níveis do gene survivin no sangue periférico de pacientes com câncer gástrico prever de forma independente os níveis do gene survivin survival

no sangue periférico de pacientes com câncer gástrico prever de forma independente a sobrevivência da arte abstracta
Fundo
A detecção de células tumorais circulantes (CTC) é considerada uma ferramenta promissora para melhorar a estratificação do risco de pacientes com tumores sólidos. Nós investigamos se a expressão de genes relacionados CTC acrescenta qualquer poder prognóstico para o sistema de estadiamento TNM em pacientes com carcinoma gástrico.
Métodos
Setenta pacientes com estágio TNM I a IV carcinoma gástrico foram retrospectivamente inscritos. Amostras de sangue periférico foram testadas por meio de quantitativa PCR em tempo real (qrtPCR) para a expressão de quatro genes relacionados CTC: antigénio carcinoembrionário (CEA), citoqueratina-19 (CK19), factor de crescimento endotelial vascular (VEGF) e Survivina (BIRC5).

resultados da expressão gênica de Survivin, CK19, CEA e VEGF foi maior do que nos controles normais em 98,6%, 97,1%, 42,9% e 38,6% dos casos, respectivamente, o que sugere um potencial valor diagnóstico de ambos Survivin e CK19 . Na análise de sobrevida multivariada, estadiamento TNM e os níveis de mRNA de Survivina foram retidos como fatores prognósticos independentes, demonstrando que a expressão Survivin no sangue periférico acrescenta informação prognóstica para o sistema TNM. Em contraste com os dados publicados anteriormente, a abundância transcrição da CEA, CK19 e VEGF não foi associada com a evolução clínica dos pacientes.
Conclusões
níveis de Survivin expressão Gene adicionar valor prognóstico significativo para o sistema de estadiamento TNM atual. A validação destes resultados em séries maiores prospectivo multicêntrico pode levar à implementação deste biomarcador na prática clínica de rotina, a fim de otimizar a estratificação de risco e, finalmente, personalizar o manejo terapêutico destes pacientes.
Fundo
O câncer gástrico representa o quarto câncer mais comum e segunda principal causa de morte relacionada ao câncer em todo o mundo. A incidência atual estimado de câncer gástrico é de aproximadamente 16,2 /100 000 pessoas /ano (taxa padronizada mundo, WSR), com maior incidência no Leste da Ásia, Europa Oriental e América do Sul [1]. Actualmente, o único sistema de prognóstico empregada rotineiramente para o tratamento de pacientes com câncer gástrico é baseado no tumor metástase-sistema internacional Cancer Union Against (TNM) [2], em que o grau de penetração do tumor (PT) e do estado nodal (pN) [3] são os dois principais indicadores de prognóstico em pacientes sem doença metastática distante. Os pacientes em estágios iniciais são candidatos considerados para a cura pela cirurgia. No entanto, 50% dos pacientes com câncer gástrico sofrem recaídas tumor mesmo após a cirurgia radical [4, 5]. Assim, o sistema de estadiamento atual não parece prever com precisão o risco do paciente individual de recorrência do câncer. Na verdade, esta classificação identifica grandes categorias com significativamente diferente subgrupo de prognóstico dentro de cada etapa, o que torna este sistema suboptimal para uma abordagem terapêutica personalizada. Isto é exemplificado pelo facto de alguns pacientes actualmente classificados como "baixo risco" não estão submetidos a terapia adjuvante, embora eles recidiva da doença experiência. Vice-versa, alguns pacientes atualmente submetidos a terapia adjuvante por causa de "alto risco" de classificação TNM, não precisaria este tratamento [6]. A fim de resolver esta questão e melhorar o prognóstico dos pacientes, são urgentemente necessários novos parâmetros prever de forma fiável a evolução dos pacientes. Os pacientes que se submeteram a cirurgias potencialmente curativas reter o risco de recorrência que se origina a partir de resíduos tumorais microscópicas conhecidas como doença residual mínima (DRM). MRD pode afectar diferentes compartimentos do corpo, incluindo a medula óssea, os gânglios linfáticos e no sangue periférico [7]. Nos últimos anos, vários estudos têm-se centrado na detecção de células tumorais (CTC) que circula no que diz respeito às suas implicações clínicas para os doentes com cancro gástrico. Como resultado, quantitativo em tempo real da reacção em cadeia da polimerase (qrtPCR) e variações desta técnica, que é considerada como sendo o método mais sensível para avaliar a expressão do gene, têm sido utilizados na detecção de marcadores tumorais que indicam a presença de CTC no sangue [8].
na análise atual, que teve como objetivo traçar o perfil do sangue periférico de 70 patentes afetadas com adenocarcinoma gástrico usando qrtPCR. Foram testados quatro biomarcadores, duas a presença de dois, anúncio da agressividade do tumor, e um destes, a Survivina, adicionar energia independente de prognóstico para o sistema de estadiamento TMN. Isso pode permitir uma melhor estratificação do risco do paciente e, assim, uma melhor gestão terapêutica, especialmente no cenário adjuvante
Métodos
Pacientes
Neste estudo foram inscritos 70 pacientes (39 homens, 31 mulheres;. Faixa etária 28 - 90 anos, média de idade 68 anos) submetidos à cirurgia (gastrectomia total ou parcial) do carcinoma gástrico histologicamente comprovada entre Outubro de 1998 e novembro de 2007, e para os quais uma amostra de sangue periférico estava disponível. O estudo, que está em conformidade com a Declaração de Helsinki, foi aprovado pelo Comitê Local de Ética da Universidade de Pádua (número de aprovação: 70/2006). consentimento informado por escrito sobre o uso de espécimes biológicos para fins de investigação foi obtido de todos os pacientes. No momento da análise, 33 (47,1%) estavam vivos enquanto que 37 (52,9%) tinham morrido. Acompanhamento médio foi de 15 meses (variação: 6-119 meses). A sobrevida média foi de 25 meses. características do tumor estão resumidos na Tabela 1. A profundidade de invasão tumoral (categoria T), a extensão da metástase em linfonodo (categoria N) e metástases macroscópica (M categoria) foram classificados de acordo com a UICC TNM encenação system.Table 1 Pacientes e características do tumor .
Parâmetros
N
(%)
pacientes
todos
70
(100,0)
masculino
39
(55,7)
feminina
31
(44,3)
Idade (anos)
≤ 65
21
(30,0) Art > 65
49
(70,0)
Localização
multicêntrico
5
(7,1)
terço superior
11
(15,7)
terço médio
19
(27,1)
terço inferior
35
(50,0)
estágio TNM
I (IA + IB)
10
(14,3)
II
14
(20,0)
III (IIIA + IIIB)
19
(27,1)
IV
27
(38,6)
As linhas celulares
a linha celular de carcinoma gástrico humano NCI-N87, obtida a partir da American Type Culture Collection (Manassas, EUA), foi incubado em meio RPMI-1640 (Invitrogen - Gibco, Carlsbad, CA, EUA) contendo soro fetal de vitelo a 10% . (Euroclone - Celbio, Pero, MI), Hepes 10 mM, 1 mM de piruvato de sódio (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO), a 37 ° C em 5% de CO 2
NCI-N87 é uma linha celular de carcinoma gástrico derivadas de uma metástase no fígado de um carcinoma bem diferenciado do estômago tomadas antes da terapia citotóxica. De acordo com a folha de dados do fabricante, as células expressam a glicoproteínas de superfície antigénio carcinoembrionário (CEA).
Celulares enriquecidas
Um estudo spiking celular foi realizado a fim de determinar a sensibilidade desta técnica qrtPCR para detecção de células cancerígenas no sangue periférico mononucleares células (PBMC). As PBMC foram obtidas de voluntários saudáveis, e foram contadas e diluídas 1: 1 em meio RPMI. células cancerosas gástricas N87 foram contadas e diluídas em série a partir de 1 × 10 6 células /mililitro para 1 célula /mililitro na PBMC. O ARN total foi extraído e reversa transcrito a partir de 2 ml de cada fracção. qrtPCR para dois genes de interesse foram então realizada, como descrito abaixo síntese de recolha de amostras, a extracção de ARN e ADNc.
Uma alíquota de 6 ml de sangue venoso foi obtida a partir de cada paciente no momento da cirurgia. O processamento da amostra foi realizada no prazo de duas horas após a retirada de sangue. A amostra foi centrifugada a 2000 × g durante 10 minutos, e a fracção de PBMC foi recolhido e armazenado em azoto líquido.
As amostras congeladas foram descongeladas e o RNA total foi extraído utilizando o método de tiocianato de guanidina-fenol-clorofórmio (Reagente Trizol, Invitrogen, Carlsbad, CA, EUA). A integridade do ARN isolado foi estabelecida por análise qrtPCR da beta actina gene de referência endógena (b-actina), tal como descrito abaixo [9].
ARN total (7 ug por 100 uL de volume de reacção final) foi sujeitos a transcrição reversa usando iniciadores aleatórios e MultiScribe transcriptase reversa (cDNA de alta capacidade reverter kit de transcrição, Applied Biosystems, Foster City, CA, EUA). A mistura de reacção foi incubada durante 10 minutos a 25 ° C, em seguida a 37 ° C durante 120 minutos. O ADNc foi armazenado a -80 ° C até à sua utilização.
reacção quantitativa de polimerase em cadeia em tempo real
Os níveis de transcrição de quatro genes (ou seja, antigénio carcinoembrionário [CEA],, survivina e endotelial vascular citoqueratina-19 [CK19] factor de crescimento [VEGF]) foram medidos no sangue periférico de pacientes, por meio de PCR quantitativa em tempo real (qrtPCR) utilizando o método de quantificação relativa (2 -ΔΔCt método) [10, 11]. Usando o -ΔΔCt método 2 Os dados são apresentados como a dobra de mudanças na expressão de genes normalizados por um gene de referência e em relação a uma amostra de calibrador. A finalidade do processo de normalização é a de ajustar o valor que representa os níveis de transcrição de cada gene por a quantidade de ARNm presente em cada amostra: este é normalmente obtido dividindo os níveis de cada um dos genes de interesse de expressão por aqueles de um gene de referência (também chamado "housekeeping gene"). genes de manutenção são expressos constitutivamente e - de preferência - não são afectados por manipulações experimentais: por conseguinte, eles devem aproximadamente reflectir a quantidade total de ARNm testadas em cada amostra [12]. Como o gene de referência no presente estudo foi utilizada a beta-actina, um dos genes de manutenção mais utilizados.
Num estudo de PCR quantificação relativa, o assim chamado "calibrador" é representado pela expressão do gene de uma amostra, através da qual escolhido o perfil de cada amostra de interesse expressão é ajustada: esta abordagem permite ao investigador para comparar o perfil das amostras de interesse uns com os outros em termos de expressão a sua dobra-alterações no que diz respeito a uma única amostra (o calibrador)
. normalmente, o calibrador é uma amostra não tratada (por exemplo, em um estudo funcional), uma amostra no tempo zero (por exemplo, em um estudo de tempo-curso) ou qualquer amostra não relacionado (por exemplo, controlos saudáveis ​​num estudo de doentes, ou fibroblastos normais em uma célula de cancro estudo de linha) [10]. Um conjunto de ADNc derivado a partir de PBMC de 20 dadores saudáveis ​​foi usado como a fonte de calibrador no nosso estudo. Avaliação do 2 -ΔΔCt indica a alteração vezes na expressão do gene em relação ao calibrador. Para o calibrador a ΔΔCt é igual a zero, e 2 0 é igual a um, de modo que a mudança vezes na expressão do gene em relação ao calibrador é igual a um, por definição.
O método foi validado para o nosso sistema experimental por meio da verificação de que o eficiências de amplificação dos alvos e os genes b-actina foram semelhantes. Gene TaqMan Ensaios de expressão específica para CEA, CK19, Survivina e VEGF foram adquiridos a Applied Biosystems. Para evitar a amplificação de ADN genómico contaminado, o par de iniciadores foi colocada na junção entre dois exões. O ensaio qrtPCR foi realizada utilizando o Sistema de Detecção de Sequência ABI Prism 7300. A reacção de PCR proceder numa mistura (30 ul) contendo 15 ul de 2 × TaqMan Universal PCR Master Mix, 1,5 ul de 20 ensaio de gene Expressão × TaqMan (todos os reagentes a partir de Applied Biosystems), 12,5 ul de água e 1 ul de molde de ADNc . Cinquenta ciclos de amplificação foram realizadas a 95 ° C (15 segundos) e 60 ° C (1 minuto) e os níveis de expressão de ARNm foram normalizados contra a expressão de ARNm de b-actina quantificada para cada amostra. A análise estatística

análises estatísticas foram realizada através do Stat Ver software V. 4,57 (Abacus Concepts, Londres, Reino Unido) eo software v7.0.0 StatXact (Cytel software Corporation, EUA). A correlação entre os níveis de genes (altas contra baixa expressão do gene, tal como definido pelo valor médio) e doença TNM categorias de paragem foi avaliada usando o teste de tendência Cochrane-Armitage. As curvas de sobrevida foram estimadas pelo método de Kaplan-Meyer, e as comparações de sobrevivência univariadas foram calculados de acordo com o teste de log-rank. Os níveis de transcrição dos quatro genes, junto com fatores antropométricos e estágios TNM (de acordo com a 5ª edição do sistema de estadiamento AJCC TNM lançado em 1997), foram utilizados como variáveis ​​independentes na análise de sobrevida multivariada, que foi realizada utilizando o Cox proporcional perigos modelo de regressão [13]. A selecção de variáveis ​​que contribuem significativamente para o modelo de previsão foi realizada pelo método de passo a passo. . Os valores <probabilidade; 5% foram considerados estatisticamente significativos
Resultados
spiking celular: sensibilidade de qrtPCR técnica
Na linha celular N87, níveis de mRNA do CEA, CK19, Survivin, e genes de VEGF foram altamente expresso (Figura 1): Assim, esta linha celular de carcinoma gástrico representado um controlo positivo válido para as nossas experiências. níveis Figura 1 Gene expressão dos quatro genes de interesse em células cancerosas gástricas humanas N87 (medidos pelo quantitativa PCR em tempo real: ver texto para detalhes). O logaritmo natural dos níveis de expressão é relatada no eixo y: a origem do eixo (0) representa a amostra de referência (chamado calibrador) com a qual todas as amostras experimentais são comparados no método de quantificação relativa (ver texto para detalhes)
. para determinar o limite de detecção (sensibilidade) da técnica qrtPCR, diluições em série de 10 vezes (em PBMC) de células de carcinoma gástrico N87 foram ensaiadas em triplicado usando o CEA por qrtPCR e Survivina como marcadores de genes. CEA e ARNm de survivina foi detectada até 1 célula /10 8 diluição de PBMC:. Isto corresponde a encontrando 1 a 10 células malignas por 10 ml de sangue periférico (dados não mostrados)
marcadores de expressão em amostras de sangue
amostras de sangue periférico de todos os 70 pacientes foram avaliados para os quatro marcadores genéticos. A expressão foi positiva (mais elevado do que o calibrador) em 98,6%, 97,1%, 42,9%, 38,6% para amostras de Survivina, CK19, CEA, VEGF, respectivamente (Tabela 2). Como os níveis de genes survivina e CK19 encontrados em quase todos os pacientes são maiores do que os controles saudáveis, estes resultados apontam para um potencial diagnóstico de ambos os níveis genes.Table 2 transcricional de quatro marcadores prognósticos no sangue periférico de pacientes com câncer gástrico.
marcador
Acima calibrador (%) *
Abaixo calibrador (%) *
Undetectable (%)

Survivin
69 (98,6)
1 (1,4)
0 (0,0)
CK19
68 (97,1) Página 2 (2,9)
0 (0.0 )
CEA
30 (42,9)
21 (30,0)
19 (27,1)
VEGF
27 (38,6)
43 (61,4)
0 (0.0 ) *
níveis de expressão do gene foram medidos por PCR em tempo real quantitativo: utilizando o método de quantificação relativa, as amostras foram classificadas como acima ou abaixo dos níveis encontrados no calibrador (amostras de sangue periférico obtidos a partir de dadores saudáveis)
Além disso,. se considerado o percentil 75 dos níveis de expressão de survivina por estágio, tivemos um aumento da tendência significativa (p = 0,04) para as fases de I a III, mas não para o estágio IV (Figura 2). Figura níveis de genes 2 Survivin medidos no sangue periférico de 70 pacientes com estágio TNM I a IV câncer gástrico. A análise do teste de tendência mostra um aumento significativo nos níveis de transcrição Survivin através pacientes com estágio I a III câncer gástrico (tendência do teste P-valor = 0,04). Para cada coluna é relatado a média ± SD
análise de sobrevida
Após um seguimento médio de 26 meses, a sobrevida global mediana (OS) para estágio TNM I-II não foi atingido.; o sistema operacional médio para a fase III e IV foi de 25 e 13 meses, respectivamente (-rank teste log P-value < 0,0001, Figura 3). Figura 3 A sobrevida global para a fase TNM I-II, III e IV para todos os pacientes (-rank teste log P-value < 0,0001).
Após a análise de sobrevida univariada, entre os quatro genes que já testamos, única Survivin expressão pode identificar dois grupos de pacientes com prognóstico significativamente diferentes. Na verdade, considerando o percentil 75 dos níveis de transcrição de genes transformados em log (1.508) como ponto de corte, OS mediana para alta (> 1.508) e baixa (≤1.508) mRNA de Survivina abundância foram de 14 e 41 meses, respectivamente (log- classificação P-value = 0,036, Figura 4). Figura 4 Kaplan-Meier curvas de sobrevida de pacientes com elevada (> percentil 75) ou baixa (< percentil 75), os níveis de transcrição de Survivin medidos no sangue periférico. Teste log-rank P-value = 0,036.
A análise de sobrevida multivariada incluindo estágio TNM, idade, sexo e níveis de mRNA dos quatro marcadores mostrou que apenas estágio TNM e os níveis de mRNA de Survivina medidos no sangue periférico prever independentemente OS pacientes . A taxa de risco (HR) associada a níveis Survivin indica o aumento no risco de morte por aumento de 100 vezes na expressão de Survivin (Tabela 3) .table 3 multivariada análise de sobrevida de 70 pacientes com câncer gástrico.
covariáveis ​​
HR
95% CI
P-valor


limite inferior
limite superior

estágio TNM I
1 (referência)
- -
-
fase II
1,20
1,01
1,45
0,048
fase III
1,34
1,05
1,70
0,017
estágio IV
3,17
1,38
6,77
0,004
Survivin *
1,34
1,14
1,53 Art < 0,001
HR: taxa de risco; IC: intervalo de confiança; * O HR associada com níveis Survivin indica o aumento do risco de morte por aumento de 100 vezes na expressão de Survivin.
Uma vez que apenas estas quatro variáveis ​​independentes foram retidos pelo modelo de Cox, esta análise sugere que a expressão do gene Survivin pode adicionar informações prognóstico útil a fatores bem estabelecidos, tais como o sistema TNM.
Discussão
neste estudo verificou-se que os níveis de transcrição de Survivin medidos no sangue periférico de pacientes com carcinoma gástrico correlacionar de forma independente com a sua sobrevivência em geral.
Se validado em maiores estudos prospectivos, estes resultados permitiria aumentar o poder prognóstico dos fatores prognósticos convencionais, que são actualmente consagrados pelos parâmetros TNM. Isto é de especial relevância para os pacientes com estágio TNM I a III da doença, para os quais a estratificação de risco ideal é essencial para identificar indivíduos com maior probabilidade de beneficiar de tratamentos adjuvantes.
Nossas descobertas são de particular relevância, também do ponto de vista da biologia do tumor porque o gene de survivina codifica uma proteína anti-apoptótica chave pertencente ao inibidor de proteína da família da apoptose (IAP). Além de ser um dos factores anti-apoptóticos melhor caracterizadas [14], Survivina é o objecto de intensa investigação devido ao facto de que em adultos se expressa selectivamente praticamente apenas por cancros de origem diferente; Além disso, a sua expressão no tumor primário tem sido associada a um pior prognóstico e resistência a agentes quimioterapêuticos convencionais [15]. Estas observações apontam survivina um alvo ideal para terapias específicas do tumor, tais como inibidores de moléculas pequenas e imunoterapia específica do antigénio [16].
Expressão da proteína survivina em tumores primários, incluindo o cancro gástrico, tem sido investigada como um factor de prognóstico, maior níveis sendo associado com o cancro resultado pior [17]. Sobre expressão do RNA, os níveis de mRNA de Survivina têm sido investigados como um marcador de células tumorais (CTC) que circula em diferentes tipos de câncer, mas os dados disponíveis são escassos [18, 19]. Numa série de 26 doentes com cancro gástrico, o mRNA de Survivina (tal como medido por meio de qrtPCR baseado em ELISA) no sangue periférico foi avaliado para correlacionar com o prognóstico dos doentes, o TNM sendo excluídas do modelo mutivariable final (obrigando todas as variáveis no modelo de Cox) [20]. Em nossa série maior (n = 70), o papel prognóstico dos níveis sanguíneos Survivin é confirmada, embora o estadiamento TNM continua a ser um fator prognóstico significativo no modelo multivariado final (usando o modo passo a passo para a seleção das variáveis). Apesar da associação significativa com o prognóstico dos pacientes, os níveis de mRNA de Survivina não aumentou em todas as quatro fases TNM: a tendência para o aumento da abundância de transcrição foi, de facto, demonstrado apenas em pacientes com estágio I a III da doença (Figura 2). Este poder constatação depende dos tamanhos de amostra reduzidos das únicas fases TNM (e consequente baixo poder estatístico), mas pode também indica que Survivin desempenha um papel na loco-regional e não na doença metastática distante (onde outros genes poderia ser mais relevante, tal como recentemente relatados [21])
Ao contrário de outros estudos [9, 22-26], os níveis de CK19 e CEA não se correlacionam com a sobrevida dos pacientes em nossa série, quer por univariáveis ​​(dados não mostrados) ou análise de sobrevida multivariada:. presente pode depender de vários fatores. Em primeiro lugar, a inclusão em nossa análise multivariada (com um modo gradual de seleção de variáveis) de um marcador não é considerado por outros autores faz qualquer comparação inviável.
De nota, alguns relatórios positivos apenas usar análise de sobrevivência univariável, que põe em risco a confiabilidade e reprodutibilidade dos seus resultados, uma vez o ajuste para fatores prognósticos bem estabelecidos (ou seja, TNM estágios) foram implementados [9, 25, 27, 28]. Além disso, em linha com os resultados de outros investigadores fazem falta relatório da associação entre citoqueratinas presença de células positiva e prognóstico [29] (Tabela 4) .table 4 séries selecionadas analisar o papel prognóstico de células tumorais (CTC) circulantes em pacientes com câncer gástrico.
Author

Year

Ref.

Patients

Method

Survival análise
Marcadores
Achados
Koga T et. al.
2008 | [9]
101
RT-PCR quantitativo
univariada
CK18, CK19, CK20, CEA
CK19 é o melhor marcador, e é utilizável para estimar o prognóstico ou tratamento adjuvante
Yie SM et. al.
2008 | [20]
26 (câncer gástrico)
RT-PCR ELISA
multivariada
Survivin
Estado de Survivin-expressando CTC é um preditor forte e independente de recorrência
Hiraiwa K et. . Al
2008 | [22]
44 (câncer gástrico)
sistema CellSearch
multivariada
CD45 (-) células vs CK (+) células
CTSS significativamente correlacionada com estágio do tumor avançado
Illert B et. al.
2005
[23]
70
RT-PCR quantitativo
multivariada
CK20
CK20 é um marcador de prognóstico independente
Yeh KH et. al.
1998
[24]
34
Nested RT-PCR quantitativo
univariada
CK19
CK19 expressar CTC estão associados com mau prognóstico
Seo JH et. al.
2005
[25]
46
RT-PCR quantitativo
não realizada
CEA
CEA mRNA é significativamente correlacionada com a recorrência clínica
Wu CH et. al.
2006
[26]
42
RT-PCR quantitativo
não realizada
hTERT, CK19, CK20, CEA
mRNA CEA está correlacionada com maior risco de pós-operatório recorrência /metástase
Uen YH et. al.
2006
[27]
52
RT-PCR quantitativo
univariada
c-MET, MUC1
c-Met e MUC1mRNA correlação significativa com o prognóstico
Mimori K et. al.
2008 | [28]
810
RT-PCR quantitativo
univariada
MT1-MMP
MT1-MMP é um fator independente para determinar a recorrência e metástase distante
Pituch Noworolska-A et. . Al
2007
[29]
57
citometria de fluxo
univariada
CD45 (-) células vs CK (+) células
A presença de CK (+) células é de nenhum valor prognóstico
Estes dados em conflito pode depender do facto de CK19 e CEA são marcadores de presença CTC mas não necessariamente de capacidade para metastizar CTC: de facto, é bem aceite que apenas um subconjunto do CTC tem a biológica potencial de dar origem a depósitos metastáticos, enquanto a maioria CTC em última análise, morrem sem ser prejudicial para o hospedeiro [7]. Assim, os marcadores da CTC "agressividade" como Survivin pode revelar-se mais informativo em termos de correlação com o prognóstico dos pacientes.
É de notar, no presente estudo, a abundância de mRNA de Survivina e CK19 foi sempre maior do que a encontrada em controlos saudáveis ​​excepto para um e dois casos, respectivamente. Isso ressalta a importância de se utilizar um método quantitativo (qrtPCR) que nos permitiu estratificar o risco de pacientes em uma escala contínua, enquanto PCR padrão teria classificados praticamente todos os pacientes como positivo. Por outro lado, esta constatação - que para o melhor de nosso conhecimento nunca foi relatado antes - sugere que esses genes pode ser explorado também para fins de diagnóstico, embora um estudo dedicado especificamente concebido para este objectivo é garantido
Como. consideração final, gostaríamos de observar que os métodos baseados em PCR não permitem identificar a fonte de células dos marcadores medidos: na verdade, todos estes métodos requerem a lise das células colhidas a partir do sangue periférico de pacientes, a fim de extrair o ARNm utilizado para avaliar a expressão de genes alvo. Além CTC, outras fontes potenciais de genes por PCR de PBMC são detectadas, circulando células endoteliais (CEC), da medula óssea derivadas de células estaminais, bem como células da pele em circulação (por exemplo queratinócitos, f ibroblastos, melanócitos) contaminantes da amostra durante a retirada de sangue. No entanto, CTC são susceptíveis de ser a principal fonte de células para survivina conforme a sua expressão é muito limitada em tecidos adultos normais e em vez disso é principalmente restringida a células malignas [30]. A este respeito, os métodos de citometria são menos propensas a resultados falsos positivos, visto que implica celular à base de anticorpos triagem seguido de identificação citológica de células tumorais que antecede a sua caracterização fenotípica [31].
Conclusões
níveis de expressão do gene de survivina adicionar valor prognóstico significativo para o atual sistema de estadiamento TNM de doentes com carcinoma gástrico. A validação destes achados em maior série prospectiva pode levar a otimizar a estratificação de risco e, finalmente, para personalizar o manejo terapêutico destes pacientes.
Arquivos enviados originais Declarações
dos autores para imagens
Abaixo estão os links para o originais dos autores apresentados arquivos de imagens. 'arquivo original para a figura 1 12967_2009_422_MOESM2_ESM.eps Autores' 12967_2009_422_MOESM1_ESM.eps Autores arquivo original para a figura 2 12967_2009_422_MOESM3_ESM.eps Autores 'arquivo original para a figura 3 12967_2009_422_MOESM4_ESM.eps Autores' arquivo original para a figura 4 Conflito de interesses
Os autores declaram que têm interesses conflitantes.

• características clínicas e papéis prognósticos de mutações KRAS, BRAF, PIK3CA e as ARN no cancro gástrico avançado
• Stent contra gastrojejunostomy para o tratamento paliativo da obstrução da saída gástrica: uma revisão sistemática