Limfangiogeneza u rak želuca regulira Akt /mTOR-VEGF-C /VEGF-D os

Limfangiogeneza u rak želuca regulira Akt /mTOR-VEGF-C /VEGF-D os pregled apstraktne pregled pozadine
limfangiogeneze igra značajnu ulogu u metastaza i recidiva raka želuca. Nema izvješća, ali s naglaskom na modulaciji VEGF puta i limfangiogeneze raka želuca ciljajući Akt /mTOR put. Ova studija ima za cilj pokazati odnos između Akt /mTOR puteva i VEGF-C /D u raka želuca.
Metode pregled prikupili smo kirurški resected želučanog adenokarcinoma uzoraka od 55 pristanak pacijenata. Imunohistokemija bojenje p-Akt, p-mTOR, VEGF-C, VEGF-D su provedena, a rezultat se dva nezavisna patologa. Rezultati su prikazani kao bojenje intenzitetu i pozitivnu stopu bojenja stanica. Također smo izmjerili limfna gustoću krvnih žila (LVD) by D2-40 bojenja. Različite doze p-Akt inhibitora LY294002 (12,5 uM, 25 uM, 50 uM) i p-mTOR inhibitor Rapamicin (25 nM, 50 nM, 100 nM) se daje rak želuca stanična linija sGC 7901 in vitro. Stopa inhibicije rasta stanica je ispitana MTT 24 sata, 48 sati i 72 sata, istim redom, i proteina izrazi Akt, p-Akt, mTOR, p-mTOR, VEGF-C i VEGF-D, ispitana je pomoću Western blot. pregled Rezultati
pozitivno obojanih stopa p-Akt, p-mTOR, VEGF-C i VEGF-D u 55 karcinoma želuca kliničkih uzoraka su 74,54%, 85,45%, 72.73% i 58.18%. p-Akt i p-mTOR pozitivno korelira s VEGF-C i VEGF-D (p < 0.01). LVD povećan inkrementalni tendencijom bojenje intenziteta p-Akt, p-mTOR, VEGF-C i VEGF-D. LY294002 ili Rapamicin značajno suprimira SGC-7901 stanični rast i brzina inhibicije bio doze i ovisna o vremenu (p < 0,001). Osim toga, protein ekspresija p-Akt i p-mTOR su pozitivno korelira s onom VEGF-C i VEGF-D (p < 0.05).
Zaključci pregled Razina LVD u želučanom uzoraka raka bila značajno viši nego kod normalnog tkiva želuca i pozitivno korelira s p-Akt, p-mTOR, VEGF-C i VEGF-D. Inhibicija p-Akt i p-mTOR, in vitro, smanjen tumorskih stanica VEGF-C i VEGF-D značajno. Dakle, zaključili smo da limfangiogeneze karcinoma želuca može biti povezano s Akt /mTOR-VEGF-C /VEGF-D osi. Pregled Ključne riječi pregled Limfangiogeneza Rak želuca Akt /mTOR VEGF Pozadina pregled, rak želuca je jedan od Najčešće maligne neoplazme u svijetu [1-3]. Uobičajene strategije liječenja za rak želuca uključuju operacije, zračenje, kemoterapija i ciljano liječenje [4,5]. neuspjeh liječenja uključuju metastaza i recidiva nakon operacije. Glavni metastatski putevi rak želuca izravne invazije, vaskularne metastaza, limfni metastaze i enterocoelia metastaza [3]. Među onima, limfna metastaze je sve važniji kriterij u ocjenjivanju prognozu želučanog karcinoma i limfangiogeneze je prepoznat kao značajan prediktor za prognozu bolesnika s rakom želuca [1,2]. Osim toga, rak želuca limfni metastaze Vjeruje se da je ranije događaja u odnosu na vaskularnu metastaze, događa i u ranom stadiju karcinoma želuca [3,4]. Stoga je Međunarodna unija protiv raka uzela stopu limfangiogeneze i metastaza količinu limfnog čvora u uprizorenju raka želuca u procjenjivanju prognozu [2,5]. Osim toga, čak i ako Limfadenektomija a u trbušnu šupljinu kemoterapije su provedena tijekom limfnog čvora negativnoj progresiji, također je donio pozitivan učinak na poboljšanje preživljenja od 5 godina od raka želuca [5].
Dva utvrđene načine ulaska tumorske stanice u lymprhatic sustav se invazija na postojećim limfnih kanala i indukcija limfangiogeneze [3]. Potonji se smatra kao glavni način. Osim toga, limfangiogeneze igra odlučujuću ulogu u metastazi, recidiva i prognozu u ranom stadiju raka želuca [4]. Prema tome, studije su limfangiogeneze obećavajuću utjecaj na tretman. VEGF-C i VEGF-D pozitivno povezane s čvrstog tumora limfne metastaza, limfni gustoće žila (LVD) i dubinu invazije tumora i povratak u skladu s prethodnim istraživanjima [6-8]. Osim toga, Akt /mTOR put također je uključen u regulaciju limfangiogeneze i limfne metastaze [9-11]. Dakle, odnos između Akt /mTOR put i VEGF puteva je vrijedno treba razjasniti. Prema našim saznanjima, ne postoji izvješće još naglaskom na modulaciji VEGF puta i limfangiogeneze ciljajući Akt /mTOR put u raka želuca. U ovom istraživanju, cilj nam je pokazati odnos između Akt /mTOR puteva i VEGF-C /D u raka želuca.
Metode
kliničke uzorke
Kirurški resekcija želuca adenokarcinoma uzoraka prikupljeni su od 55 bolesnika sa želučanim rak od travnja 2011. do studenog 2012. Svi su dobili nikakav radioterapijom, kemoterapijom ili imunoterapija prije operacije. Istraživanje je odobrilo Etičko povjerenstvo Prvog SRODNE bolnici Sveučilišta Nanchang, a svi sudionici dali pismeni informirani pristanak. Pregled Imunohistokem pregled Svi uzorci tkiva su fiksirani s 10% formalinu, rutinski ugrađen u parafin, izrezati na 4-um debele serijski dijela, odvošteno ksilenom, rehidracije sa gradijentom etanola i ispere s destiliranom vodom. Antigen dohvat je provedena uranjanjem dijela u antigenske dohvat pufera (0,5 M EDTA) i mikrovalnoj 20 minuta. Uzorci su potom tretirani sa 3% otopine vodikovog peroksida. Uzorci su blokirani s 5% normalnog seruma koze i inkubirani preko noći na 4 ° C s primarnim antitijelima: p-Akt (ser473) (zec, 1: 100, Cell Signaling Technology, USA), p-mTOR (ser2448) ( Zec, 1: 200, Abcam, SAD), VEGF-C (koza, 1: 400, R &D, USA), VEGF-D (miš, 01:50, Santa Cruz, USA) i D2-40 (miš, 1: 100, ZSGB-BIO, Kina). Zatim, drugo antitijelo je dodan i uzorci su inkubirani 30 minuta na sobnoj temperaturi, a zatim se razvija DAB. 5% normalnom kozjem serumu se koristi kao negativna kontrola umjesto primarnog antitijela. Imunohistokem bojanje je postigao dva neovisna patologa. Rezultati su prikazani u obliku mrlja intenziteta (+ /++ /+++) i pozitivnu stopu bojanja stanica.
Limfna gustoću krvnih žila pregled Prema Masakau kriterijima, D2-40 pozitivno bojanje (jednom endotelne stanice ili stanice klasteri) je označen kao pozitivan microlymphatic plovila. Provodni bogata područje u para-neoplastični adrese i tumora centra su definirani i 5 polja "vruće točke" su nasumično broje pod velikim povećanjem (× 400). Prosječni se broji kao LVD. Pregled preživljavanje stanica pregled tri različite doze (12,5 uM, 25 uM, 50 uM) inhibitora Akt aktivacije LY294002 (Sigma) ili inhibitor aktivacije mTOR (25 nM, 50 nM, 100 nM ) Rapamicin (Sigma) dobili su rak želuca stanična linija sGC 7901. Stopa inhibicije rasta stanica je ispitana MTT testom na 24 h, 48 h i 72 h, redom. Pregled Western blot pregled SGC-7901 stanice su homogenizirane u RIPA puferom za analizu (10 mM Tris-HCl, pH 7.4 , 150 mM NaCl, 600 mM NP-40, 1% Triton X-100, 10% glicerol, 1 mM fenilmetilsulfonil fluorida, 1 mM natrij fluorida, i 1 mM natrijev ortovanadat), te stavi na led kroz 2 sata. Koncentracija proteina u svakom uzorku određena je Bio-Rad komplet za određivanje proteina (Bio-Rad Laboratories,, Hercules, CA, USA) u skladu s uputama proizvođača. Lizati su sadržavale 50 ug proteina su razdvojeni pomoću SDS-PAGE i zatim se prenesu na nitrocelulozne membrane. Nespecifičnim reakcijama su blokirane tijekom 4 sata uz TBS-T (50 mM Tris.HCl, pH 7,4, 150 mM NaCl, 0.1% Tween 20) koji sadrži 5% nemasnog suhog mlijeka. Zatim membrane se inkubiraju preko noći na 4 ° C s primarnim antitijelima: Akt (miš, 1: 2000, Cell Signaling Technology, USA), p-Akt (ser473) (kunića, 1: 2000, Cell Signaling Technology, USA), mTOR ( Zec, 1: 1000, stanično signaliziranje Technology, SAD), p-mTOR (ser2448) (zec, 1: 3000, Abcam, SAD), VEGF-C (koza, 1: 1000, R &D, USA) i VEGF- D (miš, 1: 500, Santa Cruz, USA). Nakon ispiranja s TBS-T koji sadrži nemasnog suhog mlijeka, membrane se inkubiraju sa peroksidaza-konjugiranog sekundarnog antitijela. Proteinski mrlje su vizualizirani pomoću kemiluminiscencije ECL (Amersham). Pregled Statistička analiza nezavisnih uzoraka
T testa dvije grupe i jednog jednofaktorska analiza varijance (ANOVA) za višestruke usporedbe se koriste kada se podaci u skladu s normalnom raspodjelom i homogenost varijance. Inače, Mann-Whitney testa između dvije skupine i Kruskal-Wallis testom među multi-skupine su provedena. Spearman analiza korištena je za mjerenje korelacija mjerenja i brojati podatke. Statističke analize provedene su SPSS17.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). P-vrijednost < 0,05 smatrana je statistički značajna.

• Bursectomy i ne-bursectomy D2 gastrektomije za uznapredovali karcinom želuca, početno iskustvo iz jedne institucije u China
• Kliničkopatološkim značaj nuklearne faktora (erythroid-2) su povezane s faktor 2 (Nrf2) izraz u želučanoj cancer