Mikrornk-206 potiskuje želučane rast stanica raka i metastaza

Mikrornk-206 potiskuje želučane rast stanica raka i metastaza
apstraktne pregled, rak želuca je jedan od vodećih uzroka smrti od raka u svijetu i nosi visoku stopu metastatskog rizika. Pored drugih onkogena, kodiranje proteina i gena za suzbijanje tumora, mikroRNA igraju važnu ulogu u raka želuca tumorskih napredovanja. Ovdje, pokazali smo da miR-206 se izražava na izrazito niskim razinama u skupini želučanih tumora u usporedbi s podudarnim normalnim tkivima, te u brojnim staničnim linijama karcinoma želuca. Down-regulacija Mir-206 je posebno značajna u tumorima s limfni metastaza, lokalne invazije, i napredne TNM. Smatramo da je prisiljen izraz Mir-206 potisnuti proliferaciju, stvaranja kolonija, i ksenograft tumorigenezi od SCG-7901 stanica, linija želučanih stanica raka. Prisilno izraz Mir-206 također potiskuje SCG-7901 migraciju stanica i invaziju, kao i metastaze u kulturi stanica ili rep vene ubrizgan mišjim modelima, respektivno. Anti-metastatski učinak Mir-206 vjerojatno je posredovan ciljanje metastaziranja regulatorne gene STC2, HDAC4, KLF4, IGF1R, FRS2, SFRP1, BCL2, BDNF i K-ras, koje su drastično dolje regulirano stabilnu ekspresiju egzogenog MIR -206 u SCG-7901 stanica. Uzeti zajedno, naši rezultati pokazuju da Mir-206 je tumor supresor karcinoma želuca koji djeluje na koracima koji reguliraju metastaza. Pregled Ključne riječi pregled Rak želuca Mir-206 Metastaza tumor supresor Uvod pregled, Rak želuca (GC) redovima četvrti najčešći rak i drugi vodeći uzrok karcinoma povezanih smrti u svijetu [1]. Prognoza za bolesnike s uznapredovalim rakom želuca je loša, unatoč nedavnim poboljšanjima u gastriectomy, kemoterapija, radioterapija i [2]. Budući da je GC je poligenska bolest se pojavljuje kao rezultat višestrukih gena dysregulations, rasvjetljavanje regulatorne mreže uređuje GC tumorigenezi je imperativ za razvoj nove ciljane terapije.
Tumorigenezi u želucu je više koraka koji uključuje genetske i Epigenetske promjene proteina -coding, kao i ne-kodiranje proto-onkogena i tumor-supresor gena. Interakcije između domaćina, okoliš i bakterijskih čimbenika također utjecati na napredak bolesti. Helicobacter pylori pregled (KS) infekcija je utvrđeno kao jedan od glavnih faktora rizika za GC; dva histološkoj raka želuca, crijevni i difuzno podtipova, oba su povezana s HP infekcije, što pridonosi više od 80% slučajeva [3], a posebno u sekundarnom /tijelo raka želuca [4]. Mehanistički, HP nađena je infekcija uzrokuje dvostruko povećanje EGF te EGFR na želučani antralnim biopsije tkiva, ali njegova iskorjenjivanje smanjuje razinu tih faktora onima od [5] kontrole. HP infekcije u bolesnika s kroničnim gastritisom također značajno povezana s podreguliranjem E-kadherina, zbog povećanog promotorske metilacije [6], dok iskorjenjivanje HP značajno smanjuje razine MMP-9, metaloproteinazu pozitivno povezane s tumorskoj invaziji i metastaziranju [ ,,,0],7] u antrumu i sluznicu corpus. [8] pregled Osim HP infekcije, postoji mnoštvo uzroka vodi ekspresiji gena kod raka želuca, te mehanizam želučane metastaziranja raka je vrlo složena i , Ras-MAPK ovisna signalizacije, što na kraju dovodi do povećane proliferacije karcinoma želuca i uglavnom uzrokovana odstupanja aktivacije K-ras, često je povezana s crijevni tipa raka želuca [9]. Stanniocalcin 2 (STC2), koji se izlučuje glikoprotein s važnim funkcijama u kalcija i fosfata homeostaze, je izvijestila da se izražava u visokim razinama kancerogen želučane tkiva, limfnih čvorova metastaze, i venska invazije [10]. Stopa preživljavanja 5 godina bila je značajno niža u bolesnika s STC2 izražavanja u odnosu na bolesnike bez STC2 izrazu [11]. BDNF (Brain-izvedeni neutrophic faktor) izraz je izvijestila da pokazuju značajno povećanu ekspresiju u želučanom tkivu karcinoma u odnosu na susjedne normalne sluznice, te visoku razinu BDNF na invazivne ispred su korelaciji s invazijom žila, limfnih čvorova metastaza, peritonejsku širenje i siromašnih prognoza bolesnika s rakom želuca [12]. Unatoč napretku u identificiranju gore regulatorne gene, precizna temeljni mehanizam uzrokuje GC metastaze još treba utvrditi.
Dysregulations od mikroRNA igraju vrlo važnu ulogu u nastanku tumora. Uloga mikroRNA u želučanom tumorigenezi raka je dobro dokumentirano. Ovdje ćemo se usredotočiti na Mir-206, koji je zajedno sa svojim srodnih paralogs Mir-1, 133A, i Mir-133B, igra vrlo važnu ulogu u diferencijaciji mišića. Ove četiri mikroRNA su visoko konzervirani u nizu i genomske organizacije, a zovu se myomiRs jer su otkrili da se izražava u visokim razinama u mišićima [13]. Mir-1-1 /Mir-133A-2, Mir-1-2 /Mir-133A-1 i Mir-206 /Mir-133B u obliku grozdova u tri različite kromosomskih regija u ljudskom genomu 20q13.33, 18q11.2 i 6p12.2, redom. Međutim, ove miRNAs može djelovati kao tumor smetnji u različitim oblika raka kod ljudi [14]; na primjer, miR-1 i miR-133A nađeno je da su često podregulirani u karcinomima mjehura i sprječavaju rast tumora ciljajući TAGLN2 [15]. Mir-1 i Mir-206 su pokazali da posjeduju slične tumor-supresor uloge u rabdomiosarkom kroz blokira c-Met izraza [16]. Mir-206 također je uočeno da djeluju kao tumor-supresor kod raka dojke [17] i pluća [18]. Mi prijavite ovdje da Mir-206 ekspresija obrnuto povezana s limfni metastaza, lokalne invazije, a TNM malignosti uprizorenje GC, i prisiliti izraz Mir-206 suzbija rast GC stanica, tumorigenezi, i metastaza.
Materijali i metode
uzorci tkiva pregled kirurški resected ljudskog raka želuca i susjednih ne-tumorskih tkiva dobiveni su od 35 bolesnika predviđenih u Odjelu gastrointestinalnih kirurgiju povezanih bolnici Nanjing Medical University (Changzhou drugom Narodna bolnice). Projekt je odobren od strane Etičkog povjerenstva Nanjing Medical University Research, i pisani pristanak dobiven je od svakog pacijenta koji su upisani u ovoj studiji. Svi uzorci tkiva su obrađeni za skladištenje u tekućem dušiku i H &. E bojenje za patološku analizu
Stanične linije i stanična kultura pregled ljudskog želuca stanične linije raka SGC-7901, BGC-823, AGS, ne maligna želuca stanica linija GES-1, i HEK293T stanice su kupljeni od Cell Resource Center, Shanghai Institute of Biochemistry and Cell Biology, kineske akademije znanosti. Stanice su održavane u vlažnoj inkubator na 37 ° C, 5% CO 2 i SGC-7901, BGC-823 i GES-1 stanice uzgajane su u RPMI1640 mediju, HEK293T stanica u DMEM i AGS stanica u F12K medij, respektivno. Svi medij kulture dopunjen je sa 10% fetalnog goveđeg seruma i antibiotika. Ekstrakcija RNA pregled i kvantitativna real-time PCR pregled Ukupna RNA iz želučanog tkiva ili staničnih linija se ekstrahiraju pomoću Trizol reagensa (Takara) prema uputama proizvođača. cDNA je sintetizirana s reagense PrimeScript RT (Takara). Kvantitativna RT-PCR provedena je s SYBR Premiks Ex Taq priborom (Takara) na 7500 u realnom vremenu PCR sustavu (ABI) i analizirani s SDS-Analysis Software Package (verzija 2.0.1, Applied Biosystems). PCR primeri su dobiveni od Invitrogen, a reakcija je bila 95 ° C, 10 min, nakon čega slijedi 40 ciklusa 95 ° C 15 sekundi i 60 ° C, 1 min. U6 snRNA korištena je kao interna kontrola. Rezultati su prikazani kao mnogostrukost promjene, izračunava se pomoću 2 -. △ CT metodom, s omjerom izražavanja u tumora u odnosu na normalno tkivo manje od 1,0 se smatra kao niska pregled Vector konstruira pregled pri -miR-206 se pojačava iz normalnog ljudskog genoma DNA PCR-om pomoću primera: 206-Za 5'-ATAAGAATGCGGCCGCAGATGCGGGCTGCTTCTGGA-3 "i 206-Rev 5'-AGCTTTGTTTAAACCCTTGGTGAGGGAGTCATTTGC-3 '. PCR fragment je umetnut u MSCV-P2GM vektor kako P2GM-Mir-206. Prazni P2GM vektor se koristi kao kontrola. Pregled transfekciju stanice pregled Plazmid transfekcija SGC-7901 stanica provodi pomoću lipofektaminskog 2000 (Invitrogen), te su odabrani stabilni klonova nose P2GM-Mir-206 ili praznim vektorom za puromicinom otpora (10 ug /ml). Mir-206 i negativni kontrolni oponaša dobiveni su od Ribobio (Guangzhoua, Kina) i transfekcija oponaša u SGC-7901 stanica vrši se pomoću Oligofectamine (Invitrogen). Ukratko, SGC-7901 stanica stavi se jedan dan ranije su transficirane s 100 nm Mir-206 ili kontrole oponaša postizanja 50% spajanja. Nakon 48 sati, stanice su obrađene za daljnju analizu. Pregled Test stanične proliferacije pregled MTT test korišten je za procjenu brzinu proliferacije sGC 7901 stanica. Ukratko, SGC-7901 stanice trypsinzed 2 dana nakon transfekcije i reseeded na 2.5 × 10 3 stanica po jažici u pločicama s 96 jažica. MTT (3- (4, 5-dimetiltiazol-2-il) -2, 5-difenil-tetrazoliumbromide) je dodan u hranjivu podlogu u određenim intervalima xx sata, te je apsorbancija na 490 nm mjerena je spektrofotometrom. Svaki test je izveden trostruko i ponovljena su tri puta samostalno. Pregled testa koloniziranje pregled stabilnog SCG-7901 stanice koje nose miR-206 ili prazan kontrole su tripsinizirane i precijepljene na 1 × 10 3 po bazenčiću u 6 Pa ploče. Nakon 14 dana u kulturi RPMI1640 uz dodatak 10% FBS, kolonije su fiksirani s 3.7% metanola i obojene s 0.1% kristalno ljubičastog. Kolonije koje sadrže najmanje 50 stanica su pogodak. Svaki ispitivanje je provedeno u triplikatu.
Protočnom citometrijom pregled sGC 7901 stanica s transfektiranim miR-206 imitira ili negativna kontrola su tripsinizirane i resuspendirane u 1 × pufera za vezanje na 1 x 10 6 stanica /ml. 100 ul suspenzije stanica je inkubiran s 5 litara FITC-aneksina V i 5 ul propridium jodida (PI), tijekom 15 minuta u mraku. Reakcija je prekinuta dodatkom 400 ul 1 × puferom za vezanje i analizirane (FACSCalibur koristeći CellQuest softver (Becton Dickinson). FITC-aneksin V-pozitivnih, PI-negativnih stanica su smatrane apoptotskih i pokusi su provedeni u tri uzorka.
migraciju i invaziju testovi pregled zacjeljivanja rana migraciju stanica bila je procijenjena mjerenjem kretanje stanica u acelularna prostor stvoren guljenjem konfluentan stanični uzgoj sa ul pipete 200, zatvarač rana je snimljena 48 sata kasnije pod mikroskopom. za transjažična migracija testovima, 5 × 10 4 stanica dodano u gornju komoru umetka (BD znanosti, Sparks, MD, USA), dok je 1 × 10 5 stanice su korištene za matrigelu pokusima invazije. u ovim eksperimentima stanice su tripsinizirane i resuspendirane u mediju bez seruma, prije nego što zasije u gornju komoru. Potpuni medij kulture koji sadrži 10% FBS je dodano u donjoj komori. Stanice se inkubiraju u vlažnom inkubatoru na 37 ° C tijekom 24 h. Stanice na membrane su fiksirane, obojene, a radioaktivnost. Svaki eksperiment izveden trostruko. Pregled modelu ksenografta tumora pregled Mlada ženska atimičnih golih miševa (6 tjedana) kupljeni su od modela Animal Research Center Sveučilišta Nanjing. Približno 1,5 × 10 6 stabilnih SGC-7901 stanice koje nose P2GM-Mir-206 ili prazan vektor su injicirani potkožno u nižim bokova 5 miševa. Volumeni tumora su mjerene svaka 3 dana od šestog dana nakon injekcije pa nadalje za 24 dana prije nego što su životinje žrtvovane. Konačni volumen i masa je mjerena nakon što su tumori izrezana. Goli miševi su bili manipulirani i zbrinute u skladu s NIH Animal Care and Use Odbora smjernica u eksperimentu životinja Center of Medical University Nanjing (Nanjing, Jiangsu, provinciji, NR Kina).
Statistička analiza pregled, Statistička analiza je provedena pomoću programski paket SPSS (SPSS Standardna verzija 16.0, SPSS Inc.). Podaci su prikazani kao srednja vrijednost ± SEM. Spareni uzorci-t-test je korišten
u analizu diferencijalne miR-206 ekspresije između tumora i normalnog tkiva. Za in vitro i in vivo eksperimentima, neovisan uzorci t pregled -test je korišten za procjenu značaj razlika između liječenje i kontrolne skupine. P vrijednost < 0,05 smatrala se statistički značajnom. Pregled Rezultati
Down-regulacija Mir-206 korelira s ljudskog želuca tumorigenezi raka, invazije i metastaziranja Netlogu u genomu širokom anketi mikrornk izrazu, što smo ranije identificirali nekoliko članova obitelj myomiR, naime mir-1 /133A i mir-133B /206, čija je razina smanjena u neuroektodermalnih raka (neobjavljeni rezultati). Ove mikroRNA su prvenstveno poznati funkcionirati u myogenic diferencijacije i, u manjoj mjeri, u nastanku tumora pedijatrijskih karcinoma. Kako bi istražili ako ti myomiRs također može imati ulogu u tumorigensis zajedničkih raka kod odraslih osoba, ispitali smo njihove razine ekspresije u realnom vremenu matičnih petlje RT PCR kvantifikacije u skupini od svježe reseciranih želučanih tumora i njihovih podudaranje normalna tkiva, te nađeno da je medijan omjer miR-206 u odnosu na U6 snRNA od 35 tumora je bila 4 puta niža od one od normalnog tkiva (Slika 1A). Pair-mudar usporedba pokazuje da je više od 85% tumora pokazalo je veći od dva puta smanjenje Mir-206 izražavanja u usporedbi s podudarnim kontrole, sa samo dva parovima koji pokazuju porast (Slika 1B). Ekspresija Mir-206 također je smanjen u nizu staničnih linija raka želuca, uključujući sGC 7901, BGC-823, MGC-803 i AGS stanicama, u usporedbi s onom u GES-1 normalnih stanica želuca (Slika 1C). Kliničkopatološkim evidencije ovih tumora su pokazali da smanjenje Mir-206 izražavanja bila je značajno povezana s limfni metastaza, lokalne invazije, a TNM malignosti skele, ali ne s dobi, spolu, veličini tumora ili mjesto (Tablica 1). Ovi podaci upućuju na to da Mir-206 može normalno vršiti inhibitorni kontrolu na želučane tumorigenezi, invaziju i metastaziranje. Slika 1 smanjene razine Mir-206 izražavanja u želučanog tkiva raka i staničnim linijama. (A) Raspodjela Mir-206 izražavanja u skupini od 35 ljudi GC i noncancerous tkivu QRT-PCR. Endogeni U6 RNA korištena je kao unutarnje kontrole. (B) u parovima usporedba Mir-206 izražavanja između GC i podudaranja non-kancerogen tkiva pokazuje Mir-206 izraz je smanjen u 86% (30/35) uzorka na tipkovnici. (C) Relativna izraz Mir-206 u četiri GC staničnim linijama i normalne stanične linije želuca (GES-1). Pregled Tablica 1 kliničko karakteristike Mir-206 pregled Kategorije
NO. pacijenata
relativne razine Mir-206 (srednja vrijednost ± SEM)
p-vrijednost
Spol pregled Muški pregled 21 pregled, 0,49 ± 0,07
0,32 pregled Ženski pregled 14 pregled, 0,40 ± 0,06 pregled Dob (godine) pregled ≥60 pregled 19 pregled, 0,45 ± 0,05 pregled 0.93 izvoznici < 60
16 pregled, 0,46 ± 0,09 pregled Promjer (cm) pregled ≥5 pregled 13 pregled, 0,46 ± 0,09 pregled 0.90 izvoznici < 5 pregled 22 pregled, 0,45 ± 0.05 pregled Location pregled Srednji i proksimalni treći pregled 23 pregled, 0,47 ± 0,06 pregled 0,65 pregled distalne trećine pregled 12 pregled, 0,42 ± 0,07 pregled stupanj diferencijacije Netlogu dobro i umjereno pregled 12
0,48 ± 0,07
0,70
Loše pregled 23. pregled 0,44 ± 0,07 pregled lokalnu invaziju pregled T1 + T2 pregled 10 pregled, 0,65 ± 0,07 pregled 0,01 pregled T3 + T4 pregled, 25 pregled, 0,37 ± 0,05 pregled limfnih čvorova metastaze pregled NO pregled 14 pregled, 0,57 ± 0,06 pregled 0,04 pregled DA pregled, 21 pregled, 0,38 ± 0,07 pregled TNM stadij pregled I + II
12 pregled, 0,60 ± 0,07 pregled 0.02
III + IV pregled 23. pregled 0,38 ± također je utvrđeno 0,06 pregled izražavanje Mir-133A treba regulirati na dolje u tumorima gornjim kriterijima (dodatne datotečne 1: Slika S1), ali izraz Mir-1, čiji geni su grupirani s tim kodiranja Mir-133A [14], nije bio (Dodatni datoteka 2: Slika S2). Od Mir-206 je kodiran jedinstvenim genom, što je odabran za daljnje analize.
Mir-206 inhibira rast stanica raka želuca
Da biste utvrdili je li Mir-206 ima sklonost da suzbiju želučane tumorigenezi raka, uveli smo sintetičke dvostruke niti Mir-206 oponaša, 206mi, mijenjati razinu ukupnog Mir-206 u SGC-7901 stanica raka želuca, koji je izraziti nisku razinu Mir-206 u odnosu na onaj od GSE-1 normalnih kontrolnih stanica (slika 1C) i praćena stopu rasta stanica pomoću tetrazolium boje, 3- (4,5-dimetiltiazol-2-il) -2,5-difenil-tetrazolij-bromid (MTT). Matičnih petlje PCR potvrdio povišenu razinu Mir-206 u transfektiranih SGC-7901 stanica (Slika 2a), a rezultati s MTT pokusom pokazali da je stopa rasta tih stanica smanjen značajno u usporedbi s onom od stanica koje primaju ne- specifični oponaša kontrolu, mir-ctrl, tijekom razdoblja od 5 dana (slika 2b). Također se je generirao unaprijed miR-206 eksprimira plazmid u P2GM vektora i stanica za sortiranje aktivirano fluorescencijom (FACS) pokazala je produljeno G1-fazu i skraćeni S-fazu P2GM-206 (P206) transficirana u odnosu na P2GM vektor transfektirane SGC-7901 stanica (Slika 2c), čime se potvrđuje rezultat iz gornjeg 206mi imitira eksperimenta. Umjetno povećanje ukupne razine Mir-206 sa 206 ml također rezultiralo značajnim povećanjem apoptoze u 48 sati u SGC-7901 stanica preko kontrolnih oponaša transfektiranih stanica kao što je određeno protočnom citometrijom analize PI i Aneksin V dvostrukog unosa (Slika 2D i E). Ovi podaci pokazuju da miR-206 je snažan antiproliferativni regulator kultiviranim stanicama raka želuca. Slika 2 Prisilno izraz Mir-206 smanjuje proliferaciju SGC-7901 stanica raka želuca. (A) Ukupno razine Mir-206 u SGC-7901 stanica transficiranih s Mir-ctrl ili sintetičke imitacije Mir-206, 206mi (*** P 0,0001). (B) MTT analize za sGC 7901 stanica s transfektiranim miR-206 oponaša pri konačnoj koncentraciji od 100 nM. Počevši od 24 sati nakon transfekcije, testovi je očitana svakih 24 sata tijekom 5 uzastopnih dana. Rezultati su izraženi kao prosjek ± SEM od označava tri neovisna eksperimenta. (*** P 0.0001). (C) Histogram prikazuje distribuciju staničnog ciklusa SGC-7901 stanica transfektirane sa P2GM-Mir-206 ili P2GM-ctrl (100 Nm). Rezultati predstavljaju srednju vrijednost ± SEM od tri nezavisna pokusa (* P 0,05). (D) stanica, označivanjem pozitivne na Annexin V-FITC i negativne za PI na 48 sati nakon transfekcije se smatralo da su podvrgnute apoptozu. (E) Prosječna apoptoze stopa od tri nezavisna pokusa ± SEM prikazati (*** P 0.0001).
Mir-206 inhibira želučane rasta kancerogenih stanica i tumorskih formiranje učvršćenja ovisan pregled ispitati dugoročne utjecaj Mir-206 na rast stanica i formiranja kolonija, generira se stabilan liniju SGC-7901 stanica, P2GM-Mir-206, koja izražava Mir-206 iz konstitutivno aktivnog vektora, MSCV-P2GM i liniju praznu vektora -carrying stanice, P2GM-miRctrl. Prvo, ispitali smo razinu ekspresije Mir-206 u ove dvije stabilnih staničnih linija i otkrili da miR-206 je dramatično povišena kod P2GM-miR-206 stanična linija (Slika 3A). Zatim smo analizirali učinak Mir-206 na sidrište ovisan o rastu po slabo zasijavanje tripsiniziranih stanica izravno na Petrijevu zdjelicu i zamišljati stanične kolonije kristal violeta bojenja sljedećih 14 dana kulture. Rezultati su pokazali da je vektor koji nosi kontrolni stabilne stanice nastaje značajno više kolonija miR-206 stanicama koje izražavaju (Slika 3B i C). Mi i dalje ubrizgava ovih stabilnih stanica potkožno u dva bilateralna niže leđa golih miševa, a prati rast tumora dnevno. Dvadeset i četiri dana nakon injekcije, ti miševi su žrtvovani, a tumori su bili odstranjeni i izvagani (Slika 3D i E). Rezultati su pokazali da je prosječna količina Mir-206-ekspresijom tumora rasli znatno sporije nego u kontrolnim tumorima i srednje konačne težine je značajno manje nego kod kontrole (Slika 3f i G). Slika 3 Mir-206 potiskuje učvršćenja ovisan porast GC stanica i stvaranja tumorskih. (A) Razina izraz Mir-206 u P2GM-Mir-206 stabilne stanične linije i vektorski nose kontrolne stabilnih stanica (*** P 0,0001). (B) stabilni Tisuću SGC-7901 stanice Mir-206 i negativna kontrola su bile stavljene na ploče sa 6 jažica i testu koloniziranje provedena. Reprezentativni formiranja kolonija P2GM-Mir-upravljanje, P2GM-Mir-206. (C) Broj kolonija izračunata je na 14. dan nakon sijanja. Stabilne SGC-7901 stanice Mir-206 porastao je na nižoj gustoći u odnosu na NC. Rezultati predstavljaju srednju vrijednost ± SEM od tri nezavisna pokusa (** P 0,01). (D) stanice sGC 7901 sa stabilnom ekspresijom Mir-206 ili nije inokulirana supkutano u oba boka golih miševa (n = 5 po skupini). prikazani su reprezentativni fotografije golih miševa 24 dana nakon inokulacije. (E) miševi su ubijeni i tumori su vagani 24 dana nakon inokulacije, ksenografta s miR-206 prekomjerne ekspresije bile su značajno manji od kontrolne ksenografta. (F) prikazuje krivulju rasta tumora (* P < 0.05 i ** P 0,01). (G) Tumori iz svake grupe su izvagane neposredno nakon uklanjanja. Prosječna težina tumora je naznačen ± SEM (* P 0,05).
Mir-206 inhibira želučano invazije stanica raka i migraciju
smanjene ekspresije Mir-206 u lokalno invazivnih i metastatske tumore (tablica 1) sugerira da je ovaj mikrornk mogu regulirati migracijski proces stanica. Da bi se utvrdilo je li to doista slučaj, proveli smo zacjeljivanja rana i transjažičnih migracijske testova korištenjem Mir-206-izražavaju stabilne SGC-7901 stanica. Rezultati su pokazali da izvanmaternične pojačanom ekspresijom Mir-206 izazvao suzbijanje stanične migracije u SGC-7901 stanica kao što je vidljivo u analizi za liječenje rana (slika 4a i B) i migracijsku Transwell® stanica testa (slika 4c i D). Ektopično pojačanom ekspresijom Mir-206 dodatno inhibirana invazija stanica SGC-7901 kao što je pokazano na invaziju u Matrigel testu (slika 4E i F). Dakle, Mir-206 prikazuje supresijski nekretninu u migracija stanica raka i pokusima invazije in vitro. Slika 4 MiR-206 potiskuje GC migraciju stanica i invaziju in vitro. (A) Test za liječenje rana pokazali različite stanične motilities u Mir-upravljanje, Mir-206 stanicama. Ektopijsku izraz Mir-206 očito inhibira migraciju SGC-7901 stanica. (B) prikazuje statističke rezultate. Podaci predstavljaju srednju vrijednost ± SEM od tri neovisna pokusa. (** P 0,01). Prekomjerna ekspresija Mir-206 znatno otežan sposobnosti stanične migracije (C) i invazije (E) u Mir-206-izražavanje stabilne SGC-7901 stanica u usporedbi s negativnom kontrolom. (D, F) prikazuje statističke rezultate respektivno. Podaci predstavljaju srednju vrijednost ± SEM od tri neovisna pokusa. (** P 0,01, *** P 0.0001).
Mir-206 inhibira metastaziranje jetre od GC in vivo pregled Istražiti učinak Mir-206 na metastaze in vivo, proveli smo rep -vein injekcija P2GM-Mir-206 i vektorskih sama P2GM stanica sa golih miševa, 42 dana nakon ubrizgavanja, bere se i fotografirao jetru (Slika 5a, gornje tribine). H &E bojenje odjeljaka tkiva naznačeno 7 puta manji broj metastaza tumorskih čvorova po jedinici površine u jetri ubrizgan P2GM-miR-206 stanice od onih kojima je injiciran P2GM kontrolne stanice (Slika 5A, donje plohe i B). Osim toga, veličina tumora kvržica u staničnim injektiran jetre P2GM-miR-206 su bili manji od onih u kontrolnoj skupini (Slika 5A). Ovaj rezultat je snažno tvrdi da Mir-206 normalno može imati tumor supresorski ulogu spriječiti metastaziranje želučanih stanica raka. Slika 5 MiR-206 inhibira metastaziranje jetre GC in vivo. (A) Reprezentativni makroskopska slike miša jetre, 42 dana nakon inokulacije, (Gornji). Reprezentativni fotografije H &E obojeni spontane metastaze jetre. Povećanje: 10 × (Donji). Rezultati pokazuju da tumorske čvorići u P2GM-miR-206 skupini bili su manji i manje u odnosu na kontrolnu skupinu. (B) Brojevi jetre metastatskim lokusa su izbrojani i odnosu između miševa koji nose SGC-7901 kontrolu prijenosnika stanice i SGC-7901 stanica koje izražavaju Mir-206. Podaci predstavljaju ± SEM (*** P 0.0001). (C) Relativna razina mRNA navodnih meta Mir-206 između SGC-7901-Mir-P2GM i SGC-7901-Mir-206 stanica. (D) Relativna razina mRNA tobožnjih ciljeva Mir-206 između GES-1 i SGC-7901 staničnim linijama.
Biste utvrdili mehanizam kojim Mir-206 pokazuje svoju antimetastatsku ulogu, tražili smo je moguće miR- 206 ciljne gene koje koriste kombinaciju online alata mikrornk meta akvizicije i unakrsno dobijenih kandidate za one koji su izvijestili da igraju ulogu u metastaza. U bazenu od 20 takvih gena, utvrdili smo devet od njih (Dodatni file 3: Tablica S1), i to STC2, HDAC4, KLF4, IGF1R, FRS2, SFRP1, BCL2, BDNF i K-ras, drastično dolje regulirana od Mir-206 u P2GM-Mir-206 stabilnih stanica u usporedbi s njihovim razinama u stabilnim stanica P2GM vektor (Slika 5c). Neke od tih miR-206 ciljanih gena izrazito doreguliran u roditeljske SCG-7901 GC tumorske stanice u odnosu na normalne želučani GES-1 stanice (Slika 5D), sugerirajući vjerojatno kauzalni događaj. Dakle, Mir-206 vjerojatno koči metastaziranje GC tumorskih stanica kroz mrežu regulatornih gena. Pregled Rasprava pregled Iako deregulacija miRNAs je bio prijavljen u različitim vrstama raka u čovjeka [19], ekspresiji i potencijalne uloge miRNAs u želučani karcinom su understudied. Ovdje smo pokazali da miR-206 često regulirani u ljudskim želučane raka i staničnih linija raka. U svjetlu smanjenog Mir-206 izraza je prikazan na nekoliko vrsta tumora, naši rezultati pokazuju da je smanjenje Mir-206 izričaj vjerojatno preduvjet događaj u nastanku tumora. Ovaj zahtjev je napravljen još važnija kad smo otkrili da su niske razine Mir-206 su značajno povezane s limfni metastaza, lokalne invazije i TNM stadiju. Taj pojam je potvrdila ishodima izvanmaternične izražavanja Mir-206 u rak GC stanične linije SCG-7901, koji su pokazali da je Mir-206 potisnuta GC proliferaciju stanica, stvaranje kolonija, invaziju i migraciju. Konačno, sposobnost Mir-206 potisnuti metastaziranje SCG-7901 stanica u jetri pod uvjetom jasno objašnjenje za korelaciju između niskih razina Mir-206 i invazivnih i metastatskih želučanog karcinoma. Nedavno STC2 je identificiran kao prediktivni marker za limfnih čvorova metastaze u jednjaka karcinoma pločastih stanica [20]. Izražavanje TrkB i BDNF je povezana s lošom prognozom u NSCLC bolesnika [21]. Nekoliko studija pokazalo da IGF1R ekspresija je povišena u metastatskim karcinomom prostate i otpornosti hormon napredovanja [22, 23]. BCL2 izraz u primarni karcinom prostate je marker za lošom prognozom, s povećanim rizikom za ponavljanje [24]. Ono što je ovdje rečeno ukazuje na zajedničku onkogeni ulogu u ljudskom raka. Dalje smo identificirali STC2, HDAC4, KLF4, IGF1R, FRS2, SFRP1, BCL2, BDNF i K-ras kao navodnih funkcionalnih ciljeva Mir-206, kao dio njih govorilo gore. Uzeti zajedno, naši rezultati ukazuju na tumor supresorski ulogu Mir-206 u ljudskom raka želuca
Dokaz o MIR-206 kao supresor rast tumora je prijavljen u nekoliko vrsta raka. Mir-206 prvi je utvrđeno da se regulirani u ERalpha pozitivnih ljudskih tkiva raka dojke i uvođenje Mir-206 u MCF-7 stanica raka dojke ovisnih inhibira rast stanica u dozi i vremenski ovisan način [25]. Štoviše, Mir-206 može potaknuti myogenic diferencijacije i blokirati tumora rast ksenografta miševa snižavanje proizvod na MET proto-onkogena: Met tirozin-kinaze receptora [26]. Yan također pokazalo da inhibicija miR-206 funkcija može doprinijeti proliferacije aberantne i migraciju stanica, što je dovelo do razvoja rabdomiosarkom suzbijanjem c-met [16]. Međuvremenu miR-206 mogu se koristiti za inhibiciju migracije HeLa stanica i fokusirati formiranje inhibirajući obje Notch3 proteina i mRNA [27]. Nadalje, miR-206 je podreguliran za visoko metastaza raka pluća u usporedbi s niskim tumora metastaza i normalnih pluća tkiva, prekomjerna ekspresija miR-206 inhibira migraciju i invaziju stanica raka pluća [18]. Mir-206 ekspresija smanjen u estrogen receptor-a (ERα) pozitivnih endometrija endometrioid adenokarcinom (EEZ-a) i njegove prekomjerne ekspresije inhibirana ERα-ovisnu proliferaciju, oslabljen invazivnosti i potaknulo staničnog ciklusa uhićenje ERα pozitivnim staničnim linijama EEZ [28]. Svi ovi rezultati pokazuju da Mir-206 može igrati tumor supresorski ulogu u različitim oblicima raka.
Metastaza doprinosi većinu smrtnih slučajeva raka povezane. GC rangira kao drugi vodeći uzrok smrti od karcinoma povezanih u svijetu jer je njegova visoka stopa metastaza, uključujući i limfnog čvora, peritoneum, jetre itd Osobito 5 godina stopa preživljavanja želučane tumora s metastazama u jetru ne prelazi 10%, a medijan preživljavanje bez liječenja je oko 3 do 5 mjeseci [29]. Više gena odigrao ključnu ulogu u GC metastaze: kao prekomjernom ekspresijom inzulinu sličan faktor rasta receptor-I (IGF-IR), te aktivacija njegovih signalnih puteva i igraju kritičnu ulogu u razvoju i napredovanju raka želuca. Kuca-dolje SPL izražavanja malim inhibitorni RNA je dovelo do smanjenja IGFIR izražavanje i oslabljeni rast i metastaziranje želučanih stanica raka [30], inače, IGF1R može regulirani od strane Mir-7 i znatno smanjenu migraciju GC stanica i invaziju [31]. Adachi otkrili da blokada IGF-IR koji su uključeni u suzbijanju invazije stanica raka kroz silazni matrilizina [32]. Svi autori pročitali i odobrili konačnu rukopis. Pregled

• Protein endotelne lipaze je obećavajuće mokraćnog biomarker za dijagnozu želučane cancer
• Značaj Receptor mamac 3 (DcR3) i vanjskim signalom regulirane kinaze 1/2 (ERK1 /2) u želučanom cancer