MicroRNA-206 Hien gastric Kriibs Zell Wuesstem an Metastasen

MicroRNA-206 Hien gastric Kriibs Zell Wuesstem an Metastasen VerfÜgung méiglech VerfÜgung Gastric Kriibs ass eng vun den Haaptfiguren Ursaachen vun Kriibs Doud Welt-grouss an dréit eng héich Taux vun metastatic Risiko. Nieft anere FAQ-coding oncogenes an entholl suppressor Genen, Leeschtung microRNAs eng wichteg Roll am gastric Kriibs tumorigenic Werdegang. Hei, weisen mir dat Mir-206 um Ofstand nidderegen Niveau vun engem Kohort vun gastric erhéijen Verglach zu passend normal Stoffer ausgedréckt ass, an zu enger Rei vun gastric Kriibs Zell Linnen. Down-Regulatioun vum Mir-206 gouf besonnesch däitlech am erhéijen mat lymphatic Metastasen, lokal Invasioun, an fortgeschratt TNM Stadium. Mir fannen, datt gezwongen Ausdrock vu Mir-206 Trupen dem Prolifératioun, Kolonie-Opstellung, an xenograft tumorigenesis vun SCG-7901 Zellen, eng Linn vun gastric Kriibs Zellen. Forcéiert Ausdrock vu Mir-206 Trupen och SCG-7901 Zell Wanderung an Invasioun, souwéi Metastasen zu Zell Kultur oder Schwäif-verfeelt heijen Maus Modeller, bzw.. D'Anti-metastatic Effet vum Mir-206 ass wahrscheinlech duerch gezielt Metastasen reglementaresche Genen STC2, HDAC4, KLF4, IGF1R, FRS2, SFRP1, BCL2, BDNF, an K-ras mediated, déi drastesch waren verwandelt-reegelen stabil Ausdrock vun exogenous Mir -206 zu SCG-7901 Zellen. Geholl zesummen, eis Resultater weisen, datt Mir-206 entholl suppressor vun gastric Kriibs ass um Schrëtt handele datt Metastasen regléieren. VerfÜgung Schlësselwieder VerfÜgung Gastric Kriibs Mir-206 Metastasen entholl suppressor Erschléisse VerfÜgung Gastric Kriibs (GC) verléiert de véiert stäerkste gemeinsam Kriibs an der zweeter Virwaat Ursaach vum Kriibs-Zesummenhang Doud weltwäit [1]. Iwwregens hätt fir Patiente mat fortgeschratt gastric Kriibs ass schlecht, trotz rezenten Verbesserungen am gastriectomy, Chimiotherapie goen, an radiotherapy [2]. Zanter GC eng polygenic Krankheet entstane wéi d'Resultat vun Multiple Gentherapie dysregulations ass, Opkläerungsaarbecht vun der reglementaresche Reseau GC tumorigenesis letzebuergescht fir Entwécklungslänner Roman geziilte Therapien Imperativ ass. Tumorigenesis am Mo. VerfÜgung ass eng multistep Prozess déi genetesch a epigenetic hire Restaurant vun FAQ gehéiert -coding grad wéi Net-coding proto-oncogenes an entholl-suppressor Genen. Interaktiounen tëschent Provider, Ëmwelt- a bakteriell Fakteur'en en Afloss och d'Krankheet Fortschrëtt. Helicobacter pylori VerfÜgung (HP) Wonn als Risk Faktor ass fir GC gegrënnt; déi zwee histological bestemmt vun gastric Kriibs, d'intestinal an der diffusen bestemmt, sinn souwuel mat HP Wonn verbonnen, wat zu méi wéi 80% vun de Fäll [3], virun allem zu antral /Kierper gastric Kriibs dréit [4]. Mechanistically, war HP Wonn fonnt enger duebeler Erhéijung vun EGF an EGFR zu gastric antral Fro Stoffer ze féieren, mä säi Kampf verklengert sech den Niveau vun zwee Facteuren zu deene vun der Kontrollen [5]. HP Wonn an Patienten mat chronescher gastritis och vill mat verwandelt-Regulatioun vun E-cadherin wéinst fräi Promoteur methylation [6] verbonnen ass, Coursë Kampf HP bedeitend de Niveau vun MMP-9 reduzéiert, engem metalloproteinase positiv mat entholl Invasioun an Metastasen verbonne [ ,,,0],7], an der antrum an den lénken mucosa [8]. VerfÜgung Nieft HP Wonn, do ass eng ganz Rei vu Grënn un aberrant Gentherapie Ausdrock vun gastric Kriibs Virwaat, an de Mechanismus vun Metastasen gastric Kriibs ass eng ganz komplex wéi gutt . De Ras-ofhängeg MAPK sécher, déi spéider zu fräi Verbreedung zu gastric Kriibs féiert a gëtt haaptsächlech vun der geometrescher Figur vun K-ras Aktivéierung ëmmer, ass dacks mat der intestinal-Typ gastric Kriibs verbonne [9]. Stanniocalcin 2 (STC2), engem secreted glycoprotein mat wichteg Funktiounen am Kalzium an phosphate homeostasis, war gemellt an héijen Niveauen kriibserreegend gastric Stoffer, lymph Node Metastasen ausgedréckt gin, a Schwächt Invasioun [10]. De 5-Joer Iwwerliewe Taux war wesentlech méi déif an Patienten mat STC2 Ausdrock Verglach zu Patienten ouni STC2 Ausdrock [11]. BDNF (Brain-ofgeleet neutrophic Faktor) Ausdrock Rapport war vill fräi Meenungsäusserung an gastric Kriibs Otemschwieregkeeten ze weisen Verglach zu bascht normal mucosa, an héijen Niveau vun BDNF um invasiv virun sech ze pompelen Invasioun soll, lymph Node Metastasen, peritoneal Publikatioun, an den armen Iwwregens hätt an gastric Kriibs Patienten [12]. Trotz de Fortschrëtt heivun reglementaresche Genen vun Erkenntnesser, déi genee Basisdaten Mechanismus dauernd GC Metastasen bleift nach alles ze gin. VerfÜgung Dysregulations vun microRNAs ganz wichteg Roll am tumorigenesis Leeschtung. D'Roll vun microRNAs zu tumorigenesis gastric Kriibs ass och dokumentéiert. Hei, stelle mir op Mir-206, déi mat hire enk Zesummenhang paralogs Mir-1, 133a, a Mir-133b, spillt eng wichteg Roll am Muskel dat. Dës véier microRNAs sinn zu Haaptrei a Frankräich Organisatioun héich conserved, a si genannt myomiRs well si fonnt goufen an de Muskelen [13] am héijen Niveauen ausgedréckt gin. Mir-1-1 /Mir-133a-2, Mir-1-2 /Mir-133a-1, an Mir-206 /Mir-133b Form Stärekéip an dräi verschiddene chromosomal Regioune vun der mënschlecher Nepgen 20q13.33, 18q11.2 , an 6p12.2, bzw.. Allerdéngs, kann dës miRNAs als entholl suppressors zu verschiddenen Mënsch Cancers Akt [14]; zum Beispill, Mir-1 an Mir-133a goufen dacks duerch-reglementéiert BBC Cancers gin fonnt, an entholl Wuesstem oofgesinn vun gezielt TAGLN2 [15]. Mir-1 an Mir-206 huet dës Distanz an ähnleche entholl-suppressor Rollen an rhabdomyosarcoma besëtzen duerch erauszesichen c-hu Ausdrock [16]. Mir-206 huet och als entholl-suppressor zu Broscht Kriibs [17], an haett Kriibs [18] zu Akt gemellt. Mir Rapport hei dass Mir-206 Ausdrock inversely mat lymphatic Metastasen, lokal Invasioun verbonnen ass, an d'TNM malignancy Stadium vun GC, a Kraaft Ausdrock vu Mir-206 GC Hien Zell Wuesstem, tumorigenesis, an Metastasen. VerfÜgung spontan a Methoden
Ray Echantillon VerfÜgung Surgically Mënsch gastric Kriibs an bascht Net-entholl Stoffer resected sech aus 35 Patiente an d'Pompjeeën vun Gastrointestinal befënnt, déi laizistesch Hospital vun Nanjing Medical University (Changzhou Second Leit d'Spidol) zouginn kritt. De Projet gouf vun der Fuerschung IFLA- Comité vun Nanjing Medical Universitéit ugeholl, an eng schrëftlech Erlaabnes war vun all Patient an dëser Etude Coursë kritt. All Otemschwieregkeeten Echantillon waren fir Stockage zu flëssegem Stéckstoff Filteren an H &. E staining fir agebousst Analyse VerfÜgung Zell Linnen an Zell Kultur VerfÜgung Mënscherechter gastric Kriibs Zell Linnen SGC-7901, BGC-823, AGS, Net-malignant gastric Zell Linn GES-1, an HEK293T Zellen sech aus der Zell Ressourcen-Center, Shanghai Institut vun Biochimie a Zell Biologie, Chinesesch Akademie vun de Wëssenschaften kaaft. Dës Zellen sech an enger Loftfiichtegkeet incubator bei 37 ° C, 5% CO 2 an SGC-7901 haten, BGC-823, an GES-1 Zellen sech cultured zu RPMI1640 mëttelfristeg, HEK293T Zellen zu DMEM, an AGS Zellen zu F12K mëttelfristeg, bzw.. All Kultur Medien sech mat 10% An et Bovine serum nà an Antibiotiken. VerfÜgung RNS erauszéien a grouss real-Zäit Hinnen alleguer VerfÜgung Total RNS aus gastric Stoffer oder Zell goufe benotzt Trizol reagent Quecksëlwer (TaKaRa) laut den Hiersteller d'Uweisungen. cDNA war mat der PrimeScript RT reagent Kit (TaKaRa) Wierderbuch. Chemeschen RT-Hinnen alleguer war mat engem SYBR Premix Ex Taq Kit (TaKaRa) op eng 7500 real Zäit Hinnen alleguer System (Abi) an analyséiert mat der SDS Analyse Software Package (Versioun 2.0.1, Obwuel Biosystems) duerchgefouert. Hinnen alleguer primers sech aus Invitrogen kritt, an d'Reaktioun war 95 ° C, 10 min, gefollegt vun 40 Zykle vun 95 ° C 15 Sekonnen an 60 ° C, 1 min. D'U6 snRNA war wéi eng intern Kontroll benotzt. D'Resultater goufen als fantastesch änneren virgestallt, berechent mat der 2 -. △ CT Method, an engem Verhältnis vu Ausdrock an der famill erhéijen an d'normal Stoffer manner wéi 1.0 sou niddereg considéréiert gouf VerfÜgung Vecteure gesond VerfÜgung Pri -miR-206 gouf aus normale Mënsch Frankräich DNA vun Hinnen alleguer mat primers Implikatioune: 206-Fir 5'-ATAAGAATGCGGCCGCAGATGCGGGCTGCTTCTGGA-3 'an 206-Rev 5'-AGCTTTGTTTAAACCCTTGGTGAGGGAGTCATTTGC-3 ". D'Hinnen alleguer ofgesprengt gouf an der MSCV-P2GM Vecteure hin P2GM-Mir-206 ze generéieren. Déi eidel P2GM Vecteure war den Kontroll. VerfÜgung Zell transfection VerfÜgung Plasmid transfection vun SGC-7901 Zellen goufen higeriicht benotzt lipofectamine 2000 (invitrogen) benotzt ginn, an déi stabil clones P2GM-Mir-206 oder d'Linn drécke Vecteure Droen sech ausgewielt fir puromycin Resistenz (10 μg /ml). Mir-206 an negativ Kontroll mimics goufen aus Ribobio (lousoihong, China) an transfection vun mimics zu SGC-7901 Zellen war mat Oligofectamine (Invitrogen) gemaach. Kuerz, SGC-7901 Zellen virdrun 1 Dag plated eraus goufen um Erréchen 50% Niewebaach 100 nm vum Mir-206 oder Kontroll mimics transfected. No 48 h, goufen d'Zellen fir weider Analyse Filteren. VerfÜgung Zell Prolifératioun assay VerfÜgung MTT assay der proliferative Taux vun SGC-7901 Zellen Devis war benotzt. Kuerz, goufen SGC-7901 Zellen 2 Deeg no transfection trypsinzed a bei 2,5 × 10 3 Zellen pro gutt an 96-gutt Placke reseeded. MTT (3- (4, 5-dimethylthiazol-2-yl) -2, 5-diphenyl-tetrazoliumbromide) war fir leit Stonnen um spezifizéierter Intervalle zu der Kultur mëttelfristeg agefouert, an déi absorbance bei 490 nm huet mat enger spectrophotometer gemooss. All assay war zu triplicates standing an widderholl dräimol onofhängeg. VerfÜgung Kolonie Opstellung assay VerfÜgung gëllt SCG-7901 Zellen Droen Mir-206 oder d'Linn drécke Kontroll goufen trypsinized an replated op 1 × 10 3 pro gutt an 6 -well Placken. No 14 Deeg an der Kultur an RPMI1640 mat 10% FBS ergänzt, goufen Kolonien mat 3,7% methanol fix a mat 0,1% glaskloer mauve Kierchefënster. Kolonien mannst 50 Zellen mat sech domatter. All assay war zu triplicates gesuergt. VerfÜgung cytometry Flow VerfÜgung SGC-7901 Zellen transfected mat Mir-206 rescht oder negativ Kontroll huet an 1 × bindend gefiermt op 1 × 10 6 Zellen /ml trypsinized an resuspended. 100 μl vun dëser Zell Ophiewe war mat 5 l vun FITC-Annexin V an 5 μl propridium Kaliumiodid (PI) fir 15 Minutten an den däischteren incubated. D'Reaktioun war mat der Aféierung vun 400 μl 1 × bindend gefiermt kom- an analyséiert mat (FACSCalibur der CellQuest Software benotzen (Becton Dickinson). FITC-Annexin V-positiven an PI-negativ Zellen als apoptotic an der Experimenter considéréiert goufen goufen higeriicht an triplicates. VerfÜgung Migratioun an Invasioun assays VerfÜgung verkënnegt Zell Migratioun Meter gouf duerch Miessunge vun der Zirkulatioun vun Zellen an enger acellular Beräich vun dat well d'Spuenien wär Zell Wiss mat enger 200 μl Pipette Tipp. d'Meter Zoumaache war 48 HR geschaf évaluéieren spéit fotografeschen ënner engem microscope. fir transwell Migratioun assays, 5 × 10 4 Zellen sech an der ieweschter ëmkomm vun der Neiegkeet derbäi (BD Science, Sparks, MD, USA), wobäi 1 × 10 5 Zellen fir matrigel agesat goufen Invasioun assays. an dës Experimenter, goufen d'Zellen trypsinized an serum-gratis mëttelfristeg resuspended virum zu der ieweschter Chambre rakommen ginn. d'voll Kultur mëttelfristeg wouvun 10% FBS am ënneschten Chamber dobäi war. D'Zellen sech fir 24 h an enger humidified incubator bei 37 ° C incubated. D'Zellen op der dënner sech fest, geschriwwen, an gezielt. All Experimenter war zu triplicates gesuergt. VerfÜgung Xenograft entholl Modell VerfÜgung Young weiblech athymic Sauna Mais (6 Wochen al) aus dem Model Déieren Research Center vun Nanjing University kaaft huet. Ongeféier 1,5 × 10 6 stabil SGC-7901 Zellen P2GM-Mir-206 oder d'Linn drécke Vecteure Droen sech subcutaneously an den ënneschten Säite vun 5 Sauna Mais heijen. Entholl Wierker goufen Stonn un all 3 Deeg aus de sechsten Dag Post Sprëtz gemooss fir 24 Deeg virun den Déieren geaffert huet. D'Finale Volumen a Gewiicht huet gemooss nom erhéijen Leschten goufen. Sauna Mais sech manipuléiert an Refuge fir no NIH Déieren Care an Benotzt Comité Direktiven am fonnt Déieren Center vun der Nanjing Medical University (Nanjing, Jiangsu, Province, PR China). VerfÜgung statistique Analyse VerfÜgung statistique Analyse Leeschtung war mat der SPSS Software Package (SPSS Standard Versioun 16,0, SPSS INC). Date goufen als mengen ± Sem gewisen. D'vläit-Echantillon t VerfÜgung Azeton war an der Analyse vun Ënnerscheed Mir-206 Ausdrock tëscht entholl an normal Stoffer déi benotzt. Fir eng kënschtlech an VIVO Experimenter, onofhängeg-Echantillon t VerfÜgung Azeton war fir Fliessband d'Bedeitung vun Ënnerscheed tëscht der Behandlung an Kontroll Gruppen benotzt. P Wäert &Si besteet; 0,05 als statistesch relevant considéréiert gouf. VerfÜgung Resultater VerfÜgung Down-Regulatioun vum Mir-206 mat mënschlechen gastric Kriibs tumorigenesis deemolegt Weltbild, Invasioun, an Metastasen VerfÜgung An enger Nepgen breet Ëmfro fir microRNA Ausdrock, mir virdrun e puer Memberen vun identifizéiert der myomiR Famill, nämlech Mir-1 /133a an Mir-133b /206, deem Niveau sech zu engem neuroectodermic Kriibs (Engels Resultater) reduzéiert. Dës microRNAs sech haaptsächlech bekannt an myogenic dat ze Funktioun an, fir e Goal hu Supérieur, de tumorigenesis vun Cabinet Cancers. Fir ze wëssen, ob dës myomiRs och eng Roll an der tumorigensis vun gemeinsam Cancers vun den Erwuessenen hunn kéinten, iwwerpréift mir hiren Ausdrock Niveau vun real-Zäit Desaccord-Glück RT Hinnen alleguer quantification zu engem Kohort frësch gastric erhéijen resected an hir normal Stoffer passend, an de Steiren Verhältnis vu Mir-206 Familljemembere vun den 35 erhéijen zu U6 snRNA fonnt dass war 4-fantastesch niddreg wéi déi vun den normale Stoffer (Dorënner 1A). Pair-schlau Verglach uginn, datt iwwer 85% vun erhéijen zougedréckt méi wéi 2-fantastesch Reduktioun vum Mir-206 Ausdrock Verglach zu passend Kontrollen, mat nëmmen zwee Puer weist Erhéijung (Dorënner 1B). Ausdrock vun Mir-206 huet ofgeholl och zu enger Rei vu mënschlechen Linnen gastric Kriibs Zell, dorënner SGC-7901, BGC-823, MGC-803, an AGS Zellen, am Verglach zu deem zu GES-1 normal gastric Zellen (Dorënner 1c). Clinicopathological records vun dësen erhéijen gewisen, datt d'Reduktioun vum Mir-206 Ausdrock vill mat lymphatic Metastasen, lokal Invasioun verbonne war, an der TNM malignancy Stadium, awer net mat Alter, Geschlecht, entholl Gréisst oder Standuert (Table 1). Dës Donnéeë musse Mir-206 kann normalerweis eng inhibitory Kontroll iwwert gastric tumorigenesis, Invasioun, an Metastasen noutwänneg. Figur 1 reduzéiert Niveau vun Mir-206 Ausdrock vun gastric Kriibs Stoffer an Zell Linnen. (A) Distribution vum Mir-206 Ausdrock vun enger Kohort vun 35 Mënsch GC an noncancerous Stoffer vun qRT-Hinnen alleguer. D'endogenous U6 RNS war wéi déi intern Kontroll benotzt. (B) Pairwise Verglach vum Mir-206 Ausdrock tëscht GC an Aklang Net-kriibserreegend Stoffer weist Mir-206 Ausdrock zu 86% reduzéiert war (30/35) vun der Prouf opzefëllen. (C) famill Ausdrock vu Mir-206 zu véier GC Zell Linnen an eng normal gastric Zell Linn (GES-1). VerfÜgung Table 1 Clinicopathologic Charakteristiken vun Mir-206 VerfÜgung Kategorie
NEE. vun Patienten rel Niveau vun Mir-206
(mengen ± Sem)
P-Wäert
Geschlecht VerfÜgung Männlech VerfÜgung 21 VerfÜgung 0,49 ± 0,07
0,32 VerfÜgung Weiblech VerfÜgung 14 VerfÜgung 0,40 ± 0,06 VerfÜgung Alter (Joer) VerfÜgung ≥60 VerfÜgung 19 VerfÜgung 0,45 ± 0,05 VerfÜgung 0,93 VerfÜgung &Si besteet; 60
16 VerfÜgung 0,46 ± 0,09 VerfÜgung Duerchmiesser (cm) VerfÜgung ≥5 VerfÜgung 13 VerfÜgung 0,46 ± 0,09 VerfÜgung 0,90 VerfÜgung &Si besteet; 5 zur VerfÜgung 22 VerfÜgung 0,45 ± 0,05 VerfÜgung Location VerfÜgung Mëttelalter an proximal drëtt VerfÜgung 23 VerfÜgung 0,47 ± 0,06 VerfÜgung 0,65 VerfÜgung Distal drëtt VerfÜgung 12 VerfÜgung 0,42 ± 0,07 VerfÜgung studéiert dat VerfÜgung gutt an mëttelméisseg VerfÜgung 12 VerfÜgung 0,48 ± 0,07 VerfÜgung 0,70 VerfÜgung LINN VerfÜgung 23 VerfÜgung 0,44 ± 0,07 VerfÜgung lokal Invasioun VerfÜgung T1 + T2 VerfÜgung 10 VerfÜgung 0,65 ± 0,07 VerfÜgung 0,01 VerfÜgung T3 + T4 VerfÜgung 25 VerfÜgung 0,37 ± 0,05 VerfÜgung Lymph Node Metastasen VerfÜgung KENG VerfÜgung 14 VerfÜgung 0,57 ± 0,06 VerfÜgung 0,04 VerfÜgung JO VerfÜgung 21 VerfÜgung 0,38 ± 0,07 VerfÜgung TNM Etapp VerfÜgung ech II + zu 12 VerfÜgung 0,60 ± 0,07 VerfÜgung 0,02 VerfÜgung III + IV VerfÜgung 23 VerfÜgung 0,38 ± , mee Ausdrock vu mir-1, deenen hir Genen sinn Strooss mat deenen Zeechesaatz mir-133a: 0,06 VerfÜgung Expression vum mir-133a war och déi uewendriwwer Critèren (Dorënner S1 Weider Fichier 1) vun der erhéijen gin verwandelt-reegelen fonnt [14], war net (Zousätzleche Fichier 2: Dorënner S2). Zanter Mir-206 vun engem eemolege Gentherapie encoded ass, ass fir weider Analyse gewielt gouf. VerfÜgung Mir-206 gastric Kriibs Zell Wuesstem VerfÜgung bremst Fir erauszefannen, ob Mir-206 der propensity gastric Kriibs tumorigenesis zu oofgesinn huet, agefouert mir e syntheteschen duebel gekëmmert Mir-206 mimics, 206mi, den Niveau vun insgesamt Mir-206 zu SGC-7901 gastric Kriibs Zellen ze vergréisseren, wat fir déi vun GSE-1 normal Kontroll Zellen (Dorënner 1c) eng héich Niveau vum Mir-206 relativ ausdréckleche an iwwerwaacht, den Taux vun Zell Wuesstem mat der tetrazolium Hoerfaarw, 3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT). Stammzellefuerschung-Glück Hinnen alleguer confirméiert de Bistum Niveau vum Mir-206 zu der transfected SGC-7901 Zellen (Dorënner 2A), an Resultater aus der MTT assay uginn, datt d'Taux vun deenen Zellen Ofstand am Verglach zu deem vun den Zellen reduzéiert war Erhalen Net- spezifesch Kontroll mimics, Mir-Ctrl, méi wéi eng 5-Dag Period (Dorënner 2B). Mir entsteet och e Pre-Mir-206 ausdrécken plasmid an der P2GM Vecteure, an fluorescence-ageschalt-Zell-zortéieren (FACs) Analyse huet d'länger G1-Phase an der verkierzt S-Phase an P2GM-206 (P206) transfected Verglach zu der P2GM Vecteure transfected SGC-7901 Zellen (Dorënner 2C), also d'Resultat vun der uewen 206mi rescht Experimenter corroborating. Fëschweier waarden och de ganzen Niveau vum Mir-206 mat 206 mi zu engem groussen Erhéijung vun apoptosis zu 48 Stonnen am SGC-7901 Zellen iwwer d'Kontroll mimics schéinen wéi sech transfected Zellen vun Flux cytometric Analyse vum PI an Annexin V duebel Notzong (Dorënner 2D an E). Dës Donnéeë weisen, datt Mir-206 ass eng mächtegst anti-proliferative regulator vun cultured gastric Kriibs Zellen. Figur 2 gezwongen Ausdrock vu Mir-206 Hien der Verbreedung vun SGC-7901 gastric Kriibs Zellen. (A) Total Niveau vun Mir-206 zu SGC-7901 mat der Raumstatioun-Ctrl transfected Zellen oder de syntheteschen mimics vum Mir-206, 206mi (*** P &Si besteet; 0.0001). (B) MTT assays fir SGC-7901 Zellen transfected mat Mir-206 mimics op engem Finale Konzentratioun vu 100 nm. Ab 24 h Post-transfection, war d'assays all 24 h fir 5 Nuechten Deeg liesen. Resultater sinn ausdrécke wéi heescht ± Sem aus dräi onofhängeg Experimenter. (*** P &Si besteet; 0.0001). (C) Eng ugëtt alldeegleche Zell Zyklus Verdeelung vun SGC-7901 Zellen transiently transfected mat P2GM-Mir-206 oder P2GM-Ctrl (100 nm). D'Resultater genügend Mëttelen ± Sem vun dräi onofhängeg Experimenter (* P &Si besteet; 0,05). (D) BTS staining positiv fir Annexin V-FITC an negativ fir PI um 48 h Post-transfection sech als weiderentwéckelt apoptosis ze hunn. (E) Duerchschnëttlech apoptotic Taux vun dräi onofhängeg Experimenter ± Sem sinn dës (*** P &Si besteet; 0.0001). VerfÜgung Mir-206 Hafen-ofhängeg gastric Kriibs Zell Wuesstem an xenograft entholl Opstellung bremst VerfÜgung laangfristeg ze iwwerpréifen Impakt vum mir-206 op Zell Wuesstem a Kolonie Opstellung, generéiert mir eng stabil Linn vun SGC-7901 Zellen, P2GM-mir-206, dat mir-206 aus engem constitutively aktiv Vecteure, MSCV-P2GM, an eng Linn vum eidele Vecteure äussert -carrying Zellen, P2GM-miRctrl. Éischt, iwwerpréift mir den Ausdrock Niveau vum Mir-206 vun dësen zwou stabil Zell Linnen an fonnt dass Mir-206 dramatesch an P2GM-Mir-206 stabil Zell Linn (Dorënner 3A) gefördert gouf. Dann analyséiert mir den Effet vum Mir-206 op Hafen-ofhängeg Wuesstem vun fonnt direkt op Petri Plat trypsinized Zellen Morden an der Zell Kolonien vun glaskloer mauve staining visualiséieren folgenden 14 Deeg vun der Kultur. D'Resultater weisen, dass den Vecteure-Droen Kontroll stabil Zellen vill méi Kolonien gegrënnt wéi de Bord-206-ausdrécken Zellen (Dorënner 3B an C). Mir heijen weider dës stabil Zellen subcutaneously an zwee bilateral ënneschten Positioun vun Sauna Mais, an iwwerwaacht Dag entholl Wuesstem. Twenty-véier Deeg folgenden der Sprëtz, goufen dës Mais geaffert a sech d'erhéijen excised a gewien (Dorënner 3D an E). D'Resultater weisen, datt déi duerchschnëttlech Bänn vun Mir-206-overexpressing erhéijen an engem vill méi lues wéi d'Kontroll erhéijen an d'mengen Finale Gewiicht gewuess war wesentlech manner wéi déi vun der Kontrollen (Dorënner 3F an G). Figur 3 Mir-206 Hien Hafen-ofhängeg GC Zell Wuesstem an xenograft entholl Équipe. (A) Den Ausdrock Niveau vum Mir-206 zu P2GM-Mir-206 stabil Zell Linn an Vecteure-Droen Kontroll stabil Zellen (*** P &Si besteet; 0.0001). (B) dausend stabil SGC-7901 Zellen vum Mir-206 an negativ Kontroll sech op 6-gutt Placke plated an enger Kolonie Opstellung assay duerchgefouert. Vertrieder Resultater vun Amphipolis Équipe vun P2GM-Mir-Kontroll, P2GM-Mir-206. (C) D'Zuel vun de Kolonien huet op de 14. Dag no Morden gezielt. Stabil SGC-7901 Zellen vum Mir-206 gewuess zu engem méi niddreg Dicht Verglach zu NC. D'Resultater genügend Mëttelen ± Sem vun dräi onofhängeg Experimenter (** P &Si besteet; 0.01). (D) SGC-7901 Zellen mat stabil Ausdrock vu Mir-206 oder net sech subcutaneously an zwou Säite vun Sauna Mais inoculated (n = 5 pro Grupp). Vertrieder Fotoen vun Sauna Mais 24 Deeg no inoculation sinn gewisen. (E) De Mais sech ëmbruecht an de erhéijen sech déifgräifender Kris 24 Deeg no inoculation, goufen d'xenografts mat Mir-206 overexpression däitlech méi kleng wéi d'Kontroll xenografts. (F) weist entholl Wuesstem rop (* P &Si besteet; 0,05 an ** P &Si besteet; 0.01). (G) Saachen aus all Grupp sech direkt no Entféierung gewien. D'Moyenne entholl Gewiicht ass ugi wéi heescht ± Sem (* P &Si besteet; 0,05). VerfÜgung Mir-206 gastric Kriibs Zell Invasioun an Migratioun bremst VerfÜgung reduzéiert Ausdrock vu Mir-206 zu lokalen invasiv an metastatic erhéijen (Table 1) hindeit datt dës microRNA Opbau Prozess Zell regléieren kann. Fir erauszefannen, ob dëst wierklech de Fall ass, duerchgefouert mir aus Meter-Heelung a transwell Migratioun assays der Mir-206-ausdrécken stabil SGC-7901 Zellen benotzt. D'Resultater weisen, datt ectopic overexpression vum Mir-206 engem Ophiewe vun Zell Migratioun zu SGC-7901 Zellen ëmmer esou evident an d'Wonn-verkënnegt assay (Dorënner 4A an B) an der transwell Zell Migratioun assay (Dorënner 4C an D). Ectopic overexpression vum Mir-206 weider inhibited SGC-7901 Zell Invasioun wéi vun der Matrigel Invasioun assay bewisen (Dorënner 4E an F). Dofir, ugewisen Mir-206 engem suppressive Propriétéit zu Kriibs Zell Wanderung an Invasioun assays kënschtlech. Figur 4 Mir-206 Hien GC Zell Wanderung an Invasioun kënschtlech. (A) De Meter-verkënnegt assay zougedréckt a verschiddene Zell motilities zu Mir-Kontroll, Mir-206 Zellen. D'ectopic Ausdrock vu Mir-206 inhibited selbstverständlech d'Migratioun vun SGC-7901 Zellen. (B) weist d'statistesch Resultater. Donnéeën vertrieden heescht ± Sem vun dräi onofhängeg Experimenter. (** P &Si besteet; 0.01). Iwwer-Ausdrock vun Mir-206 bedeitend impeded Fähegkeeten vun Zell Migratioun (C) an Invasioun (E) an Mir-206-ausdrécken stabil SGC-7901 Zellen am Verglach mat negativen Kontroll. (D, F) weist d'statistesch Resultater bzw.. Donnéeën vertrieden heescht ± Sem vun dräi onofhängeg Experimenter. (** P &Si besteet; 0,01, *** P &Si besteet; 0.0001). VerfÜgung Mir-206 Liewer Metastasen vun GC zu VIVO VerfÜgung bremst den Effet vum Mir-206 op Metastasen zu VIVO ze ermëttelen, duerchgefouert mir Schwäif aus -vein Sprëtz vun P2GM-mir-206 an der Vecteure eleng P2GM Zellen mat Sauna Mais, 42 Deeg no beim Sprëtzen, mir gesammelt an fotografeschen der livers (Dorënner 5A, ieweschte Brieder). H & E staining vun der Otemschwieregkeeten Rubriken uginn enger 7-fantastesch niddreg Zuel vun metastatic entholl noverfollegt pro Géigend Eenheet vun der heijen livers mat P2GM-Mir-206 Zellen wéi déi heijen mat P2GM Kontroll Zellen (Dorënner 5A, manner Brieder an B). Ausserdem, huet de Gréisste vun entholl noverfollegt vun der P2GM-Mir-206 Zell-heijen livers vill méi kleng wéi déi vun der Kontroll Grupp (Dorënner 5A). Dëst Resultat staark PSA Mir-206 normalerweis eng entholl suppressor Roll hunn vläicht Metastasen vun gastric Kriibs Zellen bedengt. Figur 5 Mir-206 bremst Liewer Metastasen vun GC zu VIVO. (A) Vertriederin macroscopic Biller vun Maus Liewer, 42 Deeg no inoculation, (Déi iewescht). Vertrieder Fotoen vun H & E grousst spontan Liewer Investitiounen. Vergréisserung: 10 × (Déi ënnescht). D'Resultater weisen, datt entholl noverfollegt zu P2GM-Mir-206 Grupp kleng a manner ware wéi d'Kontroll Grupp Verglach. (B) den Nummere vun Liewer metastatic loci huet gezielt a Verglach tëscht Mais Träger SGC-7901 Vecteure Kontroll Zellen an SGC-7901 Zellen ausdrécken Mir-206. Donnéeën vertrieden heescht ± Sem, (*** P &Si besteet; 0.0001). (C) famill mRNA Niveau vun putative Ziler vum Mir-206 tëscht SGC-7901-Mir-P2GM an SGC-7901-Mir-206 Zellen. (D) De famill mRNA Niveau vun putative Ziler vum Mir-206 tëscht GES-1 an SGC-7901 Zell Linnen. VerfÜgung de Mechanismus Fir erauszefannen, wéi Mir-206 sengen anti-metastatic Roll enormen, gesichte mir fir méiglech miR- 206 Zil- Genen enger Kombinatioun vu online microRNA Zil- Acquisitioun Tools benotzen, an déi doraus resultéierend Kandidate fir déi Kräiz-referenzéiert, datt eng Roll ze spillen an Metastasen gemellt goufen. An engem Pool vu 20 vun sou Genen, fonnt mir 9 vun hinnen (Zousätzleche Fichier 3: Table S1), nämlech STC2, HDAC4, KLF4, IGF1R, FRS2, SFRP1, BCL2, BDNF, an K-ras, sech drastesch erof-reglementéiert vum Mir-206 zu der P2GM-Mir-206 stabil Zellen am Verglach zu hire jeweilege Niveau vun der P2GM Vecteure stabil Zellen (Dorënner 5C). Verschidde vun dëse Mir-206 Zil- Genen huet Ofstand weider-reglementéiert an d'Elteren SCG-7901 GC entholl Zellen am Verglach zu normalen gastric GES-1 Zellen (Dorënner 5D), e wahrscheinlech causal event suggeréiert. Sou, bremst Mir-206 wahrscheinlech Metastasen vun GC entholl Zellen duerch e Reseau vun reglementaresche Genen. VerfÜgung Diskussioun VerfÜgung Obwuel dysregulation vun miRNAs war zu verschiddenen Zorte vu mënschlechen Cancers gemellt [19], aberrant Ausdrock a Potential Roll vun miRNAs zu gastric Cancers sech understudied. Hei, weisen mir dat Mir-206 dacks zu Mënsch gastric Cancers a Kriibs Zell Linnen downregulated ass. Am Liicht vun der Ausdrock reduzéiert Mir-206 an e puer Zorte vun erhéijen gemellt, eis Resultater hindeit, datt Mir-206 Ausdrock reduzéieren ass wahrscheinlech eng Viraussetzung Event am tumorigenesis. Dëst Noutwendegkeete war souguer méi relevant gemaach wou mer dat nidderegen Niveau vum Mir-206 fonnt goufen mat lymphatic Metastasen vill verbonnen, lokal Invasioun, an TNM Etapp. Dës Notioun ass duerch d'Resultater vun ectopic Ausdrock vu Mir-206 am GC Kriibs Zell Linn SCG-7901 corroborated, déi weisen, datt Mir-206 GC Zell Prolifératioun repressed, Kolonie Opstellung, Iwwerfall a Migratioun. Endlech, d'Fähegkeet vum Mir-206 zu Metastasen vun SCG-7901 Zellen an der Liewer eraus gëtt eng kloer Erklärung fir déi Korrelatioun tëscht nidderegen Niveau vum Mir-206 an invasiv an metastatic gastric Cancers. Kuerzem STC2 war als predictive Bewaacher fir lymph Node Metastasen zu esophageal squamous-Zell carcinoma [20] identifizéiert. Ausdrock vun TrkB an BDNF ass mat aarmséileg hätt an NSCLC Patienten verbonne [21]. Puer Studien hu bericht, dass IGF1R Ausdrock vun metastatic Aarbecht Kriibs an Hormon Resistenz Werdegang nik ass [22, 23]. BCL2 Ausdrock am primäre Aarbecht Kriibs ass eng Bewaacher fir aarm hätt, mat enger méi Risiko fir Terrain [24]. Wat virun suggeréiert eng gemeinsam oncogenic Roll am mënschleche Kriibs gesot ass. Weider identifizéiert mir STC2, HDAC4, KLF4, IGF1R, FRS2, SFRP1, BCL2, BDNF an K-ras als putative funktionell Ziler vum Mir-206, als Deel vun hinnen virun geschwat goufen. Geholl zesummen, eis Conclusiounen entholl suppressor proposéiere Roll vum Mir-206 zu Mënsch gastric Kriibs VerfÜgung Biller vum Mir-206 als entholl Wuesstem suppressor huet zu puer Cancers gemellt ginn:. Mir-206 gouf fonnt éischt zu ERalpha downregulated ginn -positive Mënsch Broscht Kriibs Stoffer an Aféierung vum Mir-206 an estrogen-ofhängeg MCF-7 Broscht Kriibs Zellen bremst Zell Wuesstem an engem dose- an Zäit-ofhängeg Manéier [25]. Hu tyrosine-kinase receptor [26]: Desweideren, myogenic dat an Spär entholl Wuesstem zu xenografted Mais Mir-206 konnt duerch downregulating de Produit vun der kennegeléiert proto-oncogene förderen. Yan fonnt och dass inhibition vun Mir-206 Funktioun ze aberrant Zell Prolifératioun a Migratioun droen hätt, flénke rhabdomyosarcoma Entwécklung vun Ennerdréckung vun C-hu [16]. Mëttlerweil Mir-206 benotzt ginn hätt Hela Zell Migratioun zu inhibit an Opstellung Schwéierpunkt vun béiden Notch3 FAQ inhibiting an mRNA [27]. Doriwwer eraus, war Mir-206 zu héich Metastasen haett Kriibs downregulated Verglach zu niddereg Metastasen erhéijen an normal haett Stoffer, overexpression vum Mir-206 inhibited Wanderung an Invasioun vun haett Kriibs Zellen [18]. Mir-206 Ausdrock Verréngerung vun estrogen receptor-α (ERα) -positive endometrial endometrioid adenocarcinoma (EWG) an seng overexpression inhibited ERα-ofhängeg Prolifératioun, leider invasiveness an entschlof Zell Zyklus verhaften ERα-positiv EWG Zell Linnen [28]. All dës Conclusiounen uginn dass Mir-206 entholl suppressor Roll vun verschiddenen Cancers spille kann. VerfÜgung Metastasen ze stäerkste Kriibs Zesummenhang Doudesfäll dréit. GC geklommen wéi den zweete Spëtzekandidat Ursaach vum Kriibs-Zesummenhang Doud weltwäit wéinst hirem héijen Taux vun Metastasen, dorënner lymph Node, peritoneum, Liewer etc. Besonnesch de 5-Joer Iwwerliewe Taux vun gastric entholl mat Liewer Investitiounen net 10% méi héich wéi an de Steiren Iwwerliewe ouni Behandlung ass ongeféier 3 bis 5 Méint [29]. Multiple Genen huet eng dréien Roll am GC Metastasen: wéi de overexpression Insulin-wëll Wuesstem Faktor receptor-ech (IGF-asetzen) an den Aktivéierungscode vu sengem sécher Weeër souwuel kritescher Rollen vun der Entwécklung an Werdegang vun gastric Kriibs Leeschtung. Sax-Ugrëff vun Spl Ausdrock duerch kleng inhibitory RNS Nerve ofgeholl IGFIR Ausdrock an attenuated Wuesstem an Metastasen vun gastric Kriibs Zellen [30], soss, IGF1R kann duerch Mir-7 an bedeitend reduzéiert GC Zell Wanderung an Invasioun [31] downregulated ginn. Adachi fonnt dass Blockade vum IGF-asetzen ass an dem Ophiewe vun Kriibs Zell Invasioun duerch downregulation vun matrilysin Équipe [32]. All Auteuren liesen an guttgeheescht der Finale mëttelalterlech Handschrëft. VerfÜgung

• D'endothelial lipase FAQ ass villverspriechend Duerchfall Infektioun uweist fir Diagnos vun gastric cancer
• Bedeitung vun decoy receptor 3 (Dcr3) an extern-Signal reegelen kinase 1/2 (Erk1 /2) an gastric cancer