Survivin gennivå i det perifera blodet hos patienter med magcancer förutse oberoende survival

survivin gennivå i det perifera blodet hos patienter med magcancer självständigt förutsäga överlevnad Bild Sammanfattning
Bakgrund
Detekteringen av cirkulerande tumörceller (CTC) anses vara ett lovande verktyg för att förbättra riskstratifiering hos patienter med solida tumörer. Vi undersökte huruvida uttrycket av CTC relaterade gener fogar prognostisk effekt till TNM i patienter med magsäckscancer.
Metoder
Sjuttio patienter med TNM stadium I-IV magcancer var efterhand inskrivna. Perifera blodprover testades med hjälp av kvantitativ realtids-PCR (qrtPCR) för uttrycket av fyra CTC besläktade gener: karcinoembryonalt antigen (CEA), cytokeratin-19 (CK19), vaskulär endotelial tillväxtfaktor (VEGF) och Survivin (BIRC5).
Resultat
Gene expression av Survivin, CK19, CEA och VEGF var högre än i normala kontroller i 98,6%, 97,1%, 42,9% och 38,6% av fallen, och tyder på en potentiell diagnostiska värdet av både Survivin och CK19 . Vid multivariabel överlevnadsanalys, var TNM stadieindelning och Survivin mRNA-nivåer behållas som oberoende prognostiska faktorer, vilket visar att Survivin expression i det perifera blodet tillför prognostisk information till TNM-systemet. I motsats till tidigare publicerade data, var avskrift överflöd av CEA, CK19 och VEGF inte förknippas med patienternas kliniska resultat.
Slutsatser
genuttryck nivåer av Survivin addera betydande prognostiskt värde till den aktuella TNM. Valideringen av dessa resultat i större blivande och multicentric serien kan leda till genomförandet av denna biomarkör i rutinmässig klinisk miljö för att optimera riskstratifiering och slutligen anpassa terapeutisk behandling av dessa patienter.
Bakgrund
Gastric cancer representerar den fjärde vanligaste cancerformen och näst vanligaste orsaken till cancerrelaterad död i världen. Den beräknade nuvarande förekomsten av magsäckscancer är cirka 16,2 /100 000 personer /år (världs standardiserade, WSR), med högsta incidensen i östra Asien, Östeuropa och Sydamerika [1]. För närvarande är den enda prognostiska systemet rutinmässigt för hantering av gastric cancerpatienter baseras på den internationella unionen mot cancer tumör-Node-metastaser (TNM) stadieindelning systemet [2], där graden av tumörpenetration (PT) och nodstatus (pN) [3] är de två viktigaste prognostiska indikatorer hos patienter utan avlägsen metastatisk sjukdom. Patienter i tidiga skeden anses kandidater för att bota med kirurgi. Emellertid 50% av gastriska cancerpatienter lider av tumör återfall även efter radikal kirurgi [4, 5]. Således inte aktuellt iscensättningen systemet inte verkar exakt förutsäga enskilda patientens risk för cancer återkommer. I själva verket denna klassificering identifierar breda kategorier med signifikant olika prognosgrupp inom varje steg, vilket gör detta system suboptimal för en personlig terapeutiskt tillvägagångssätt. Detta exemplifieras av det faktum att vissa patienter som för närvarande klassas som "låg risk" inte lämnas på adjuvant terapi, även om de erfarenhet återfall. Vice versa, en del patienter som för närvarande genomgår adjuvant terapi på grund av "hög risk" TNM klassificering, skulle inte behöva denna behandling [6]. För att lösa detta problem och förbättra prognosen för patienter, är angelägna nya parametrar tillförlitligt förutsäga patientens resultat. Patienter som hade genomgått potentiellt botande operationer behåller risken för återfall som kommer från mikroskopiska tumörrester kallas minimal kvarvarande sjukdom (MRD). MRD kan påverka olika kropps fack, inklusive benmärgen, lymfkörtlarna och perifert blod [7]. Under de senaste åren har flera studier fokuserat på detektionen av cirkulerande tumörceller (CTC) med avseende på deras kliniska implikationer för patienter med magcancer. Som ett resultat har kvantitativ realtid polymeraskedjereaktion (qrtPCR) och variationer av denna teknik, som anses vara den mest känsliga metoden för att utvärdera genuttryck, inte har använts vid detektion av tumörmarkörer som indikerar närvaron av CTC i blod [8].
i den aktuella analysen, som syftar vi att profilera det perifera blodet hos 70 patent påverkas med magcancer med qrtPCR. Vi testade fyra biomarkörer, två av närvaron, annons två av aggressivitet av tumören, och en av dessa, Survivin, lägger oberoende prognostisk effekt till TMN iscensättning systemet. Detta kan möjliggöra en bättre skiktning av patientens risk och därmed en bättre terapeutisk behandling, särskilt i adjuvant
metoder
Patienter
I denna studie vi inskrivna 70 patienter (39 män, 31 kvinnor,. Åldersgrupp 28 - 90 år, medianålder 68 år) som genomgick kirurgi (total eller partiell gastrektomi) för histologiskt verifierad magcancer mellan oktober 1998 och november 2007, och för vilka en perifert blodprov var tillgängliga. Studien, vilket är i överensstämmelse med Helsingforsdeklarationen, godkändes av den lokala etiska kommittén vid University of Padua (godkännandenummer: 70/2006). Skriftligt informerat samtycke om användningen av biologiska prover för prövningsändamål erhölls från alla patienter. Vid tidpunkten för analysen, 33 (47,1%) levde medan 37 (52,9%) hade dött. Median uppföljningstid var 15 månader (intervall: 6-119 månader). Medianöverlevnaden var 25 månader. Tumör egenskaper sammanfattas i Tabell 1. Djupet av tumörinvasion (T kategori), omfattning av lymfkörtelmetastaser (N kategori) och makroskopisk metastaser (M kategori) kategoriserades enligt UICC TNM staging system.Table 1 Patienter och tumöregenskaper .
Parametrar
N
(%)
Patienter
alla
70
(100,0) Review male
39
(55,7) Review kvinnliga
31
(44,3) Review Ålder (år) katalog ≤ 65
21
(30,0) Hotel > 65
49
(70,0) Review plats
multicentric
5
(7,1) Review övre tredje
11
(15,7) Review mittersta tredje
19
(27,1) Review lägre tredje
35
(50,0) Review TNM stadium
I (IA + IB) katalog 10
(14,3)
II
14
(20,0) Review III (IIIA + IIIB) katalog 19
(27,1) Review IV
27
(38,6) Review Cellinjer
humana gastriska karcinom cellinje NCI-N87, erhållna från American Type Culture CoUection (Manassas, USA), inkuberades i RPMI-1640-medium (Invitrogen - Gibco, Carlsbad, CA, USA) innehållande 10% fetalt kalvserum . (Euroclone - Celbio, Pero, Ml), 10 mM Hepes, 1 mM natriumpyruvat (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO), vid 37 ° C i 5% CO 2
NCI-N87 är en magcancer cellinje härledd från en levermetastaser av en väl differentierad cancer i magsäcken tas före cytostatikabehandling. Enligt tillverkarens datablad, celler uttrycker ytglykoproteinerna karcinoembryonalt antigen (CEA).
Cell spiking experiment Review, en cell spiking studie utfördes för att bestämma känsligheten hos denna qrtPCR teknik för detektering av cancerceller i perifert blod mononukleära celler (PBMC). PBMC erhölls från friska frivilliga, och räknades och späddes 1: 1 i RPMI-medium. Gastric cancerceller N87 räknades och serieutspädda från 1 x 10 6 celler /ml till en cell /ml i PBMC. Totalt RNA extraherades och reverse- transkriberad från 2 milliliter av varje fraktion. qrtPCR för två gener av intresse utfördes sedan, såsom beskrivs nedan.
Provtagning, RNA-extraktion och cDNA-syntes Review, en 6 ml alikvot av venöst blod erhölls från varje patient vid tiden för kirurgi. Beredning av prover utfördes inom två timmar efter avlägsnande av blod. Provet centrifugerades vid 2000 x g under 10 minuter, och PBMC-fraktionen uppsamlades och lagrades i flytande kväve.
Frysta prover tinades och total-RNA extraherades med användning av guanidiniumtiocyanat-fenol-kloroform-metoden (Trizol Reagent, Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Integriteten för det isolerade RNA: t fastställdes genom qrtPCR analys av den endogena referensgenen beta aktin (b-aktin) som beskrivs nedan [9].
Total RNA (7 | j, g per 100 | al slutlig reaktionsvolym) till transkriberades omvänt med användning av slumpmässiga primers och MultiScribe omvänt transkriptas (High-Capacity cDNA omvänd transkription kit, Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Reaktionsblandningen inkuberades under 10 minuter vid 25 ° C, därefter vid 37 ° C i 120 minuter. cDNA lagrades vid -80 ° C fram till användning.
realtid kvantitativ polymeraskedjereaktion
De transkriptionella nivåer av fyra gener (dvs., karcinoembryonalt antigen [CEA], cytokeratin-19 [CK19], Survivin och vaskulär endotelial tillväxtfaktor [VEGF]) mättes i det perifera blodet hos patienter med hjälp av kvantitativ realtids-PCR (qrtPCR) med användning av den relativa kvantifieringen metoden (2 -ΔΔCt metod) [10, 11]. Använda 2 -ΔΔCt metod data presenteras som flerfaldiga förändringen i genuttryck normaliseras genom en referens gen och i förhållande till en kalibrator prov. Syftet med normaliseringsprocessen är för att justera värdet som representerar de transkriptionella nivåer av varje gen av mängden mRNA närvarande i varje prov: det är oftast erhålls genom att dividera de expressionsnivåer av varje gen av intresse genom att de för en referens gen (även kallas "housekeeping" -gen). Housekeeping-gener uttrycks konstitutivt och - helst - inte påverkas av experimentella manipulationer: Därför bör de ungefär motsvarar den totala mängden mRNA testades i varje prov [12]. Som referensgenen i denna studie använde vi beta-aktin, en av de mest använda hushållningsgener.
I en relativ kvantifiering PCR studie, är den så kallade "kalibrator" som representeras av genuttrycket av en vald prov genom vilket uttrycksprofilen för varje prov av intresse justeras: detta tillvägagångssätt gör det möjligt för forskaren att jämföra uttrycksprofilen för proverna av intresse med varandra när det gäller deras flerfaldiga förändringen med avseende på ett enda prov (kalibratorn) Review. vanligtvis är kalibratorn ett obehandlat prov (t.ex. i en funktionell studie), ett prov vid tidpunkten noll (t.ex. i en tidsförloppsstudie) eller orelaterad prov (t.ex. friska kontroller i en patientstudie eller normala fibroblaster i en cancercell linjens behandling) [10]. En pool av cDNA härlett från PBMC från 20 friska givare användes som kalibrator källa i vår studie. Utvärdering av två -ΔΔCt indikerar faldig förändring i genuttryck i förhållande till kalibrator. För kalibrator den ΔΔCt är lika med noll, och 2 0 lika med ett, så att faldig förändring i genuttryck i förhållande till kalibrator motsvarar en per definition.
Metoden validerades för vårt experimentella system genom att verifiera att effektiviteten hos förstärkningen av målen och B-aktin gener var likartade. TaqMan Gene Expression Analyser specifika för CEA, CK19, Survivin och VEGF köptes från Applied Biosystems. För att undvika att amplifiera förorenad genom-DNA, var primerparet placerad vid korsningen mellan två exoner. Den qrtPCR-analysen utfördes med användning av ABI PRISM 7300 Sequence Detection systemet. PCR-reaktionen fortskrida i en blandning (30 ^ il) innehållande 15 | il av 2 x TaqMan Universal PCR Master Mix, 1,5 | il 20 x TaqMan Gene Expression analys (alla reagenser från Applied Biosystems), 12,5 pl vatten och 1 pl av cDNA-templat . Femtio cykler av amplifiering utfördes vid 95 ° C (15 sekunder) och 60 ° C (1 minut) och mRNA-expressionsnivåer normaliserades mot kvantifierad b-aktin mRNA-expression för varje prov.
Statistisk analys
Statistiska analyser var utförs med hjälp av Stat View V. 4,57 programvara (Abacus Concepts, London, UK) och StatXact V7.0.0 programvara (Cytel Software Corporation, USA). Korrelationen mellan gennivå (högt kontra låg genuttryck, enligt definitionen i medianvärde) och sjukdomar TNM staging kategorier bedömdes med hjälp av Cochrane-Armitage trendtest. Överlevnadskurvor uppskattades med Kaplan-Meyer-metoden, och univariata överlevnads jämförelser beräknades enligt den log-rank test. Transkriptionsnivåerna för de fyra generna, tillsammans med antropometriska faktorer och TNM steg (enligt den 5: e upplagan av AJCC TNM släpptes 1997), användes som oberoende variabler i multivariat överlevnadsanalys, som utfördes med hjälp av Cox proportionella hazards regressionsmodell [13]. Urvalet av variabler som signifikant bidrar till den prediktiva modellen utfördes genom stegvis metod. . Sannolikhetsvärden < 5% ansågs statistiskt signifikanta
Resultat
Cell tillsatta: känslighet för qrtPCR teknik
I N87 cellinjen mRNA-nivåer av CEA, CK19, Survivin, och VEGF gener uttrycks kraftigt (Figur 1): därför, denna gastric karcinomcellinje representerade en giltig positiv kontroll för våra experiment. Figur 1 genuttryck nivåer av de fyra generna av intresse i N87 humana gastriska cancerceller (mätt med kvantitativ realtids-PCR: se text för detaljer). Den naturliga logaritmen av de uttrycksnivåer rapporteras på y-axeln: axeln ursprung (0) representerar referensprovet (kallas kalibrator) som alla experimentella prov jämförs i den relativa kvantifieringen metoden (se text för detaljer) katalog. att fastställa detektionsgränsen (känslighet) i qrtPCR tekniken, var seriella 10-faldiga utspädningar (i PBMC) av N87 gastric karcinomceller analyserades i triplikat genom qrtPCR med användning av CEA och Survivin som genmarkörer. CEA och Survivin mRNA detekterades upp till en cell /10 8 PBMC utspädning. Detta motsvarar att finna en till 10 maligna celler per 10 ml perifert blod (data visas ej) Review Expression markörer i blodprov
perifera blodprover från alla 70 patienter utvärderades med avseende på de fyra genmarkörer. Uttrycket var positiv (högre än kalibrator) i 98,6%, 97,1%, 42,9%, 38,6% av prover för Survivin, CK19, CEA, VEGF (tabell 2). Eftersom Survivin och CK19 gennivå finns i nästan alla patienter är större än hos friska kontroller, dessa resultat pekar på en diagnostisk potential både genes.Table två transkriptionsnivå av fyra prognostiska markörer i det perifera blodet hos patienter med magcancer.
Marker
Ovanför kalibrator (%) *
Under kalibrator (%) *
omätbara (%)
vid Survivin
69 (98,6) Review 1 (1,4) Review 0 (0,0) Review CK19
68 (97,1) Review 2 (2,9) Review 0 (0,0 ) Review CEA
30 (42,9) Review 21 (30,0) Review 19 (27,1) Review VEGF
27 (38,6) Review 43 (61,4) Review 0 (0,0 ) Review * genuttryck mättes genom kvantitativ realtids-PCR: med hjälp av den relativa kvantifiering metod prover klassificerade som över eller under de nivåer som konstaterats i kalibratorn (poolade perifera blodprov från friska givare) katalog dessutom. om vi ansåg 75: e percentilen av Survivin uttrycksnivåer per scen, hade vi en signifikant ökad trend (p = 0,04) för stegen från i-III, men inte för steg IV (Figur 2). Figur 2 survivin gennivå som mäts i det perifera blodet hos 70 patienter med TNM stadium I-IV gastric cancer. trendtest Analysen visar en signifikant ökning av Survivin transkriptionsnivåer över patienter med stadium I-III magcancer (trendtest P-värde = 0,04). För varje kolumn redovisas medelvärdet ± SD
Överlevnadsanalys
Efter en genomsnittlig uppföljning på 26 månader, median total överlevnad (OS) för TNM stadium I-II uppnåddes inte. median OS för steg III och IV var 25 och 13 månader, respektive (log-rank test P-värde < 0,0001, Figur 3). Figur 3 Total överlevnad för TNM stadium I-II, III och IV för alla patienter (log-rank test P-värde < 0,0001).
Efter univariat överlevnadsanalys, bland de fyra generna som vi har testat, bara Survivin uttryck kunde identifiera två patientgrupper med väsentligt annorlunda prognos. I själva verket, med tanke på den 75: e percentilen av log-transformerade genen transkriptionsnivåer (1.508) som brytpunkten, median OS för hög (> 1,508) och låg (≤1.508) Survivin mRNA överflöd var 14 och 41 månader, respektive (log- rank p-värde = 0,036, Figur 4). Figur 4 Kaplan-Meier överlevnadskurvor för patienter med högt (större än 75: e percentilen) eller låg (mindre än 75: e percentilen) transkriptionsnivåer Survivin uppmätta i det perifera blodet. Log-rank test P-värde = 0,036.
Multivariat överlevnadsanalys inklusive TNM stadium, ålder, kön och mRNA-nivåer av de fyra markörerna visade att endast TNM stadium och Survivin mRNA-nivåer som uppmätts i det perifera blodet förutsäga oberoende patienternas OS . Hazard ratio (HR) i samband med Survivin nivåer indikerar ökad risk för död för 100-faldig ökning av Survivin uttryck (tabell 3) .table 3 Multivariat överlevnadsanalys av 70 patienter med magcancer.
Covariates
HR
95% CI
P-värde
vid
Nedre gräns
Övre gräns
vid TNM stadium I
en (referens) -
-
-
etapp II
1,20
1,01
1,45
0,048
stadium III
1,34
1,05
1,70
0,017
steg IV
3,17
1,38
6,77
0,004
Survivin *
1,34
1,14
1,53
< 0,001
HR: hazard ratio; CI: konfidensintervall; * HR förknippas med Survivin nivåer indikerar en ökning av dödsrisk för 100-faldig ökning av Survivin expression.
Eftersom endast dessa fyra oberoende variabler behålls av Cox-modellen, tyder denna analys att Survivin genuttryck kan lägga till användbar prognostisk information till väletablerade faktorer såsom TNM.
Diskussion
i denna studie fann vi att transkriptionella nivåer av Survivin mätta i det perifera blodet hos patienter med gastrisk karcinom självständigt korrelerar med deras total överlevnad.
Om validerade i större prospektiva studier, skulle dessa resultat gör det möjligt att öka prognostiska kraften i konventionella prognostiska faktorer, som för närvarande är förkroppsligade av TNM mellanparametrar. Detta är av särskild betydelse för patienter med TNM stadium I-III sjukdom, för vilka optimala riskstratifiering är viktigt att identifiera ämnen med högsta sannolikhet att dra nytta av adjuvant behandling.
Våra fynd är av särskild betydelse även från tumörbiologi synpunkt eftersom Survivin genen kodar en viktig anti-apoptotiska proteinet hör till hämmare av apoptos protein (IAP) familj. Förutom att vara en av de bäst karakteriserade antiapoptotiska faktorer [14], är Survivin föremål för intensiv forskning på grund av det faktum att hos vuxna är det selektivt uttrycks i stort sett endast av cancer av olika ursprung; Dessutom har sitt uttryck i primärtumör förknippats med sämre prognos och resistens mot konventionella kemoterapeutiska [15]. Dessa observationer gör survivin ett perfekt mål för tumörspecifika terapier som småmolekylinhibitorer och antigenspecifik immunterapi [16].
Survivin proteinuttryck i primära tumörer, inklusive magcancer har undersökts som en prognostisk faktor, högre nivåer som förknippas med sämre cancer resultatet [17]. Om RNA-expression har Survivin mRNA-nivåer undersökts som en markör av cirkulerande tumörceller (CTC) i olika typer av cancer, men tillgängliga data är knappa [18, 19]. I en serie av 26 patienter gastric cancer, har Survivin mRNA (mätt med hjälp av ELISA-baserad qrtPCR) i det perifera blodet rapporterats korrelera med patientens prognos, varvid TNM staging uteslutas från den slutliga mutivariable modellen (vilket tvingar alla variabler i Cox modell) [20]. I våra större serier (n = 70), är prognostiska roll Survivin blodnivåer bekräftades, även om TNM staging förblir en betydande prognostisk faktor i den slutliga multivariabla modellen (med användning av det stegvisa läget för rörlig selektion). Trots signifikant samband med patienternas prognos, gjorde Survivin mRNA-nivåer inte öka över alla fyra TNM stadier: trenden för ökad transkriptions överflöd var i själva verket visade endast hos patienter med stadium I-III sjukdom (Figur 2). Denna upptäckt kanske beror på de låga urvalsstorlekar för de enskilda TNM stegen (och den därav följande låg statistisk styrka) men kanske också tyder på att Survivin spelar en roll i lokoregional och inte avlägsen metastatisk sjukdom (där andra gener kan vara mer relevant, som nyligen rapporterats [21]) katalog Till skillnad från andra studier [9, 22-26], nivåerna av CK19 och CEA inte korrelerar med patienter överlevnad i vår serie, antingen på univariable (data visas ej) eller multivariabla överlevnadsanalys. detta kan bero på flera faktorer. Först av allt, att man i vår multivariabelanalys (med en stegvis läge med variabel val) av en markör som inte anses av andra författare gör en jämförelse omöjligt.
Notera några positiva rapporter endast använda univariable överlevnadsanalys, vilket äventyrar tillförlitlighet och reproducerbarhet av resultat, en gång justering för väletablerade prognostiska faktorer (dvs. TNM stadier) genomfördes [9, 25, 27, 28]. I linje med våra resultat andra forskare gör rapport brist på samband mellan cytokeratiner positiva celler närvaro och prognos [29] (Tabell 4) .table fyra utvalda serier analysera prognostiska roll av cirkulerande tumörceller (CTC) i patienter med magcancer.
Author

Year

Ref.

Patients

Method

Survival analys
Markörer
Resultat
Koga T et. al.
2008
[9]
101
Kvantitativ RT-PCR
Univariat
CK18, CK19, CK20, CEA
CK19 är bättre markör, och är användbar för uppskatta prognos eller för adjuvant behandling
Yie SM et. al.
2008
[20]
26 (magcancer) Review RT-PCR-ELISA
Multivariate
Survivin
Status för Survivin-uttryck CTC är en stark och oberoende prediktor för återfall
Hiraiwa K et. . Al
2008
[22]
44 (magcancer) katalog CellSearch systemet
multivariat
CD45 (-) celler vs CK (+) celler
CTSS korrelerade signifikant med avancerade tumörstadium
Illert B et. al.
2005
[23]
70
Kvantitativ RT-PCR
Multivariate
CK20
CK20 är en oberoende prognostisk markör
Yeh KH et. al.
1998
[24]
34
Nested kvantitativ RT-PCR
Univariat
CK19
CK19 uttrycker CTC är förknippade med dålig prognos
Seo JH et. al.
2005
[25]
46
Kvantitativ RT-PCR
inte utförs
CEA
CEA mRNA signifikant korrelerad med klinisk återfall
Wu CH et. al
2006
[26].
42
Kvantitativ RT-PCR
Ej utfört
hTERT, CK19, CK20, CEA
CEA-mRNA är korrelerad med högre risk för postoperativ återfall /metastas
Uen YH et. al
2006
[27].
52
Kvantitativ RT-PCR
Univariat
c-MET, MUC1
c-Met och MUC1mRNA signifikant korrelerar med prognos
Mimori K et. al.
2008
[28]
810
Kvantitativ RT-PCR
Univariat
MT1-MMP
MT1-MMP är en oberoende faktor för att fastställa återfall och fjärrmetastaser
Pituchs-Noworolska A et. . Al
2007
[29]
57
Flödescytometri
Univariat
CD45 (-) celler vs CK (+) celler
Närvaron av CK (+) celler är ingen prognosvärde
Dessa motstridiga uppgifter kan bero på det faktum att CK19 och CEA är markörer för CTC närvaro men inte nödvändigtvis av CTC förmåga att metastasera: i själva verket är det väl accepterat att endast en delmängd av CTC har den biologiska potential att ge upphov till metastaser insättningar, medan de flesta CTC slutligen dö utan att vara skadlig för värden [7]. Följaktligen kan markörer för CTC "aggressivitet" som Survivin avslöja att vara mer informativ när det gäller sambandet med patienternas prognos.
Notera i den aktuella studien mRNA överflöd av Survivin och CK19 var alltid större än den som finns i friska kontroller med undantag för en och två fall, respektive. Detta understryker vikten av att använda en kvantitativ metod (qrtPCR) som gjorde det möjligt för oss att skikta patientrisk på en kontinuerlig skala, medan standard-PCR skulle ha klassificerats nästan alla patienter som positiv. Å andra sidan, detta fynd - tyder på att dessa gener kan utnyttjas även för diagnostiska ändamål, även om en särskild studie som designats speciellt för detta mål är berättigad
Som - som till vitt vi vet aldrig har rapporterats tidigare. sista fråga, vill vi konstatera att PCR-baserade metoder inte tillåter att identifiera cellkälla av de uppmätta markörer: i själva verket alla dessa metoder kräver lys av cellerna skördas från perifert blod från patienter för att extrahera mRNA används för att bedöma uttrycket av målgener. Förutom CTC, andra potentiella källor till PCR-upptäckta generna är PBMC, cirkulerande endotelceller (CEC), benmärg härrör cirkulerande stamceller samt hudceller (exempelvis keratinocyter, fibroblaster, melanocyter) förorenande provet under avlägsnande av blod. Ändå CTC kommer sannolikt att vara den huvudsakliga cellkällan för Survivin som dess uttryck är mycket begränsad i normala vuxna vävnader och i stället i huvudsak begränsad till maligna celler [30]. I detta avseende, cytometrisk metoder är mindre benägna att falskt positiva resultat, eftersom de innebär antikroppsbaserad cellsortering följt av cytologisk identifiering av tumörceller som föregår deras fenotypiska karaktärisering [31].
Slutsatser
genuttryck nivåer av Survivin addera betydande prognostiskt värde till den aktuella TNM av patienter med magsäckscancer. Valideringen av dessa fynd i större blivande serien kan leda till att optimera riskstratifiering och slutligen för att anpassa den terapeutiska behandlingen av dessa patienter.
Deklarationer
Författarnas ursprungliga inlämnade filer för Images of Nedan finns länkar till författarnas original lämnat filer för bilder. 12967_2009_422_MOESM1_ESM.eps Författaroriginalfilen för figur 1 12967_2009_422_MOESM2_ESM.eps Författaroriginalfilen för figur 2 12967_2009_422_MOESM3_ESM.eps Författaroriginalfilen för figur 3 12967_2009_422_MOESM4_ESM.eps Författaroriginalfilen för figur 4 Konkurrerande intressen
Författarna förklarar att de har inga konkurrerande intressen.

• Kliniskt patologiska egenskaper och prognostiska roller KRAS, BRAF, PIK3CA och de nationella tillsynsmyndigheterna mutationer i avancerad magsäckscancer
• Stent kontra gastrojejunostomy för lindring av gastric utlopp obstruktion: en systematisk genomgång