Ljekoviti učinci Musa sapientum var. paradisiaca u dijabetičnih štakora s ko-se javljaju želuca: citokina i faktora rasta pomoću PCR amplifikacije

Ljekoviti učinci Mesa sapientum
var. paradisiaca pregled kod štakora s ko-se javljaju želuca: citokina i faktora rasta pomoću PCR amplifikacije
apstraktne pregled pozadine
ovoj studiji ocjenjuje utjecaj ekstrakta Musa sapientum
voća (MSE) o indeksu ulkus, razine glukoze u krvi i želučane sluznice citokina TNF-a i IL-1 i faktor rasta, TGF-a (pogođeni dijabetesa i kronične ulkusa) u octenoj kiselini (AA) koji inducira želuca (gu) u dijabetičara ( DR) štakora.
Methods pregled MSE (100 mg /kg, oralno), omeprazola (OMZ, 2,0 mg /kg, oralno), inzulin (INS, 4 U /kg, sc) ili pentoxyphylline (PTX 10 mg /kg, oralno) su dane jednom dnevno tijekom 10 dana 14 dana nakon streptozotocina (60 mg /kg, intraperitonealno) izazvanu kod štakora, dok je uobičajeni /dijabetičke štakori primili CMC u istom razdoblju nakon indukcije GU s AA , Indeks čir je izračunata na temelju produkta duljine i širine (mm 2 /štakoru) čireva a, TNF-α, IL-1β i TGF-α su dobiveni u želučanoj mukoznoj homogenatu iz netaknutog /ulkus regije. Fitokemikalija screening i HPTLC analiza MSE je učinjeno sljedeće standardnim postupcima. Pregled Rezultati
do porasta indeksa ulkus, TNF-a i IL-1 zabilježene su u normalnom (NR) -AA štakora u odnosu na NR-normalne slane štakora , koje su dodatno povećana u DR-AA vrijeme štakora, tretmani DR-AA štakora s MSE, OMZ, dodataka i PTX ih obrnuto, više s MSE i PTX. Značajno povećanje TGF-a pronađen je u NR-AA štakora koji nije povećala dalje u DR-AA rat. MSE i PTX tendenciju povećanja vrijeme, OMZ i INS pokazala mali ili nikakav učinak na TGF-a u AA-DR rat. Phytochemical probir MSE pokazala prisutnost saponina, flavonoidi, glikozidi, steroida i alkaloida i HPTLC analiza pokazala prisutnost osam aktivnih spojeva. Pregled Zaključak
MSE pokazao antidijabetično i bolje ulkusa ljekovite učinke u usporedbi s OMZ (antiulcerozni) ili INS (antidijabetično) u dijabetičkog štakora i može biti učinkovitiji u šećernoj bolesti s istovremenim želučanog čira. pregled Ključne riječi
Musa sapientum pregled dijabetes čir ljekovito TNF-α IL-1β TGF-α Pozadina pregled opsežnu istragu u vezi anti-ulcerogene i zarastanja čira aktivnosti trputac banane su provedena u laboratoriju za posljednjih 30 godina. Anti-ulcerogenu aktivnost suhog praška trputac banana voće celuloze (Musa sapientum
var. Paradisiaca pregled, MS) protiv različitim eksperimentalnim gastro-duodenalni su izvijestili iz našeg laboratorija i drugdje. Ulkus zaštitni učinci trputac banana je prijavljen zbog povećanja obrambenih čimbenika viz. povećanje lučenje mucina, sluznice glikoproteini, nakupljanje prostaglandina E i ja 2, životni vijek i proliferaciju stanica, a ne utječe na uvredljiv kiseline pepsina lučenje [1-6]. Nedavno smo izvijestili ulkus zaštitni, trputac banana koje povećavaju antioksidansi, superoksid dismutaze (SOD), katalaze (MAČKA) i glutation peroksidaze (GSH) i smanjenje slobodnih radikala, lipidne peroksidacije (LPO) i dušikovog oksida (NO) razina u želučane sluznice homogenatima bez anti-H. pylori pregled aktivnost in vitro pregled [7]. Nekoliko izvješća ukazuju da dijabetes mellitusa (DM) povećava osjetljivost na mukozne ulcerogeno stimulanse i predispozicijom za želučane ulceracije i oslabljene rana [8, 9]. Naš je izvijestila ranije rad na streptozotocina izazvanog dijabetesa s ko-se javljaju želučane ulceracije učinio ukazuju na uključenost oba uvredljivog lučenja kiseline pepsin i slobodnih radikala proizvodnje i obrambenih čimbenika kao što su lučenjem sluzi, sluznice glikoproteina, životni vijek stanica sluznice i antioksidativni status želuca sluznica što je povećati ili smanjiti odnosno [10, 11]. pregled proupalnih citokina kao što je faktor nekroze tumora-a (TNF-a), interleukin-1β (IL-1), interleukin-6 (IL-6) i čimbenici rasta, uključujući inzulin sličan faktor rasta-1 (IGF-1) igraju važnu ulogu u patogenezi kroničnih bolesti kao što su autoimune šećerne bolesti i želučani vrijed [12, 13]. čimbenici rasta kao što je vaskularni endotelni faktor rasta (VEGF), čimbenik rasta fibroblasta, transformirajući čimbenik rasta-alfa (TGF-α) imaju važnu ulogu u tkivno ljekovita procesima uključujući želučanog čira [9, 14]. Nedavno smo izvijestili ljekovite učinke alkoholnog ekstrakta sušenog voća pulpe MS (MSE) na octene kiseline induciranog želučanog čira u normalnom (NR) štakora i našao ulogu citokina, TNF-a, IL-1 i faktora rasta, TGF -α u liječenju čira [15]. pregled Hipoglikemijska aktivnost je izvijestio iz zelenog ploda trputac banane. Nadalje, leucocyanidin, flavonoid, izdvojen iz trputac banana i njegove dimetoksi derivata, leucocyanidin 3-O-p-D-galaktozil celobiosid, pokazao hipoglikemijski učinak na pokusnoj životinji [16, 17]. Dakle, ova studija je produžen za procjenu ljekovite učinke MSE (ispitivanog lijeka) u octenoj čira na želucu kiseline izazvanog dijabetičke (DR-AA) štakora i njegove učinke na TNF-a, IL-1 i TGF-a. Učinci MSE na čir na želucu, TNF-α, IL-1β i TGF-α su uspoređeni s protiv čira lijekovi, omeprazola (OMZ, inhibitori protonske pumpe) i pentoxyphylline (PTX, inhibitor TNF-a istaknuto upalni marker) i hipoglikemičkog droga, inzulin (pozitivne kontrole) i tretira CMC-a (negativna kontrola) u DR-AA štakora. pregled metoda
životinjama
Inbred Charles-Foster albino štakora (200-250 g ) od bilo kojeg spola dobiveni su iz središnje kući za životinje Instituta za medicinske znanosti, Banaras Hindu University, Varanasi. Oni su držani u odjela kući za životinje na 26 ± 2 ° C i relativna vlažnost 44-56%, svijetlih i tamnih krugova od 10 i 14 sati odnosno za 1 tjedan prije i za vrijeme pokusa. Životinje su dobile standardne glodavaca peleta prehrani (Pashu Aahar, Ramnagar). Hrana je povučena 18-24 sati prije eksperimenta, iako je voda dozvoljeno ad libitum pregled. Životinje su podijeljene u sedam skupina sadrži 6 životinja u svakoj. Prve dvije skupine su imali normalne štakore, a 3 rd do sedam skupina koje su kod štakora. Želučani ulkusi su proizvedene s octenom kiselinom u svim grupama osim 1 st skupina (NR + NS), na kojem je primijenjena na NS stijenke želuca umjesto octene kiseline. 1 st 3 Rd grupa dobila CMC oralno, dok 4 og do 7 th grupe dobile alkoholnog ekstrakta voća pulpe Musa sapientum
(MSE), omeprazol (OMZ), inzulin (INS) i pentoxyphylline (PTX) tijekom 10 dana, odnosno nakon indukcije GU s octenom kiselinom. "Načela čuvanja laboratorijskih životinja '(NIH Publication br. 82-23, revidiran 1985.) su slijedili smjernice. Odobrenje iz Etičkog povjerenstva Institucionalna životinja je snimljena prije eksperimentalnog rada (Dean 542/02 /ab /CPCSEA datumom 23.8.2002).
Zbirku i priprema ekstrakta
Velike veličine, nezrele, zelene trputec banana voće ( Musa sapientum Linn pregled. var. paradisiaca, pregled, MS) prikupljeni tijekom mjeseca studenog dobiveni su iz lokalnog tržišta i identificirati prof VK Joshi, Odsjek za Dravyaguna fakulteta Ayurveda, IMS, Bhu. Uzorak Uzorak (MS-09/231) je sačuvan u Zavodu za Dravyaguna, IMS, Bhu, Varanasi. Koža ploda je oguljena i Pulpa se izrezati u male komadiće i suši na sobnoj temperaturi. Nakon sušenja nijansa praška pulpe je pripravljen iz male komadiće i koristiti za ekstrakciju. Etanolni ekstrakt (MSE) dobije se dodavanjem 1 litre etanola dva puta, u razmaku od dva dana. Etanol sadrži ekstrakt tako dobiveni svaki put se miješa i potom suši u vakuum sušioniku. MSE je pohranjen na -20 ° C sve do upotrebe. Prinos ekstrakta bio 1,6% (w /w).
Fitokemikalija studiju pregled kemijskih sastojaka kao što su saponini, flovonoids, glikozidi, steroida i alkaloida su procijenjeni na MSE sljedeće standardnih postupaka [18]. Pregled HPTLC prst ispis procjenu pregled, MSE je podvrgnut HPTLC (CAMAG TLC sustav) analiza prsta tiskanje. Ekstrakti se razrijedi kako bi se dobila koncentracija od 1 ug /ul, a primjenjuje se na pre-coated silikagela G60 F 254 pločama (10x10, 2 mm debljine, E. Merck) upotrebom nanose na tanki sloj promatrač. Ploča je zatim razvijen u CAMAG ravnom dnu komore u uvjetima djelomičnog ili potpunog zasićenja spremnika atmosferi s parama otapala. Sustav otapala koje se koristi kloroform: metanol: mravlja kiselina (9: 1: 0,5). Ploča je pažljivo osušena i poprska se sa anisaldehidnom-sulfatna kiselina, nakon čega slijedi grijanje na 110 ° C 5-10 min. Otkrivanje spotova je napravljen pomoću Hg žarulje na 254 nm i slike su snimljeni pomoću CAMAG Reprostar 3. Ploča je skenirana pomoću CAMAG TLC skener 3 sa evaluacije WinCATS softvera. Pregled, Lijekovi i kemikalije pregled streptozotocina (St . Louis, MO, USA), omeprazol (Cipla, Mumbai, Indija) i pentoxyphylline (Abbott, Bangalore, Indija) su korišteni u ovom istraživanju. pregled Indukcija Dijabetes
Šećerna bolest je izazvana u odraslih štakora (200- 250 g) jednim intraperitonealnom injekcijom streptozotocina (STZ, 60 mg /kg) je otopljena u citratnom puferu (pH 4,5), te puni u pravilu nakon toga [19], dok su kontrolni štakori su primali samo citratni pufer. Uzorci krvi su skupljeni iz retro-orbitalnog pleksusu štakora Serum je odvojen centrifugiranjem na 3000 rpm kroz 3 minute. Razine glukoze u krvi su procijenjeni u unhemolysed serumu metodom glukoza oksidaza-peroksidaza (GOD-POD) pomoću glukoze dijagnostičku opremu (Ranbaxy Laboratories Ltd, Indija). Razina glukoze u krvi (BGL) procijenjena je nakon 48 sati i dva tjedna streptozotocina primjene i štakorima pokazuju BGL iznad 250 mg /dL u ne natašte su odabrani iz želučanog ulkusa studija. Promjene tjelesne težine uočene su prije (0 dan), nakon što je 14 dana nakon dijabetesom ili normalnih štakora, as 10 og dana AA-inducirana GU nakon CMC /MSE /OMZ /INS /PTX tretmana (24 og dana) u normalnim i dijabetičnih štakora. pregled octena kiselina-induciranog želučanog čira kod štakora i protokol tretmana pregled dijabetičnih štakora su anestezirani pentobarbitonom (35 mg /kg, intraperitonealno). Abdomen je cut otvoren sa rez i želudac vizualizira. Cilindrični staklene cijevi od 6 mm je čvrsto postavljen na prednjem seroznog površine žljezdanog dijela želuca daleko 1 cm od piloričkog kraju. 100% octene kiseline (0,06 ml /životinji) se ubaci u cijev i pusti da ostane 60 sekundi na želučanu stijenku. Nakon uklanjanja otopine kiseline, trbuh je zatvoren u dva sloja, a životinje su hranjene kavezu normalno. MSE (100 mg /kg, oralno), OMZ (2,0 mg /kg, oralno), INS (4U /kg, subkutano) i PTX (10 mg /kg, oralno) se primjenjuje jednom dnevno, prva doza se daje 4 sata nakon aplikacije octene kiseline na dan 1, a potom nastavlja do 10 dana. Životinje su stavili na brzo za 24 sata nakon zadnje doze ispitivanja lijekova na 10 -og dana i žrtvovani eutanazije na 11 og dana eksperimenta za procjenu želučanog ulkusa veličinu i ozdravljenje. Indeks ulkus je izračunata na temelju proizvoda dužine i širine (mm 2 /štakor) čireva [20].
TNF-a, IL-1 i TGF-a procjena
TNF-a, IL -1β i TGF-α procijenjeni su u netaknutom želučanoj sluznici i od želučane sluznice dijabetičnih štakora izloženih octene kiseline sa ili bez različitih lijekom. Sluznica iz žljezdanog dijela želuca se ostruže s čirevima /intaktne područja korištenjem sterilnih staklene predmetnice, te spremljeni na -80 ° C do analize. Ukupna RNA je ekstrahirana iz uzorka sluznice po metodi Chomczynski i Sacchi (1987) [21] pomoću ekstrakcijske opreme od Bangalore Genei, Indija. Izolacija RNA je kvantificirana i 5 ug ukupne RNA korišten je za pripremu cDNA. PCR smjesa je pojačan u DNK termalni ciklički uređaj sa specifikacijama opisanim u materijalima i metodama. Tako β-aktin, IL-1β, TNF-α i TGF-α su procijenjene. Rezultati su izraženi kao omjer faktor citokini /rasta za p-aktin u različitim tretiranim skupinama. Pregled izdvajanja ukupne RNA iz sluznice želuca pregled oko 100 mg želučane sluznice otkup starih vozila iz žljezdanog regije (stranica čira područje) u blizini područja čirevima se preuzme u DEPC pomiješa cijev i homogenizira s 1 ml otopine denaturirajućim. U ovu 1 ml vode zasićene fenola i zatim 200 ul kloroforma - izoamil smjesa alkohola (svježe pripremljena u omjeru 49: 1) je dodan i dobro je pomiješano. Smjesa je inkubirana na ledu tijekom 15 minuta i centrifugira pri 10000 okretaja u minuti tijekom 20 minuta na 4 ° C. Gornji sloj je pažljivo uklonjen na drugi DEPC tretiranoj tube i dodaje se 1 ml 100% izopropanol i čuva na -20 ° C tijekom 30 minuta da se istaloži RNA. Ponovno je smjesa centrifugirana na 10000 rpm tijekom 20 minuta na 4 ° C, a supernatant se odbaci. Talog je ponovno suspendiran u 0,3 ml otopine i denaturiranje istaloži dodavanjem jednake količine 100% izopropanola. Ova smjesa se drži na -20 ° C tijekom 30 minuta, te centrifugirana na 10000 rpm tijekom 20 minuta na 4 ° C. Supernatant je odbačen, a talog je ispran s 75% etanolom da se uklonile sve zaostale količine gvanidina tijekom 15 minuta. Ponovno sadržaj se centrifugira tijekom 20 minuta na 4 ° C na 10000 rpm. Supernatant je odbačen, a talog koji sadrži RNA je otopljen u 100 - 200 ul DEPC tretiranoj vodi i inkubiraju na 55 ° C za 10-15 minuta. Ova ukupna RNA je pohranjena na -70 ° C do daljnje upotrebe. Ukupna RNA se kvantificira uzimanjem apsorbancije pri 260 nm (A 260) i pomoću sljedeće formule odnosno koncentracije RNA uzorka = 40 × A 260 faktor × razrjeđivanje, odnosno s apsorbancije 1 jedinice na 260 odgovara 40 ug RNA po ml (Ovaj odnos vrijedi samo za mjerenja u vodi).
sintezu Prvi lanac cDNA pregled 5 ug ukupne RNA je uzet iz svakog uzorka u sterilnom RNA slobodni (DEPC pomiješa) cijevi i sterilne vode se doda kako bi se konačni volumen na 9 ul. U ovu 1 ul oligo (dT) 18 primer doda se i postavi na 65 ° C tijekom 10 minuta i zatim na sobnoj temperaturi tijekom 2 minute. To 1 ul RNA inhibitor, 1 ul 0,1 M DTT, dodano je 4 ul RT pufera (5x), 2.0 ul 30 mM dNTP mix, 0,5 jal reverzne transkriptaze i 1 ul sterilne vode i dobro se promiješa. Smjesa je držana na 42 ° C tijekom 1 sata i inkubira na 95 ° C tijekom 2 minute i drži na ledu brzo. To cDNA produkt može se izravno koristiti za PCR amplifikaciju, ili na drugi način pohraniti na -20 ° C za daljnju uporabu. Pregled lančana reakcija polimeraze (PCR) amplifikacija pregled Dobivena cDNA (2 ul) je pojačan u reakcijskom volumenu od 50 ul sadrži 2 u Taq polimerazom, dNTP 1 ul (30 mM), 5 ul 10 × pufer za PCR i specifičnih primera (naprijed i natrag) su korišten u konačnoj koncentraciji od 1 mM. Polimeraza lančana reakcija smjesa je pojačan u DNK termalni ciklički uređaj (MJ Research) i u uvjetima biciklističkim inkubacije i termičkih su na sljedeći način: denaturacija na 94 ° C tijekom 2 minute, sljepljivanje pri 60, 66 i 62 ° C, P aktin, TGF - α, IL - β i TNF - a odnosno i proširenje na 72 ° C tijekom 50 sekundi i konačno proširenje za 2 minute. Broj ciklusa je 30 za sve reakcije. Nukleotidni slijed primera su kao što slijedi: β aktin, osjetiti 5'-TTG TAA CCA GGG ACT ACG ATA TGG - 3 '; negativna 3 '- GAT CTT GAT GGT GCT AGG - 5' (764 bp); TGF - α smisao 5 '- ATG GTC CCC GCG GCC GGA CA-3'; negativna 3 '- GAC CAC TGT CTC AGA GTG OKS OKS AGG CAG TCC TTC TTT - 5' (476 bp); IL - 1β osjećaj 5'GCT ACC TAT GTC TTG CCC GT -3 '; negativna 3 '- GAC MAČKA TGC TGT TTC CTA GG - 5' (543 bp); TNF - α smisao 5 '- TAC TGA ACT TCG GGG TGA TTG GTC C - 3'; negativna 3 '- CAG CCT TGT CCC TTG AAG AGA ACC - 5' (295 bp). Klice su odabrani na temelju sekvencama objavljenih u ranijim istraživanjima [9] su sintetizirani Bangalore Genei, Bangalore, Indija. Pregled, lančana reakcija polimeraze proizvodi su otkrivene elektroforezom na agaroznom gelu 1,5% sadrži etidijev bromid. Lokacija predvidjeti proizvoda potvrđena je pomoću 300-bp DNA (Bangalore Genei, Indija) kao standardni marker veličine. Gel je zatim fotografirao pod UV transiluminatoru. Gustoća PCR produkata je izmjerena pomoću alfa elementa softvera. Signal za PCR proizvoda su standardizirani prema onom P-aktin mRNA od svakog uzorka, a rezultati su izraženi kao PCR proizvoda /P omjer aktin mRNA. Pregled Statistička analiza pregled nespareni Student't "test je korišten za statističku usporedbu dvije skupine. Usporedbe koje uključuju više od dvije skupine provedena su jednosmjernom analizom varijance (ANOVA) i za višestruke usporedbe u odnosu na kontrolnu skupinu je učinio Dunnettovim test.

• Cisaprid smanjuje aspiracije sadržaja želuca u mehanički ventilirane patients
• Metodološki problemi pri analizi uloge tjelesne aktivnosti u prevenciji raka želuca: kritički review