R és MPO válik észrevehetően erősebb (r = 0,86 és p < 0,01). Katalógusa Megbeszélés katalógusa A jelen tanulmány vizsgálta a kiindulási jelenlétét és helyét az angiotenzin II receptorok a antrális és testi fal a mongol futóegér és kimutatták, hogy a AT1R és AT2R fejeztük a különböző sejtekben. A megállapítás különösen fontos volt, hogy egy bizonyos alcsoportja endokrin sejtek antrális nyálkahártya mutatott jelentős kifejezése AT1R. A érvényességét a immunhisztokémiai eljárás használható a jelen tanulmány megerősítette különböző módokon. Az Ang II receptor antitestek alkalmazásával detektáltuk két különböző technikával, és specifikussága a primer antitestekkel egyaránt használható Western blot és immunhisztokémiai ellenőriztük összehasonlításával festődési minták a versenyegér azokkal a humán mellékvese és preabszorpció blokkoló peptid ( AT1R).
a mindenütt jelenlévő eloszlása ​​Ang II receptorok a gyomorban itt közölt összhangban van-, amit már korábban beszámoltunk a vastagbélben [7]. Az autoradiográfiás a patkány gyomor is jelezte, hogy AT1R, és alacsony száma AT2R, jelen vannak az összes réteget a gyomor [4]. Azonban a pontos helyét az AT1R és AT2R a gyomorban a jelenleg még csak nem ritkán tárni. Matsuo és munkatársai katalógusa. Használt immunhisztokémia, hogy keresse AT1R humán antrum, és megállapította, hogy a vaszkuláris simaizom sejtek (VSMC-k), mesenchymalis sejtek és simaizom sejtek a izmos réteg a nyálkahártya és muscularis propria [25]. Továbbá Bregonzio munkatársai katalógusa.

• Helicobacter pylori fertőzés okozta gyomorrák; előre gyomor őssejtkutatás és a fennmaradó kihívások
• Értékelés és klinikai jelentősége a gyomor kor modell értékelésére elöregedése a gyomor-multicentrikus tanulmány Kínában