Guarigione effetti della Musa sapientum var. paradisiaca in ratti diabetici con concomitanti ulcera gastrica: citochine e fattori di crescita per l'amplificazione PCR

Guarigione effetti della Musa sapientum
var. paradisiaca
in ratti diabetici con concomitanti ulcera gastrica: citochine e fattori di crescita per amplificazione PCR
Abstract
sfondo
Il presente studio valuta gli effetti di estratto di Musa sapientum
frutta (MSE) sull'indice di ulcera, il livello di glucosio nel sangue e citochine della mucosa gastrica, TNF-α e iL-1β e fattore di crescita, TGF-α (colpita nel diabete e ulcera cronica) in acido acetico (AA) indotta ulcera gastrica (GU) nei pazienti diabetici ( DR) topo.
Metodi
MSE (100 mg /kg, per via orale), omeprazolo (OMZ, 2,0 mg /kg, per via orale), insulina (INS, 4 U /kg, sc) o pentossifillina (PTX, 10 mg /kg, per via orale) sono stati dati una volta al giorno per 10 giorni a 14 giorni post-streptozotocina (60 mg /kg, intraperitoneale) indotta ratti diabetici, mentre i ratti normali /diabetici hanno ricevuto CMC per lo stesso periodo, dopo l'induzione di Gu con AA . Indice ulcera è stato calcolato in base al prodotto della lunghezza e larghezza (mm 2 /ratto) di ulcere mentre, TNF-α, IL-1β e TGF-α sono stati stimati nel omogeneizzato mucosa gastrica dalla regione /ulcera intatto. lo screening Fitochimico e l'analisi HPTLC di MSE è stato fatto seguendo le procedure standard.
Risultati
Un aumento dell'indice ulcera, TNF-α e IL-1β sono stati osservati in normale (NR) -AA ratto rispetto al normale NR-rat salina , che sono stati ulteriormente aumentata in DR-AA topo, mentre, i trattamenti di DR-AA ratto con MSE, OMZ, INS e PTX riversata, a maggior ragione con MSE e PTX. Significativo aumento della TGF-α è stato trovato nel ratto NR-AA che non è aumentato ulteriormente nel DR-AA ratto. MSE e PTX tendevano ad aumentare mentre, OMZ e INS mostrato poco o nessun effetto sulla TGF-α in AA-DR rat. lo screening Fitochimico del MSE ha mostrato la presenza di saponine, flavonoidi, glicosidi, steroidi e alcaloidi e analisi HPTLC indicato la presenza di otto composti attivi.
Conclusione
MSE ha mostrato antidiabetico e una migliore guarigione dell'ulcera effetti rispetto OMZ (antiulcera) o INS (antidiabetico) nei ratti diabetici e potrebbe essere più efficace nel diabete con ulcera gastrica concomitante.
Parole
Musa sapientum diabete guarigione dell'ulcera TNF-α IL- 1β TGF-α Sfondo
indagini estese in materia attività anti-ulcerose e guarigione dell'ulcera di piantaggine banane sono stati condotti nel nostro laboratorio per gli ultimi 30 anni. Attività anti-ulcerogeno di polvere secca di piantaggine polpa di frutta della banana (Musa sapientum
var. paradisiaca
, MS) contro vari sperimentale gastro-duodenali sono stati segnalati dal nostro laboratorio e altrove. Ulcera effetti protettivi di piantaggine banane è stato segnalato a causa di aumento dei fattori difensivi vale a dire. aumento della secrezione di mucina, glicoproteine ​​mucose, l'accumulo di prostaglandine E e I 2, durata della vita e la proliferazione delle cellule piuttosto che interessano l'offensiva secrezione di acido-pepsina [1-6]. Recentemente abbiamo riportato ulcera protettivo, piantaggine banane antiossidanti migliorando, superossido dismutasi (SOD), catalasi (CAT) e glutatione perossidasi (GSH) e diminuendo i radicali liberi, perossidazione lipidica (LPO) e ossido nitrico (NO) livelli nei omogenati della mucosa gastrica senza anti-H. pylori
attività in vitro
[7]. Diversi rapporti indicano che il diabete mellito (DM) aumenta la suscettibilità agli stimoli della mucosa ulcerose e predisposizione di ulcere gastriche e la guarigione alterata [8, 9]. Il nostro precedente lavoro ha riferito il diabete indotto da streptozotocina con co-occorrenti ulcera gastrica ha indicato il coinvolgimento di offensiva secrezione acida-pepsina e la generazione di radicali liberi e fattori difensivi come la secrezione di muco, glicoproteine ​​mucose, durata della vita delle cellule della mucosa e stato antiossidante di gastrico mucosa che sono stati aumentati e diminuiti, rispettivamente [10, 11].
citochine pro-infiammatorie come fattore di necrosi tumorale-α (TNF-α), interleuchina-1β (IL-1β), interleuchina-6 (IL-6) e fattori di crescita tra cui l'insulina like growth factor-1 (IGF-1) svolgono un ruolo importante nella patogenesi di malattie croniche come il diabete autoimmune e ulcere gastriche [12, 13]. I fattori di crescita come il fattore di crescita endoteliale vascolare (VEGF), il fattore di crescita dei fibroblasti di base, fattore di crescita trasformante-α (TGF-α) stanno avendo ruolo importante nei processi di guarigione dei tessuti tra cui quello di ulcere gastriche [9, 14]. Recentemente, abbiamo riportato gli effetti curativi di estratto etanolico di polpa di frutta secca di MS (MSE) in acido acetico indotta ulcera gastrica in condizioni normali (NR) ratto e abbiamo trovato il ruolo delle citochine, TNF-alfa, IL-1b e fattore di crescita, TGF -α nella guarigione dell'ulcera [15]
. attività ipoglicemizzante stato segnalato da frutto verde di piantaggine banana. Inoltre, leucocianidolo, un flavonoide, è stato isolato da piantaggine banana e la sua derivata dimetossi, leucocianidolo 3-O-beta-D-galactosyl cellobioside, dimostrato effetto ipoglicemico in animale da esperimento [16, 17]. Pertanto, il presente studio è stato esteso per valutare gli effetti curativi di MSE (droga test) in acido acetico ulcera gastrica indotta da acido a diabetica (DR-AA) ratto ei suoi effetti sulla TNF-α, IL-1β e TGF-α. Gli effetti del MSE in ulcera gastrica, TNF-α, IL-1β e TGF-α sono stati confrontati con farmaci anti-ulcera, omeprazolo (OMZ, inibitore della pompa protonica) e pentossifillina (PTX, un inibitore del TNF-α , un marcatore di primo piano infiammatoria) e farmaci ipoglicemizzanti, insulina (controlli positivi) e CMC-trattati (controllo negativo) in DR-AA ratto.
ratti albini Metodi
Animali
Inbred Charles-Foster (200-250 g ) di entrambi i sessi sono stati ottenuti dalla casa animale centrale dell'Istituto di Scienze mediche, Università di Banaras Hindu, Varanasi. Sono stati tenuti in casa animali dipartimentale a 26 ± 2 ° C e umidità relativa 44-56%, luce e cicli scure di 10 e 14 ore, rispettivamente per 1 settimana prima e durante gli esperimenti. Gli animali sono stati dotati di standard di dieta roditori pellet (Pashu Aahar, Ramnagar). Il cibo è stato ritirato 18-24 ore prima dell'esperimento se l'acqua è stato permesso ad libitum
. Gli animali sono stati divisi in sette gruppi contenenti 6 animali ciascuno. I primi due gruppi stavano avendo ratti normali mentre il 3 rd a gruppi settimo aveva ratti diabetici. ulcere gastriche sono stati prodotti con acido acetico in tutti i gruppi tranne 1 gruppo st (NR + NS), dove NS è stato applicato alla parete dello stomaco al posto di acido acetico. 1 st a 3 gruppi rd ricevuto CMC per via orale, mentre 4 al 7 th gruppi hanno ricevuto estratto etanolico di polpa di frutta di Musa sapientum
(MSE), omeprazolo (OMZ), l'insulina (INS) e pentossifillina (PTX) per 10 giorni rispettivamente dopo induzione della GU con acido acetico. 'Principi di laboratorio cura degli animali' (NIH pubblicazione n. 82-23, rivisti 1985) le linee guida sono state seguite. Approvazione da parte del Comitato Etico Istituzionale Animal è stata presa prima del lavoro sperimentale (Dean 542/02 /ab /CPCSEA del 23.8.2002).
Raccolta e la preparazione di estratto
dimensioni, acerbi, piantaggine verde frutti grande banana ( Musa sapientum Linn
. var. paradisiaca,
MS) raccolti nel corso del mese di novembre sono stati ottenuti dal mercato locale e identificato dal Prof. VK Joshi, Dipartimento di Dravyaguna, Facoltà di Ayurveda, IMS, BHU. Un campione di esempio (MS-09/231) è stato conservato presso il Dipartimento di Dravyaguna, IMS, BHU, Varanasi. La buccia del frutto è staccato e la polpa è stato tagliato in piccoli pezzi ed essiccato a temperatura ambiente. Dopo essiccamento ombra polvere della polpa è stato preparato dai piccoli pezzi e utilizzati per l'estrazione. L'estratto etanolico (MSE) è stata preparata aggiungendo 1 litro di etanolo due volte, con un intervallo di due giorni. L'etanolo contenente estratto così ottenuto ogni volta è stato mescolato e poi essiccato in essiccatoio a vuoto. MSE è stato conservato a -20 ° C fino all'utilizzo. Il rendimento dell'estratto è stata dell'1,6% (w /w).
Studio Fitochimico
costituenti chimici come saponine, flovonoids, glicosidi, steroidi e alcaloidi sono stati stimati nel MSE seguendo le procedure standard [18].
dito HPTLC stampa valutazione
MSE è stato sottoposto a HPTLC (CAMAG sistema TLC) di analisi stampa dito. Gli estratti sono stati diluiti in modo da ottenere una concentrazione di 1 mg /mL e applicati su gel di silice rivestite pre G60 F 254 piastre (10x10, spessore 2 mm E. Merck) utilizzando LINOMAT IV spotter. La piastra è stata poi sviluppata nella camera inferiore piana CAMAG in condizioni di saturazione parziale o completa dell'atmosfera serbatoio con vapori di solvente. Il sistema solvente utilizzato è cloroformio: metanolo: acido formico (9: 1: 0,5). La piastra è stata accuratamente essiccato e spruzzato con acido anisaldeide-solforico seguita da riscaldamento a 110 ° C per 5-10 min. Il rilevamento di macchie è stata fatta utilizzando lampada Hg a 254 nm e sono stati registrati immagini utilizzando CAMAG Reprostar 3. Il piatto è stato scansionato utilizzando CAMAG TLC scanner 3 con il software di valutazione WinCATS
farmaci e sostanze chimiche
Streptozotocin. (St . Louis, MO, USA), omeprazolo (Cipla, Mumbai, India) e pentossifillina (Abbott, Bangalore, India) sono stati utilizzati in questo studio.
induzione di diabete diabete è stata indotta nei ratti adulti (200- 250 g) mediante una singola iniezione intraperitoneale di streptozotocina (STZ, 60 mg /kg) sciolta in tampone citrato (pH 4,5) ed alimentati normalmente successivamente [19], mentre i ratti di controllo hanno ricevuto solo tampone citrato. I campioni di sangue sono stati raccolti dal retro-orbitale plesso dei ratti e siero è stato separato per centrifugazione a 3000 rpm per 3 minuti. I livelli di glucosio nel sangue sono stati stimati nel siero unhemolysed con il metodo glucosio ossidasi-perossidasi (GOD-POD) utilizzando kit diagnostico glucosio (Ranbaxy Laboratories Ltd, India). glicemia (BGL) è stato stimato dopo 48 ore e due settimane di somministrazione streptozotocina e ratti che mostrano BGL superiore a 250 mg /dL in condizioni non a digiuno sono stati selezionati per lo studio ulcera gastrica. sono state osservate variazioni del peso corporeo prima (0 giorno), dopo i ratti 14 giorni dopo diabetici o normali e il 10 ° giorno di AA-indotta GU dopo i trattamenti CMC /MSE /OMZ /INS /PTX (24 ° giorno) nei ratti normali e diabetici.
acetico acido ulcera gastrica indotta nei ratti diabetici e il trattamento di protocollo
ratti diabetici sono stati anestetizzati con pentobarbitone (35 mg /kg, intraperitoneale). L'addome è stato tagliato aperto con un'incisione e lo stomaco è stato visualizzato. Un tubo di vetro cilindrico 6 mm di diametro è stato saldamente posizionata sulla superficie sierosa anteriore della porzione ghiandolare dello stomaco 1 cm di distanza dall'estremità pilorica. acido acetico 100% (0,06 ml /animale) è stato instillato nel tubo e lasciata rimanere 60 secondi sulla parete gastrica. Dopo la rimozione della soluzione acida, l'addome è stato chiuso in due strati e animali sono stati ingabbiato ed alimentato normalmente. MSE (100 mg /kg, per via orale), OMZ (2,0 mg /kg, per via orale), INS (4U /kg, sottocutanea) e PTX (10 mg /kg, per via orale) sono stati somministrati una volta al giorno, prima dose viene data 4 ore dopo l'applicazione di acido acetico al giorno 1 e poi continuato fino a 10 giorni. Gli animali sono stati messi in veloce per 24 ore dopo l'ultima dose di farmaci di prova su 10 ° giorno e si sono sacrificati per l'eutanasia su 11 ° giorno di esperimento per valutare le dimensioni ulcera gastrica e la guarigione. Indice ulcera è stato calcolato in base al prodotto della lunghezza e larghezza (mm 2 /ratto) delle ulcere [20].
TNF-α, IL-1b e TGF-alfa stime
TNF-α, IL -1β e TGF-α sono stati stimati in mucosa gastrica intatto e dalla mucosa gastrica di ratti diabetici esposti ad acido acetico, con o senza diversi trattamenti farmacologici. Mucosa dalla porzione ghiandolare dello stomaco stati raschiato dalla zona ulcerata /intatta tramite vetrini sterilizzati e conservati a -80 ° C fino all'analisi. RNA totale è stato estratto da campioni di mucosa con il metodo di Chomczynski e Sacchi (1987) [21] utilizzando il kit di estrazione da Bangalore Genei, India. L'isolamento di RNA è stato quantificato e 5 mg di RNA totale è stato utilizzato per preparare cDNA. La miscela PCR è stato amplificato in un ciclatore termico del DNA con le specifiche descritte nei materiali e metodi. Così β-actina, IL-1β, TNF-α e TGF-α sono stati stimati. I risultati sono stati espressi come rapporto tra il fattore di citochine /crescita beta-actina nei diversi gruppi trattati
. Isolamento di RNA totale da mucosa gastrica
circa 100 mg di mucosa gastrica demolizione dalla regione ghiandolare (sito di ulcera area) vicino alla zona ulcerata stato preso in tubo DEPC trattati ed omogeneizzato con 1 ml di soluzione di denaturazione. Per questo 1 ml di acqua fenolo saturato seguiti da 200 ml di cloroformio - miscela alcool isoamilico (appena preparato nel rapporto di 49: 1) è stato aggiunto e mescolato con cura. La miscela è stata incubata in ghiaccio per 15 minuti e centrifugata a 10000 rpm per 20 minuti a 4 ° C. Lo strato superiore è stato accuratamente rimosso in un'altra provetta trattata DEPC e 1 ml di 100% isopropanolo è stato aggiunto e conservato a -20 ° C per 30 minuti per precipitare l'RNA. Anche la miscela viene centrifugata a 10000 rpm per 20 minuti a 4 ° C ed il surnatante è stato scartato. Il pellet è stato risospeso in 0,3 ml di soluzione di denaturazione e precipitato aggiungendo uguali quantità di 100% isopropanolo. Questa miscela è stata mantenuta a -20 ° C per 30 minuti e centrifugata a 10000 rpm per 20 minuti a 4 ° C. Il surnatante è stato scartato e il pellet è stato lavato con 75% etanolo per rimuovere eventuali tracce residue di guanidina per 15 minuti. Anche il contenuto è stato centrifugato per 20 minuti a 4 ° C a 10000 rpm. Il surnatante è stato scartato e il pellet contenente RNA è stato disciolto in 100 - 200 ml di DEPC acqua trattata ed incubata a 55 ° C per 10-15 minuti. Questo RNA totale è stato conservato a -70 ° C fino all'utilizzo. L'RNA totale è stato quantificato prendendo l'assorbanza a 260 nm (A 260) e utilizzando il seguente esempio concentrazione formula di campione di RNA = 40 × A 260 fattore × diluizione cioè un'assorbanza di 1 unità a A 260 corrispondente a 40 mg di RNA per ml (Questa relazione è valida solo per misure in acqua).
sintesi del DNA primo aspetto
5 mg di RNA totale è stata presa da ogni campione in un RNA sterili gratuito (DEPC trattati) tubo e acqua sterile è stato aggiunto per compensare il volume finale a 9 microlitri. Per questo 1 ml di Oligo (dT) 18 Primer inserito e posizionato a 65 ° C per 10 minuti e poi a temperatura ambiente per 2 minuti. Per questo 1 ml di RNA Inhibitor, 1 ml di 0,1 M DTT, sono stati aggiunti e mescolati ben 4 ml di RT Buffer (5x), 2,0 ml di miscela dNTP 30 mm, 0,5 l di trascrittasi inversa e 1 ml di acqua sterile. La miscela è stata mantenuta a 42 ° C per 1 ora e incubato a 95 ° C per 2 minuti e mantenuto in ghiaccio rapidamente. Questo prodotto cDNA può essere utilizzato direttamente per l'amplificazione PCR o altrimenti conservare a -20 ° C per un ulteriore uso. Reazione
catena della polimerasi (PCR)
Il cDNA risultante (2 ml) è stato amplificato in un volume di reazione di 50 microlitri contenente 2 U di Taq polimerasi, dNTP 1 ml (30 mm), 5 pl di 10 × PCR Buffer e specifici primer (avanti e indietro) sono stati utilizzati ad una concentrazione finale di 1 mm. La miscela di reazione a catena della polimerasi è stato amplificato in un ciclatore DNA termica (MJ Research) e le condizioni di ciclo di incubazione e termiche erano come seguito: denaturazione a 94 ° C per 2 minuti, ricottura a 60, 66 e 62 ° C per actina β, TGF - α, IL - β e TNF - alfa rispettivamente ed estensione a 72 ° C per 50 secondi e l'estensione finale per 2 minuti. Il numero di cicli è 30 per tutte le reazioni. La sequenza nucleotidica dei primer erano come seguito: β actina, senso 5'-TTG TAA CCA ACT GGG ACG ATA TGG - 3 '; antisenso 3 '- GAT CTT GAT GGT GCT AGG - 5' (764 bp); TGF - α senso 5 '- ATG GTC CCC GCG GCC GGA CA-3'; antisenso 3 '- GAC CAC TGT CTC AGA GTG GCA GCA AGG CAG TCC TTC TTT - 5' (476 bp); IL - 1β senso 5'-GCT ACC TAT GTC TTG CCC GT -3 '; antisenso 3 '- GAC CAT TGC TGT TTC CTA GG - 5' (543 bp); TNF - α senso 5 '- TAC TGA ACT TCG GGG TGA TTG GTC C - 3'; antisenso 3 '- CAG CCT TGT CCC TTG AAG AGA ACC - 5' (295 bp). I primer sono stati selezionati sulla base delle sequenze pubblicate in studio precedente [9] sono stati sintetizzati da Bangalore Genei, Bangalore, India. Prodotti di reazione a catena della polimerasi
sono stati rilevati mediante elettroforesi su gel di agarosio 1,5% contenente bromuro di etidio. Posizione del prodotto previsto è stata confermata utilizzando 300-bp ladder DNA (Bangalore Genei, India) come marcatore di dimensioni standard. Il gel è stato poi fotografata con transilluminazione UV. La densità dei prodotti di PCR è stata misurata utilizzando il software alpha imager. Il segnale per prodotti di PCR sono stati standardizzati contro quella di mRNA β-actina da ciascun campione ei risultati sono stati espressi come prodotto di PCR /β rapporto mRNA actina.
Analisi statistica
test per dati non appaiati Student't 'stato utilizzato per il confronto statistico tra i due gruppi. I confronti che coinvolgono più di due gruppi sono stati eseguiti utilizzando uno analisi della varianza (ANOVA) e per confronti multipli rispetto al gruppo di controllo è stato fatto con il test di Dunnett.
Risultati
studio Fitochimico
preliminare di screening fitochimica del MSE ha mostrato la presenza di saponine, flovonoids, glicosidi, steroidi e alcaloidi di test chimici. La stampa dito di alte prestazioni cromatografia su strato sottile (HPTLC) cromatogramma ha mostrato la presenza di almeno otto composti attivi (Figura 1). L'analisi del fattore di ritenzione e colori delle bande risolti a 254 nm a R f 0,71 a MSE potrebbe essere un flavonoide, leucocianidolo come precedentemente riportato da Prabha e collaboratori [17] dove hanno mostrato il risultato simile con l'estratto metanolico di Musa sapientum
frutta. Figura 1 La stampa dito di HPTLC cromatogramma di MSE.
sangue studio glucosio
normale (NR) + NS (98.7 ± 6.0 mg /dL) e NR + AA (106,3 ± 5,8 mg /dL) ratti hanno mostrato poco o nessun cambiamento nel livello di glucosio nel sangue (BGL). Uno studio anti-iperglicemici dose-dipendente è stata intrapresa con 50, 100 e 200 mg /kg di MSE somministrati per 10 giorni ai ratti diabetici e un calo del 11,0, 17,0 e 19,9% (P
< 0,3 a P
< 0.1, n = 6) a BGL è stato osservato (BGL- 297,6 ± 21,2 mg /dL). MSE (100 mg /kg) tende a diminuire (17,0% di diminuzione, P
< 0,1) ma INS diminuito il BGL (61,4% di diminuzione, P
< 0,05) mentre, OMZ e PTX mostravano poca o nessuna cambiare in BGL rispetto al gruppo AA DR +. Tuttavia, la dose di 100 mg /kg è stato selezionato per ulteriori studi come questa dose è stato precedentemente trovato efficace nella guarigione acetico ulcera gastrica acida indotta nei ratti normali 15.
Cambiamenti del peso corporeo
La media ± SE corpo pesi di ratti in tutti i 7 gruppi studiati a 0 giorno hanno fatto registrare un intervallo di 201,3 ± 3.4 al 205,4 ± 2,9 g /ratto all'inizio dell'esperimento. 1 ° e 2 nd erano normali gruppi di ratti mentre 3 rd 7 th era gruppi di ratti diabetici. Aumento del peso corporeo è stata osservata in 1 st (8,9%, P < 0,05) e 2 nd (5,6%) gruppi, mentre i ratti diabetici di 3 ° a 7 th gruppo ha mostrato diminuzione del peso corporeo del 8,7 all'11,3% (P < 0,05 a P < 0,01), rispettivamente il 14 ° giorno dopo normale /diabetici rispetto al loro rispettivo valore di 0 giorni. C'era significativo guadagno in peso dopo trattamenti con MSE (9,7%, P < 0,05) e INS (15,3%, P < 0.01) mentre, poco aumento del peso corporeo è stato osservato con OMZ (3,4%) e PTX (4,7% ) trattamenti rispetto al rispettivo valore di 14 giorni. Tuttavia, ratti di controllo diabetici non hanno mostrato alcun aumento del loro peso corporeo rispetto al valore di 14 giorni.
Cicatrizzazione dell'ulcera gastrica
NR + AA ratto ha mostrato aumento dell'indice ulcera (UI-14.3 ± 2.3, P <
; 0,05) rispetto al NR + NS (No ulcera) ratto mentre, DR + AA ratto ha mostrato un ulteriore aumento dell'indice di ulcera (aumento del 108,4%, P
< 0,05) rispetto a AA ratto NR + indica una maggiore propensione a ulcerazioni e ritardo nella guarigione dell'ulcera. ratti DR + AA, trattati con OMZ, INS e PTX ha mostrato diminuzione dell'indice di ulcera del 39,3, 38,6 e 43,3%, rispettivamente, (vicino a NR + livello AA), mentre, MSE ha mostrato diminuzione del 63,8%, inferiore al valore di NR + AA ratti indicano una migliore guarigione dal MSE rispetto al OMZ, INS o PTX (Figura 2). Figura 2 Effetti di estratto etanolico di polpa di frutta di Musa sapientum (MSE, 100 mg /kg × 10 giorni), omeprazolo (OMZ, 2 mg /kg × 10 giorni), l'insulina (INS, 4U /kg × 10 giorni) e pentossifillina (PTX, 10 mg /kg × 10 giorni) sul ratto indice ulcera gastrica e citochine mucosa gastrica, fattore di necrosi tumorale-α (TNF-α) e interleuchina-1β (iL-1β) e trasformando crescita α factor (α TGF- ) come rapporto di ß actina in acido acetico (AA) indotta ulcera gastrica in condizioni normali (NR) e ratti diabetici (DR). I risultati sono media + SEM, 4 animali in citochine e studio del fattore di crescita e di 6 animali in studio ulcera gastrica. CMC, MSE, OMZ e PTX sono stati somministrati per via orale, mentre; INS è stato dato per via sottocutanea. * P
< 0,05 rispetto al gruppo NS, AP
< 0,05 rispetto al NR + AA gruppo e + P
< 0,05 rispetto al gruppo AA DR + (analisi statistica è stata effettuata da una ANOVA seguita da test di Dunnett per confronti multipli).
TNF-α, iL-1β e TGF-α
I risultati di TNF-α, iL-1β e TGF-α sono stati espressi come rapporto di citochine /crescita fattore beta-actina (figure 2 e 3). Figura 3 Effetto del MSE, OMZ, INS e PTX sulla mucosa gastrica TNF-α, IL-1β e livelli TGF-α in ratti diabetici (DR) (metodo RT-PCR). Corsia M: Indicatore. Corsia 1: NR + NS. Corsia 2: NR + AA. Corsia 3: DR + AA. Corsia 5: DR + AA + MSE. Corsia 6: DR + AA + OMZ. Corsia 7: DR + AA + INS. Corsia 8:. DR + AA + PTX
TNF-α e IL-1β
ratti NR + AA hanno mostrato aumento della mucosa gastrica TNF-α da 265,1% (P
< 0,05) e IL- 1β dal 52,8% (P
< 0,05) rispetto al NR + NS (mucosa intatta) ratti. ratti DR + AA mostrato ulteriore aumento dei livelli di IL-1β e TNF-α da 345,0 e 102,5% rispettivamente (P
< 0,05) rispetto a rispettivi ratti NR + NS e del 21,9 e 32,6% di aumento (P
< 0,05) rispetto ai rispettivi ratti NR + AA. Trattamenti di ratti DR + AA con farmaco ipoglicemizzante, INS e farmaci anti ulcera, MSE e OMZ e PTX invertiti i livelli di IL-1β e TNF-α vicino al livello NR + AA. Tuttavia, sia MSE e PTX hanno mostrato i migliori effetti una riduzione il TNF-α e IL-1β rispetto a OMZ o INS (figure 2 e & 3).
TGF-α
NR + AA ratti hanno mostrato un significativo aumento della mucosa gastrica TGF-α (aumento del 165,1%, P
< 0,05) rispetto ai ratti NR + NS. Tuttavia, TGF-α non è stato ulteriormente aumentato nei ratti DR + AA rispetto al gruppo AA + NR. Trattamenti di ratti DR + AA con OMZ e INS non ha aumentato il livello di TGF-α ulteriormente mentre, MSE e PTX tendevano ad aumentare il TGF-α (figure 2 & 3).
Discussione ratti diabetici
sperimentali hanno dimostrato una maggiore propensione a ulcere gastriche e guarigione ridotta di lesioni gastriche [8, 9] e questo aggravamento di ulcera /ritardata guarigione sono stati invertiti da agenti correzione livello di zucchero nel sangue [22]. Non insulino-dipendente diabete mellito (NIDDM) ha aumentato la propensione a ulcere gastriche, migliorando offensivo, la secrezione di acido-pepsina gastrica radicali liberi delle mucose, la perossidazione lipidica (LPO), l'ossido nitrico (NO) e diminuendo glicoproteina e antiossidanti della mucosa, la superossido dismutasi ( SOD) livelli [10]
. Streptozotocin (STZ) è ampiamente usato per indurre il diabete sperimentale negli animali e la sua azione citotossica è mediato da specie reattive dell'ossigeno. STZ sembra essere più preciso in quanto vi è assorbimento da parte GLUT2 specifiche cellule beta, ma non da altri trasportatori del glucosio e hanno meno effetti collaterali. Essa provoca l'attivazione di poli ADP-ribosilazione, che porta alla formazione di radicali superossidi e, di conseguenza, le cellule beta subiscono la distruzione da necrosi [23]. Il meccanismo alla base della maggiore suscettibilità della mucosa gastrica negli animali diabetici a danno è multifattoriale e comprende l'attenuazione di angiogenesi e l'aumento della produzione di citochine proinfiammatorie, TNF-alfa e IL-1b che comportano reazione infiammatoria sostenuta e processo ritardando curativo l'area dell'ulcera [9]. Il meccanismo principale attraverso il quale le citochine esercitano le loro influenze deleterie sulla guarigione dell'ulcera può comportare l'inibizione dei fattori di crescita responsabili per la rigenerazione della mucosa e di recupero dai danni [24]. E 'stato anche riportato che TNF-α aumenta la produzione di IL-1β e altre citochine, con conseguente accumulo di neutrofili [25] e una maggiore produzione di ROS nella mucosa gastrica esposto a ischemia-riperfusione. Pentossifillina, un inibitore di TNF-α 'stato segnalato per accelerare la guarigione delle acido acetico indotta ulcere gastriche in ratti possibilmente attraverso l'inibizione della produzione di TNF-α [13]. E 'stato riportato che l'aumento della proliferazione delle cellule durante la guarigione dell'ulcera può essere mediata da aumento del rilascio di EGF e TGF-α. E 'stato anche riferito che, nonostante l'aumento del livello di TGF-α nei ratti diabetici con co-occorrenti ulcera gastrica la guarigione è stata ritardata a causa di sconosciuto il meccanismo /s. È stato proposto che l'iperglicemia in animali diabetici potrebbe indurre alcune modifiche strutturali del TGF-α o suoi recettori nella zona dell'ulcera, portando alla disfunzione di questo fattore di crescita durante diabete mellito [9, 26].
Acido acetico (AA ) ulcera indotta nel ratto sono stati segnalati per avere stretta somiglianza con ulcere clinici in posizione, la cronicità e la gravità e serve come il modello più affidabile per studiare processo di guarigione delle ulcere [20]. Nel presente studio, abbiamo osservato un aumento dei livelli di citochine proinfiammatorie TNF-α e IL-1β nella mucosa gastrica di ratti normali trattati con acido acetico. ratti diabetici hanno mostrato un ulteriore aumento del loro livello rispetto ai ratti normali quando sottoposto a acetico ulcera gastrica indotta da acido. Quanto sopra di osservazione è stato in conferma con i lavori segnalati in precedenza [13, 27, 28]. MSE è stato segnalato per invertire l'aumento di TNF-α e IL-1β in GU indotta da AA in ratti normali e promosso la guarigione dell'ulcera dai suoi vari effetti sui fattori difensivi della mucosa gastrica, tra cui una maggiore proliferazione delle cellule e antiossidanti e ridurre i livelli di radicali liberi [7, 15]. Il trattamento con insulina invertito la guarigione dell'ulcera ridotta negli animali diabetici, principalmente a causa della normalizzazione di iperglicemia, ma non per l'effetto diretto di insulina sulla guarigione dell'ulcera perché l'insulina somministrata a ratti non diabetici non ha mostrato alcun effetto nella cicatrizzazione delle ulcere [ ,,,0],27]. Questo ha dimostrato che i farmaci antidiabetici sono stati efficaci correggendo l'aumento riducendo in tal modo i livelli di queste citochine, mentre, farmaco anti ulcera (omeprazolo) è stato migliorare la guarigione delle ulcere e riducendo il loro livello [15] livello di glucosio. TNF-α è stato segnalato per stimolare la regolazione dei livelli desiderati IL-1b, quindi controllando l'espressione di TNF-α l'espressione di IL-1β potrebbe essere controllato. Questo può essere il meccanismo attraverso il quale pentossifillina riduce sia i livelli di citochine [29].
Il presente lavoro ha mostrato aumento del livello di TGF-α nei ratti trattati con acido acetico. Tuttavia, nessun ulteriore aumento del livello di TGF-α è stato trovato in ratti diabetici e questa osservazione è coerente con le precedenti osservazioni che mostrano l'importanza di questo fattore di crescita nel processo di guarigione dell'ulcera. Tuttavia, il fatto che un ritardo di guarigione delle ulcere gastriche in stato diabetico, nonostante aumentata espressione di TGF-α, indica che gli effetti curativi di questo fattore di crescita possono essere attenuati da qualche meccanismo sconosciuto. Questo milita contro il principale ruolo di questo fattore di ritardo osservato nella guarigione delle ulcere gastriche in condizioni diabetici. Una possibilità è che l'iperglicemia in animali diabetici potrebbe indurre alcune modifiche strutturali del TGF-α oi suoi recettori o ridurre la disponibilità di ingredienti essenziali necessari per la guarigione normale nell'area dell'ulcera, portando alla disfunzione di questo fattore di crescita durante diabete mellito. Ulteriori studi sono necessari per rispondere alla domanda perché aumentata espressione di TGF-α non contribuisce al rilascio di un fattore di crescita funzionalmente attiva [9]. E 'stato anche riferito che l'aumento del livello di TGF-α potrebbe aumentare la proliferazione cellulare [30]. MSE ha mostrato una tendenza ad aumentare il livello di TGF-α in ratti diabetici. Questo può essere meglio correlata con la proliferazione cellulare, come è stato riportato MSE per aumentare la proliferazione cellulare [4].
Attività ipoglicemizzante dovuto alla stimolazione della produzione di insulina e l'utilizzazione del glucosio è stata segnalata da frutto verde di piantaggine banana e fibre di frutta sono stati trovati aumentare glucogenesi nel fegato e abbassato glicemia a digiuno. Musa sapientum
stato segnalato per contenere beta-sitosteroli, leucocianidolo, sryngin, quercetina, sterylglycosides, aminoacidi ecc beta sitosteroli e derivata dimetossi di leucocianidolo, leucocianidolo 3-O-beta-D-galactosyl cellobioside, hanno dimostrato effetto ipoglicemico in animali da esperimento [16]. I flavonoidi sono più comunemente noti per la loro attività antiulcera, ipolipemizzanti attività, attività anti-infiammatoria, attività antiossidante, attività antimicrobica [31] e attività anti-iperglicemici [32]. HPTLC impronte digitali di MSE dimostrato otto componenti attivi in ​​cui uno dei componenti possono essere leucocianidolo, come riportato in precedenza da Prabha e collaboratori [17], che hanno confrontato il costituente con leucocianidolo standard di autenticazione. Gli alcaloidi sono stati segnalati per mostrare anti-diabetici e anti-infiammatori, attività antiossidante [33], mentre le saponine hanno mostrato effetti anti-diabetici [34].
Conclusione
La presenza di molti costituenti attivi come flavonoidi, saponine, glicosidi e Tutti gli autori hanno letto e approvato il manoscritto finale.

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