caractéristiques clinicopathologiques et les rôles pronostiques de KRAS, BRAF, PIK3CA et NRAS mutations dans le cancer gastrique avancé

caractéristiques clinicopathologiques et les rôles pronostiques de KRAS, BRAF, PIK3CA et NRAS mutations dans le cancer gastrique avancé
Résumé de l'arrière-plan
RAS-RAF-MEK-ERK et PI3K-AKT forment une cascade importante pour la thérapie potentielle cible moléculaire dans le cancer avancé. La signification clinique de mutations dans ces gènes dans le cancer gastrique avancé (AGC) est incertain.
Méthodes
Nous avons recueilli formaline fixé, des échantillons tumoraux congelés paraffine et fraîches provenant de patients AGC et analysé les KRAS, NRAS, BRAF
et PIK3CA de les mutations par séquençage direct. Nous avons rétrospectivement ont étudié les caractéristiques clinico de ces mutations chez les patients AGC, et certains patients atteints de cancer gastrique métastatique.: Résultats
Parmi 167 patients AGC, les mutations de KRAS de les codons 12/13 (N = 8
/164, 4,9%), (N PIK3CA
= 9/163, 5,5%), et NRAS
codon 12/13 (N
= 3/159, 1,9%) ont été détectés. La comparaison des caractéristiques clinico des mutées KRAS, PIK3CA, NRAS
gènes avec un type tout-sauvage de ces gènes a montré que la fréquence du type intestinal était significativement plus élevée chez les patients dont le tissu tumoral contenu KRAS de les mutations (P
= 0,014). Parmi 125 patients atteints de cancer gastrique métastatique, les patients atteints de NRAS
codon 12/13 mutations dans leurs tumeurs avaient la survie globale plus courte par rapport à NRAS
patients de type sauvage (MST: 14,7 vs 8,8 mois, p = 0,011
). En analyse multivariée, NRAS
codon 12/13 mutation était un indicateur de mauvais pronostic chez les patients atteints de cancer gastrique métastatique (HR ajusté 5,607, IC à 95%: 1,637 à 19,203). Des Conclusions
Notre étude a révélé que mutations de KRAS, PIK3CA
et NRAS
étaient rares dans AGC. NRAS de les mutations étaient susceptibles d'associer à un mauvais pronostic dans l'état métastatique des patients AGC, mais en outre la validation d'autres recherches sont nécessaires.
Contexte
Le cancer gastrique est la deuxième cause de décès par cancer dans le monde avec environ 989.600 nouveaux cas et 738.000 décès par an, soit environ 8 pour cent des nouveaux cancers [1]. Les taux d'incidence les plus élevés sont en Asie orientale, les régions andines de l'Amérique du Sud, et en Europe orientale, tandis que les taux les plus bas sont en Amérique du Nord, Europe du Nord, et la plupart des pays en Afrique et en Asie du Sud-Est.
Grâce au développement de la systémique la chimiothérapie, le temps de survie pour le cancer gastrique avancé (AGC) a été améliorée au cours de la dernière décennie. Un fluoropyrimidine et le platine régime est une chimiothérapie standard de première ligne dans le cancer gastrique métastatique (MGC) patientes HER2-négatif et trastuzumab ajouté à XP est une chimiothérapie standard chez les patients MGC HER2-positif au Japon [2-5]. Bien que certains patients AGC obtenu un bénéfice clinique de la chimiothérapie systémique, la plupart des patients n'a pas atteint un résultat clinique satisfaisant. nouveau traitement du MGC avec des traitements plus efficaces et moins toxiques chimiothérapie était nécessaire. III des essais cliniques de thérapie moléculaire avec un inhibiteur de mTOR, anticorps anti-VEGF
phase, les anticorps anti-EGFR ont été rapportés chez AGC ou un cancer gastro-oesophagien, mais ces médicaments n'a pas pu être démontré avoir une efficacité significative [6, 7]. Récemment, ramcirumab, anti-VEGFR anticorps monoclonal cible, a été signalé pour améliorer la survie chez les patients réfractaires à la chimiothérapie MGC. Ce serait un avantage thérapeutique important pour identifier des biomarqueurs efficaces afin de faire correspondre les cellules cancéreuses sensibles à la drogue moléculaire cible appropriée et d'élucider d'autres mécanismes associés à la résistance à la chimiothérapie.
La protéine kinase activée par un mitogene (MAPK) fait partie d'une voie de signalisation intracellulaire important qui régule diverses fonctions cellulaires, y compris la prolifération cellulaire, la régulation du cycle cellulaire, la survie cellulaire, l'angiogenèse et la migration cellulaire [8]. Les protéines Ras ont été initialement identifiés en tant que composants de transformation des virus oncogènes, alors que les ARN
a été identifié comme étant la composante de transformation d'un neuroblastome. Ras mutations se trouvent dans jusqu'à 30% de tous les cancers et sont particulièrement fréquents dans les cancers du pancréas et du côlon. Raf est recruté à la membrane cellulaire en se liant à Ras est activée dans un processus complexe impliquant la phosphorylation et plusieurs cofacteurs. BRAF de les mutations ont une distribution étroite, mais sont répandues dans quelques tumeurs malignes spécifiques tels que le mélanome, le cancer papillaire de la thyroïde, et de bas grade cancer de l'ovaire [9-11]. L'importance de la phosphoinositide 3-kinase (PI3K) dans le cancer a été confirmé par la découverte que le gène de la PIK3CA, codant pour la sous-unité catalytique p110 de PI3K est fréquemment muté dans certaines tumeurs humaines les plus courants [12]. Ces altérations génétiques de PIK3CA
sont composées exclusivement de mutations faux-sens somatiques regroupés dans deux "hotspot" régions exons 9 et 20, correspondant aux hélicoïdaux et kinases domaines de p110, respectivement [13].
Récemment, l'utilisation de KRAS
, BRAF
, PIK3CA
et NRAS
en tant que biomarqueurs pour la thérapie de cible moléculaire dans les tumeurs solides a été largement discuté. Plusieurs analyses de biomarqueurs à petite échelle de KRAS
, BRAF
et PIK3CA de les mutations ont été signalés précédemment dans AGC [14-16]. La signification clinique de ces mutations chez les patients AGC est pas déjà précisé, et d'autres enquêtes de ces changements moléculaires intracellulaires sont nécessaires.
Dans la présente étude, nous avons effectué une analyse génomique de KRAS
, BRAF
, PIK3CA Méthodes
et NRAS
mutations afin d'étudier les caractéristiques clinico et le rôle pronostique des mutations génétiques chez les patients AGC.
patients et échantillons collection
Toutes les données ont été extraites de la base de données de notre département, et le graphique examen a été effectué pour chaque patient afin d'obtenir des informations importantes. Nous avons recueilli des échantillons de tissus pour l'analyse de l'état de mutation du gène KRAS de, BRAF, PIK3CA
et NRAS
. Des échantillons de tissus ont consisté d'échantillons utilisés dans la recherche de biomarqueurs précédente dans notre institution [2, 17] et des échantillons de tissus congelés frais, qui ont été obtenus à partir de résections chirurgicales antérieures d'AGC dans notre institution. Des échantillons de tissu tumoral de 173 patients AGC ont été recueillies, mais les échantillons insuffisants à partir de 6 patients ont été exclus. Enfin, nous avons utilisé 167 échantillons de tissus provenant de patients AGC et étudié les mutations du gène KRAS de
, BRAF
, PIK3CA
et NRAS
par la méthode directe de séquençage (cohorte entière). Parmi 167 patients AGC, 42 patients ont subi une résection chirurgicale sans chimiothérapie systémique (cohorte non métastatique dans le groupe A) et 125 patients atteints de cancer gastrique métastatique reçu une chimiothérapie systémique (cohorte métastatique dans le groupe B). Un diagramme de la présente étude est illustrée à la figure 1. Le consentement éclairé d'utiliser les tissus tumoraux de patients a été confirmée de tous les patients qui ont participé à l'étude, qui a été réalisée avec l'approbation du conseil d'administration du Centre national du cancer éthique Institutional Review en conformément à la déclaration d'Helsinki de 1975 (révisée en 1983). Figure 1 Schéma de cette étude.
Genomic analyse du gène KRAS, BRAF, PIK3CA et les échantillons d'ADN de NRAS ont été extraites, des sections de tissus tumoraux fixés au formol paraffine (FFPE) et frais congelés. zones riches de cellules tumorales dans la section hématoxyline et l'éosine ont été marquées au microscope, et le tissu a été rayé de la zone d'une autre section unstained déparaffinées. L'ADN à partir des morceaux de l'échantillon de tissu gratté a été isolé en utilisant le kit QIAamp DNA Tissue FFPE (QIAGEN KK, Tokyo, Japon). Exons 2 (codon 12, 13), l'exon 3 (codon 61), l'exon 4 (codon 146) du gène KRAS et de l'exon 15 (codon 600) et du gène de l'exon 9 du gène BRAF (codon 542, 545) , l'exon 20 (codon 1047) du gène PIK3CA et de l'exon 2 (codon 12, 13), l'exon 3 (codon 61) du gène de NRAS ont été amplifiés par PCR (le thermocycleur GeneAmp PCR System 9700). Les produits de PCR ont été visualisés par électrophorèse sur gel d'agarose avec du bromure d'éthidium et directement séquences en utilisant un ABI 3130X /Genetic Analyzer (Life Technologies Japan (Applied Biosystems), Tokyo, Japon) selon les instructions du fabricant.
Traitement
A au total, 125 patients du groupe B ont reçu une chimiothérapie systémique. Schémas de chimiothérapie de première ligne se composait de CP (n = 42, 33,6%), S-1 (n = 39, 31,2%), le 5-FU (n = 10, 24,0%), une combinaison de 5-FU et le methotrexate (n = 10, 8,0%), paclitaxel (n = 3, 2,4%) et XP et /ou le bévacizumab (n = 1, 0,8%). les principaux médicaments anti-cancéreux pour l'AGC au Japon sont fluoropyrimidine (5-FU, le S-1, la capécitabine), le cisplatine, l'irinotécan et le taxane. Pendant toute la durée de la chimiothérapie systémique dans le groupe B, les proportions de patients recevant 5-FU, le cisplatine, l'irinotécan et de taxanes étaient 85,6% (n = 107/125), 52,8% (n = 66/125), 60,8% (n = 76/125), 36,0% (n = 45/125), respectivement. En outre, 22 patients (17,6%) ont reçu tous les médicaments clés anti-cancer, 37 patients (29,6%) ont reçu 3 des principaux médicaments, 30 patients (24,0%) ont reçu 2 des médicaments clés, et 36 patients (28,8%) reçu que l'un des principaux médicaments anticancéreux. Les horaires et les doses de CP, S-1 et 5-FU étaient fondées sur les rapports précédents [17]. Paclitaxel en monothérapie a été répétée trois fois par semaine pendant 4 semaines et le docétaxel en monothérapie a été administré par perfusion intraveineuse analyse statistique de toutes les 3 semaines.
Nous avons évalué la proportion de chaque KRAS
, BRAF
, PIK3CA
et NRAS
mutation dans la cohorte entière et les valeurs pronostiques de ces mutations, qui ont été ajustées des variables des caractéristiques des patients en termes de survie globale (OS) dans le groupe B. métastatique OS a été défini comme étant l'intervalle entre l'initiation de la chimiothérapie de première ligne à la mort ou le dernier suivi.
Nous avons effectué des analyses statistiques par le logiciel statistique SPSS version 19 (IBM, Tokyo, Japon). Les différences dans la distribution des variables ont été évaluées en utilisant le test exact de Fisher ou le test du chi-carré, selon le cas. La durée médiane de survie (MST) a été estimée par la méthode et la survie des courbes de Kaplan-Meier ont été comparées par le test du log-rank. Tous les tests étaient bilatéraux et une valeur de p < 0,05 a été définie comme statistiquement significative. Nous avons estimé hazard ratio (HR) et l'intervalle de confiance à 95% correspondant (CI) pour OS en utilisant univariée et multivariée analyses par les modèles de risque de proportion Cox. Variables dans cette analyse comprenaient l'âge (≥median /< médiane), le sexe (masculin /féminin), ECOG PS (0 /1-2), le type histologique de la classification Lauren (de type intestinal /type diffus), le nombre de sites métastatiques ( Résultats de simples /multiples).
séquençage direct d'échantillons de tissus dans le groupe B déterminé la proportion de chacun des KRAS
, BRAF
, PIK3CA
et NRAS
(tableau 1). Les mutations de KRAS
codon 12 (3,7%, n = 6/164) et KRAS
codon 13 (1,2%, n = 2/164), exon 9 (4,9% de PIK3CA, n = 8 /163), PIK3CA
exon 20 (0,6%, n = 1/163) et les ARN
mutations (1,9%, n = 3/159) ont été détectés. D'autre part, des mutations dans le gène KRAS
codons 61, KRAS
codon 146, BRAF V600E de la, et NRAS
codon 146 ne sont pas détectés. KRAS
codon 12 mutations comprenaient G12D (35G > A, n = 4), G12S (34G > A; n = 1) et G12N (34 35GG > AA; n = 1), et le codon 13 mutations Composée de G13S (37G > A; n = 1) et G13V (38 39GC > TT; n = 1). 'exon 9 mutations de PIK3CA consistaient E542K (1624G > A; n = 2), E545K (1633G > A; n = 5) et E545D (1635G > C; n = 1), et l'exon 20 mutations se composait de H1047R (3140A > G; n = 1). Les ARN des mutations comprenaient G12S (34G > A; n = 1) et G13S (37G > A; n = 1). Il y avait 70 patients dont le tissu tumoral contenus types tout-sauvages de KRAS (le exon2, 3, 4), (l'exon 15) de BRAF, (exon9, 20)
PIK3CA et NRAS
(exon2 , 3). Parmi les patients dont la tumeur AGC tissu contenu des mutations génétiques, des mutations multiples de KRAS
codons 13, PIK3CA
codon 545 et NRAS
codon 12 ont été détectés dans un seul case.Table 1 Résultats de mutations du gène KRAS de, BRAF, PIK3CA et NRAS chez les patients d'AGC Gene les mutations
Proportion (%)
échantillons d'ADN insuffisant
KRAS codon 12
6/164 (3,7)
3/167
KRAS codon 13
2/164 (1,2)
3/167
KRAS codon 61
0/131 (0,0)
36/167
KRAS codon 146
0/137 (0,0)
30/167
BRAF V600E
0/136 (0,0)
31/167
PIK3CA exon 9
8 /163 (4.9)
4/167
PIK3CA exon 20
1/163 (0,6)
4/167
NRAS codon 12
1/159 (0,6)
8 /167
NRAS codon 13
2/159 (1,3)
8/167
NRAS codon 61
0/135 (0,0)
32/167
Les caractéristiques clinico de chaque mutation du gène par rapport au type tout-sauvage sont résumés dans le tableau 2. l'âge médian des patients dont le tissu tumoral contenait des mutations de KRAS
, PIK3CA
et NRAS
(54,5, 58,0 et 56,0 ans, respectivement) étaient inférieurs à celui des patients contenant des types tout-sauvages de KRAS, BRAF, PIK3CA
et NRAS
(âge médian, 64,0 ans).
Il n'y avait pas de différence significative, sauf pour le type histologique, entre variables des caractéristiques clinico tels que le sexe, l'âge, ECOG PS et le nombre de sites métastatiques. Comparativement aux patients de type tout-sauvages, les proportions de type intestinal étaient plus élevés chez les patients atteints codon 12/13 la mutation de KRAS (p = 0,014). Le type histologique de la tumeur chez tous les patients dont le tissu tumoral contenait des ARN des mutations était le type diffus de adenocarcinoma.Table 2 Comparaison des caractéristiques clinocopathological selon le statut des mutations du gène par rapport à tout type sauvage chez les patients avec
AGC patients Tout type sauvage KRAS

codon 12/13
PIK3CA
exon 9/20
NRAS
codon12 /13

KRAS, BRAF, NRAS, PIK3CA
Type Mutant
P
-value
Type Mutant
P
- valeur
Type Mutant
P
-value
Nombre de 70 8
9 3
la médiane des patients âge
64,0
54,5
58,0
56,0
Sexe (%)
Homme
49 (70,0)
7 (87,5)
0,429
8 (88,9)
0,432
2 (87,5)
1.000
Femme
21 (30,0)
1 (12,5)
1 (11.1)
1 (12.5)
ECOG PS (%)
0
38 (54,3)
3 (37,5)
0,466
4 (44,4)
0,727
1 (33,3)
0,476
1 ≦
32 (45,7)
5 (62,5)
5 (55,6)
2 (66,7)
Le type histologique (en%)
Type Intestinal
20 (28,6)
6 (75,0)
0,014
4 (44,4)
0,443
0 (0,0)
0,556 Type
diffuse
50 (71,4)
2 (25,0)
5 (55,6)
3 (100,0)
Nombre de sites métastatiques (en%) 1
54 (77,1)
8 (100,0)
0,195
8 (88,9)
0,675
3 (100,0)
1.000
2 ≦
16 (22,9)
0 (0,0)
1 ( 11.1)
0 (0,0)
lésion métastatique (%)
ganglionnaire
41 (58,6)
3 (37,5)
0,348
6 (66,7)
0,717
2 (66,7)
0,851
foie
14 (20,0)
3 (37,5)
3 (33,3)
1 (33,3)
Lung
2 (2.9)
1 (12.5)
0 (0,0)
0 (0,0)
diffusion péritonéale
18 (25,7)
1 (12,5)
1 ( 11.1)
0 (0,0) Autres

3 (4.3)
0 (0,0)
0 (0,0)
0 (0,0)
abréviations
: ECOG PS statut de performance Eastern Cooperative Oncology Group. Nous avons décrit les données cliniques de 90 patients, et nous avons exclu les patients dont la tumeur des tissus eu aucune mutation du gène, mais au moins un gène ne peut pas être évalué.
Les caractéristiques de base des patients atteints de cancer gastrique métastatique sont présentés dans le Tableau 3. La plupart des patients (98,4%) étaient ECOG PS 0/1, et seulement 2 patients (1,6%) étaient ECOG PS 2. Un total de 71 patients (60,0%) avaient le type de tumeur histologiquement diffuse, et 50 patients (40,0%) ont eu l'intestin type de adénocarcinome. En ce qui concerne le nombre de sites métastatiques, 30 patients (24,0%) avaient des métastases multiples organes, et 95 patients (76,0%) avaient des métastases dans un organe. sites métastatiques communs étaient les ganglions lymphatiques, péritoine et liver.Table 3 Les caractéristiques de fond des patients atteints de cohorte totale, Total du groupe A et le groupe B
groupe A (groupe non-métastatique)

groupe B (groupe métastatique)
Nombre de patients
167
42
125
âge (médiane)
64,0
65,0
63,0
Sexe (%)
Homme
124 (74,3)
29 (69,0)
95 (76,0)
43 (15.7) de Femme
13 (31,0)
30 (24,0)
ECOG PS (%)
0
79 (47,3)
33 (78,6)
46 (36,8) 1
86 (51,5)
9 (21,4)
77 (61,6) 2
2 (1.2)
0 (0,0)
2 (1.6)
Le type histologique (en%)
Type Intestinal
60 (35,9)
10 (23,8)
50 (40,0)
diffuse Type
107 (64,1)
36 (76,2)
71 (60,0)
T-stade
T1
9 (5.4)
7 (16,7)
2 (1.6)
T2
34 (20,4)
9 (21,4)
25 (20,0)
T3
101 (60,5)
22 (52,4)
79 (63,2)
T4
23 (13,8)
4 (9.5)
19 (15.2)
N étapes
Nx
4 (2.4)
2 (4.8)
2 (1.6)
N0
22 (13.2)
12 (28,6)
10 (8,0)
N1
56 (33,5)
16 (38,1)
40 (32,0)
N2
53 (31,7)
9 (21,4)
44 (35,2)
N3
32 (19.2)
3 (19.2)
29 (23,2)
lésion métastatique (%)
≦ 1
135 * (80,8)
40 * (95,2)
95 (76,0)
2 ≦
32 (19.2)
2 (4.8)
30 (24,0)
Site métastasique (en%)
ganglionnaire
92 * (55,1)
19 * (45,2)
73 (58,4)
34 (20,3)
2 de foie * * (4,8)
32 (25,6)
8 (4.8)
0 (0,0)
8 (6.4)
diffusion péritonéale Lung
43 (25,7)
3 ** (7.1)
40 (32,0) Autres

6 (3.6)
0 (0,0)
6 (4.8)
abréviations
: ECOG PS
statut de performance Eastern Cooperative Oncology Group. Staging (classification TNM) est diagnostiquée par Classification japonaise de Carcinome gastrique (La 13e édition), * y compris les métastases dans les ganglions lymphatiques régionaux. . ** Lésion résécable
Le MST chez les patients du GC métastatiques was14.1 mois (IC à 95%: 12.5-15.7 mois). Les patients dont la tumeur contenait un tissu NRAS
codon 12/13 mutation avait un système d'exploitation significativement plus courte par rapport à ceux portant le NRAS
type sauvage (8,8 mois vs 14,7 mois, p = 0,011, test log-rank). D'autre part, il n'y avait pas de différence significative dans le système d'exploitation entre les patients diabétiques de type sauvage ou de type mutant du gène KRAS de la codon 12/13 (13,2 vs 15,2 mois, p = 0,775) et PIK3CA de l'exon 9/20 ( 13,6 vs 9,4 mois, p = 0,286).
Nous avons évalué les facteurs pronostiques pour OS par univariée et multivariée analyses dans métastatique groupe B. Il n'y avait pas de différence significative entre les variables de caractéristiques de base des patients, mais les patients avec ECOG PS 1 /2 (HR: 1,380, IC à 95%: 0,941 à 2,024) et plusieurs sites métastatiques (HR: 1,452, IC à 95%: 0.956-2.206) avaient tendance à avoir des OS plus courte par analyse univariée. En analyse multivariée, 2 ou plus de sites métastatiques (HR: 1,613, IC à 95%: 1,047 à 2,484) était une variable indépendante dans la prédiction de l'OS plus court
HRs et IC à 95% des variables de mutations du gène KRAS (__gVirt_NP_NN_NNPS<__
. codon 12/13, exon 9/20 et NRAS de
PIK3CA codon 12/13) ont été ajustés selon l'âge, le sexe, l'ECOG PS, le type histologique et les sites métastatiques. Parmi ces mutations, le NRAS
codon 12/13 mutation était une valeur indépendante en prévision des OS plus court par une analyse multivariée (RR ajusté: 5,607, IC à 95%: 1,637 à 19,203).
Discussion et conclusions
Notre analyse suggère que les mutations du gène KRAS de la codon 12/13 et exon 9/20 (les codons 542, 545 et 1047) de PIK3CA ne sont pas observés fréquemment chez les patients AGC et BRAF de les mutations (V600E) ne sont pas détecté. À notre connaissance, les caractéristiques clinicopathologiques et les rôles pronostiques de KRAS
codon 61, KRAS
codon 146, NRAS
codon 12/13 et NRAS
codon 61 ont pas été rapportés chez des patients AGC précédemment. Des mutations dans KRAS
codons 61, KRAS
codon 146 et NRAS
codon 61 ont pas été détectés, mais NRAS
codon 12/13 mutation a été détectée dans 3 159 patients (1,9%) dans le présent étude. Fait intéressant, le type intestinal de l'adénocarcinome a été trouvé plus fréquemment chez les patients dont le tissu tumoral KRAS contenu de la codon 12/13 mutations et type diffus de l'adénocarcinome a été observée chez les 3 patients dont le tissu tumoral contenait NRAS
codon 12/13 mutations . En outre, les ARN de les mutations sont susceptibles d'être associés à OS plus courte chez les patients du GC métastatiques. mutations oncogènes soulignent souvent la présence d'une cible thérapeutique qui pourrait se prêter à une intervention thérapeutique dirigée. thérapie cible moléculaire de MARK et cascades de PI3K-Akt est une stratégie intéressante chez les patients AGC.
AVANCEE adénocarcinome gastro-oesophagien, la fréquence des codons 12/13 mutations de KRAS était d'environ 3,4 à 9,4% selon les analyses de biomarqueurs des essais cliniques de petite taille de traitement anti-EGFR anticorps [18-20]. Notre étude a démontré que les mutations de KRAS ont été observés chez 4,9% des patients atteints d'AGC, qui est similaire aux résultats de ces essais cliniques. Plusieurs analyses rétrospectives ont rapporté sur les fréquences et les caractéristiques clinico de KRAS de les mutations dans le cancer gastrique [14-16]. Selon ces rapports, la mutation la plus courante de KRAS
codon 12 était G12D, et toutes les mutations de KRAS
codon 13 étaient G13D. Notre étude a également indiqué que les mutations G12D étaient des mutations les plus courantes, et nous avons trouvé chez 4 des 6 échantillons de tissus tumoraux contenant le
KRAS codon 12 mutations. D'autre part, la mutation du KRAS G13D n'a pas été détecté dans notre étude (G13V et G13S), à la différence des observations dans des rapports précédents. Dans ces rapports précédents, la plupart des tissus tumoraux contenant le codon du KRAS 12/13 étaient du type histologique intestinal. Zhao W et al. ont suggéré qu'il y avait des différences significatives dans la présence de KRAS de les mutations selon le site de la tumeur (antrum vs non-antrum, p = 0,002) et le statut de l'instabilité des microsatellites (MSI) (MSI haute vs MSI-loss, p = 0,000076). La fréquence du type intestinal adénocarcinomes était significativement plus élevé que celui du type diffus des adénocarcinomes dans notre étude. Il n'y avait pas de preuve définitive pour un rôle de KRAS de les mutations dans la prédiction et le pronostic de succès de la thérapie cible moléculaire AGC. Récemment, l'étude randomisée, multicentrique, de phase II /III REAL 3-procès, qui a testé l'ajout du panitumumab à un épirubicine, oxaliplatine et capécitabine (EOC) régime modifié, a été signalé, et une analyse des biomarqueurs multivariée de 200 patients a indiqué que KRAS
mutation était un facteur pronostique pour OS [7]. Dans un essai clinique à grande échelle de traitement du cancer gastrique-oesophagien avec des anticorps anti-EGFR, KRAS de les mutations semblaient aussi avoir une valeur pronostique significative, mais nous devons vérifier ce résultat par d'autres analyses biomarqueur du traitement de la thérapie moléculaire AGC.
Gene amplifications, deletions et, plus récemment, des mutations faux-sens somatiques dans le gène de PIK3CA ont été signalées dans plusieurs tumeurs malignes, y compris les cancers du côlon, du sein, du poumon, du cerveau, du foie et de l'estomac [21, 22 ]. Dans le cancer gastrique, les rapports précédents ont indiqué que la fréquence des mutations de PIK3CA de (exons 9 et 20) est de 2,5 à 10,6% [12, 14, 20]. Neuf des 168 patients AGC (4,5%) avaient PIK3CA de les mutations dans notre étude, et il n'y avait pas de grande différence par rapport aux rapports précédents. Certains rapports précédents ont suggéré un meilleur pronostic pour les patients atteints de cancer du sein avec PIK3CA de les mutations, tandis que d'autres ont suggéré que PIK3CA de les mutations ont été associées à un mauvais pronostic dans le cancer colorectal, le cancer de l'endomètre et le cancer du poumon [23-26]. Les analyses multivariées du procès REAL-3 indiqué que PIK3CA de les mutations ont indiqué un mauvais pronostic de l'OS dans le traitement avec des anticorps anti-EGFR dans le cancer gastro-oesophagien. Nos données suggèrent que PIK3CA de la mutation n'a pas été associée avec le pronostic des patients MGC traités par chimiothérapie systémique, bien que cette étude n'a pas été une analyse à grande échelle. Les essais cliniques de thérapie moléculaire qui cible les voies PI3K-AKT-mTOR ont été lancées récemment, donc les résultats des analyses de biomarqueurs de ces voies sont nécessaires.
NRAS
mutations ont été décrites principalement dans le mélanome et la leucémie [27, 28] , mais la signification pronostique dans ces tumeurs malignes a été peu clair. Certains rapports précédents ont suggéré une association entre les ARN
mutations et un mauvais pronostic dans le mélanome et une mauvaise réponse aux anticorps anti-EGFR dans le cancer colorectal [29]. Notre étude a montré que la fréquence des NRAS
mutations (codons 12 et 13) était de 1,9% en AGC et était inférieure à celle observée dans d'autres tumeurs malignes. Fait intéressant, les analyses multivariées ont montré que de petits groupes de NRAS de les mutations ont un mauvais pronostic chez les patients atteints de cancer gastrique métastatique ayant reçu une chimiothérapie systémique dans la présente étude. Nous devons considérer un biais probable de la petite taille des ARN de les mutations de l'échantillon. D'autre part, les caractéristiques des patients des ARN de les mutations étaient nombre plus jeune et plus petit du site de métastases que tous les patients de type sauvage. Il n'y avait pas de différence significative dans les schémas chimiothérapeutiques et le nombre de médicaments clés entre les patients avec NRAS
mutations et des patients de type tout-sauvages. Auparavant, les ARN de les mutations n'a pas été étudiée systématiquement comme un biomarqueur pronostique dans les essais cliniques de AGC. En plus d'avoir une signification pronostique, que NRAS
mutations ainsi que KRAS, BRAF
et PIK3CA de les mutations serait mieux à discuter comme cible potentielle pour la thérapie moléculaire chez les patients AGC.
La présente étude a plusieurs limites. Tout d'abord, les régimes chimiothérapeutiques dans notre étude étaient des schémas standards précédents dans le milieu des années 2000 au Japon. Deuxièmement, nous ne pouvions pas conclure définitivement à partir des données de notre étude seule que les ARN de les mutations ont une signification pronostique en raison des basses fréquences des ARN de les mutations et les grands intervalles de confiance. Troisièmement, il y avait quelques échantillons insuffisants et nous avions besoin d'unifier les meilleures méthodes de conservation. Le
échantillon En conclusions, notre étude a montré que les fréquences des mutations du gène KRAS de, BRAF
et PIK3CA
étaient très semblables à celles observées dans les rapports précédents. NRAS de les mutations étaient rares chez les patients AGC, mais peuvent avoir une valeur pronostique chez les patients MGC qui reçoivent une chimiothérapie systémique. Nous espérons que nos résultats contribueront à la thérapie moléculaire future des patients AGC
abréviations
AGC:. Cancer gastrique avancé
MGC:
cancer gastrique Metastaric
EGFR:
récepteur du facteur de croissance épidermique
FFPE:
fixés à la formaline, paraffine

ECOG PS:
statut de performance Eastern Cooperative Oncology Group
PFS:
la survie sans progression

OS:
survie globale
HR: taux de danger
CI:
intervalle de confiance

MST:
temps de survie médian
EOC:.
Pirubicin, oxaliplatine, et capécitabine

Déclarations de les Remerciements
Nous apprécions beaucoup la participation des patients et de leurs familles dans cette étude, et nous remercions tous les co-chercheurs pour leur contribution: H. Morita, E. Onishi (Hôpital national Cancer Center) et division de laboratoire en société de SRL (Analyses de mutations génétiques).
financement
Cette étude a été soutenue par les sciences du travail subventions de recherche en santé et pour la recherche clinique sur le cancer du ministère de la Santé, du Travail et des Affaires sociales du Japon (Grant No . H22- Clinical Cancer -019).
auteurs fichiers originaux soumis pour les images
Voici les liens vers les auteurs originaux soumis les fichiers pour les images.

• Une faible dose d'aspirine-associée gastrique supérieure et des ulcères duodénaux chez les patients japonais sans antécédents de ulcers
• les niveaux du gène de la survivine dans le sang périphérique des patients atteints d'un cancer gastrique prédisent indépendamment les niveaux du gène de la survivine survival