Mehanizmi gastroprotection metanol ekstrakt Melastoma malabathricum ostavlja

Mehanizmi gastroprotection metanol ekstrakta Melastoma malabathricum
ostavlja pregled Sažetak pregled Pozadina pregled Melastoma malabathricum pregled L. (Melastomaceae) je mali grm s različitim ljekovitim namjene. Ova studija je provedena kako bi se utvrdilo Gastroprotektivni mehanizme metanol ekstrakta M. malabathricum
listovima (MEMM) u štakora. Pregled Metode
ekstrakta u mehanizmima gastroprotection (50, 250, 500 mg /kg) ispitivani su pomoću piloms-podvezivanja u modelu štakora, gdje volumen, pH, slobodna i ukupna kiselost želučanog soka, a želučani sadržaj zid sluzi određena. Uključenost endogenih dušikovog oksida (NO) i sulfhidril (SH) spojeva u Gastroprotektivni učinak MEMM Također je mjerena. MEMM podvrgnut je antioksidans, protuupalno i fitokemikalija analiza i HPLC profiliranje. Pregled Rezultati
MEMM sadržavala različite Phyto-sastojke s quercitrin biti identificirani kao dio njih. MEMM i quercitrin: i) značajno (p < 0,05) smanjuje volumen i kiselost želučanog soka, a povećanje pH vrijednosti i želučanog sadržaja zid sluzi .; ii) značajno (p < 0,05) povećao razinu SOD, GTP i GTR, dok značajno (p < 0,05) smanjuje razinu mačku, MPO i TBARS aktivnosti .; iii) djeluje Gastroprotektivni aktivnost kada ispitana primjenom želučanog čira testa etanol induciranu, koji se obrće pomoću N G-nitro-L-arginin metilni esteri (L-NAME, inhibitor NO sintaze) i N pregled - etilmaleinimida (NEM, sulfhidrilni (SH) blokator). MEMM inhibira lipoksigenaze (LOX) i ksantin oksidaza (XO) aktivnosti s najvećim afinitetom za bivše dok quercitrin pokazali visok afinitet za XO aktivnosti.
Zaključci pregled MEMM izložena Gastroprotektivni aktivnost zbog djelomično prisutnosti quercitrin, njegova antioksidans i protuupalno djelovanje, te putem modulacije NO i SH skupina. pregled Ključne riječi
Melastoma malabathricum pregled Melastomaceae metanol ekstrakt Gastroprotektivni mehanizme Dušikov oksid sulfidrilne grupe antioksidansima protuupalno Pozadina pregled, peptički ulkusi su čest poremećaj cijelog gastrointestinalnog trakta. Od gotovo 8 do 10% svjetske populacije pogođene čirom na želucu, oko 5% od njih pate od želučanih čireva [1]. U čir koji utječu na probavni sustav obično se pogoršava od nerazmjera između destruktivne i obrambenih čimbenika u želucu [1]. Iako smatra Složena bolest, to je općenito prihvaćeno da su gotovo svi peptički ulkusi povezani s infekcijom Helicobacter pylori Netlogu i glavni terapijski cilj je iskorijeniti H. pylori pregled infekcije. Trenutno, prva linija liječenja čira na želucu je usmjerena na iskorjenjivanje H. pylori pregled infekcije i obično se temelji na trostruki postupak liječenja, koji je uključivao upotrebu inhibitora želuca (tj histamina H 2-antagonisti, protona pumpa inhibitori ili sukralfat i bizmut) u kombinaciji s dva tipa antibiotika [2]. Međutim, činjenica da postoje razni drugi faktori osim H. pylori Netlogu koji mogu pokrenuti stvaranje čira na želucu ne treba zanemariti. [3] Različiti pristupi su korišteni za liječenje čira na želucu koji je povezan s tim ne-H. pylori pregled povezani s grupom čimbenika kao što su smanjenje lučenja kiseline i povećanje proizvodnje sluzi, ali ovi pristupi su smatrati tretman druge linije.
Unatoč njihovu učinkovitost u iskorjenjivanju H. pylori pregled, liječenje je složen i visoke cijene, uključuju upotrebu najmanje dva antibiotika u kombinaciji s inhibitorima želučane kiseline. Ova kombinacija često uzrokuje nekoliko neželjenih nuspojava (tj otpornosti na antibiotike, ponavljanje, mučnina) [2,3]. Unatoč činjenici da je H. pylori pregled infekcija postupno su se smanjili tijekom većine razvijenih zemalja, postupan porast neuspjeha H. pylori
iskorjenjivanja tretmana nalazimo i drugdje [2]. To je dodatno pogoršati udruge od onih standardnih antiulcerozni agenata s raznim neželjenim nuspojavama. S obzirom na svoje različite štetnih učinaka i pojave otpornim na antibiotike H. pylori
sojeva, potraga za novim i sigurno ne antibiotike Gastroprotektivni agenata iz prirodnih izvora, posebice biljaka, i dalje u porastu u cijelom svijetu [2, 4].
jedna od biljaka koje se koriste za liječenje želučanog čira u Maleziji je Melastoma malabathricum pregled L. (obitelj Melastomaceae). Lokalno poznat malajski kao 'Senduduk pregled ", M. malabathricum pregled nalazi se u izobilju u Indian Ocean Island, u cijeloj južnoj i jugoistočnoj Aziji, Tajvan, Kina, Južna Tihi ocean i Australija. Različiti dijelovi biljke se koriste u malajskih tradicionalne lijekove za liječenje različitih bolesti s listovima, a posebno se koriste za tretiranje želučanog ulkusa, između ostalog [5]. Znanstveno, M. malabathricum
dijelovi su izvijestili da pokazuju različite farmakološke aktivnosti [5-7]. Osim po svojim tradicionalnim uporabu kao sredstvo protiv čira, M. malabathricum pregled izabran je u ovom istraživanju temelji se na činjenici da je jedan od poznatih bilja u malajski ljekovita folklora, ali je dobio nedostatak pažnje među zajednice. Štoviše, M. malabathricum pregled objavljeno je da sadrži visok sadržaj ukupnog fenola i izvršiti visoke antioksidansa i protuupalne aktivnosti [5-7], koji su važni u mehanizmima protiv čira spojeva koji /ekstrakata. Poznato je da je čir želuca, posebice one izazivaju etanolom, povezana je s ROS generacije. Etanol se brzo prodire u sluznicu želuca, jer je u stanju da se otopi zaštitne sluznice i uzrokuje oslobađanje hidroperoksi bez radikala i superoksid aniona. Ovi slobodni radikali uzrokuju povećanje oksidativnog stresa u tkivima, što zauzvrat, povećava razinu malondialdehida, marker povećanog lipidne peroksidacije. Sve u svemu, etanol-inducirana štetan učinak može se manifestirati izravno putem generaciju reaktivnih metabolita ili neizravno putem aktivacije drugih mehanizama da konačno aktiviraju oksidativne štete [7]. Dakle, ekstrakti /spojevi s antioksidansima aktivnost igraju vrlo važnu ulogu u ispiranje one slobodne radikale i inhibiraju peroksidaciju lipida. U zamjenu za to, M. malabathricum pregled je izvijestila da vrše znatan antioksidativno djelovanje [7] i stoga se vjeruje da posjeduje djeluju protiv čira potencijal. Naše ranije prikazivanje metanol ekstrakta M. malabathricum
(MEMM) za protiv čira potencijal protiv etanol i indometacin inducirani modeli želučanog čira je prijavljena negdje drugdje. [8] MEMM je ublažavao izazvana etanolom, a pogoršalo indometacin induciran, želučani nastanak čira. Sposobnost MEMM izvršiti oba gastroprotection i protuupalno djelovanje, [5] je u suprotnosti sa onom indometacin, koji je samo djeluje protuupalno djelovanje. Ovo opažanje sugerira da ekstrakt aktivira gastroprotection putem mehanizma koji nije povezan s onim anti-upala. Štoviše, anti-upalno djelovanje MEMM bi eventualno razlikovao od onoga koji vrši indometacina. Je inhibitor oba coxs (tj COX-1 i COX-2), indometacin je selektivniji COX-1, koji je potreban za održavanje zaštitne sluznice sloj želučane [9]. Sposobnost MEMM intenzivirati nastanak čira na želucu indometacin izazvanu sugerira da MEMM također može inhibirana COX-1 akciju i ometati formiranje konstitutivnog PG koji pomažu u zaštiti želučane sluznice među ostalima. S druge strane, sposobnost MEMM da izvrši protuupalno djelovanje može biti zbog njegove sposobnosti da inhibira COX-2 ovisnog odgovora povezanog s edem šape testirati pobuđene karageninom štakora [5, 9]. Osim toga, MEMM također može funkcionirati Nasuprot aktiviranjem COX-2, što dovodi do povećanja PGE 2 sinteza, koja je prijavljena pokazuju protuupalno djelovanje vezanjem na jedan od njegovih receptora, PGE receptora 4 (EP 4) [10]. Nadalje, PGE 2 je poznato da je preteča za formiranje ciklopentenon prostaglandina (cyPG) koje ima protuupalno [11]. Osim toga, sposobnost za aktiviranje PGE 2 sintezu, što pak povećava želučane proizvodnje sluzi, može se dogoditi preko aktivacije EP 3 receptora [10]. Ovo ponovno može pomoći objasniti sposobnost MEMM da demonstriraju anti-upalno djelovanje, dok, u isto vrijeme, izvrši djeluju protiv čira protiv etanol, ali ne i indometacin induciranih modela. Unatoč tim prijedlozima, ni pokušalo se utvrditi moguće mehanizme gastroprotection od MEMM, koje bi se mogle upotrijebiti objasniti uočeni djeluju protiv čira. Pregled Uzimajući u obzir gore navedeno izvješće [8] i još izvješća od strane Huseina et al. [6], koji je procijenio djeluju protiv čira potencijal vodenog ekstrakta M. malabathricum pregled koristeći samo jedan model čira na želucu (npr izazvana etanolom model), struja istraga dizajna. Iako M. malabathricum pregled nikad nije bio korišten u liječenju H. pylori pregled, infekcije, koji je podržan od strane njegovog lošeg antibakterijsko djelovanje [12,13], tradicionalnog korištenja postrojenja za liječenje čira na želucu opravdano istraživanje prisutnost u nadi pronalaska alternativnog /prirodni Gastroprotektivni sredstva kao zamjena za trenutno dostupnih popratnih lijekova efekt-baring se koriste u liječenju druge linije. Uzimajući tu činjenicu u obzir, je istraživanje imalo za istraživanje o mogućim mehanizmima gastroprotection od MEMM pomoću raznih štakora modele.
Metode pregled Kemikalije
kemikalije koje se koriste u ovom istraživanju su analitičkih ocjenama te su bili pripremljeni neposredno prije upotrebe. Korišteni su sljedeći lijekovi: ranitidin (Sigma Aldrich, SAD), quercitrin (Sigma Aldrich, SAD), apsolutnim etanolom (Fischer Scientific, USA), N-etilmaleinimida (NEM) (Sigma-Aldrich, SAD), N G nitro-L-arginin metilni esteri (L-NAME) (Sigma-Aldrich, USA) karbenoksolona (CBX) (Sigma-Aldrich, USA) i dietil etera (Fischer Scientific, USA). pregled biljnih materijala prikupljanje i priprema od MEMM
lišća M. malabathricum pregled prikupljeni su između kolovoza i rujna 2010. godine od Serdangu, Selangor, Malezija, a prepoznaje se po botaničar iz Instituta biomedicine (IBS), Universiti Putra Malaysia (UPM), Serdang, Selangor, Malezija. Bon primjerak, ACP-0017, je pohranjena u herbarij od IBS, UPM, Malezija. Osnovna osušeni listovi (40 g) su natopljeni tri puta pri sobnoj temperaturi 24 h metanolom u omjeru 1:20 (w /v), a metanol supernatant je uparen (40 ° C) pod smanjenim tlakom do suhog rezultira prinos od 12,8 g osuši i ljepljiva ekstrakt metanola (udio dobiveno je ≈ 32%). pregled phytochemical screening i HPLC analiza MEMM
phytochemical screening i HPLC analiza MEMM provedena je u skladu s prethodno objavljenom metodom [ ,,,0],7]. Fitokemikalija probir MEMM je provedeno kako bi se utvrdilo prisustvo flavonoidi, triterpeni, tanini, alkaloidi i saponina u skladu s uobičajenim protokolima kao što je opisano below.i) Flavonoidi
Približno 10,0 g MEMM je posebno kuhana 2 do 3 minute, u 100 ml vode u vodenoj kupelji. U 3 ml filtrata se 3 ml kiselina-alkohola (etanol: voda: koncentrirana klorovodična kiselina u omjeru 1: 1: 1), krutu tvar magnezij (1 cm) i 1 ml t-amil-alkohola se doda. Mješavine su promatrani u roze-narančasta ili krše boja change.ii) triterpeni
Približno 1,0 g MEMM odvojeno ekstrahira 24 sata u eteru. 1 ml filtrata se upari do suha i ostatak je otopljen u nekoliko kapi anhidrida octene kiseline i zatim nekoliko kapi sumporne kiseline doda se u otopinu. Smjese su zatim promatrani u zelenoj boji change.iii) tanini
Približno 0,2 g MEMM odvojeno se prokuha u 5 ml vode. Mješavina se ohladi i filtrira. Nekoliko kapi (3 kapi) 5% željeznog otopine klorida doda se u filtrat, te je praćen plavo-crna taloga formation.iv) Alkaloids
Približno 0.5 g MEMM odvojeno se prokuha s 10 ml razrijeđene solne kiseline (alkoholnim) u epruveti 5 min. Smjese se ohladi i krhotine se ostavi da se slegne. Svaki od supernatanta tekućina se filtrira u drugu epruvetu i 1 ml svakog filtrata je preneseno u koju se doda tri kapi Dragendorffovovim reagensom (kalij bizmut jodid otopina), tresena i promatraju za pojavu narančasto-crvene mjesto i taloga formation.v) Saponini
Približno 0,2 g MEMM mućka s vodom i smjesa se promatraju uporni pjene.
HPLC analiza MEMM izvede se u skladu s prethodno izvješće [4 ] ali uz male modifikacije. Ukratko, MEMM (10 mg) suspendira se u 1 ml metanola. Otopina se propusti kroz filter cartridge (veličina pora 0,45 um) prije analize. Filtrirani uzorak je analiziran pomoću HPLC sustav koji se sastoji od Waters Delta 600 s 600 kontrolora, Photodiode Array detektorom (Waters 996). I Phenomenex Luna (5 pm) (Torrance, CA, USA) kolona (i.d. 4.6 mm x 250 mm). Dva otapala označeni kao A i B su korišteni za ispiranje sastavnica. A je bila 0,1% vodena otopina mravlje kiseline i B je bio acetonitril. Početni uvjeti su bili 95% A i 5% B s linearnim gradijentom od 25% B dosežu pri t = 12 min pregled a to stanje se održava kroz 8 minuta. B je reduciran nazad do 15% u t = 22 min
i održava na toj stanja za još 8 min (t = 30 minuta
). U t = 35 min
, program se vratio na početni sastav otapala. Brzina protoka je korišten bio je 1,0 ml /min, volumen ubrizgavanja je 10 ul. Kolona pećnice bila je postavljena na 27 ° C i ispiranje je praćena na 210, 254, 280, 300, 330 i 366 nm. analiziran je vremena retencije, površine pikova i UV spektra od glavnih vrhova. Za HPLC analiza provedena je u laboratoriju phytomedicine, Ljekovito bilje Division, Forest Research Institute Malezije (FRIM), Kepong Malezija pregled eksperimentalnih životinja
Muški Sprague Dawley (180-200 g;. 8-10 tjedana stari) su dobiveni iz životinja Jedinice za veterinarstvo, Veterinarski fakultet, Universiti Putra Malaysia (UPM), Maleziji i čuva pri sobnoj temperaturi (27 ± 2 ° C; 70-80% vlažnosti, 12 h svjetlo /tama ciklus) u holding jedinica životinja, Medicinski fakultet i zdravstva, UPM. Su opskrbljeni hranom i vodom ad libitum
od početka pokusa. Studija protokol ovog istraživanja je odobren od strane Animal House i korištenja odbora Medicinskog fakulteta i zdravstva, UPM (Etičko odobrenje br: UPM /FPSK /jastučići /BR-UUH /00.449). Štakori su postupati u skladu s važećim UPM smjernicama za skrb o laboratorijskim životinjama i etičke smjernice za istraživanja eksperimentalnog bol u svjesnim životinjama [14]. Svi pokusi su provedeni između 09.30 i 18.30 sati kako bi se smanjili efekti promjena u okolišu. Post je primijenjen 48 sati prije svih testova gdje je štakorima omogućen pristup samo vodu.
Određivanje mogućih mehanizama gastroprotection od MEMM pregled pylorus podvezivanja inducirane ulceracija pregled pylorus ligaciju se provodi u skladu s metoda po Shay et al. [15] uz male modifikacije. Trideset štakori nasumično su podijeljeni u 5 skupina, (n = 6). Grupe I (kontrola), tretirani sa nosačem (10% DMSO), grupe II (pozitivna kontrola, ranitidin), daje se 100 mg /kg (po), grupe III -IV i-V, štakori u tretirani MEMM (50, 250 i 500 mg /kg, redom). Pilorus ligaciju je provedena 1 sat nakon primjene ispitivanih spojeva na 48 sata bile na dijeti štakora. Ketamin HCl (100 mg /kg, intramuskularno) i ksilazina HCl (16 mg /kg, intramuskularno) korišteni su za anesteziju štakora prije ligacije pylorus. A 2 cm dugi rez je napravljen u trbuhu odmah ispod prsne kosti na anesteziranih štakora. Želudac je bio izložen, a nit je prošlo oko pyloric sfinktera i vezan u uskoj čvor. Njega je snimljena dok je vezanje čvor kako bi se izbjeglo uključuju krvne žile u čvor. Abdomen je zašivena, a koža je očišćena od bilo kakvih krvnih mrlja ili krvarenja. Životinje su žrtvovane 6 sati nakon podvezivanja cervikalnom dislokacijom. Pregled Određivanje obujma, pH, slobodne i ukupne kiselosti želučanog sadržaja
želudaca su uklonjene, a sadržaj se iscijedi, prikupljaju i centrifugira na 2500 okretaja u minuti 10 min. Volumen i pH želučanog soka je izmjerena, te je izložen slobodnog i ukupnog procjeni kiselosti u skladu s postupkom koji su opisali Srivastava i sur. [16]. Slobodna kiselost je određena titracijom sa 0.01 N natrij hidroksidom (NaOH) s metil narančasto reagensom sve dok boja otopine postala žućkast. Volumen lužine dodao je zabilježeno. Zatim se doda dvije do tri kapi fenolftaleinom i otopina se titrira se pojavi definitivno ružičaste boje. Ukupni volumen NaOH je napomenuti i to odgovara ukupnoj kiselosti. Kiselost je izračunata pomoću sljedeće formule: $$ \\ mathrm {kiselosti} = \\ frac {\\ mathrm {Volume} \\ kern0.5em \\ mathrm {od} \\ kern0.5em \\ mathrm {NaOH} \\ puta \\ mathrm {normalnost} \\ kern0.5em \\ mathrm {od} \\ kern0.5em \\ mathrm {NaOH} \\ puta 100} {0,1} \\ mathrm {m} \\ mathrm {e} \\ mathrm {q} /1 $$ Procjena želučanog sadržaja zid sluzi
želučanog sadržaja sluzi zid određena je postupkom koji su opisali Corne et al. [17] uz male modifikacije. Želudac se otvoreni uzduž veće zakrivljenosti, izvagane i uroni se u 10 ml 0,1% Alcian blue u 0,16 M sukroze /0.05 M natrijevog acetata, pH 5,8 tijekom 2 sata. Prekomjerna boja zatim ukloni dva uzastopna ispiranja u 0,25 M otopine saharoze (15 min svaki put). Preostali boju kompleksiranu sa želučanim sluz se ekstrahira s 0,5 M MgCl 2 tijekom 2 sata i trešena s prekidima tijekom 1 min svakih 30 min intervalima. Plavu ekstrakt zatim se snažno protrese s jednakim volumenom dietil etera i dobivena emulzija je centrifugirana na 3600 rpm tijekom 10 min. Apsorbancija (OD) Alcian blue u vodenom sloju je očitana na 580 nm korištenjem spektrofotometra. Količina Alcian blue izdvajanje po gramu vlažnom želuca se zatim izračunava iz standardne krivulje.
Izazvana etanolom lezija želučane sluznice u L-NAME predtretirane štakore pregled Uključenost endogenog NO u modulaciji etanola induciranu Gastroprotektivni aktivnost je određena u skladu s metodom Andreo et al. [18], ali uz male modifikacije. Muški štakori su nasumično podijeljeni u dvanaest skupina (n = 6), postile 24 sati, ali je slobodan pristup vodi. Zatim su predtretirani s otopinom soli ili L-NAME (70 mg /kg, inhibitor NO sintaze) intraperitonealno (ip) i 30 minuta kasnije životinje su primile vehikl (10% DMSO), 100 mg /kg CBX (pozitivni kontrolna skupina) ili 500 mg /kg MEMM (po). Jedan sat nakon primjene test otopine, želuca je inducirana sa 5 mL /kg apsolutnog etanola u svim skupinama. S druge strane, L-Arginin (200 mg /kg) je primijenjen 30 minuta nakon fiziološke otopine ili L-NAME liječenja i, nakon čega slijedi nakon 30 min je etanol davanje. Svi štakori su žrtvovani 1 sata kasnije izlaganjem dietil etera. Želudac se otvoreni uzduž veće zakrivljenosti da se utvrdi površinu ulkus (UA) kako su opisali Balan et al. [19]. Postotak zaštite izračunat je pomoću sljedeće formule: $$ \\ mathrm {Zaštita} \\ lijevo (\\% \\ D) = \\ frac {\\ lijevo (\\ mathrm {U} \\ mathrm {A} \\ \\ mathrm {naredbe} \\ hbox {-} \\ mathrm {U} \\ mathrm {A} \\ \\ mathrm {p} \\ mathrm {r} \\ mathrm {e} \\ hbox {-} \\ mathrm {tretiraju} \\ \\ mathrm {skupinu} \\ D)} {\\ lijevo (\\ mathrm {u} \\ mathrm {A} \\ \\ mathrm {naredbe} \\ D)} \\ 100 prethodno obrađen puta \\% $$ etanol-inducirana lezija želučane sluznice u NEM štakora
istražiti uključenost sulfhidrilnih (SH) skupinu u modulaciji aktivnosti Gastroprotektivni etanolom inducirana, postupci su opisali Andreo et al. [18] usvojene su uz male modifikacije. Štakori su nasumce podijeljeni u skupine (12 n = 6), postile 24 sati, ali je slobodan pristup vodi. Pokus je započeo s predobradom (LP) slane otopine ili NEM (10 mg /kg), a sulfidrilne (SH-) blocker. Trideset minuta nakon puka predobrade, štakori se da (po) sa nosačem (10% DMSO), 100 mg /kg CBX (pozitivna kontrolna skupina) ili 500 mg /kg MEMM slijedi davanjem 5 ml /kg etanola sat vremena kasnije izazvati želučane čireve. Sve životinje su žrtvovane 1 h primio etanola izlaganjem dietil etera. Želudac je uklonjena i želuca šteta je određena kao pregled, što je gore opisano. Biokemijske analize želučanog tkiva
Nakon makroskopska analiza, superoksid dismutaza (SOD) [20], katalaze (MAČKA) [21], mijclopcroksidazc (MPO) [22], glutation peroksidaze (GTP) [23], glutation reduktaze (GTR) [24] i thiobarbituric kiselina reaktivne tvari (TBARS) mjerene su [25] enzimske aktivnosti u želucu tkivima štakora. Sluznicu želuca Sadržaj se skine sa antralnog dijela želuca upotrebom scrapper i pohranjeni na 4 ° C tijekom biokemijskih procjenu. Otpisan želučanoj sluznici podvrgnut pripremiti sluznice homogenata (pH 7.2). Homogenat se potom centrifugira na 3000 okretaja u minuti tijekom 10 minuta, a supernatant je dobivena korištena za analizu antioksidativni tipa na etanol inducirano oštećenje želuca sluznice. U svim pokusima antioksidativnu obranu, ranitidin (100 mg /kg) -pretreated skupina je smatrana pozitivne kontrolne skupine. Pregled Određivanje aktivnosti SOD
aktivnosti SOD određena je baziran na inhibiciji formiranja nikotinamid adenin dinukleotid, fenazin meto-sulfata i amino plava tetrazolij formazan [20]. Približno 0,5 ml homogenata tkiva pomiješa se s 0,4 ml etanola i kloroform i centrifugira. Supernatantu, pokusna smjesa (natrijev pirofosfat pufera (0,025 M, pH 8,3), tetrazolija, fenazin metosulfat i smanjene nikotinamid adenin dinukleotid (NADH)) se doda i inkubira na 30 ° C tijekom 90 s. Reakcija uhićen dodatkom ledene octene kiseline i pomiješa se s n-butanola
. Intenzitet se boja nije razvila u butanolu je mjerena na 560 nm. SOD aktivnost mjerena je prema stupnju inhibicije ove reakcije, a izražava se kao milimol /min /mg proteina. Pregled Određivanje djelovanja CAT
aktivnost CAT je analiziran kolorimetrijski na 620 nm kao što je opisano po metodi Sinha [21]. Reakcijska smjesa 1,5 ml koja sadrži 1,0 ml fosfatnog pufera (0,01 M, pH 7,0), 0,4 ml 2,0 M H 2O 2 i 1,0 ml tkiva homogenata. Reakcija je zaustavljena dodatkom 2,0 ml reagensa kiseline dikromata octene (5% kalijeva dikromata i ledene octene kiseline i u omjeru 1: 3). Rezultati su izraženi kao milimol /min /mg proteina. Pregled Određivanje aktivnost MPO
aktivnost MPO izmjerena je prema metodi opisanoj od Bradley et al. [22], ali uz male modifikacije. Homogenizirana Uzorci su zamrznuti i odmrznuti tri puta i centrifugiran na 1500 g 10 min na 40 ° C. Približno 100 ul homogenizirane supernatanta doda se 1,9 ml 10 mmol /L fosfatnog pufera (pH 6,0) i 1,0 ml od 1,5 mmol /LO-dianisidine hidroklorid sadrži 0.0005% (w /v) 'H sub> 2O 2. Apsorbancija je procijenjena na 450 nm na UV spektrofotometra i aktivnost MPO u želučanom tkivu je izražena kao μmoles /min /mg proteina. Pregled Određivanje aktivnosti GTP pregled Aktivnost GTP mjerena je metodom koju su opisali Rotruck et al. [23] uz male modifikacije. Reakcijska smjesa, koja je sadržavala 0.2 ml 0.4 M, Tris - HCl, pH 7,0, 0,1 ml 10 mM natrijevog azida, 0,2 ml homogenata tkiva (homogenizirane tkiva u 0,4 M Tris-HCl puferu, pH 7,0), 0,2 ml glutation i 0.1 ml 0,2 mM vodikovog peroksida se zatim inkubiraju na sobnoj temperaturi 10 min. Reakcija uhićen dodatkom 0,4 ml 10% TCA i podvrgavanja postupku centrifugiranja. Supernatant se analizira na sadržaj glutation upotrebom Ellmans reagensa (19,8 mg 5, 5'-dithiobisnitro benzojeve kiseline (DTNB) u 100 ml 0,1% -tne otopine natrijevog nitrata). Molarnom ekstincijskom koeficijentu u 6,22 × 103 umol je korištena za određivanje aktivnosti GTP. Aktivnost enzima prikazana je kao međunarodnih jedinica enzimske aktivnosti /g proteina. Internacionalne jedinice izražene su kao μmoles hidroperokside transformiranih /min /ml enzima.
Određivanje aktivnosti GTR pregled Razina GTR određena je metodom Ellman [24]. Approximately1.0 ml supernatanta se pomiješa s 0,5 ml Ellmans reagensom (19,8 mg 5, 5'-dithiobisnitro benzojeve kiseline (DTNB) u 100 ml 0,1% -tne otopine natrijevog nitrata) i 3.0 ml fosfatnog pufera (0.2 M, pH 8.0 ). Apsorbancija je očitana na 412 nm, a GTR aktivnost izražena je kao μmoles /min /mg tkiva. Pregled Određivanje sadržaja TBARSa
opsegu LPO je mjerena analizom razine TBARS u sluznici želuca u skladu s prethodna metoda [25], ali uz manje modifikacije. Do 0.5 ml homogenata tkiva, 1,5 ml 20% octene kiseline, 0,2 ml SDS i 1,5 ml TBA je dodano. Smjesa je sastavljena od 4 ml s destiliranom vodom i grije 1 sat pri 95 ° C. Nakon hlađenja, dodano je 4.0 ml butanola-piridin smjesu i dobro promućka. Ova smjesa je zatim centrifugirana na 4000 rpm tijekom 10 min. Organski sloj se uzme i njegova apsorbancija je očitana na 532 nm, a rezultati su izraženi kao n mol /g proteina.
Procjena proteina pregled Sadržaj proteina u želučanom tkivu procijenjena je prema metodi po Lowry et al. [26], ali uz male modifikacije. Uzorak tkiva i standarda (1.0 mg /ml goveđeg serumskog albumina na pomoćnom destiliranoj vodi) u različitim cijevi pomiješa se s 5,0 ml reakcijske smjese (48% natrij kalij tartarata, 2% bakrenog sulfata i 3% natrij karbonata u 1:48 (v /v)). Zatim Folin fenol reagensa (1: 2) se doda u reakcijsku smjesu i ostavi stajati 30 minuta na sobnoj temperaturi. Optička gustoća je očitana na 710 nm uz korištenje vode kao prazan reagens. Pregled In vitro anti-upalno djelovanje MEMM pregled in vitro učinka MEMM na dušičnog oksida
kulture stanica i stimulaciju
RAW 264.7 stanična linija (mišje monocitne makrofazi) (European Collection of cell Cultures, Porton Down, UK) je došlo u DMEM uz dodatak 10% FBS, 4.5 g /L glukoze, L-glutamina (2 mM), natrijevog piruvata (1 mM), penicilin (50 u /ml) i streptomicin (50 ug /ml) i 5% CO 2 na 37 ° C. Stanice (4 × 10 5 stanica /bunariću) su zasijane u 96 jažica i inkubirane 2 sata na 37 ° C u CO 2 inkubator kako bi se omogućilo vezanje stanica, a zatim se aktiviraju s stimulansi (100 u /ml IFN-g i 5 ug /mL LPS) sa ili bez prisutnosti MEMM u koncentraciji u rasponu od 12,5 do 100 ug /ml. DMSO (nositelj) se koristi kako bi se otopio MEMM. Konačna koncentracija DMSO je osigurano da je 0,1% u svim kulturama. Stanice su zatim inkubirane 17-20 sata pri 37 ° C u CO 2 inkubator. NO određivanje je provedena podvrgavanjem kulturan supernatant prema testu Griess i stanice ostaju u jažice su testirane stanične vijabilnosti testu
nitrit određivanje pregled Koncentracija nitrita (NO 2 . - ), stabilan metabolit NO u mediju za kulturu, određena je primjenom Griess testa [27]. Jednaki volumen Griess reagensom se pomiješa s supernatantu kulture i razvoj boje je mjerena na 550 nm. Količina nitrita u supernatantu kulture određena je na temelju standardne krivulje natrijevog nitrita (0-100

• Nova metoda, digitalno skeniranje genom otkriva KRAS gena pojačanje u želučanog karcinoma: Uključenost prekomjerno izražen divljeg tipa Kraš u nizvodnom signalizacije i stanica raka growth
• Genomska Profil Analiza difuzni tipa želučane cancers