Értékelése a folyosón a Lactobacillus gasseri K7 és bifidobaktériumok a gyomorból a belek használatával egyetlen reaktorban model

értékelése áthaladását Lactobacillus gasseri katalógusa K7 és bifidobaktériumok a gyomorból a belek használatával egyetlen reaktorban Model
Abstract
háttér katalógusa a probiotikus baktériumok úgy gondolják, hogy fontos szerepet játszanak az emésztőrendszerben, és ezért van, hogy túlélje a áthaladásra gyomor belek. Nemrégiben egy újszerű megközelítés, hogy szimulálja a áthaladásra gyomor belek egyetlen bioreaktort fejlesztettek ki. Ennek az az előnye az automatizált egy reaktorban rendszer volt a képességét, hogy teszteljék a befolyása a sav, epesók és pankreatin.
Lactobaeiilus gasseri
K7 izolált törzset csecsemő székletből tulajdonságokkal így a törzs érdekes sajt előállításához. Ebben a vizsgálatban, egyetlen reaktorban rendszert használtuk, hogy értékelje a túlélés L. gasseri katalógusa K7, és a kiválasztott bifidobaktériumok a gyűjtemény át a gyomron-bél szakaszban.
Eredménye
kezdeti szkrínelés savas rezisztencia savanyított kultúra média igencsak alacsony tolerancia Bifidobacterium dentium katalógusa ez az állapot jelző alacsony túlélési a folyosón. Hasonló eredményeket értek el B. longum katalógusa subsp. infantis
mivel B. animalis katalógusa subsp. lactis katalógusa nagy volt a túlélésre.
Ezek a kezdeti eredményeket megerősítették a bioreaktorban modell a gyomor-bél folyosón. B. animalis katalógusa subsp. lactis
volt a legmagasabb túlélési arány (10%) elérése körülbelül 5 × 10 6 cfu ml -1, mint a többi vizsgált bifidobaktériumok törzsek, amelyeket faktorral csökken, legfeljebb 10 6 . Lactobacillus gasseri katalógusa K7 kevésbé volt ellenálló, mint a B. animalis katalógusa subsp. lactis katalógusa, de túlélte a sejtkoncentrációkban körülbelül 1000-szer nagyobb, mint a többi bifidobaktériumok. katalógusa Következtetés
Ebben a tanulmányban tudtuk mutatni, hogy L. gasseri katalógusa K7 magas volt a túlélési arány a gyomor- bél folyosón. Összehasonlítva az eredményeket egy korábbi tanulmány a malacok tudtuk megerősíteni a megbízhatóság a szimuláció. A vizsgált bifidobaktériumok törzsek csak B. animalis
subsp. lactis katalógusa megmutatta elfogadható túlélési sikeres áthaladás a szimulációs rendszer. katalógusa Háttér katalógusa probiotikumok, különösen a tejsavbaktériumok jótékony hatással van a fogyasztók egészségére, mint azt 1907-ben [1]. Azt hitték, hogy a baktériumok elsősorban ellenőrzött fertőzések okozta enterális kórokozók és szabályozott toxoaemia, ezáltal javítja az egészségügyi és befolyásoló halandóság. Eközben már ismert, hogy néhány, a pozitív hatások a fogyasztókra egészségre a javulás a mikroflóra egyensúly a bélben, a stimuláció az immunrendszert, és segíti a szervezet a harcot patogén mikroorganizmusok [2]. Egy nagy része a kamat összpontosult törzsek használata a Lactobacillus és a Bifidobacterium katalógusa katalógusa, még ha vannak is más baktériumokat probiotikus hatásokat, például Néhány Propionibacteria.
A fenti tulajdonságokkal is az alapja a mikroorganizmus a címkézésre probiotikus. Vannak különböző meghatározások világszerte de hasonló tartalommal. Az egyik kritériumokat egy probiotikus törzs ellenáll a savasság és gyomor megoldások az emberi gyomor-bél traktusban [3]. Ezért fontos, hogy értékelje a rezisztencia egy lehetséges probiotikus törzs a savas és gyomor környezet a bélben.
A magas költségek miatt és az etikai, valamint a biztonsági előírásokat a klinikai vizsgálatokban, szűrés túlélés könnyebb szimulálni in vitro katalógusa. Egy egyszerű teszt, hogy tegyük a bakteriális sejtek savas vagy epesó megoldás egy meghatározott időszakban, és számolja a túlélő sejtek számát. Egy további lépésben, a szimuláció végezzük kevert lombikokban, amely egyesíti a savasság és gyomor megoldásokat majd egy becslés és a túlélő sejtek az egész szimuláció. Ez egy reálisabb replikációját a feltételek a bélben [4]. Egy másik rendszer, a szimulátor az emberi bél mikrobiális ökoszisztéma (Shime) áll 5-6 sorbakötött szabályozott pH bioreaktorokban [5-7]. A beállítás meglehetősen bonyolult, és követeli, abszolút anaerob körülmények között. Továbbá, a felszívódás, a metabolitok és a víz nem szimulált. Ezt elkerülhetjük, ha membránokkal által leírt Marteau munkatársai katalógusa. [8].
Nemrégiben egy új rendszer segítségével egyetlen bioreaktort fejlesztettek, hogy tanulmányozza a gyomor-bél szakasz [9]. A rendszer lehetővé tette a pH-értéket kell változtatni belül egyetlen reaktorban, és alkalmazkodott a retenciós időket a különböző régióiban a gyomor-bél szakaszban. Katalógusa Lactobacillus gasseri katalógusa K7 nemrég izolálták csecsemő széklet [10]. Ez termel egy bakteriocin, amely aktív ellen Clostridium
sp. és spórákat. L. gasseri katalógusa tartozik az úgynevezett "acidophilus" -csoport és több független tanulmány szerint ezek a törzsek a lakosság a bőr és a bél [11-13]. A korábbi kísérletekben már kimutatták in vitro
hogy L. gasseri
K7 túlélte savas környezetben, és 0,3% -os epesók [10]. Ezek a megállapítások, hogy a törzs érdekes, mint egy lehetséges probiotikus.
Ebben a tanulmányban egy bioreaktor alapuló munkája Sumeri munkatársai katalógusa. [9] használtuk a túlélés a Lactobacillus gasseri katalógusa K7 és nyolc Bifidobacterium törzsek katalógusa a gyűjtemény. Meg tudtuk összehasonlítani az eredményeket L. gasseri katalógusa K7 egy tanulmányt végeztek malacok [14], amely lehetővé tette az értékelés közötti korreláció az in vitro katalógusa vizsgálat eredményeit in vivo kísérletek katalógusa .
a retenciós időket és pH, amelyek ebben a vizsgálatban adatok alapján a szakirodalomban. Számos módszer létezik mérésére a pH a bélben [15]. Az 1. táblázat azt mutatja, a pH-értékeket a különböző részein a bél által mért Heidelberg kapszula [16, 17]. Retenciós idők kiszámítható akár alkalmazásával marker anyagok (kémiai) vagy rádión telemetriai kapszulák, mint például a Heidelberg
kapszula [18]. Azonban kapszulák általában hosszabb tartózkodási idő, mint a kémiai markerek. A 2. táblázat néhány, a retenciós idők a szakirodalomban található [4, 5, 19-24] .table 1 pH-értékeket a humán bélrendszerben, mérve a Heidelberg
kapszula.
katalógusa Gyomor Matton Duodenum Matton Jejunum Matton Ileum Matton közelebbi katalógusa mediális katalógusa distalis katalógusa pH katalógusa 1.4 ** katalógusa 6.22 * katalógusa 6,4 ** katalógusa 7,1 ** katalógusa 7,4 ** katalógusa * Fallingborg munkatársai katalógusa. 1994 [16] katalógusa ** Fallingborg munkatársai katalógusa. 1998-ban [17] katalógusa 2. táblázat A retenciós idők a vékonybélben hivatkozott irodalomban. Katalógusa retenciós idő
Forrás Matton Megjegyzések katalógusa
1-4 órán katalógusa Huang és Adams 2004 [21]
4.25 h katalógusa Van Den Driessche munkatársai katalógusa. 2000 [24]
gyomor és a vékonybél
4 H
Mojaverian 1996 [22]
6 H
Picot és Lacroix 2004 [4]
kiválasztott maximális időt a szimuláció
7,5 h katalógusa Fallingborg munkatársai katalógusa. 1990 [20] katalógusa Children katalógusa 8 óra katalógusa Fallingborg munkatársai katalógusa. 1989 [19] katalógusa 8 óra katalógusa Alander munkatársai katalógusa. 1998-ban [5] katalógusa szimuláció a shime Reactor katalógusa 6-10 óra katalógusa inak munkatársai katalógusa. 1991-ben [23] összehasonlítás alapján a talált adatokat a szakirodalomban, és a munka Sumeri munkatársai katalógusa. [9] a fermentációs eljárás jött létre leírtak szerint Anyagok és módszerek, és az 1. ábrán látható az 1. ábrán paraméterei a gyomor-bél szakasz szimulációs 7 óra alatt.
Eredménye
Acid ellenállás szűrés
célja egy kezdeti tesztsorozat volt, hogy áttekintést ad a savval szemben ellenálló és nyolc bifidobaktériumok törzsek. 2., 3. és 4. ábrán a túlélés ezen törzsek alkalmazásával kontúrábrák készült Sigmaplot. Bifidobacterium dentium
(3. ábra) azt mutatták, a legkisebb savas ellenállás. Között pH = 4,0 és pH = 2,0 nem volt különbség a túlélés és a koncentráció a sejtek csökkent több mint 7 log 40 percen belül. Bifidobacterium animalis katalógusa subsp. lactis
volt jobban ellenáll akár 40 percen át pH = 2,0, de akkor csökkent mintegy 3 log amikor inkubáltuk 120 percen keresztül (4. ábra). A pH 2,5 és 3,0 közötti volt a csökkenés kisebb, mint 1 log 120 perc után. 2. ábra Acid ellenállása három Bifidobacterium longum törzs. X-tengely: Idő (perc); Y-tengely: pH; log CFU-színesen vannak ábrázolva (skála a jobb oldalon a grafikonokat). Számok a bakteriális nevek törzs számok a FAM-adatbázisa ALP.
3. ábra Acid ellenállása Bifidobacterium dentium, B. longum subsp. infantis és B. adolescentis. X-tengely: Idő (perc); Y-tengely: pH; log CFU-színesen vannak ábrázolva (skála a jobb oldalon a grafikonokat). Számok a bakteriális nevek törzs számok a FAM-adatbázisa ALP.
4. ábra Acid ellenállása Bifidobacterium breve és B. animalis subsp. lactis. X-tengely: Idő (perc); Y-tengely: pH; log CFU-színesen vannak ábrázolva (skála a jobb oldalon a grafikonokat). Számok a bakteriális nevek törzs számok a FAM-adatbázisa ALP.
Összes többi vizsgált Bifidobacterium törzsek katalógusa (B. longum, B. breve, B. longum katalógusa subsp. Infantis és B. adolescentis katalógusa) is hasonló, de eltérő mintát B. animalis katalógusa subsp. lactis
(2., 3. és 4. ábra). Volt egy rövid túlélési idő alatti pH 2,5 és túlélte nagyobb számban fenti pH = 3,5.
Azzal a céllal, hogy kidolgozott egy módszert, hogy szimulálja a GI a bioreaktorban, további vizsgálatot végeztünk egy törzs. Betartani a hatása az élelmiszer mátrixban, koncentrált B. longum katalógusa subsp. infantis katalógusa felszuszpendáltuk soványtejben előtt beoltása a savas megoldásokat. Amint látható a jobb oldali oszlopban az 5. ábra, a tej közvetlen hatást a túlélés a törzs. PH között 3,0 és 3,5 a baktériumokat túlélte 120 percig csökkentésével a log 2. alábbiakban pH = 3,0 a túlélési arány csökkent körülbelül log 5. A csökkenés a túlélés alatt pH = 3,0 volt, gyors, de rendszeres idővel. 3,5 pH és a fenti, a törzs rezisztens volt legalább 120 percig. 5. ábra összehasonlítása sav rezisztencia Bifidobacterium Longum subsp. infantis 14390 felfüggesztették NaCl vagy lefölözött tej. Balra: Bifidobacterium újraszuszpendáljuk NaCl, jobbra: Bifidobacterium reszuszpendáltuk tejet. X-tengely: Idő (perc); Y-tengely: pH; log CFU-színesen vannak ábrázolva (skála a jobb oldalon a grafikonokat). Számok a bakteriális nevek a törzs számok a FAM-adatbázis az ALP.
A baloldali oszlop az 5. ábra ugyanazon törzs hozzáadása nélkül sovány tej. Feletti pH 3,5, nem volt hatással a túlélésre a baktériumok. Azonban 3,5 pH alatt a túlélés csökkent attól függően, hogy az inkubálás időtartama. PH között 3,0 és 3,5 a törzs már csökkent mintegy jelentkezzen 5. 30 perc inkubálás elteltével, nem volt szinte egy lineáris csökkenését túlélés csökkenő pH 3,0-2,5.
Szimuláció a bioreaktorban
legtöbb leírt rendszereket a szakirodalom áll több reakció hajók, pl A shime [6]. Más tanulmányok használt immobilizált sejteket három reaktorok [25], vagy egy dialízis rendszer [8]. Alapján a munka Sumeri munkatársai katalógusa. [9], és az összegyűjtött adatokat a körülmények a bél folyosón tudtuk, hogy korlátozza a szimuláció egy tartályra. Adatokkal együtt a savas ellenállás szűrés, a kiválasztás egy lehetséges kiindulási pH-t és húsleves összetétele a szimulátorban lehetne választani. A kapott szimulációs paramétereket az 1. ábrán látható, és az az anyagokat és módszerek részben. A kísérleti szakaszban a jelen tanulmány Sumeri munkatársai katalógusa. [9] kifejlesztett egy hasonló rendszert, hogy értékelje a Lactobacillus katalógusa sp. a gyomor-bél szakasz szimulációja.
A szoftvercsomag "Lucullus" egy kiváló eszköz, hogy ellenőrizzék a pH és a folyamat szerint a fejlett szimuláció. Kiválasztása közepes bioreaktort egyszerűsített kiválasztásával a megfelelő táptalajt a törzsek, kiegészítve lefölözött tej funkcionáló szimulált élelmiszer mátrixban. Azt követően ra savanyítjuk, a kiindulási pH-t és kiegészített enzim oldatok leírt Anyagok és módszerek. A szimulációkat végeztünk sorozatban, naponta egyet. Az eredményeket a 6. ábrán mutatjuk be A törzseket használt szimulációs vannak 3. táblázatban felsorolt ​​(csak Bifidobacterium dentium
kizárták), és standardizáltuk az OD 650 1,5 a beoltás előtt. 6. ábra kidolgozása 7 Bifidobacterium törzsek alatt a gyomor-bél szakasz szimulációs 7 órán. Szaggatott vonal mutatja az időt hozzáadásának epesavak sói és a hasnyál. Számok a bakteriális nevek törzs számok a FAM-adatbázisa ALP. Katalógusa 3. táblázat a vizsgált törzsek a szimulációban. Katalógusa Name Matton azonosítószáma ALP törzs gyűjtemény Matton Bifidobacterium adolescentis Matton FAM-14377 katalógusa Bifidobacterium breve Matton FAM-14398 katalógusa Bifidobacterium longum katalógusa subsp. infantis Matton FAM-14390 katalógusa Bifidobacterium animalis katalógusa subsp. Lactis Matton FAM-14403 katalógusa Bifidobacterium dentium Matton FAM-14396 katalógusa Bifidobacterium longum Matton FAM-14382, -14383, -14406 katalógusa Lactobacillus gasseri
K7
FAM-14459
Bifidobacterium adolescentis
beoltjuk a fent leírt módon a kezdeti koncentrációja 10 7 cfu ml -1 és csökkent szinte lineárisan alá 10 4 cFU ml -1 5 óra után. B. breve katalógusa és B. longum katalógusa törzsek kezdeti koncentráció között 10 7 és 10 8 CFU ml -1, és csökkent az alábbi 10 2 cfu ml -1 belül az első 30 percben. B. animalis katalógusa subsp. lactis
14403 fennmaradt mintegy 15% -a az eredeti átlagos CFU 5 × 10 8 CFU ml -1. Volt gyors csökkenés túlélését B. longum katalógusa subsp. infantis
több mint az első 30 perc alatt. Ezután a túlélés csökkent csak lassan 10 5-10 4 cfu ml -1.
Későbbi fázisában, Lactobacillus gasseri katalógusa K7-ben vett részt a vizsgálatban, hiszen több projekt fut ebben az időben intézetünkben ezzel törzzsel. Lactobacillus gasseri
K7 beoltottunk 2,2 × 10 7 cfu ml -1 és 7 óra elteltével szimuláció koncentrációja 10 5 cfu ml -1 élő sejtek még mindig jelen volt a táptalajok (7. ábra, görbe a 250 ml-es pre-kultúra). A legmagasabb csökkenése túlélés volt az első 2 órában, és elkezdte hozzáadása után azonnal a gyomornedv és az epe-sók. Ezalatt az idő alatt, volt csökkent az élő sejtek által log 2. során a többi a szimulációs idő, már csak egy log 1 csökkenés az élő sejtek. 7. ábra összehasonlítása a befolyása a 100 ml-es elő-tenyésztő Lactobacillus gasseri K7 250 ml pre-kultúra. A pre-tenyészetet centrifugálással kinyerjük és újra szuszpendáljuk fiziológiás nátrium-klorid-oldat elérése OD600 1,5. A gyomor-bél áthaladás szimulációs inkubáljuk segítségével a korrigált oldat és inkubáljuk 7 órán át. A szaggatott vonal mutatja a kiegészítéssel, az epesavak sói és hasnyál. Görbe átlagát ismétlődő kísérleteknek.
A készítmény az inokulum L. gasseri katalógusa K7 egy 100 ml térfogatú tenyészetet is értékelték. A kísérletek eredményeit mutatjuk be a 7. ábra 250 ml kultúrát csökkenése az élő sejtekben körülbelül log 2, míg a csökkenés egy 100 ml-es tenyészetet csak log 1 egész inkubációs idő. Azonban, 2H hozzáadása után az epesók és a hasnyál, a csökkenés a sejtszám hasonló volt mindkét kötetek.
Discussion
lehalászáskor kultúra után egy adott inkubációs idő, a növekedési fázis az egyes bakteriális törzs lehet különbözik, hiszen mind különböző növekedési dinamika. Annak érdekében, hogy a sejteket körülbelül ugyanabban növekedési fázisban, előzetes kísérleteket végeztünk (az adatokat nem mutatjuk). Inkubációs idő 15 óra az előre kultúra alkalmas volt az összes vizsgált törzs kivételével a Bifidobacterium longum
subsp. infantis
, amelyet meg kell inkubáltuk csak 12 órán át.
A sav tolerancia szűrés (2., 3. és 4.) végeztünk, hogy értékelje a pH hatását, függetlenül az egyéb feltételek mellett. Bifidobacterium dentium katalógusa erősen érzékeny a savas, és ezért esetleg nem éli túl az áthalad a gyomron. A törzset ezért nem szerepelnek a szimuláció kísérletekben. A B. longum katalógusa törzsek (2. ábra) nem engedett sokkal jobb eredményt, mint a B. dentium katalógusa (3. ábra). Ugyanakkor közel 4 pH voltak ellenállóbbak, mint a B. dentium katalógusa.
B. longum katalógusa subsp. infantis katalógusa egyike az első faj feltölti az emberi bélben röviddel a születés után [26]. A kísérletek alapján ebben a tanulmányban azonban a tesztelt B. longum
subsp. infantis katalógusa törzs csak akkor lenne képes átadni a csecsemő gyomor nagy számban, ha a felfutási idő a gyomor savas nagyon rövid volt. A túlélés a kiválasztott törzs a vizsgált környezet túl alacsony volt a sikeres áthaladás nagy számban. Amikor a törzset újraszuszpendáltuk lefölözött tej, túlélés növekedett (5. ábra). Ez arra utalhat, hogy az emberi tej segít B. longum katalógusa subsp. infantis
törzsek át a gyomor-bél folyosón egy magasabb túlélési arány.
A védő hatásait a tejfehérjék az emésztőrendszerben már leírták az irodalomban [27]. Védelem tejfehérjék kimutatták azt is, ebben a vizsgálatban (5. ábra). A megfelelő mátrix, vagy akár egy hordozót, probiotikus baktériumok biztonságosan áthaladnak a gyomron a belekbe, hogy elérjék a hatás helyére.
B. adolescentis katalógusa törzsek, hogy feltölti az emberi bél egy későbbi korban, alig volt nagyobb ellenállás, mint a B. longum katalógusa subsp. infantis katalógusa amely magyarázza leszállítása során a haladás az emberi csecsemő a felnőttkorig [26].
A legérdekesebb törzset B. animalis katalógusa subsp. lactis katalógusa, amely a legkevésbé érzékeny törzset a vizsgálatba. Ez a pH-rezisztens törzs van egy nagy potenciállal való használatra élelmiszerek a probiotikus kiegészítő, mivel nagyobb számú baktériumsejtek túléli a járatba. Ahhoz azonban, hogy ezt a törzset probiotikus, további vizsgálatokat kell végezni annak érdekében, hogy a probiotikus állapot szerinti meghatározása Klaenhammer [3].
Vizsgálatunkban a lenyelés egy élelmiszer mátrixot szimulálta egy kezdeti környezet, a savanyított tej és a növekedés közepes. A hozzáadott szimulált gyomornedv-oldatban és oxigénnel a gyomor fázis növelte a stressz. A szimulált áthaladását a vékonybélbe az oxigén helyett nitrogénatom, és a táptalajt semlegesítjük pH = 6,3. A kiegészítés a hasnyálmirigy oldat és az epe-sók befejezett áthaladását a vékonybélbe. Ez az in vitro
rendszer nem veszi figyelembe, hogy az in vivo
emésztés, enzimek aktiválódnak és inaktivált és egyéb anyagok, például epesók felszívódnak. Sumeri munkatársai katalógusa. [9] talált egy részleges megoldás, hogy megkerülje ezt a problémát. Ezek hígított tartalmát a reaktor egy speciálisan tervezett hígító közeg. Egy másik lehetőség az lenne, hogy kicsapjuk a epesók végén szimuláció a vékonybél utánozni az enterohepatikus áramkört. Ez elvégezhető a kalcium-ionok [28-30]. Eltávolítása epesók jobban szimulálja a környezet és a vastagbél és talán még lehetővé teszi a bifidobaktériumok szaporodását.
Tanulmányunkban a fennmaradó epesavak sói és a hasnyál a szimuláció vezetett további stresszt a baktériumokra, ami valószínűleg megváltoztatta az igazi jellemzői a törzsek in vivo katalógusa.
a kiindulási cFU a szimuláció változtatható egy log cFU bár a kiigazítás OD 650 az oltóanyag korábban tesztelt Bifidobacterium animalis katalógusa subsp. lactis katalógusa és Bifidobacterium longum katalógusa subsp. infantis
törzsek. A bifidobaktériumok ebben a tanulmányban alkalmazott tendenciát mutatott alkotnak klasztereket, amelyek eredményeként a csökkentett CFU (vizuális megfigyelések, az adatokat nem mutatjuk). Egy másik tanulmányban a kialakulását klaszterek összefüggésben lehet a csökkenő pH növekedés során [31]. Ezek a klaszterek általában számít egy kolónia egy tányérra.
6. ábra mutatja, az eredmények a gyomor-bél szakasz szimulációs 7 óra alatt, a hét vizsgált Bifidobacterium
törzsek. A koncentráció élő sejtek bifidobaktériumok csökkent azonnal az inkubálás után, ami az alacsony pH-érték (pH = 3,0). Azonban B. animalis katalógusa subsp. lactis katalógusa stabil maradt. Ez megerősítette az eredmények a korábbi kísérletek a fentiekben tárgyaltuk (4. ábra). Ezt az ellenállást ki lehetne terjeszteni az epesavak sói és hasnyál bár a sejtszám B. animalis katalógusa subsp. lactis
csökkent mintegy 85% -a a kezdeti érték (6. ábra). Összehasonlítva a többi törzs ebben a vizsgálatban alkalmazott, azonban ez a csökkenés szinte elhanyagolható.
Összes B. longum
és a B. breve
törzsek meghalt nagyon gyorsan elején a szimuláció és alatt volt a kimutatási határa a galvanizáló eljárás néhány órán belül (6. ábra), amely várható volt az eredményekből az átvilágítás kísérlet fenti (2. és 4. ábra).
Másrészt, B. longum
subsp. infantis
14390 gyorsan csökkent elején szimuláció de hozzáadása után hasnyál és epesók, és a változás, hogy anaerob körülmények, a csökkentés mértéke csökkent. A tanulmány azt sugallja, hogy ez a törzs jól alkalmazkodott a körülmények a bélben, de kell, hogy elfogyasszák nagy számban, hogy túlélje a feltételeket a gyomorban (oxigén, alacsony pH). Mint már említettük, a B. longum
subsp. infantis
törzsek tartoznak az első csoport a baktériumok megtölteni a belekben a csecsemők [26].
ellentétben a B. longum
subsp. infantis katalógusa, B. adolescentis katalógusa csökkent szinte lineárisan alatt 7 óra szimuláció. Nem volt kimutatható megszakítás, ha a feltételek a fermentorban megváltozott. A kísérletek alapján a savas tolerancia szűrés, ez az eredmény váratlan volt.
Azonban ez összefüggésben lehet a vizsgálati körülmények között, ahol az epe-sót és a gyomornedvet koncentrációk maradt a kezdeti szinten, és nem kerültek hígításban lennének vivo katalógusa. A jövőben a kísérletben azt kell értékelni, hogy a hígító által kifejlesztett módszer Sumeri munkatársai katalógusa. [9] stabilizálja a sejtszám B. adolescentis katalógusa alatt 6 óra szimulációs időszak a bélben.
Tanulmányunkban azt is értékelte a gyomor-bél áthaladását Lactobacillus gasseri katalógusa K7. A törzs már értékelte a túlélésre az in vivo
malacoknál [14]. Ezért volt lehet összehasonlítani a mi in vitro
eredményeket adatokkal in vivo
kísérletekben.
Bogović et al katalógusa. [14] táplált malacok alatt 14 napon át 5 * 10 10 CFU napon -1 L. gasseri katalógusa K7. Ez azt eredményezte, kb. 7 * 10 4 cfu g -1 a széklettel etetése idején a. Meg kell venni, hogy a koncentráció a baktériumok előtt hígítani végre megérkezett a gyomor-bél folyosón. Egy durva közelítés, akkor becslések szerint mintegy 1% -a érkezett meg a folyosón. Ez lehetővé tette számunkra, hogy összehasonlítani az eredményeket ennek a malac vizsgálat a vége a mi szimuláció.
Mint az 5. ábrán látható, L. gasseri
K7 volt egy sejt koncentrációja körülbelül 5 * 10 4 cfu ml -1, miután a 7 H szimulációs időszak (egy előre kultúra 250 ml), amely hasonló a koncentráció a széklettel a malacok. Ez azt sugallja, hogy a szimulációs modell ebben a tanulmányban alkalmazott lehet egy hasznos eszköz hatásainak becslése a folyosó egy in-vitro
modell előtt a drága in vivo
modellek. A modell tovább lehetne optimalizálni hígításával epesavak sói és a hasnyál által leírt Sumeri munkatársai katalógusa. [9]. A kísérletek során a aktiválása és inaktiválása enzimek egy olyan módszerrel, még mindig megtalálható.
Amikor csak 100 ml tápközeget alkalmaztuk az inokulum a L. gasseri
K7, a kultúra túlélte a szimulációs jobb (7. ábra). Mindkét kötet volt egy hasonló kezdeti sejtszám. Mindkét kötet oltottunk be 1 ml. Ezért, a tenyészetet 250 ml térfogatú volt egy korábbi szakaszban a növekedés, mint a 100 ml-es kultúra. Ezek az eredmények voltak megjelölve a növekedési fázis függését a kultúra alatt a stressz.
Következtetés
Ebben a vizsgálatban, tudtuk mutatni, hogy a rendszer, hogy szimulálja a gyomor-bél szakasz által kifejlesztett Sumeri et al
. [9] volt alkalmas az értékelés a túlélés 8 Bifidobacterium törzsek katalógusa és Lactobacillus gasseri katalógusa K7 bár mi nem szimulálják eltávolítását gyomornedv és az epe-sók. L. gasseri katalógusa K7 tudtuk összehasonlítani az eredményeket in vivo katalógusa tanulmány malacok és kapott hasonló eredményeket.
Az egyetlen reaktor rendszer lehetővé teszi, hogy az itt bemutatott egy sokkal egyszerűbb azonosítását az ideális növekedési fázisban az esetleges probiotikus törzs, amely ahhoz szükséges, hogy adja át a gyomor-bél folyosón, mint ha el kellett végezni a más rendszerekkel egy nehéz beállítás.
a tanulmány azt is kimutatta, hogy az összes vizsgált Bifidobacterium törzsek katalógusa, kivéve a B. animalis katalógusa subsp. lactis
lenne szükség, védő szerek, hogy túlélje a a gyomron való áthaladás-bél nagy számban. Ezt meg lehet tenni a megfelelő élelmiszer-mátrixban vagy tokozott sejtek. Katalógusa Módszerek
Baktérium törzsek
Összes bifidobaktériumok törzset kiválasztott törzs gyűjtemény Agroscope Liebefeld-Posieux ALP Research Station Svájc szigetelt ALP-re emberi forrásokból. Lactobacillus gasseri katalógusa K7 származott ZIM Ipari Mikroorganizmusok a Ljubljanai Egyetem Biotechnikai Karán (ZIM 105) [10], és szintén letétbe a ALP törzs gyűjtemény. A vizsgált törzsek és azonosító számai ALP törzs gyűjtemény táblázat sorolja 3. Minden bifidobaktériumok törzsek tulajdonában ALP. Katalógusa Media és a növekedési feltételek
Az előzetes kultúrák, 1 ml fagyasztott konzervál a törzsek oltottuk 250 ml-es Wilkins-Chalgren táptalaj (WC CM0643, Oxoid, Hampshire, UK), kiegészítve 9 GL -1 további laktóz-monohidrát (bifidobaktériumok) vagy de Man-Rogosa-Sharpe (MRS; Biolife, Milano, Olaszország) közepes (Lactobacillus gasseri
K7) [32]. L katalógusa. gasseri K7, egy próba egy 100 ml-es elő-tenyésztő is végeztünk. Minden törzs, kivéve a Bifidobacterium longum
subsp. infantis
, inkubáltuk 37 ° C-on 15 órán át anaerob körülmények között. Bifidobacterium longum katalógusa subsp. infantis
C-on inkubáljuk 12 órán, mivel ez volt nagyon érzékeny a meghosszabbított inkubációs időszakok. A pre-tenyészeteket 15 percig centrifugáltuk 3500 rpm-en, és az üledéket újra szuszpendáljuk 10 ml, foszfáttal pufferolt fiziológiás nátrium-klorid-oldattal (PBS).
Meghatározása sejtszám katalógusa A sejtszámot úgy határozzuk meg, 10-szeres hígítási a tenyészet fiziológiás sóoldat. A két legnagyobb hígítást ezután MRS agar (Biolife, Milano, Olaszország) egy spirális plater (IUL Instruments, Barcelona, ​​Spanyolország) és értékeli automatizált kolónia számláló a megfelelő szoftvert (IUL Instruments, Barcelona, ​​Spanyolország).
Screening savas ellenállás
a savas ellenállás szűrés a koncentrált sejtszuszpenziót a pre-tenyészetet pipettázunk 20 ml PBS-sel, amíg az OD 650 1,0 eléréséig. 4 ml ilyen sejtszuszpenziót ezután beoltjuk 16 ml citrát-HCl pufferben (TRI-Na-Citratex2 H 2O 7,35 g és 250 ml desztillált H 2O, igazítani a megfelelő pH-t 1 M HCI) a pH 2,0, 2,5, 3,0, 3,5 és 4,0. Az inkubálást végeztük 37 ° C-on és mintákat vettünk minden 30 perc 120 perc alatt. 1 ml mintákat összekeverjük 9 ml 0,25 mólos foszfát-puffer pH = 7,0, az első lépése a hígítási sor. A savas rezisztencia vizsgálat egy élelmiszer-mátrixban, az azonos mennyiségű pre-kultúra a fentiekben alkalmazott (beállítjuk az OD 650 1,0) pipettáztunk 20 ml UHT sovány tej. 4 ml sejtszuszpenziót tejben oltunk 16 ml citrát-HCl pufferben. Minden vegyszert cégtől vásároltuk Merck (Darmstadt, Németország). Az adatok a szűrési kísérletek láthatóvá kontúrábrák segítségével Sigmaplot 11.0 szoftver (Systat Software Inc., Chicago IL, USA).
Szimuláció a bioreaktorban
Minden oldatot frissen készített minden egyes kísérletben. Szimulált gyomor oldatot készült 50 mg pepszint sertés gyomor nyálkahártya (Sigma-Aldrich P7012, Buchs, Svájc) 20 ml 0,1 M sósavoldattal. A szimulált hasnyál 2 g pankreatin (Sigma-Aldrich P7545) oldunk 50 ml 0,02 M foszfát-puffer, pH-ja 7,5. Szimulált epe-só oldatot készítettünk 7,5 g szarvasmarha-epe (Sigma-Aldrich B3883) készült 50 ml-re desztillált H 2O. A leves a szimuláció volt, vagy 1 l WC vagy MRS húslevest 29.41 g trinátrium-citratex2 H 2 O. A vizsgálat során a túlélés egy élelmiszer-mátrix, 500 ml UHT lefölözött tej adunk hozzá, és a pH-t 3,0 értékre állítjuk be 5 M HCI röviddel a szimuláció. 1 l tápközeget adtunk a bioreaktorba (NewMBR Mini, NewMBR, Svájc), előzőleg sterilizált vízzel (121 ° C, 20 perc), és az elegyet 37 ° C-on. A gyomor szimuláció, levegőztetés hajtották végre. Az erjesztés ellenőrzött és rögzíthetők integrált folyamatirányító szoftver Lucullus (Biospectra, Schlieren, Svájc). A koncentrált sejtszuszpenziót a pre-tenyészetet pipettázunk 40 ml PBS-ben, hogy az OD 650 1,5. Röviddel a beoltás 40 ml sejtszuszpenziót, 20 ml-t a szimulált gyomor-oldatot adunk, hogy a közeg (1 l) a bioreaktorban.

• A kockázatértékelés a gyomorrák kapcsolatos azbesztózis: egy esetismertetés
• Baktericid tevékenységét a kationos szteroid CSA-13 és a cathelicidin peptid LL-37 Helicobacter pylori elleni szimulált gyomornedv