Procjena prolaz Lactobacillus gasseri K7 i bifidobakterija iz želuca do crijeva pomoću jednog reaktora model

Procjena prolaz Lactobacillus gasseri
K7 i bifidobakterija iz želuca do crijeva pomoću jednog reaktora modela pregled Sažetak pregled Pozadina pregled probiotičkih bakterija su mislili da igraju važnu ulogu u probavnom sustavu i stoga morati preživjeti prijelaz iz želuca u crijeva. Nedavno je novi pristup za simulaciju prijelaz iz želuca u crijeva u jednom bioreaktoru je razvijen. Prednost ovog automatiziranog jednog reaktora sustava je mogućnost testirati utjecaj kiselina, žučnih soli i pankreatina. Pregled, Lactobacillus gasseri pregled K7 je soj izoliran iz fecesa dojenčadi sa svojstvima čineći pritisak zanimljivo za proizvodnju sira. U ovom istraživanju, jedan reaktor sustav se koristi za procjenu preživljavanje L. gasseri
K7 i odabranim bifidobakterija iz naše kolekcije kroz prolaz želuca-crijeva. Pregled Rezultati
početnu screeninga za otpornost na kiselinu u kiselim kulture mediji su pokazali nisku toleranciju Bifidobacterium Dentium Netlogu za ovo stanje ukazuje na nisku opstanak u prolazu. Slični su rezultati postignuti s B. longum
subsp. infantis
dok B. animalis
subsp. lactis pregled je visok opstanak.
Ovi početni rezultati su potvrđeni u bioreaktor modelu prolaz želuca-crijeva. B. animalis
subsp. lactis pregled imala najvišu stopu preživljavanja (10%) postizanje približno 5 × 10 6 cfu mL -1 u odnosu na druge testirane sojevima bifidobakterija koje su smanjene za faktor do 10 6 , Lactobacillus gasseri pregled K7 je manje otporna od B. animalis
subsp. lactis pregled, ali je preživio u koncentraciji stanica oko 1000 puta veća od ostalih bifidobakterija. pregled Zaključak
U ovom istraživanju, bili smo u mogućnosti pokazati da L. gasseri pregled K7 imala visoku stopu preživljavanja u stomach- crijeva prolaz. Uspoređujući rezultate s prethodnom istraživanju u prasadi možemo potvrditi pouzdanost naših simulacije. Od testiranih sojeva bifidobakterija, samo B. animalis
subsp. lactis pregled je pokazao prihvatljivu preživljavanje za uspješan prolazak u simulacijskom sustavu. pregled Pozadina pregled Probiotici, bakterije pogotovo mliječne kiseline imaju blagotvoran učinak na zdravlje potrošača, kao što je sugerirano u 1907 [1]. Vjerovalo se da su bakterije se uglavnom pod kontrolom infekcija uzrokovanih enteričkih patogena i uređenom toxoaemia, čime se poboljšava zdravlje i utječu na smrtnost. U međuvremenu je poznato da su neke od pozitivnih učinaka na zdravlje potrošača su poboljšanje u mikroflore ravnotežu u crijevima, stimulacija imunog sustava, te pomaže organizmu da se bori patogenih mikroorganizama [2]. Veliki dio kamata je koncentriran na uporabu sojeva iz rodova Lactobacillus i Bifidobacterium Netlogu Netlogu, čak i ako postoje i druge bakterije s probiotičkim učincima, npr neki propionibaktcrijc.
Navedene osobine su također osnova za mikroorganizam koji se obilježava probiotik. Postoje različite definicije širom svijeta, ali oni su slični u sadržaju. Jedan od kriterija za probiotika soja otpornost na kiselost i želučanih otopina u gastrointestinalnom traktu humanog [3]. Stoga je važno, ocijeniti otpor probiotičkih soja kiseloj i probavnom traktu u crijevu.
Zbog visokih troškova i etičkih kao sigurnosnih propisa za klinička ispitivanja, probir opstanak lakše simulirati in vitro pregled. Jednostavan test je u inkubatoru bakterijskih stanica u kiselom ili žučnih otopinama soli za određeno razdoblje i brojati broj preživjelih stanica. U daljnjem koraku, simulacija se provodi u agitiranih tikvicama, kombinirajući kiselosti i želučanih rješenja slijedi procjeni preživjelih stanica po cijeloj simulacije. To je realniji odgovor od stanja u [4] crijeva. Drugi sustav je simulator za humane intestinalne mikrobni ekosustav (shime), sastoji se od 5 do 6 serijski povezanih pH kontrolira bioreaktora [5-7]. Postavljanje je vrlo složen i zahtijeva apsolutnu anaerobne uvjete. Nadalje, apsorpcija metabolita i voda nije simulirani. To se riješiti korištenjem dijalizu membrana kao što je opisano od strane Marteau sur pregled. [8]. Pregled, nedavno, novi sustav pomoću jednog bioreaktor je razvijen na studij prolaz želuca-crijeva [9]. Sustav dozvoljeno pH se mijenjati unutar jednog reaktora i adaptiran na retencijskim vremenima u različitim regijama prolaza želuca-crijeva. Pregled, Lactobacillus gasseri pregled K7 je nedavno bio izoliran od dojenčadi fecesa [10]. To stvara bakteriocina koji je aktivan protiv Clostridium pregled sp. i njihove spore. L. gasseri pregled pripada takozvanom "acidophilus"-skupine i nekoliko nezavisnih istraživanja identificirali ovih sojeva kao stanovnici kože i crijeva [11-13]. U prethodnim pokusima, bilo je već prikazano na vitro pregled da L. gasseri pregled K7 preživio u kiselom okruženju te s 0,3% žučnih soli [10]. Ovi rezultati bi soj zanimljiva kao moguća probiotik.
U ovom istraživanju, jedan bioreaktorski sustav zasnovan na radu Sumeri i sur pregled. [9] se koristi za procjenu preživljavanje Lactobacillus gasseri
K7 i osam Bifidobacterium pregled sojeva iz naše kolekcije. Mi smo bili u mogućnosti usporediti rezultate za L. gasseri pregled K7 sa studija provedena u prasadi [14] što je omogućilo procjenu korelacije između studija in vitro pregled s rezultatima iz in vivo
eksperimenata . pregled vremena zadržavanja i pH koji se koriste u ovom istraživanju su na temelju podataka iz literature. Postoji nekoliko metoda za mjerenje pH u crijevu [15]. Tablica 1 prikazuje pH vrijednosti u različitim dijelovima crijeva mjereno po Heidelberg kapsuli [16, 17]. Vremena zadržavanja može se izračunati ili pomoću markera tvari (kemijski) ili radio telemetrijskih kapsule, kao što su Heidelberg
kapsuli [18]. Međutim, kapsule obično imaju dulje vrijeme zadržavanja od kemijskih markera. Tablica 2 navodi neke od retencijskim vremenima naći u literaturi [4, 5, 19-24] .table 1 pH vrijednosti u ljudskom probavnom traktu, mjerene sa Heidelberg pregled kapsule. Pregled pregled želuca
Dvanaesnik
ijejunumu
ileuma
proksimalni pregled medijalni pregled distalni pregled pH pregled 1.4 **
6,22 * pregled 6.4 ** pregled 7.1 ** pregled 7.4 ** pregled * Fallingborg sur pregled. 1994 [16] pregled ** Fallingborg sur pregled. 1998 [17]
Tablica 2 puta zadržavanje u tankom crijevu navedeni u literaturi. Vrijeme pregled Zadržavanje
Izvor
primjedbe
pregled, 1-4 h pregled Huang i Adams 2004. [21]
4,25 h pregled Van Den Driessche sur pregled. 2000 [24]
želuca i tankog crijeva pregled 4h pregled Mojaverian 1996. [22]
6 h pregled Picot i Lacroix 2004. [4] pregled Izabrani maksimalno vrijeme simulacije
7,5 h pregled Fallingborg sur pregled. 1990 [20] pregled Dječje
8 h pregled Fallingborg sur pregled. 1989 [19] pregled, 8 sati pregled Alander sur pregled. 1998. [5] pregled simulacije u Šimej Reactor pregled 6-10 h pregled mišići i sur pregled. 1991 [23]
Na temelju podataka pronađenih u literaturi i rad po Sumeri i sur pregled. [9] je proces fermentacije bila je postavljena kao što je opisano u materijalima i metodama, a prikazan je na slici 1. Slika 1 Parametri trakta prolaz simulaciju više od 7 h. Pregled Rezultati
otpornost na kiseline screening
Cilj početne niza pokusa bio je da se dobije uvid u otpornost na kiselinu osam sojeva bifidobakterija. Slike 2, 3 i 4 pokazuju opstanak ovih sojeva pomoću konture parcele su stvorene pomoću SigmaPlot. Bifidobacterium Dentium pregled (Slika 3) pokazali najmanju otpornost na kiseline. Između pH 4.0 i pH 2.0 nije bilo nikakvih razlika u preživljavanju i koncentracija stanica smanjena više od 7 log 40 minuta. Bifidobacterium animalis subsp
. lactis pregled je više otporan do 40 minuta pri pH 2.0, a onda smanjila se za oko tri dnevnika kada se inkubira 120 minuta (slika 4). Pri pH između 2,5 i 3,0 smanjenje je manje od 1 log nakon 120 minuta. Otpornost Slika 2 Acid od tri Bifidobacterium longum sojeva. X-os: vrijeme (min); Y-os: pH; log cfu prikazani su u boji (skala na desnoj grafikona). Brojevi u bakterijskim imena su soja brojevi u FAM-baze podataka ALP.
Slika 3 otpornost na kiseline Bifidobacterium Dentium, B. longum subsp. infantis i B. adolescentis. X-os: vrijeme (min); Y-os: pH; log cfu prikazani su u boji (skala na desnoj grafikona). Brojevi u bakterijskim imena su soja brojevi u FAM-baze podataka ALP.
Slika 4 otpornost na kiseline Bifidobacterium breve i B. animalis subsp. lactis. X-os: vrijeme (min); Y-os: pH; log cfu prikazani su u boji (skala na desnoj grafikona). Brojevi u bakterijskim imena su soja brojevi u FAM-baze podataka ALP.
Sve ostale testirane Bifidobacterium pregled sojeva (B. longum, B. breve, B. longum pregled subsp. Infantis i B. adolescentis pregled) pokazuju sličnu, ali drugačiji uzorak iz B. animalis
subsp. lactis pregled (Slike 2, 3 i 4). Imali su kratko vrijeme preživljavanja ispod pH 2,5 i preživio u većem broju navedenih pH 3,5.
S ciljem razvoja metoda za simulaciju GI u bioreaktoru, dodatno ispitivanje provedeno je sa jednim sojem. Promatrati utjecaj matrice hrane, koncentrirani B. longum pregled subsp. infantis pregled je ponovno suspendiran u obrano mlijeko prije inokulacije u kiselim otopinama. Kao što je prikazano u desnom stupcu na slici 5, mlijeko imalo direktan utjecaj na opstanak soja. Između pH 3,0 i 3,5 bakterije su preživjele 120 min sa smanjenjem zapisnik 2. ispod pH 3,0 stopa preživljavanja smanjen na oko dnevnika 5. Smanjenje opstanak ispod pH 3,0 je bio brz ali redovito tijekom vremena. Na pH 3,5 i gore, pritisak je bio otporan na najmanje 120 minuta. Slika 5. Usporedba otpornost na kiselinu Bifidobacterium longum subsp. infantis 14.390 suspendiran u NaCl ili obranim mlijekom. Lijevo: bifidobakterija ponovno suspendiran u NaCl, jel: bifidobakterija ponovno suspendiran u mlijeku. X-os: vrijeme (min); Y-os: pH; log cfu prikazani su u boji (skala na desnoj grafikona). Brojevi u bakterijskim imena su soja brojevi u FAM-baze podataka ALP.
Lijeva kolona slici 5 prikazan je isti soj bez dodanog obranog mlijeka. Iznad pH 3,5, nije bilo utjecaja na preživljavanje bakterija. Međutim, ispod pH 3,5 opstanak smanjen, ovisno o trajanju inkubacije. Između pH 3.0 i 3.5 je soj već smanjen za oko prijavite 5. Nakon 30 minuta inkubacije, bilo je gotovo linearno smanjenje preživljavanja sa smanjenjem pH od 3,0 do 2,5. Pregled simulacije u bioreaktoru pregled Većina sustava je opisano u literatura se sastoje od nekoliko reakcijskih posuda, npr Šimej [6]. Druge studije koriste imobilizirane stanice s tri reaktora [25] ili sustava za dijalizu [8]. Na temelju rada Sumeri i sur pregled. [9] i prikupljeni podaci o uvjetima u probavnom prolazu smo bili u mogućnosti da se ograniči simulacije na jednu posudu. Zajedno s podacima iz projekcije otpornost na kiseline, izbor mogućeg početne pH i juha sastava u simulatoru mogao biti izabran. Dobivene simulacijski parametri su prikazani na slici 1 i opisana u materijal i metode dijelu. Je u fazi ove studije, Sumeri sur pregled. [9] razvili sličan sustav za procjenu Lactobacillus
sp. u simulaciji želudac crijevo prolaz.
programski paket "Lucullus" bio je odličan alat za kontrolu pH i procesa u skladu s razvijenom simulacije. Odabir medija u bioreaktor je pojednostavljen odabirom odgovarajućeg medij za rast sojeva, a dodan je obrano mlijeko, funkcionira kao simulacija matrice hrane. Nakon toga je zakiseljena na početni pH uz dodatak enzima otopinama kao što je opisano u materijalima i metodama. Simulacije su provedene serijski, jedan po danu. Rezultati su prikazani na slici 6. sojevi koriste za simulaciju navedene su u tablici 3 (samo Bifidobacterium Dentium pregled je isključen) i standardizirani do OD 650 od 1,5 prije inokulacije. Slika 6 Razvoj 7 sojeva Bifidobacterium tijekom trakta prolaz simulacije za 7 h. Isprekidana linija pokazuje vrijeme dodavanja žučne soli i pankreasnog soka. Brojevi u bakterijskim imena su soja brojevi u FAM-baze podataka ALP.
Tablica 3. sojeva u simulaciji. Pregled Naziv
Identifikacijski broj ALP soja kolekcije
Bifidobacterium adolescentis
FAM-14377 pregled Bifidobacterium brevisom
FAM-14398 pregled, Bifidobacterium longum pregled subsp. infantis
FAM-14390 pregled Bifidobacterium animalis subsp
. Lactis
FAM-14403 pregled Bifidobacterium Dentium
FAM-14396 pregled, Bifidobacterium longum
FAM-14382, -14383, -14406 pregled Lactobacillus gasseri
K7 pregled FAM-14.459 pregled Bifidobacterium adolescentis pregled inokulirana kao što je opisano u početnoj koncentraciji od 10 7 cfu ml 1 i smanjena je linearnog ispod 10 4 cfu mL -1 nakon 5 sati. B. brevisom pregled i B. longum pregled sojeva imao početne koncentracije od 10 7 i 10 8 cfu mL 1 i smanjio na ispod 10 2 cfu mL -1 unutar prvih 30 minuta. B. animalis
subsp. lactis
14.403 preživio do oko 15% od početne prosječne cfu od 5 × 10 8 cfu mL 1. Došlo je do brzog smanjenja opstanak B. longum
subsp. infantis
preko prvih 30 min. Nakon toga je preživljavanje pada samo polako od 10 5-10 4 cfu mL 1.
U kasnijoj fazi, Lactobacillus gasseri pregled K7 je bio uključen u studiju, jer je nekoliko projekata su trčanje u ovom trenutku u našem institutu s ovom vrstom. Lactobacillus gasseri pregled K7 nasadi se na 2,2 × 10 7 cfu mL 1 i nakon 7 sati simulacije u koncentraciji od 10 5 cfu mL -1 živih stanica je još uvijek prisutna u kultura mediji (Slika 7, krivulja za 250 ml pre-kultura). Najviša smanjenje preživljavanje bilo je u prva 2 sata, a počinje odmah nakon dodatka na želučani sok i žučnih soli. Unutar tog vremena, došlo je do smanjenja od živih stanica po zapisniku 2. U ostatku vremena simulacije, bilo je samo dnevnik jednog smanjenje žive stanice. Slika 7. Usporedba utjecaja 100 ml pre-kulture Lactobacillus gasseri K7 sa 250 ml pre-kulturom. Pred-kulturu se prikupiti centrifugiranjem, te ponovno suspendiraju u fiziološkoj otopini natrijeva klorida kako bi se postigla OD600 od 1,5. Želudac-crijevni prolaz simulacija inkubira se pomoću prilagođene rješenja i inkubira 7 h. Isprekidana linija pokazuje dodavanje žučnih soli i pankreasnog soka. Krivulje su srednja vrijednost rezultata dva pokusa.
Pripremu inokuluma L. gasseri
K7 u volumenu kulture 100 ml Također se ocjenjuje. Rezultati eksperimenata prikazani su na slici 7. 250 ml kulture smanjenje u živim stanicama je oko log 2, dok je smanjenje sa 100 ml kulture se je log samo 1 tijekom cijelog vremena inkubacije. Međutim, 2 sata nakon dodatka žučne soli i pankreasnog soka, smanjenje broja stanica bila je slična za oba volumena. Pregled Rasprava pregled Prilikom branja kulture nakon određenog vremena inkubacije, faza rasta svakog bakterijskog soja može se drugačije, jer svi imaju različitu dinamiku rasta. Kako bi se dobila stanica na približno istoj fazi rasta, preliminarni pokusi su izvedeni (podaci nisu prikazani). Vrijeme inkubacije od 15 sati za pre-kulture bio je pogodan za sve ispitivane sojeve osim Bifidobacterium longum
subsp. infantis pregled koji je potrebno da se inkubirati samo 12 sati.
kiseline toleranciju screening (slike 2, 3 i 4), kako bi se evaluirala učinak pH neovisno o drugim uvjetima. Bifidobacterium Dentium pregled bio je vrlo osjetljiv na kiselinu i stoga će možda neće preživjeti prolaska kroz želudac. Soj stoga nije bio uključen u pokusima simulacije. B. longum pregled sojeva (Slika 2) nisu donijeli mnogo bolje rezultate od B. Dentium pregled (slika 3). Međutim, u blizini pH 4 su bili otporniji nego B. Dentium
. Pregled B. longum pregled subsp. infantis pregled je jedna od prvih vrsta naseliti ljudskom crijevu ubrzo nakon rođenja [26]. Na pokuse u ovoj studiji, međutim, testirani B. longum
subsp. infantis pregled soj će samo biti u mogućnosti da prođe novorođenčadi želudac u velikom broju, ako je vrijeme prijelaza u kiselom želucu bio je vrlo kratak. Opstanak odabranog soja u testnoj okolini bila preniska za uspješan prolazak u velikom broju. Kada je soj je ponovno suspendiran u obrano mlijeko, opstanak povećana (slika 5.). To bi mogao biti znak da ljudsko mlijeko pomaže B. longum
subsp. infantis pregled sojevi proći prolaz želudac crijevo sa po višoj stopi preživljavanja.
zaštitni učinak mliječnih proteina u probavnom sustavu su već opisane u literaturi [27]. Zaštita mliječnih proteina je također bio prikazan u ovom istraživanju (Slika 5). Uz odgovarajuću matricu ili čak prijevoznika, probiotičke bakterije mogao sigurno proći kroz želudac u crijeva da ostvare svoje mjesto djelovanja.
B. adolescentis pregled sojeva koji nastanjuju ljudsko crijevo u kasnijoj dobi, imao je nešto veći otpor nego B. longum
subsp. infantis pregled koji može objasniti smanjenje potonji tijekom napretka ljudskih djeteta do odrasle dobi [26].
najzanimljiviji naprezanje je B. animalis
subsp. lactis pregled, što je najmanje osjetljiva soja u našem istraživanju. Ovaj soj pH otporan ima veliki potencijal za korištenje u hrani kao probiotik dopuniti od većeg broja bakterijskih stanica će preživjeti prolaz. Međutim, kako koristiti ovaj soj kao probiotik, više studija moraju biti izvedena kako bi se postigla probiotika status prema definiciji Klaenhammer [3]. Netlogu U našoj studiji, unošenje matrice hrane je simuliran u početni okolina zakiseljeno mlijeko i medija za rast. Dodana želučanog soka i kisika u fazi želuca povećao stres. Tijekom simulirane prolaz u tankom crijevu kisik je zamijenjen dušikom i reakcijski medij se neutralizira do pH 6,3. Dodavanje otopine i žučnih soli pankreasa završilo prolazak u tanko crijevo. Ovaj in-vitro pregled sustava nije uzeo u obzir da se u in vivo pregled probavu, enzimi se aktiviraju i inaktivirana i drugih tvari, npr žučnih soli resorbira. Sumeri i sur pregled. [9] našli djelomično rješenje zaobići taj problem. Se razrijedi sadržaj reaktora s posebno napravljenoj podlozi za razrjeđivanje. Druga bi mogućnost bila da se istaloži žučnih soli na kraju simulacije tankog crijeva imitiranja enterohepatičku sklop. To može biti izvedena s kalcijevim ionima [28-30]. Uklanjanje žučne soli bi bolje simuliraju okoliš debelog crijeva i možda čak i dopustiti bifidobakterije razmnožiti.
U našoj studiji, preostale žučne soli i sok pankreasa u simulaciji je dovelo do dodatnog stresa na bakterije koje su vjerojatno promijenjeni prave karakteristike sojeva in vivo pregled.
počevši cfu u simulaciji varirao unutar jedne log cfu iako je prilagodba oD 650 inokuluma je prethodno testiran s Bifidobacterium animalis subsp
. lactis pregled i Bifidobacterium longum pregled subsp. infantis
sojeva. U bifidobakterije koji se koriste u ovom istraživanju pokazali sklonost stvaranja klastera koji mogu rezultirati smanjenom cfu (vizualna promatranja, podaci nisu prikazani). U drugoj studiji, formiranje klastera moglo biti povezano s smanjenjem pH tijekom rasta [31]. Te nakupine se obično računa kao jedan koloniju na tanjuru.
Slika 6 prikazuje rezultate želuca-crijeva prolaz simulaciju više od 7 h od sedam testiranih Bifidobacterium pregled sojeva. Koncentracija živih stanica bifidobakterija neposredno smanjila nakon inkubacije zbog niskog pH (pH 3,0). Međutim, B. animalis
subsp. lactis pregled ostao stabilan. To je potvrdio rezultate prethodnih eksperimenata objašnjeno gore (slika 4). Ovaj otpor može biti produžen do žučne soli i soka gušterače Iako broja stanica B. animalis
subsp. lactis
smanjila se za oko 85% od početne vrijednosti (slika 6). U usporedbi s drugim sojevima koji se koriste u ovom istraživanju, međutim, taj pad je bio gotovo zanemariv.
Sve B. longum
i B. breve pregled sojevi umro vrlo brzo na početku simulacije i bili su ispod detekcije granica metode oplata u roku od nekoliko sati (Slika 6) što je i za očekivati ​​od rezultata eksperimenta screening gore (slike 2 i 4).
s druge strane, B. longum pregled subsp. infantis pregled 14.390 brzo smanjio na početku simulacije, ali nakon dodavanja gušterače sok i žučnih soli i promjene u anaerobnom okruženju, stopa smanjenja smanjen. Naša studija pokazuje da je ovaj soj dobro prilagođen uvjetima u crijevu, ali se treba gutati u velikom broju preživjeti uvjete u želucu (kisik, niski pH). Kao što je već spomenuto, B. longum pregled subsp. infantis pregled sojevi pripadaju prvoj skupini bakterija naseljavanja crijeva dojenčadi [26].
Za razliku od B. longum
subsp. infantis pregled, B. adolescentis pregled smanjena gotovo linearno tijekom 7 sati simulacije u. Nije bilo moguće otkriti prekid kada su uvjeti u fermentor promijenila. Na temelju pokusa za toleranciju screening kiseline, ovaj rezultat je bio neočekivan.
Međutim, to bi moglo biti povezano s uvjetima testiranja gdje žučne soli i želučanih koncentracije sok ostala na početnoj razini i nisu razrijeđene kako bi se u vivo pregled. U budućnosti eksperimentu treba ocijeniti da li metoda razrjeđivanje su razvili Sumeri sur pregled. [9] bi stabilizirala broja stanica od B. adolescentis pregled tijekom simulacije periodu od 6 sati u crijevu.
U našoj studiji, također ocjenjuju prolaz želuca-crijeva Lactobacillus gasseri
K7. Soj je već ocijenjen za opstanak in vivo pregled kod prasadi [14]. Stoga je bilo moguće usporediti naše in-vitro pregled rezultata s podacima iz in vivo
eksperimentima. Pregled, Bogovića i sur pregled. [14] hranili prasad tijekom razdoblja od 14 dana, s 5 * 10 10 cfu dana -1 L. gasseri
K7. To je dovelo do cca. 7 * 10 4 cfu g -1 u stolici tijekom razdoblja hranjenja. To se mora uzeti u obzir da je koncentracija bakterija je razrijeđen prije nego što je napokon stigao u prolazu želuca-crijeva. U grubo aproksimacija, procjenjuje se da oko 1% stigli u prolazu. To nam je omogućilo da se usporediti rezultate ove prasadi studije s krajem naše simulacije.
Kao što je prikazano na slici 5, L. gasseri pregled K7 imali koncentraciju stanica od približno 5 x 10 4 cfu mL -1 nakon simulacije perioda od 7 h (s pre-kulture od 250 ml) koji je sličan koncentracije izmetu prasadi. To sugerira da je simulacijski model koji se koristi u ovom istraživanju može biti koristan alat za procjenu učinaka prolaz u modelu in-vitro pregled prije korištenja skupo in vivo pregled modela. Model se može još više optimizirati razrjeđivanje žučne soli i sok pankreasa kao što je opisano u Sumeri sur pregled. [9]. Za simulaciju aktivaciju i deaktivaciju enzima prikladna metoda je još uvijek može naći.
Kada se koristi samo 100 ml medija za kalemljenje L. gasseri
K7, kultura preživjela simulacije bolja (slika 7). Oba volumena imao sličnu početnu broj stanica. Oba volumena inokulira 1 ml. Stoga, kultura s 250 ml volumena je bio u ranijoj fazi rasta od 100 ml kulture u. Ovi rezultati su bili pokazatelj fazi rasta ovisnosti o kulturi za vrijeme stresa. Pregled Zaključak
U ovom istraživanju, bili smo u mogućnosti pokazati da sustav za simulaciju prolaz želuca-crijeva su razvili Sumeri i dr
. [9] je prikladan za procjenu opstanak 8 Bifidobacterium pregled sojeva i Lactobacillus gasseri pregled K7 iako nismo simuliraju uklanjanje želučanog soka i žučnih soli. Za L. gasseri pregled K7 smo mogli usporediti rezultate sa studija in vivo pregled na prasadi i dobiti slične rezultate.
Jednog reaktora sustav ovdje predstavljena omogućava izravnije identifikaciju idealnog fazi rasta za bilo kakvu moguću probiotički soj koji je potreban da prođe prolaz trbuh-crijeva nego ako to mora biti izvedena s drugim sustavima s teškom postava.
studija je također pokazala da su svi testirani Bifidobacterium pregled sojeva, izuzev B. animalis pregled subsp. lactis pregled, će zahtijevati zaštitnih sredstava preživjeti prolaz kroz želudac crijevo u velikom broju. To se može učiniti pomoću odgovarajućeg matricu hrane ili kapsuliranje stanica.
Metode
Bakterijski sojevi
Svi sojevi bifidobakterije su izabrani iz kolekcije soja od Agroscope Liebefeld-Posieux ALP Research Station Švicarskoj, izolirana ALP iz ljudskih izvora. Lactobacillus gasseri pregled K7 potječe iz ZIM Zbirke industrijskih mikroorganizama Sveučilišta u Ljubljani, Biotehnički fakultet (ZIM 105) [10], a također je pohranjena u soja zbirci ALP. Ispitivani sojevi i njihove identifikacijske brojeve iz soja zbirke ALP navedeni su u tablici 3. Svi sojevi bifidobakterije su vlasništvo ALP. Pregled Mediji i uvjeti rasta
za pre-kultura, 1 ml smrznutog konzervi od sojeva su unosi u 250 ml Wilkins-Chalgren juhe (WC CM0643, Oxoid, Hampshire, Velika Britanija), uz dodatak 9 gl -1 dodatne laktoza monohidrat (bifidobakterija) ili De Man-Rogosa-Sharpe (MRS; Biolife, Milano, Italija) medij (Lactobacillus gasseri pregled K7) [32]. Za L Netlogu. gasseri K7, suđenje sa 100 ml pre-kulture također je izvršena. Svi sojevi, osim Bifidobacterium longum pregled subsp. infantis pregled, inkubirane su na 37 ° C tijekom 15 sati pod anaerobnim uvjetima. Bifidobacterium longum pregled subsp. infantis pregled se inkubira kroz 12 sati, budući da je vrlo osjetljiva na dulje vrijeme inkubacije. Pre-kulture se centrifugira 15 min pri 3500 rpm i talog se ponovno suspendira u 10 ml fosfatno puferiranom fiziološkom otopinom natrijevog klorida (PBS), pregled Određivanje stanice kut pregled Broj stanica je određena 10 puta niz razrjeđenja kulture u fiziološkoj otopini. Dvije najveće razrjeđenje su tada stavljeni na MRS agaru (Biolife, Milano, Italija) koristeći spiralni pozlatar (IUL Instruments, Barcelona, ​​Španjolska) i ocijeniti automatizirani kolonija pult s odgovarajućim softverom (IUL Instruments, Barcelona, ​​Španjolska).
Screening za otpornost na kiselinu pregled za otpora kiseline screening koncentrirana suspenzija stanica iz pre-kulture je pipetom u 20 ml PBS-a dok se ne dobije oD 650 1,0 je postignut. 4 ml te suspenzije stanica se zatim inokulira u 16 ml citrat-HCl puferu (tri-Na-Citratex2 H 2O 7,35 g i 250 ml destilirane H 2O, prilagođena na odgovarajući pH s 1 M HCl) pri pH od 2.0, 2.5, 3.0, 3.5 i 4.0. Inkubacija je učinjeno na 37 ° C, te su uzeti uzorci svakih 30 min tijekom 120 minuta. 1 ml uzorka se pomiješaju sa 9 ml 0,25 M fosfatnog pufera na pH 7,0 u prvom koraku u nizu razrjeđenja. Za ispitivanje otpornosti kiseline u matrici hrane ista količina pre-kulture kako je gore korišten (podešen do OD 650 1.0) pipetirano je u 20 ml UHT obranim mlijekom. 4 ml te stanične suspenzije u mlijeku su inokulirani u 16 ml citrat-HCl. Sve kemikalije su kupljeni od tvrtke Merck (Darmstadt, Njemačka). Podaci za pokuse probiranje je vidljivo u kontura parcele pomoću softvera SigmaPlot 11,0 (Systat Software Inc, Chicago IL, USA).
Simulacije u bioreaktoru pregled Sva rješenja su svježe pripremljene za svaki eksperiment. Simulirani otopina želudac je načinjena od 50 mg pepsinskom svinjske želučane sluznice (Sigma-Aldrich P7012, Buchs, Švicarska) u 20 ml 0,1 M HCl. Za simulirani pankreasa sok od 2 g pankreatina (Sigma-Aldrich P7545) se otopi u 50 ml 0,02 M fosfatnog pufera na pH 7,5. Simulirani otopina žučnih soli napravljena od 7.5 g goveđeg žuči (Sigma-Aldrich B3883) razrijeđeno do 50 ml s destiliranom H 2O. Juha za simulaciju je bilo 1 l WC ili MRS juha s 29.41 g tri-natrijeva citratex2 H 2O. Tijekom ispitivanja preživljavanja u matrici hrane 500 ml UHT obranim mlijekom, zatim se pH podesi na 3,0 s 5 M HCl neposredno prije simulacije. 1 l medij je dodan u bioreaktor (NewMBR Mini, NewMBR, Švicarska), prethodno sterilizirane s vodom (121 ° C, 20 min), te grije na 37 ° C. Tijekom simulacije želuca, provjetravanje je provedena. Fermentacija je kontrolirano i zabilježeno pomoću integriranog softvera za upravljanje procesom Lucullus (Biospectra, Schlieren, Švicarska). Stanična suspenzija koncentrira s pred-kulturom pipetirano je u 40 ml PBS do OD 650 od 1,5. Neposredno prije inokulacije suspenzije 40 ml stanica, 20 ml simulirane želučane otopine doda se u mediju (1 l) u bioreaktoru.

• Procjena rizika od raka želuca povezane s azbestoze: prikaz slučaja
• Baktericidno djelovanje kationskog steroid CSA-13 i cathelicidin peptida LL-37 protiv Helicobacter pylori u simuliranom želučanom soku