Gyógyító hatása Musa sapientum var. paradisiaca diabéteszes patkányok együtt előforduló gyomorfekély: citokinek és növekedési faktor PCR amplifikáció

Gyógyító hatása Musa sapientum katalógusa var. paradisiaca katalógusa diabéteszes patkányok együtt előforduló gyomorfekély: citokinek és növekedési faktor PCR amplifikáció katalógusa Abstract katalógusa Háttér katalógusa A jelen tanulmány értékeli hatásait kivonat Musa sapientum katalógusa gyümölcs (MSE) a fekély-index, a vér glükóz szint és a gyomor nyálkahártya citokin, TNF-α és IL-1β és a növekedési faktor, TGF-α (érintett cukorbetegség és krónikus fekély) ecetsavban (AA) által indukált gyomorfekély (GU) a diabéteszes ( DR) patkány.
Methods
MSE (100 mg /kg, szájon át), az omeprazol (OMZ, 2,0 mg /kg, szájon át), inzulin (INS, 4 U /kg, sc) vagy pentoxyphylline (PTX, 10 mg /kg, szájon át) kaptak naponta egyszer, 10 napon keresztül 14 nap utáni streptozotocin (60 mg /kg, intraperitoneális) indukált diabéteszes patkányokban, míg a normál /diabéteszes patkányok CMC ugyanabban az időszakban indukció után GU AA . Fekély-indexet alapján számítottunk ki a hosszúság és a szélesség (mm 2 /patkány) fekélyek, míg, a TNF-α, IL-1β és TGF-α becsülték a gyomornyálkahártya homogenizátumot az érintetlen /fekély régióban. Fitokémiai szűrés és HPTLC elemzését MSE végeztük standard eljárásokat követve.
Eredménye
növekedése fekély index, a TNF-α és IL-1β észleltek normál (NR) -AA patkány képest NR-normál sóoldat patkány , ami tovább növelte a DR-AA patkány míg kezeléseket DR-AA patkányt MSE, OMZ, INS és PTX fordított nekik, inkább az MSE és PTX. Jelentős növekedés TGF-α találtak NR-AA patkány, amely nem növeli tovább a DR-AA patkány. MSE és PTX növelhetik, míg, OMZ és INS mutatott kevés vagy nincs hatása a TGF-α AA-DR patkány. Fitokémiai szűrése MSE jelenlétét mutatta szaponinok, flavonoidok, glikozidok, szteroidok és alkaloidok és HPTLC analízis jelenlétét jelzi nyolc aktív vegyületek.
Következtetés
MSE megmutatta antidiabetikus és jobb a fekély gyógyulását hatásokat összehasonlítva OMZ (fekélyellenes), vagy INS (antidiabetikus) diabeteses patkányok és hatékonyabb lehet a diabetes egyidejű gyomorfekély. katalógusa Kulcsszavak katalógusa Musa sapientum katalógusa diabetes fekélygyógyuláshoz TNF-α IL 1β TGF-α Háttér katalógusa Kiterjedt vizsgálatainak anti-fekélyt és a fekély gyógyulását tevékenysége útifű banán végeztek a laboratóriumban az elmúlt 30 évben. Anti-fekélyt aktivitását szárított por útifű banán gyümölcshús (Musa sapientum katalógusa var. Paradisiaca katalógusa, MS), ellentétben a különböző kísérleti gyomor-nyombél számoltak be a laboratóriumi és másutt. Fekély védő hatása útifű banán jelentették növekedése miatt a védekező tényezők ti. növekedni mucin szekréciója, nyálkahártya glikoproteinek felhalmozódása prosztaglandinok E és I 2, élettartam és sejtburjánzást helyett érintő támadó sav-pepszin szekréció [1-6]. A közelmúltban számoltak be fekély védő, útifű banán fokozó antioxidánsok, szuperoxid-diszmutáz (SOD), kataláz (CAT) és a glutation-peroxidáz (GSH) és csökkentve a szabad gyökök, lipidperoxidáció (LPO) és nitrogén-oxid (NO) szintje a gyomornyálkahártya homogenizátumokban nélkül anti-H. pylori
aktivitás in vitro
[7]. Számos jelentés azt jelzi, hogy a diabetes mellitus (DM) növeli a nyálkahártya érzékenységet ulcerogén ingerekre, és hajlam a gyomorfekély és a károsodott gyógyulás [8, 9]. A korábban közölt munka sztreptozotocinnal cukorbetegség együtt előforduló gyomorfekély azt mutatta bevonása mind támadó sav-pepszin szekréció és a szabadgyök termelés és a defenzív tényezők, mint a nyálkakiválasztással, nyálkahártya glikoproteinek élettartama nyálkahártya sejtekben és antioxidáns státusz gyomor- nyálkahártya amelyek fokozott és csökkent, illetve [10, 11].
proinflammatorikus citokinek, mint például a tumor nekrózis faktor-α (TNF-α), az interleukin-1β (IL-1β), az interleukin-6 (IL-6) és növekedési faktorok, beleértve az inzulin-szerű növekedési faktor-1 (IGF-1) fontos szerepet játszanak patogenezisében a krónikus betegségek, mint a az autoimmun diabetes és gyomorfekély [12, 13]. A növekedési faktorok, mint a vaszkuláris endoteliális növekedési faktor (VEGF), a bázikus fibroblaszt növekedési faktor, a transzformáló növekedési faktor-α (TGF-α) vannak jelentős szerepet szövet gyógyulási folyamatokat, beleértve, hogy a gyomorfekély [9, 14]. Nemrég jelentették a gyógyító hatását etanolos kivonatot szárított gyümölcs cellulóz MS (MSE) az ecetsavval indukált gyomorfekély normál (NR) patkány, és megállapította, a szerepe a citokinek, a TNF-α, IL-1β és a növekedési faktor, a TGF -α gyógyulást fekély [15]. katalógusa hipoglikémiás aktivitást jelentettek zöld gyümölcs útifű banán. Továbbá, leukocianidin, egy flavonoid, izoláltuk a útifű banán és dimetoxi-származék, leukocianidin 3-O-béta-D-galaktozil cellobiozid bizonyította hipoglikémiás hatás kísérleti állatokon [16, 17]. Ezért a jelen tanulmány kiterjesztették, hogy értékelje a gyógyító hatását MSE (vizsgálati hatóanyag) ecetsavval indukált gyomorfekély diabéteszes (DR-AA) patkány és annak hatása a TNF-α, IL-1β és TGF-α. A hatások a MSE a gyomorfekély, a TNF-α, IL-1β és TGF-α összehasonlítottuk fekélyellenes gyógyszerek, omeprazol (OMZ, protonpumpa inhibitor) és pentoxyphylline (PTX, inhibitort TNF-α , egy kiemelkedő gyulladásos marker) és hipoglikémiás szer, inzulin (pozitív kontrollok) és a CMC-kezelt (negatív kontroll) DR-AA patkány.
módszerek
Állatok
Beltenyésztett Charles-Foster albínó patkányokon (200-250 g ) mindkét nembeli nyert a központi állat háza Institute of Medical Sciences, Banaras hindu University, Varanasi. Úgy tartották a megyei állat ház 26 ± 2 ° C és a relatív páratartalom 44-56%, a világos és sötét ciklus 10 óra és 14 óra, illetve 1 hét előtt és alatt a kísérletekben. Az állatokat feltéve standard rágcsáló pellet étrend (Pashu Aahar, Ramnagar). Élelmiszer visszavonták 18-24 órával a kísérlet ellenére vizet hagytunk ad libitum katalógusa. Az állatokat hét csoportba sorolhatjuk, amely 6 állattal. Az első két csoport volt, amelynek normál patkányoknál, míg 3 rd a hetedik csoport volt diabéteszes patkányokban. Gyomorfekélyek gyártottak ecetsavval az összes csoport esetében, kivéve 1 ST csoport (NR + NS), ahol NS vittük fel a gyomor fal helyett ecetsav. 1 st 3 rd csoport kapott CMC orálisan, míg a 4 th 7 th csoport kapott etanolos kivonatot gyümölcshús Musa sapientum katalógusa (MSE), omeprazol (OMZ), inzulin (INS) és pentoxyphylline (PTX) 10 napig, illetve az indukció után GU ecetsavval. "Alapelvek laboratóriumi állatok gondozása" (NIH publikáció sem. 82-23, átdolgozott 1985) irányelveket követtük. Jóváhagyást az Institutional Animál etikai bizottság előtt hozott kísérleti munka (Dean 542/02 /ab /CPCSEA kelt 2002/08/23).
Összegyűjtése és előkészítése kivonat
Nagyméretű, éretlen, zöld banán útifű gyümölcsök ( Musa sapientum Linn katalógusa. var. paradisiaca, katalógusa MS) során gyűjtött november hónapban kaptuk a helyi piacon, és amely a professzor VK Joshi Tanszék Dravyaguna Kar Ayurveda, IMS, BHU. A mintadarab (MS-09/231) megőrződik a Department of Dravyaguna, IMS, BHU, Varanasi. A bőr a gyümölcsöt lehámlott, és a pépet kis darabokra vágva, és szobahőmérsékleten szárítjuk. Miután árnyékában szárítás por a pépet állítunk elő a kis darabokra, és az extrakcióhoz használt. Az etanolos kivonat (MSE) úgy állítjuk elő, hogy 1 liter etanol kétszer, időközzel két napig. Az etanolos tartalmazó kivonatot így kapott minden egyes alkalommal, összekevertük és később vákuumban szárítjuk szárítóban. MSE-on tároltuk -20 ° C-on, amíg a további felhasználásig. A hozam az extraktumot 1,6% (w /w).
Fitokémiai tanulmány katalógusa kémiai összetevők, mint a szaponinok, flovonoids, glikozidok, szteroidok és alkaloidok becsültük az MSE alábbi szabványos eljárásokkal [18].
HPTLC ujjlenyomat értékelést katalógusa MSE vetettük alá HPTLC (CAMAG TLC rendszer) ujjlenyomat elemzés. Az extraktumokat hígított annak érdekében, hogy koncentrációja 1 ug /ul és alkalmazott pre- bevont szilikagél G60 F 254 lemezeken (10x10, 2 mm-es vastagságban, az E. Merck) alkalmazásával LINOMAT IV megfigyelő. A lemezt ezután kifejlesztett CAMAG lapos alsó kamrába körülmények között részleges vagy teljes telítettségét a tartály légkör oldószerrel gőzök. Az alkalmazott oldószerrendszer kloroform: metanol: hangyasav (9: 1: 0,5). A lemezt óvatosan megszárítjuk, és bepermetezzük ánizsaldehid-kénsav, majd melegítjük 110 ° C-on 5-10 percig. Kimutatására foltokat felhasználásával készült Hg lámpa 254 nm-en, és képeket készített használatával CAMAG Reprostar 3. A lemezt beolvasott segítségével CAMAG TLC szkenner 3 WinCATS kiértékelő szoftverrel. Katalógusa gyógyszerek és vegyszerek katalógusa streptozotocinnal (St . Louis, MO, USA), omeprazol (Cipla, Mumbai, India) és pentoxyphylline (Abbott, Bangalore, India) használtunk a jelen tanulmányban. katalógusa indukciós cukorbetegség katalógusa diabetes váltottunk felnőtt patkányokban (200- 250 g) egyetlen intraperitoneális injekció streptozotocin (STZ, 60 mg /kg) feloldunk citrát-puffer (pH = 4,5), és táplált normálisan ezt követően [19], míg a kontroll patkányok citrát puffer csak. Vérmintákat veszünk a retro-orbitális plexus a patkányok és a szérumot centrifugálással elválasztjuk 3000 rpm-en, 3 percig. A vércukorszint becsülték a unhemolysed szérum glükóz-oxidáz-peroxidázzal (GOD-POD) módszerrel glükóz diagnosztikai kit (Ranbaxy Laboratories Ltd, India). Vérglükózszint (BGL) becsültük után 48 órával és két héttel a streptozotocin beadás és mutató patkányok BGL felett 250 mg /dl alatt nem éhgyomri körülmények választottak ki gyomorfekély tanulmány. Testtömeg változásokat figyeltek előtt (0 nap) után 14 nappal a diabetikus és normál patkányok és a 10 napjáig AA indukálta GU után CMC /MSE /OMZ /INS /PTX kezelések (24 th nap) a normális és a diabetikus patkányokban.
ecetsav és indukált gyomorfekély diabéteszes patkányokban és kezelési protokoll
diabetikus patkányokat altattunk pentobarbiton (35 mg /kg, intraperitoneális). A hasat felvágni egy bemetszés és a gyomor tettük láthatóvá. Egy hengeres üvegcsövet 6 mm átmérőjű szorosan fektetni az elülső savós hártya felületén a mirigyes részének gyomor 1 cm-re a pylorus-végét. 100% -os ecetsav (0,06 ml /állat) csepegtettünk a csőbe, és hagytuk, hogy továbbra is 60 másodperc a gyomor falon. Eltávolítása után a savas oldatot, a hasat összezárjuk két rétegben, és az állatokat ketrecbe zárt és táplált normálisan. MSE (100 mg /kg, orális), OMZ (2,0 mg /kg, orális), INS (4U /kg, szubkután) és az PTX (10 mg /kg, szájon át) adagoltuk, naponta egyszer, az első dózis beadásának 4 óra alkalmazása után ecetsav 1. napon, majd tovább maximum 10 napig. Az állatokat hozott gyors 24 órával az utolsó adag vizsgálati gyógyszerek 10 napon leöltük a eutanázia 11 napjáig kísérlet értékelésére gyomorfekély mérete és a gyógyulás. Fekély-indexet alapján számítottunk ki a hosszúság és a szélesség (mm 2 /patkány) fekélyek [20].
A TNF-α, IL-1β és TGF-α becslések
a TNF-α, IL -1β és TGF-α becsülték intakt gyomornyálkahártya és gyomornyálkahártya diabéteszes patkányok kitett ecetsav vagy anélkül különféle hatóanyag kezelés. Nyálkahártyát a mirigyes részének gyomor lekapartuk a fekélyes /érintetlen terület alkalmazásával sterilizált üveg tárgylemezek és -80 ° C-ig elemzést. A teljes RNS-t vontunk ki nyálkahártya mintákból módszerével Chomczynski és Sacchi (1987) [21] alkalmazásával extrakciós készlettel Bangalore GENEI, India. Az RNS-izolálás mennyiségileg és 5 ug össz-RNS-t használjuk, hogy készítsen cDNS. A PCR-elegyet amplifikáltuk DNS thermal cycler a specifikációk leírt anyagok és módszerek. Így β-aktin, az IL-1β, a TNF-α és TGF-α becsülték. Az eredményeket kifejezett aránya citokinek /növekedési faktor p-aktin a különböző kezelt csoportok között.
Az összes RNS izolálása gyomornyálkahártya
Körülbelül 100 mg gyomornyálkahártya selejtezési a mirigyes régió (helyén fekély terület) közelében, a fekélyes terület vették DEPC-vel kezelt csőbe, és homogenizáljuk 1 ml denaturáló oldatot. Ahhoz, hogy ezt az 1 ml vízzel telített fenollal, majd 200 ul kloroformot - izoamil-alkohol keverékkel (frissen készített arányban 49: 1) adunk hozzá, és alaposan összekeverjük. A keveréket inkubáltuk 15 percig jégen és centrifugáltuk 10000 rpm fordulatszámon 20 percen át 4 ° C-on. A felső réteget óvatosan eltávolítottuk, másik DEPC-vel kezelt csőbe, és 1 ml 100% -os izopropanolt adtunk hozzá, és -20 ° C-on 30 percig centrifugáltuk. Az elegyet ismét centrifugáljuk 10000 rpm fordulatszámon 20 percen át 4 ° C-on, és a felülúszót eldobtuk. Az üledéket újra szuszpendáljuk 0,3 ml denaturáló oldatot és kicsapjuk azonos mennyiségű 100% izopropanol. Ezt az elegyet -20 ° C-on 30 percig centrifugáltuk 10000 rpm fordulatszámon 20 percen át 4 ° C-on. A felülúszót eldobtuk, és a pelletet mostuk 75% -os etanollal, hogy eltávolítsa a maradék mennyiségű guanidin 15 percig. Ismét a tartalmat centrifugáltuk 20 percen át 4 ° C-on, 10000 rpm-en. A felülúszót elöntjük, és az üledéket tartalmazó RNS-t feloldjuk 100-200 mikroliter DEPC-vel kezelt vízben, és inkubáljuk 55 ° C-on 10-15 percig. Ezt a teljes RNS-t -70 ° C-on, amíg a további felhasználásig. A teljes RNS-t mennyiségileg azáltal, hogy az abszorbancia 260 nm-en (A 260), valamint a következő képlet segítségével azaz koncentrációja RNS-minta = 40 × A 260 × hígítási tényező, azaz abszorbanciája 1 egységet egy 260 megfelel a 40 ug RNS-ml-enként (Ez a kapcsolat csak akkor érvényes mérésekhez, vízben).
az első szál cDNS szintézisét
5 ug teljes RNS-t venni minden egyes mintát egy steril RNS mentes (DEPC kezelt) csövet és steril vizet adunk, hogy a végső térfogat 9 ul. Ahhoz, hogy ezt az 1 ul oligo (dT) 18 primert adunk hozzá, és helyezzük 65 ° C-on 10 percig, majd szobahőmérsékleten 2 percig. Ahhoz, hogy ezt az 1 ul RNS inhibitor, 1 ul 0,1 M DTT-t, 4 ul RT-puffert (5x), 2,0

• Cizaprid csökken gyomortartalom aspiráció lélegeztetett patients
• Módszertani kérdések elemzésekor szerepe a fizikai aktivitás a gyomorrák megelőzésében: a kritikus review