les niveaux du gène de la survivine dans le sang périphérique des patients atteints d'un cancer gastrique prédisent indépendamment les niveaux du gène de la survivine survival

dans le sang périphérique des patients atteints d'un cancer gastrique signifie indépendamment survie
Résumé de l'arrière-plan
La détection de cellules tumorales circulantes (CTC) est considéré comme un outil prometteur pour améliorer la stratification du risque chez les patients atteints de tumeurs solides. Nous avons étudié si l'expression des gènes liés CTC ajoute toute la puissance pronostique au système de classification TNM chez les patients atteints d'un carcinome gastrique.
Méthodes
Soixante-dix patients atteints de stade TNM I à IV carcinome gastrique ont été rétrospectivement inscrits. Des échantillons de sang périphérique ont été testés au moyen de temps réel de PCR quantitative (qrtPCR) pour l'expression de quatre gènes CTC associés: l'antigène carcinoembryonnaire (CEA), la cytokératine-19 (CK19), facteur de croissance vasculaire endothélial (VEGF) et la survivine (BIRC5).
Gene expression
Résultats de la survivine, CK19, le CEA et le VEGF était plus élevé que chez les témoins normaux dans 98,6%, 97,1%, 42,9% et 38,6% des cas, respectivement, suggérant une valeur diagnostique potentielle des deux survivine et CK19 . A l'analyse de survie multivariée, la classification TNM et les niveaux d'ARNm de la survivine ont été retenus comme facteurs pronostiques indépendants, démontrant que l'expression de la survivine dans le sang périphérique ajoute une information pronostique au système TNM. Contrairement aux données publiées précédemment, l'abondance de transcription du CEA, CK19 et VEGF n'a pas été associée à des résultats cliniques des patients. De Conclusions
niveaux de survivine d'expression génique ajoutent de la valeur pronostique significative au système de classification TNM actuelle. La validation de ces résultats dans une plus grande série prospective et multicentrique pourrait conduire à la mise en œuvre de ce biomarqueur dans le cadre clinique de routine afin d'optimiser la stratification du risque et, finalement, personnaliser la gestion thérapeutique de ces patients.
Contexte
cancer gastrique représente le quatrième cancer le plus fréquent et la deuxième cause principale de décès liés au cancer dans le monde entier. L'incidence actuelle estimée du cancer gastrique est d'environ 16,2 /100 000 personnes /an (taux standardisé mondial, WSR), avec incidences les plus élevées en Asie de l'Est, Europe de l'Est et en Amérique du Sud [1]. À l'heure actuelle le seul système pronostique couramment utilisé pour le traitement des patients atteints de cancer gastrique est basé sur la tumeur-Node-Metastasis (TNM) système de stadification International Cancer Union Against [2], dans lequel le degré de pénétration de la tumeur (pT) et le statut ganglionnaire (pn) [3] sont les deux principaux indicateurs de pronostic chez les patients sans maladie métastatique à distance. Les patients aux premiers stades sont des candidats considérés pour la guérison par la chirurgie. Cependant, 50% des patients atteints de cancer gastrique souffrent de récidives de tumeurs, même après une chirurgie radicale [4, 5]. Ainsi, le système de mise en scène actuelle ne semble pas prédire avec précision le risque de chaque patient de récidive du cancer. En effet, cette classification définit les grandes catégories avec significativement différents sous-groupe pronostique au sein de chaque étape, ce qui rend ce système suboptimale pour une approche thérapeutique personnalisée. Ceci est illustré par le fait que certains patients actuellement classés comme «faible risque» ne sont pas soumis à un traitement adjuvant, bien qu'ils rechute de la maladie de l'expérience. Vice versa, certains patients subissant actuellement un traitement adjuvant en raison de la classification TNM "à haut risque", ne serait pas besoin de ce traitement [6]. Afin de résoudre ce problème et d'améliorer le pronostic des patients, de nouveaux paramètres de prédiction fiable le résultat de patients sont nécessaires d'urgence. Les patients qui avaient subi une chirurgie potentiellement curative conservent le risque de récidive qui provient de résidus de tumeurs microscopiques connus sous le nom de maladie résiduelle minimale (MRD). MRD peut affecter les différents compartiments du corps, y compris la moelle osseuse, les ganglions lymphatiques et le sang périphérique [7]. Au cours des dernières années, plusieurs études ont mis l'accent sur la détection des cellules tumorales circulantes (CTC) par rapport à leurs implications cliniques pour les patients atteints de cancer gastrique. En conséquence, le temps réel réaction quantitative en chaîne par polymérase (qrtPCR) et des variantes de cette technique, qui est considérée comme étant la méthode la plus sensible pour l'évaluation de l'expression génique, ont été utilisés dans la détection de marqueurs tumoraux qui indiquent la présence de CTC dans le sang [8].
Dans la présente analyse, nous avons pour objectif de profilage du sang périphérique de 70 brevets touchés avec adénocarcinome gastrique en utilisant qrtPCR. Nous avons testé quatre biomarqueurs, deux de la présence, annonce deux de l'agressivité de la tumeur, et l'un d'eux, la survivine, ajouter de la puissance pronostique indépendant au système de mise en scène TMN. Cela pourrait permettre une meilleure stratification du risque du patient et donc une meilleure gestion thérapeutique, en particulier dans le cadre du traitement adjuvant
Méthodes
Patients
Dans cette étude, nous avons inscrit 70 patients (39 hommes, 31 femmes;. Tranche d'âge 28 - 90 ans, l'âge médian 68 ans) qui ont subi une intervention chirurgicale (gastrectomie totale ou partielle) pour histologiquement prouvé carcinome gastrique entre Octobre 1998 et Novembre 2007, et pour lequel un échantillon de sang périphérique était disponible. L'étude, qui est en conformité avec la Déclaration d'Helsinki, a été approuvé par le comité d'éthique local de l'Université de Padoue (numéro d'agrément: 70/2006). Rédigé le consentement éclairé en ce qui concerne l'utilisation des échantillons biologiques à des fins d'enquête a été obtenue chez tous les patients. Au moment de l'analyse, 33 (47,1%) étaient vivants alors que 37 (52,9%) étaient morts. Le suivi médian était de 15 mois (extrêmes: 6-119 mois). La médiane de survie était de 25 mois. caractéristiques tumorales sont résumées dans le tableau 1. La profondeur de l'invasion tumorale (catégorie T), l'étendue des métastases ganglionnaires (N catégorie) et les métastases macroscopique (catégorie M) ont été classés en fonction de l'UICC TNM system.Table 1 Patients et caractéristiques de la tumeur .
Paramètres
N
(%)
patients tous
70
(100,0)
39
hommes (55,7)
femme
31
(44,3)
âge (années)
≤ 65
21
(30,0)
> 65
49
(70,0)
multicentriques
5
emplacement (7.1)
tiers supérieur
11
(15,7)
tiers moyen
19
(27.1)
tiers inférieur
35
(50,0)
stade TNM
I (IA + IB)
10
(14,3)
II
14
(20,0)
III (IIIA + IIIB)
19
(27.1)
IV
27
(38,6)
lignées cellulaires
la lignée humaine de cellules de carcinome gastrique NCI-N87, obtenu à partir de l'American type Culture Collection (Manassas, États-Unis), a été incubé dans un milieu RPMI-1640 (Invitrogen - Gibco, Carlsbad, CA, USA) contenant 10% de sérum de veau foetal . (Euroclone - CELBIO, Pero, MI), Hepes 10 mM, 1 mM de pyruvate de sodium (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO), à 37 ° C dans 5% de CO 2
NCI-N87 est une lignée cellulaire de carcinome gastrique dérivée d'une métastase hépatique d'un cancer bien différencié de l'estomac prise avant le traitement cytotoxique. Selon la fiche technique du fabricant, les cellules expriment la glycoprotéines de surface l'antigène carcinoembryonnaire (CEA).
Cellulaires spiking expériences
Une étude de dopage cellulaire a été effectuée afin de déterminer la sensibilité de cette technique qrtPCR pour détecter les cellules cancéreuses dans le périphérique mononucléaires du sang les cellules (PBMC). Les PBMC ont été obtenus chez des volontaires sains, et ont été comptés et dilué 1: 1 dans du milieu RPMI. les cellules cancéreuses gastriques N87 ont été comptées et diluées en série de 1 x 10 6 cellules /ml à 1 cellules /ml dans le PBMC. L'ARN total a été extrait et reverse- transcrit à partir de 2 ml de chaque fraction. qrtPCR pour les deux gènes d'intérêt ont ensuite été effectués comme décrit ci-après un prélèvement d'échantillon, extraction d'ARN et l'ADNc de la synthèse de.
A 6 ml d'aliquote de sang veineux a été obtenu auprès de chaque patient au moment de l'intervention chirurgicale. Le traitement des échantillons a été effectuée dans les deux heures après le retrait de sang. L'échantillon a été centrifugé à 2000 x g pendant 10 minutes, et la fraction de CMSP a été recueilli et stocké dans de l'azote liquide.
Les échantillons congelés ont été décongelés et l'ARN total a été extrait en utilisant la méthode du thiocyanate de guanidinium-phénol-chloroforme (réactif Trizol, Invitrogen, Carlsbad, CA, États-Unis). L'intégrité de l'ARN isolé a été établie par analyse qrtPCR de la bêta-actine du gène endogène de référence (b-actine), comme décrit ci-dessous [9] L'ARN total de. (7 pg par 100 volume réactionnel final ul) a été transcription inverse en utilisant amorces aléatoires et MultiScribe transcriptase inverse (ADNc haute capacité inverse kit de transcription, Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Le mélange réactionnel a été mis en incubation pendant 10 minutes à 25 ° C, puis à 37 ° C pendant 120 minutes. L'ADNc a été stocké à -80 ° C jusqu'à utilisation.
temps réel réaction en chaîne par polymérase quantitative
Les niveaux de transcription de quatre gènes (par exemple, un antigène carcinoembryonnaire [CEA], la cytokératine-19 [CK19] survivine et endothélial vasculaire le facteur de croissance [VEGF]) ont été mesurés dans le sang périphérique des patients au moyen d'une PCR quantitative en temps réel (qrtPCR) en utilisant la méthode de quantification relative (2 -ΔΔCt méthode) [10, 11]. En utilisant le -ΔΔCt procédé 2, les données sont présentées sous forme de facteur de variation de l'expression génique normalisée par un gène de référence et par rapport à un échantillon étalon. Le but du processus de normalisation consiste à ajuster la valeur représentant le niveau de transcription de chaque gène par la quantité d'ARNm présente dans chaque échantillon: ceci est généralement obtenu en divisant le niveau de chaque gène d'intérêt d'expression par ceux d'un gène de référence (également appelé "ménage" gène). gènes d'entretien ménager sont exprimés constitutivement et - idéalement - ne sont pas affectés par des manipulations expérimentales: donc, ils devraient approximativement refléter le montant total de l'ARNm testé dans chaque échantillon [12]. Comme le gène de référence dans cette étude, nous avons utilisé la bêta-actine, l'un des gènes les plus couramment utilisés d'entretien ménager.
Dans une étude PCR de quantification relative, le soi-disant «calibrateur» est représenté par l'expression du gène d'un échantillon choisi par lequel le profil d'expression de chaque échantillon d'intérêt est ajusté: cette approche permet à l'enquêteur de comparer le profil d'expression des échantillons d'intérêt les uns avec les autres en fonction de leur facteur de variation par rapport à un échantillon unique (calibrateur)
. habituellement, le calibrateur est un échantillon non traité (par exemple, dans une étude fonctionnelle), un échantillon au temps zéro (par exemple, dans une étude de décours temporel) ou tout échantillon non lié (par exemple, des contrôles sains dans une étude de patients, ou des fibroblastes normaux dans une cellule cancéreuse étude de la ligne) [10]. Un pool d'ADNc dérivée à partir de PBMC de donneurs sains a été 20 utilisé comme source d'étalonnage dans notre étude. Évaluation du 2 -ΔΔCt indique que le facteur de variation de l'expression génique par rapport à l'étalon. Pour l'étalonnage du ΔΔCt est égal à zéro, et 2 0 est égal à un, de sorte que le facteur de variation de l'expression génique par rapport à l'étalon égal à un, par définition. Of the méthode a été validée par notre système expérimental en vérifiant que le l'efficacité de l'amplification des cibles et les gènes b-actine étaient similaires. TaqMan Gene Expression Assays spécifiques pour le CEA, CK19, survivine et VEGF ont été achetés chez Applied Biosystems. Pour éviter l'amplification de l'ADN génomique contaminé, la paire d'amorces a été placée à la jonction entre deux exons. Le test qrtPCR a été réalisée en utilisant le système de détection de séquence ABI PRISM 7300. La réaction de PCR procéder dans un mélange (30 pl) contenant 15 pi de 2 x TaqMan PCR Universal Master Mix, 1,5 pi de 20 × TaqMan test Gene Expression (tous les réactifs d'Applied Biosystems), 12,5 pi d'eau et 1 pl de matrice d'ADNc . Cinquante cycles d'amplification ont été réalisées à 95 ° C (15 secondes) et 60 ° C (1 minute) et les niveaux d'expression de l'ARNm ont été normalisés par rapport quantifié l'expression de l'ARNm b-actine pour chaque échantillon.
Analyse statistique
Les analyses statistiques ont été réalisée en utilisant le logiciel Stat View V. 4.57 (Abacus Concepts, Londres, Royaume-Uni) et le logiciel V7.0.0 StatXact (Cytel Software Corporation, États-Unis). La corrélation entre les niveaux (élevés par rapport faible expression du gène, tel que défini par la valeur médiane) gène et catégories d'échelonnement TNM de la maladie a été évaluée en utilisant le test de tendance Cochrane-Armitage. Les courbes de survie ont été estimées en utilisant la méthode de Kaplan-Meyer, et des comparaisons de survie univariées ont été calculés selon le test du log-rank. Les niveaux de transcription des quatre gènes, ainsi que des facteurs anthropométriques et stades TNM (selon la 5ème édition du système de stadification TNM de l'AJCC sorti en 1997), ont été utilisés comme variables indépendantes dans l'analyse de survie multivariée, qui a été réalisée en utilisant la Cox proportionnelle modèle de régression des risques [13]. Le choix des variables importantes qui contribuent au modèle prédictif a été effectué par la méthode pas à pas. . Les valeurs <Probabilités; les résultats de 5% ont été considérés comme statistiquement significative
cellulaire dopage: sensibilité de qrtPCR technique
Dans la lignée cellulaire N87, les niveaux d'ARNm de la CEA, CK19, survivine, et les gènes du VEGF ont été fortement exprimés (Figure 1): par conséquent, cette lignée cellulaire de carcinome gastrique a représenté un témoin positif valide pour nos expériences. niveaux Figure 1 Gene expression des quatre gènes d'intérêt dans les cellules cancéreuses gastriques humaines N87 (tel que mesuré par PCR quantitative en temps réel: voir le texte pour les détails). Le logarithme naturel des niveaux d'expression est rapporté sur l'axe des y: l'origine de l'axe (0) représente l'échantillon de référence (appelé calibrateur) avec laquelle tous les échantillons expérimentaux sont comparés dans la méthode de quantification relative (voir le texte pour les détails)
. pour établir la limite de détection (sensibilité) de la technique qrtPCR, des dilutions en série de 10 fois (dans les PBMC) de N87 cellules de carcinome gastrique ont été dosés en triple exemplaire en utilisant le CEA et qrtPCR survivine comme marqueurs génétiques. CEA et survivine ARNm ont été détectés jusqu'à 1 cellule /10 8 PBMC dilution. Expression des marqueurs de ce qui correspond à la recherche de 1 à 10 malignes de cellules par 10 ml de sang périphérique (données non représentées) dans des échantillons de sang
des échantillons de sang périphérique provenant de tous les 70 patients ont été évalués pour les quatre gènes marqueurs. L'expression a été positive (supérieure calibrateur) dans 98,6%, 97,1%, 42,9%, 38,6% des échantillons pour la survivine, CK19, CEA, VEGF, respectivement (tableau 2). Puisque les niveaux de gènes survivine et CK19 trouvé dans presque tous les patients sont plus importants que ceux des témoins en bonne santé, ces résultats indiquent un potentiel diagnostique des deux niveaux genes.Table 2 transcriptionnelle de quatre marqueurs pronostiques dans le sang périphérique des patients atteints de cancer gastrique.
marqueur
Au-dessus de calibrateur (%) *
ci-dessous calibrateur (%) *
Indétectable (%)

survivine
69 (98,6)
1 (1.4)
0 (0,0)
CK19
68 (97,1)
2 (2.9)
0 (0.0 )
CEA
30 (42,9)
21 (30,0)
19 (27.1)
VEGF
27 (38,6)
43 (61,4)
0 (0.0 )
* les niveaux d'expression génique ont été mesurés par PCR quantitative en temps réel: en utilisant la méthode de quantification relative, des échantillons ont été classés comme ci-dessus ou en dessous des niveaux trouvés dans le calibrateur (échantillons de sang périphérique mis en commun provenant de donneurs sains)
en outre,. si l'on considère le 75e percentile des niveaux d'expression de la survivine par étape, nous avons eu une tendance augmentation significative (p = 0,04) pour les étapes de I à III, mais pas pour la phase IV (figure 2). Figure 2 niveaux du gène de la survivine mesurée dans le sang périphérique de 70 patients au stade TNM I à IV du cancer gastrique. L'analyse de test de tendance montre une augmentation significative des niveaux de transcription survivine pour les patients de stade I à III cancer gastrique (tendance test de valeur P = 0,04). Pour chaque colonne est rapporté la moyenne ± écart-type
Survival analyse
Après un suivi moyen de 26 mois, la survie globale médiane (OS) pour le stade TNM I-II n'a pas été atteinte. le système d'exploitation médian pour la phase III et IV était de 25 et 13 mois, respectivement (test log-rank P-valeur < 0,0001, Figure 3). Figure 3 La survie globale pour le stade TNM I-II, III et IV pour tous les patients (test log-rank P-valeur < 0,0001).
Sur l'analyse de survie univariée, parmi les quatre gènes que nous avons testé, seulement survivine expression pourrait identifier deux groupes de patients dont le pronostic est significativement différent. En fait, compte tenu de la 75e centile des niveaux de transcription du gène transformation logarithmique (1.508) comme point de coupure, OS médian pour haute (> 1.508) et faible (≤1.508) survivine l'abondance d'ARNm étaient 14 et 41 mois, respectivement (log- rang P-value = 0,036, Figure 4). Figure 4 Kaplan-Meier courbes de survie des patients souffrant d'hypertension (> 75e percentile) ou faible (< 75e percentile) les niveaux de transcription de survivine mesurées dans le sang périphérique. Log-rank test de valeur P = 0,036.
L'analyse de survie multivariée, y compris le stade TNM, l'âge, le sexe et les niveaux d'ARNm des quatre marqueurs a montré que seulement un stade TNM et les niveaux survivine ARNm mesurés dans le sang périphérique prédisent indépendamment l'OS de patients . Le hazard ratio (HR) associée à des niveaux survivine indique l'augmentation du risque de décès pour 100 fois plus dans l'expression de la survivine (tableau 3) .Table 3 multivariée d'analyse de survie de 70 patients atteints de cancer gastrique.
95% CI
P-valeur
HR de
covariables


limite inférieure
limite supérieure

stade TNM I
1 (référence)
- -
-
stade II
1.20
1.01
1,45
0,048
stade III
1,34
1,05
1,70
0,017
stade IV
3.17
1,38
6,77
0,004
survivine *
1,34
1.14
1,53
< 0,001
HR: hazard ratio; IC: intervalle de confiance; * HR associée à des niveaux survivine indique l'augmentation du risque de mort pour 100 fois augmentation de l'expression de la survivine.
Étant donné que seuls ces quatre variables indépendantes ont été retenues par le modèle de Cox, cette analyse suggère que l'expression du gène survivine peut ajouter de l'information pronostique utile à des facteurs bien établis tels que le système de classification TNM.
Discussion
dans cette étude, nous avons constaté que les niveaux de transcription de survivine mesurées dans le sang périphérique des patients atteints de cancer de l'estomac en corrélation indépendamment avec leur survie globale.
Si validé dans des études prospectives plus importantes, ces résultats permettraient d'augmenter la puissance pronostique des facteurs pronostiques classiques, qui sont actuellement incorporées par les paramètres TNM de mise en scène. Ceci est d'une importance particulière pour les patients avec le stade TNM I à III de la maladie, dont la stratification du risque optimal est essentiel pour identifier les sujets avec la plus forte probabilité de bénéficier de traitements adjuvants.
Nos résultats sont particulièrement pertinents aussi du point de vue de la biologie de la tumeur parce que le gène code pour une protéine survivine anti-apoptotique clé appartenant à l'inhibiteur de la protéine de l'apoptose (IAP) famille. En plus d'être l'un des facteurs anti-apoptotiques mieux caractérisés [14], la survivine est l'objet d'intenses recherches en raison du fait que chez les adultes, il est exprimé de façon sélective pratiquement que par les cancers d'origines différentes; Par ailleurs, son expression dans la tumeur primaire a été associée à un pronostic défavorable et la résistance aux agents chimiothérapeutiques classiques [15]. Ces observations survivine une cible idéale pour des thérapies spécifiques à une tumeur, tels que des inhibiteurs de petites molécules et spécifiques de l'antigène immunothérapie [16]. Le plus survivine l'expression des protéines dans les tumeurs primaires, y compris le cancer gastrique, a été étudiée en tant que facteur de pronostic supérieur les niveaux étant associés à des pires résultats du cancer [17]. A propos de l'expression de l'ARN, les niveaux d'ARNm de la survivine ont été étudiés comme un marqueur de cellules tumorales circulantes (CTC) dans différents types de cancer, mais les données disponibles sont rares [18, 19]. Dans une série de 26 patients atteints d'un cancer de l'estomac, survivine ARNm (telle que mesurée au moyen d'qrtPCR à base d'ELISA) dans le sang périphérique a été rapporté en corrélation avec le pronostic des patients, la classification TNM étant exclus du modèle mutivariable final (forçant toutes les variables dans le modèle de Cox) [20]. Dans notre grande série (n = 70), le rôle pronostique des taux sanguins survivine est confirmé, bien que la mise en scène TNM reste un facteur pronostique important dans le modèle multivarié final (en utilisant le mode pas à pas pour la sélection variable). Malgré l'association significative avec le pronostic des patients, les niveaux d'ARNm de survivine n'a pas augmenté dans les quatre stades TNM: la tendance pour une abondance accrue de la transcription a été en effet démontré que chez les patients atteints de stade I à III de la maladie (Figure 2). Cette constatation pourrait dépend de la taille des échantillons bas des stades TNM simples (et la faible puissance statistique conséquente), mais pourrait aussi indique que la survivine joue un rôle dans locorégionale et non dans la maladie métastatique à distance (où d'autres gènes pourraient être plus pertinents, comme l'a récemment rapportés [21])
Contrairement à d'autres études [9, 22-26], les niveaux de CK19 et le CEA ne sont pas corrélées avec la survie des patients dans notre série, soit sur univariées (données non présentées) ou l'analyse de survie multivariée. ce peut dépendre de plusieurs facteurs. Tout d'abord, l'inclusion dans notre analyse multivariée (avec un mode pas à pas de sélection variable) d'un marqueur pas considéré par d'autres auteurs rend toute comparaison impossible.
noter, certains rapports positifs utilisent uniquement l'analyse de survie univariée, ce qui compromet la la fiabilité et la reproductibilité de leurs résultats, une fois l'ajustement pour les facteurs pronostiques bien établis (par exemple les stades TNM) ont été mises en œuvre [9, 25, 27, 28]. Par ailleurs, en ligne avec nos résultats d'autres chercheurs font rapport absence d'association entre cytokératines cellules positives présence et le pronostic [29] (tableau 4) .Table 4 Certaines séries analysant le rôle pronostique des cellules tumorales circulantes (CTC) chez les patients atteints de cancer gastrique.
Author

Year

Ref.

Patients

Method

Survival analyse
Marqueurs
de Constatations
Koga T et. al.
2008
[9]
RT-PCR quantitative de 101
univariée
CK18, CK19, CK20, CEA
CK19 est le meilleur marqueur et est utilisable pour estimer le pronostic ou le traitement adjuvant
Yie SM et. al.
2008
[20]
26 (cancer gastrique)
Statut survivine de RT-PCR ELISA
multivariée de survivine exprimant CTC est un prédicteur puissant et indépendant pour une récidive
Hiraiwa K et. Al.
2008
[22]
44 (cancer gastrique)
système CellSearch
multivariée de CD45 (-) cellules vs CK cellules (+)
NORCO significativement corrélée avec stade de la tumeur avancée
Illert B et. al.
2005
[23]
70
RT-PCR quantitative
multivariée
CK20 de la CK20 est un marqueur pronostique indépendant
Yeh KH et. al.
1998
[24]
34
imbriquée RT-PCR quantitative
univariée
CK19
CK19 exprimant CTC sont associés à un mauvais pronostic
Seo JH et. al.
2005
[25]
46
RT-PCR quantitative
Non effectuée
CEA
CEA ARNm est significativement corrélée avec récidive clinique
Wu CH et. al. 2006

[26]
42
RT-PCR quantitative
Non effectuée
hTERT, CK19, CK20, CEA
CEA ARNm est corrélée à un risque plus élevé de post-opératoire récurrence /métastases
Uen YH et. al. 2006

[27]
52
RT-PCR quantitative
univariée
c-MET, c-Met de MUC1 et MUC1mRNA corrélation significative avec le pronostic
Mimori K et. al.
2008
[28]
RT-PCR quantitative de 810
univariée
MT1-MMP
MT1-MMP est un facteur indépendant pour déterminer la récidive et de métastases à distance
Pituch-Noworolska A et. Al.
2007
[29]
57
cytométrie de flux
univariée de CD45 (-) cellules vs CK (+) des cellules
La présence de CK cellules (+) est sans valeur pronostique
Ces données contradictoires pourraient dépendent du fait que CK19 et le CEA sont des marqueurs de la présence de la CCT, mais pas nécessairement de la capacité de la CCT à métastaser: en fait, il est bien accepté que seul un sous-ensemble de la CCT a le biologique le potentiel de donner lieu à des dépôts métastatiques, alors que la plupart CTC finalement mourir sans être nocif pour l'hôte [7]. En conséquence, les marqueurs de CTC "agressivité" tels que la survivine pourrait révéler être plus informatif en termes de corrélation avec le pronostic des patients.
Noter, dans la présente étude de l'abondance de l'ARNm de la survivine et CK19 était toujours supérieure à celle trouvée dans témoins sains, sauf pour une ou deux cas, respectivement. Cela souligne l'importance d'utiliser une méthode quantitative (qrtPCR) qui nous a permis de stratifier les patients risque sur une échelle continue, alors que PCR standard aurait classé pratiquement tous les patients comme positif. De l'autre côté, cette conclusion - qui, au meilleur de notre connaissance n'a jamais été signalée auparavant - suggère que ces gènes pourraient être exploitées aussi à des fins de diagnostic, même si une étude dédiée spécifiquement conçu pour cet objectif est justifié
En. examen final, nous aimerions observer que les méthodes basées sur la PCR ne permettent pas d'identifier la source de la cellule des marqueurs mesurés: en fait, toutes ces méthodes nécessitent la lyse des cellules récoltées à partir du sang périphérique des patients afin d'en extraire la l'ARNm utilisé pour évaluer l'expression de gènes cibles. Outre la CCT, d'autres sources potentielles de gènes PCR-détectés sont PBMC, les cellules endothéliales circulantes (CEC), la moelle osseuse dérivée cellules souches en circulation, ainsi que les cellules de la peau (par exemple les kératinocytes, les fibroblastes, les mélanocytes) contaminent l'échantillon pendant le retrait de sang. Néanmoins, la CCT sont susceptibles d'être la source de la cellule principale de la survivine comme son expression est très limitée dans les tissus adultes normaux et est à la place principalement restreinte aux cellules malignes [30]. À cet égard, les méthodes cytométrie sont moins sujettes à des résultats faussement positifs, car ils impliquent la cellule à base d'anticorps tri suivie par l'identification cytologique des cellules tumorales qui précède leur caractérisation phénotypique [31]. Des conclusions de niveaux de survivine d'expression génique ajouter de la valeur pronostique significative au système actuel de classification TNM des patients atteints de cancer de l'estomac. La validation de ces résultats dans une plus grande série prospective pourrait
conduire à optimiser la stratification du risque et, finalement, de personnaliser la gestion thérapeutique de ces patients. Originaux fichiers Déclarations
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Les auteurs déclarent qu'ils avoir aucun conflit d'intérêts.

• caractéristiques clinicopathologiques et les rôles pronostiques de KRAS, BRAF, PIK3CA et NRAS mutations dans le cancer gastrique avancé
• Stent par rapport gastrojéjunostomie pour la palliation de l'obstruction de la vidange gastrique: une revue systématique