i livelli di gene survivina nel sangue periferico di pazienti con cancro gastrico predire in modo indipendente i livelli del gene Survivin survival

nel sangue periferico di pazienti con cancro gastrico predire in modo indipendente sopravvivenza
Abstract
sfondo
Il rilevamento delle cellule tumorali circolanti (CTC) è considerato uno strumento promettente per migliorare la stratificazione del rischio nei pazienti con tumori solidi. Abbiamo studiato se l'espressione dei geni legati CTC aggiunge alcun potere prognostico per il sistema di stadiazione TNM in pazienti con carcinoma gastrico.
Metodi
Settanta pazienti con stadio TNM da I a IV carcinoma gastrico sono stati retrospettivamente arruolati. campioni di sangue periferico sono stati testati mediante real time PCR quantitativa (qrtPCR) per l'espressione di quattro geni CTC correlati: l'antigene carcinoembrionario (CEA), citocheratina-19 (CK19), fattore di crescita vascolare endoteliale (VEGF) e Survivin (BIRC5).
Risultati
Gene espressione di survivina, CK19, CEA e VEGF è stata maggiore rispetto ai controlli normali nel 98,6%, 97,1%, 42,9% e 38,6% dei casi, rispettivamente,, suggerendo un potenziale valore diagnostico sia Survivin e CK19 . All'analisi multivariata della sopravvivenza, stadiazione TNM e livelli di mRNA Survivin sono state mantenute come fattori prognostici indipendenti, a dimostrazione che l'espressione Survivin nel sangue periferico aggiunge informazioni prognostiche al sistema TNM. In contrasto con i dati pubblicati in precedenza, l'abbondanza trascrizione del CEA, CK19 e VEGF non è stata associata con l'esito clinico dei pazienti.
Conclusioni
livelli di espressione genica di Survivin aggiungono un significativo valore prognostico per il sistema di stadiazione TNM corrente. La convalida di questi risultati in grande serie prospettico e multicentrico potrebbe portare alla realizzazione di questo biomarker nella pratica clinica di routine al fine di ottimizzare la stratificazione del rischio e, infine, di personalizzare la gestione terapeutica di questi pazienti.
Sfondo
cancro gastrico rappresenta la quarta più comune di cancro e la seconda causa di morte per cancro in tutto il mondo. L'incidenza corrente stimata di cancro gastrico è di circa 16,2 /100 000 persone /anno (tasso standardizzato mondo, WSR), con più alte incidenze in Asia orientale, Europa dell'Est e Sud America [1]. Al momento l'unico sistema prognostico abitualmente utilizzato per la gestione dei pazienti affetti da cancro gastrico si basa sul tumore-Node-Metastasi (TNM) sistema di stadiazione Unione internazionale contro il cancro [2], in cui il grado di penetrazione del tumore (Pt) e lo stato linfonodale (pn) [3] sono i due principali indicatori prognostici nei pazienti senza metastasi a distanza. I pazienti in fase iniziale sono candidati presi in considerazione per la cura da un intervento chirurgico. Tuttavia, il 50% dei pazienti con cancro gastrico soffrono di recidive tumorali anche dopo chirurgia radicale [4, 5]. Così, il sistema di stadiazione corrente non sembra prevedere con precisione il rischio individuale del paziente di recidiva del tumore. In effetti questa classificazione identifica ampie categorie con significativamente diversi sottogruppi di prognosi per ogni fase, che rendono questo sistema ottimale per un approccio terapeutico personalizzato. Questo è esemplificato dal fatto che alcuni pazienti attualmente classificati come ricaduta l'esperienza della malattia "a basso rischio" non sono sottoposti alla terapia adiuvante, anche se lo fanno. Viceversa, alcuni pazienti attualmente sottoposti a terapia adiuvante a causa della classificazione TNM "ad alto rischio", non avrebbe bisogno di questo trattamento [6]. Al fine di affrontare questo problema e migliorare la prognosi dei pazienti, sono urgentemente necessari nuovi parametri che predicono in modo affidabile outcome dei pazienti. I pazienti che avevano subito interventi chirurgici potenzialmente curative mantengono il rischio di recidiva, che proviene da residui tumorali microscopici nota come malattia minima residua (MRD). MRD può colpire diversi compartimenti del corpo, tra cui il midollo osseo, linfonodi e sangue periferico [7]. Negli ultimi anni, diversi studi si sono concentrati sul rilevamento delle cellule tumorali circolanti (CTC) per quanto riguarda le loro implicazioni cliniche per i pazienti con cancro gastrico. Come risultato, in tempo reale reazione quantitativa catena della polimerasi (qrtPCR) e varianti di questa tecnica, che è considerato il metodo più sensibile per valutare l'espressione genica, sono stati utilizzati nella rilevazione di markers tumorali che indicano la presenza di CTC nel sangue [8].
nell'analisi corrente, abbiamo voluto profilatura sangue periferico di 70 brevetti affetti da adenocarcinoma gastrico utilizzando qrtPCR. Abbiamo testato quattro biomarcatori, due di presenza, annuncio di due dell'aggressività del tumore, e uno di questi, la survivina, aggiungere il potere prognostico indipendente per il sistema di stadiazione TMN. Questo potrebbe consentire una migliore stratificazione del rischio del paziente e quindi una migliore gestione terapeutica, in particolare nel trattamento adiuvante
Metodi
pazienti
In questo studio abbiamo arruolato 70 pazienti (39 uomini, 31 donne;. Fascia di età 28 - 90 anni, età media 68 anni) che hanno subito un intervento chirurgico (gastrectomia totale o parziale) per istologicamente provata carcinoma gastrico tra ottobre 1998 e il novembre 2007 e per i quali un campione di sangue periferico era disponibile. Lo studio, che è in conformità con la Dichiarazione di Helsinki, è stato approvato dal Comitato Etico Locale dell'Università degli Studi di Padova (numero di riconoscimento: 70/2006). Consenso informato scritto per quanto riguarda l'uso di campioni biologici a fini di sperimentazione è stato ottenuto da tutti i pazienti. Al momento dell'analisi, 33 (47,1%) erano vivi, mentre 37 (52,9%) erano morti. Follow-up mediano è stato di 15 mesi (range: 6-119 mesi). La sopravvivenza mediana è stata di 25 mesi. caratteristiche del tumore sono riassunte nella Tabella 1. La profondità di invasione tumorale (categoria T), estensione delle metastasi linfonodali (categoria N) e metastasi macroscopica (M categoria) sono stati classificati in base alla stadiazione TNM UICC system.Table 1 Pazienti e caratteristiche del tumore .
Parametri
N
(%)
pazienti in tutte le nazioni 70
(100,0)
maschio
39
(55,7)
femminile
31
(44,3)
Età (anni)
≤ 65
21
(30.0)
> 65
49
(70,0)
Località
multicentrico
5
(7.1)
Alto terzo
11
(15,7)
terzo medio
19
(27,1)
terzo inferiore
35
(50.0)
TNM fase
I (IA + IB) 10
(14.3)
II
14
(20,0)
III (IIIA + IIIB)
19
(27,1)
IV
27
(38,6)
linee cellulari
la linea di cellule di carcinoma gastrico umano NCI-N87, ottenuto dalla American Type Culture Collection (Manassas, Stati Uniti d'America), è stato incubato in RPMI-1640 (Invitrogen - Gibco, Carlsbad, CA, USA) contenente il 10% di siero fetale bovino . (Euroclone - Celbio, Pero, MI), 10 mM Hepes, 1 mM sodio piruvato (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO), a 37 ° C in 5% di CO 2
NCI-N87 è una linea cellulare di carcinoma gastrico derivata da una metastasi epatiche di un carcinoma ben differenziato dello stomaco taken prima della terapia citotossica. Secondo la scheda tecnica del produttore, cellule esprimono il glicoproteine ​​di superficie dell'antigene carcinoembrionario (CEA).
Cellulari esperimenti di arricchimento
uno studio chiodare delle cellule è stata effettuata al fine di determinare la sensibilità di questa tecnica qrtPCR per rilevare le cellule tumorali in mononucleate del sangue periferico cellule (PBMC). Il PBMC sono stati ottenuti da volontari sani, e sono stati contati e diluito 1: 1 in terreno RPMI. cellule di cancro gastrico N87 sono stati contati e diluiti da 1 × 10 6 celle /millilitro di 1 cellula /millilitro nel PBMC. L'RNA totale è stato estratto e reverse trascritto da 2 millilitri di ogni frazione. qrtPCR per due geni di interesse sono stati poi eseguiti, come descritto di seguito
. sintesi di raccolta del campione, estrazione di RNA e cDNA
A 6 ml aliquota di sangue venoso è stato ottenuto da ciascun paziente al momento dell'intervento chirurgico. campione di trasformazione è stata effettuata entro due ore dopo la sospensione del sangue. Campione è stato centrifugato a 2000 g per 10 minuti, e la frazione PBMC è stata raccolta e conservata in azoto liquido.
Campioni congelati sono stati scongelati e RNA totale è stato estratto con il metodo del tiocianato di guanidinio-fenolo-cloroformio (Trizol Reagent, Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). L'integrità del RNA isolato è stato istituito con l'analisi qrtPCR del gene di riferimento endogena beta actina (b-actina) come descritto di seguito [9]
. RNA totale (7 g per 100 ml di volume finale di reazione) è stato retrotrascritto utilizzando primer casuali e MultiScribe trascrittasi inversa (cDNA ad alta capacità inversa kit di trascrizione, Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). La miscela di reazione è stata incubata per 10 minuti a 25 ° C, poi a 37 ° C per 120 minuti. cDNA è stato conservato a -80 ° C fino al momento dell'uso. Real-tempo di reazione a catena della polimerasi quantitativa
I livelli trascrizionali di quattro geni (cioè l'antigene carcinoembrionario [CEA], citocheratina-19 [CK19], Survivin e endoteliale vascolare fattore di crescita [VEGF]) sono stati misurati nel sangue periferico di pazienti mediante real time PCR (qrtPCR) utilizzando il metodo di quantificazione relativa (2 -ΔΔCt metodo) [10, 11]. Utilizzando la -ΔΔCt metodo 2 i dati sono presentati come la piega-cambiamento nell'espressione genica normalizzata da un gene di riferimento e relativo a un campione calibratore. Lo scopo del processo di normalizzazione è quello di regolare il valore che rappresenta i livelli trascrizionali di ogni gene dalla quantità di mRNA presente in ciascun campione: questo è solitamente ottenuto dividendo i livelli di espressione di ciascun gene di interesse da quelle di un gene di riferimento (anche chiamato "servizio di pulizia" gene). geni housekeeping sono espressi costitutivamente e - idealmente - non sono interessati da manipolazioni sperimentali: di conseguenza, essi dovrebbero riflettere circa la quantità totale di mRNA testato in ogni campione [12]. Poiché il gene di riferimento in questo studio abbiamo usato beta-actina, uno dei geni housekeeping più comunemente usati.
In uno studio quantificazione relativa PCR, il cosiddetto "calibratore" è rappresentata dell'espressione genica di un campione scelto da cui il profilo di espressione di ciascun campione di interesse è adeguato: questo approccio consente al ricercatore di confrontare il profilo di espressione dei campioni di interesse tra loro in termini di armadio variazione rispetto ad un singolo campione (calibratore)
. Solitamente, il calibratore è un campione non trattato (ad esempio in uno studio funzionale), un campione al tempo zero (ad esempio in uno studio tempo portate) o qualsiasi campione estranei (ad esempio controlli sani in uno studio pazienti, o fibroblasti normali in una cellula tumorale studio line) [10]. Un pool di cDNA derivato da PBMC di 20 donatori sani è stato usato come sorgente calibratore nel nostro studio. Valutazione del 2 -ΔΔCt indica la variazione piega in genica rispetto al calibratore. Per il calibratore la ΔΔCt uguale a zero, e 2 0 è uguale a uno, così che la variazione piega in genica rispetto al calibratore è uguale a uno, per definizione.
Il metodo è stato convalidato per il nostro sistema sperimentale verificando che il efficienze di amplificazione degli obiettivi e il B-actina geni erano simili. TaqMan saggi di espressione genica specifici per CEA, CK19, Survivin e VEGF sono stati acquistati dalla Applied Biosystems. Per evitare di amplificare DNA genomico contaminati, la coppia di primer è stata posta all'incrocio tra due esoni. Il saggio qrtPCR è stata eseguita utilizzando il ABI PRISM 7300 Sistema di rilevazione sequenza. La reazione di PCR procedere in una miscela (30 ml) contenente 15 ml di 2 × TaqMan Universal PCR Master Mix, 1,5 ml di 20 × TaqMan assay Gene Expression (tutti i reagenti da Applied Biosystems), 12,5 ml di acqua e 1 ml di cDNA . Cinquanta cicli di amplificazione sono state eseguite a 95 ° C (15 secondi) e 60 ° C (1 minuto) e livelli di espressione di mRNA sono stati normalizzati contro quantificata b-actina espressione di mRNA per ogni campione. Analisi statistica

analisi statistiche sono state effettuata con il software Stat View V. 4.57 (Abacus Concepts, Londra, UK) e il software V7.0.0 StatXact (Cytel software Corporation, Stati Uniti d'America). La correlazione tra i livelli di geni (elevati rispetto a bassa espressione del gene, come definito dal valore mediano) e la malattia TNM categorie di soppressione è stata valutata utilizzando il test di tendenza Cochrane-Armitage. Le curve di sopravvivenza sono state stimate utilizzando il metodo di Kaplan-Meyer, e il confronto di sopravvivenza univariata sono stati calcolati secondo il log-rank test. I livelli trascrizionali dei quattro geni, insieme a fattori antropometrici e stadi TNM (secondo la 5 ° edizione del sistema di stadiazione AJCC TNM uscito nel 1997), sono stati utilizzati come variabili indipendenti nella analisi di sopravvivenza multivariata, che è stata effettuata utilizzando il Cox proporzionale pericoli modello di regressione [13]. La selezione delle variabili che contribuiscono al significativo modello predittivo è stata eseguita con il metodo stepwise. . Probabilità valori < 5% è stato considerato statisticamente significativo
Risultati
cellulare chiodare: sensibilità di qrtPCR tecnica
Nel linea cellulare N87, livelli di mRNA del CEA, CK19, Survivin, e geni VEGF erano altamente espresse (Figura 1): di conseguenza, questa linea cellulare di carcinoma gastrico rappresentato un controllo positivo valido per i nostri esperimenti. Figura livelli di espressione genica 1 dei quattro geni di interesse in cellule di cancro gastrico umano N87 (misurata mediante real time PCR quantitativa: vedi testo per i dettagli). Il logaritmo naturale dei livelli di espressione è riportato sull'asse y: all'origine degli assi (0) rappresenta il campione di riferimento (chiamato calibratore) con la quale tutti i campioni sperimentali sono confrontati nel metodo di quantificazione relativa (vedi testo per i dettagli)
. per stabilire il limite di rilevamento (sensibilità) della tecnica qrtPCR, diluizioni seriali di 10 volte (in PBMC) delle cellule di carcinoma gastrico N87 sono stati analizzati in triplicato da qrtPCR utilizzando CEA e survivina come marcatori genetici. CEA e Survivin mRNA sono stati rilevati fino a 1 cellula /10 8 PBMC diluizione:. Questo corrisponde a trovare da 1 a 10 cellule maligne per 10 ml di sangue periferico (dati non riportati)
marcatori di espressione in campioni di sangue
campioni di sangue periferico da tutti i 70 pazienti sono stati valutati per i quattro geni marcatori. L'espressione era positivo (superiore calibratore) in 98,6%, 97,1%, 42,9%, 38,6% di campioni per Survivin, CK19, CEA, VEGF, rispettivamente (Tabella 2). Dal momento che i livelli di gene Survivin e CK19 presenti in quasi tutti i pazienti sono superiori a quelli ottenuti controlli sani, questi risultati indicano un potenziale diagnostico di entrambi i livelli genes.Table 2 trascrizionale di quattro marcatori prognostici nel sangue periferico di pazienti con cancro gastrico.
marker
Sopra calibratore (%) *
seguito calibratore (%) *
inosservabile (%)

Survivin
69 (98,6)
1 (1,4)
0 (0.0)
CK19
68 (97,1) Pagina 2 (2.9)
0 (0.0 )
CEA
30 (42,9)
21 (30,0)
19 (27,1)
VEGF
27 (38,6)
43 (61,4)
0 (0.0 )
* livelli di espressione genica sono stati misurati con quantitativa real time PCR: utilizzando il metodo di quantificazione relativa, i campioni sono stati classificati come sopra o sotto i livelli riscontrati nel calibratore (campioni di sangue periferico raccolti da donatori sani)
Inoltre,. se abbiamo considerato il 75 ° percentile dei livelli di espressione Survivin per stadio, abbiamo avuto un significativo trend di aumento (p = 0,04) per le fasi da I a III, ma non per la fase IV (Figura 2). Figura livelli gene 2 Survivin misurati nel sangue periferico di 70 pazienti con stadio TNM da I a IV cancro gastrico. L'analisi del test di tendenza mostra un aumento significativo dei livelli trascrizionali Survivin tra i pazienti con stadio I a III cancro gastrico (trend prova P-value = 0,04). Per ogni colonna è riportata la media ± SD
sopravvivenza analisi
Dopo un follow-up medio di 26 mesi, la sopravvivenza globale mediana (OS) per la fase TNM I-II non è stato raggiunto.; il sistema operativo mediana per lo stadio III e IV era di 25 e 13 mesi, rispettivamente (log-rank test p-value < 0,0001, figura 3). Figura 3 La sopravvivenza globale per la fase TNM I-II, III e IV, per tutti i pazienti (log-rank test p-value < 0,0001).
Su analisi di sopravvivenza univariata, tra i quattro geni che abbiamo testato, solo Survivin espressione potrebbe identificare i due gruppi di pazienti con significativamente diversa prognosi. Infatti, considerando il 75 ° percentile dei livelli di trascrizione genica log-trasformati (1.508) come il punto di taglio, OS mediana per alta (> 1.508) e bassa (≤1.508) Survivin mRNA abbondanza erano 14 e 41 mesi, rispettivamente (log- rank p-value = 0.036, Figura 4). Figura 4 curve di sopravvivenza di Kaplan-Meier di pazienti con alta (> 75 ° percentile) o basso (< 75 ° percentile) livelli trascrizionali di Survivin misurati nel sangue periferico. Log-rank test p-value = 0.036.
L'analisi di sopravvivenza multivariata tra cui stadio TNM, età, sesso e livelli di mRNA dei quattro marcatori ha mostrato che solo stadio TNM e dei livelli di mRNA Survivin misurati nel sangue periferico predicono in modo indipendente OS dei pazienti . L'hazard ratio (HR) associato a livelli Survivin indica l'aumento del rischio di morte per 100 volte maggiore di espressione Survivin (Tabella 3) .table 3 multivariata analisi di sopravvivenza di 70 pazienti con cancro gastrico.
covariate
HR
95% CI
P-value


limite inferiore
limite superiore

stadio TNM I
1 (di riferimento) -
-
-
fase II
1.20
1.01
1.45
0,048
fase III
1.34
1.05
1,70
0.017
stadio IV
3.17
1.38
6,77
0,004
Survivin *
1.34
1.14
1.53
< 0.001
HR: hazard ratio; CI: intervallo di confidenza; * La HR associati a livelli Survivin indica l'aumento del rischio di morte per aumento di 100 volte nell'espressione Survivin.
Dal momento che solo questi quattro variabili indipendenti sono stati mantenuti dal modello di Cox, questa analisi suggerisce che la survivina espressione genica può aggiungere utili informazioni prognostiche a fattori già consolidati, come il sistema di stadiazione TNM.
Discussione
in questo studio abbiamo riscontrato che i livelli trascrizionali di Survivin misurati nel sangue periferico di pazienti con carcinoma gastrico correlano in modo indipendente con la loro sopravvivenza globale.
Se convalidato in grandi studi prospettici, questi risultati permetterebbero di aumentare il potere prognostico di fattori prognostici tradizionali, che sono attualmente incarnati dai parametri di stadiazione TNM. Questo è di particolare importanza per i pazienti con stadio TNM I a III della malattia, per i quali la stratificazione del rischio ottimale è fondamentale per identificare i soggetti con la più alta probabilità di beneficiare di trattamenti adiuvanti.
I nostri risultati sono di particolare rilevanza anche dal punto di vista della biologia tumorale perché il gene Survivin codifica una proteina anti-apoptotica chiave comune inibitore della proteina dell'apoptosi famiglia (IAP). Oltre ad essere uno dei fattori anti-apoptotici meglio caratterizzati [14], Survivin è oggetto di intense ricerche per il fatto che negli adulti è espressa selettivamente praticamente solo da tumori di origine diversa; inoltre, la sua espressione nel tumore primario è stato associato con un peggiore prognosi e resistenza a chemioterapici convenzionali [15]. Queste osservazioni fanno survivina un bersaglio ideale per le terapie tumore-specifici, come ad esempio piccole molecole inibitrici e immunoterapia antigene-specifica [16].
Espressione della proteina survivina nei tumori primari, tra cui il cancro gastrico, è stato indagato come un fattore prognostico, più alto i livelli di essere associati con il cancro risultato peggiore [17]. A proposito di espressione dell'RNA, i livelli di mRNA Survivin sono stati studiati come marcatore di cellule tumorali circolanti (CTC) in diversi tipi di cancro, ma i dati disponibili sono scarsi [18, 19]. In una serie di 26 pazienti affetti da cancro gastrico, Survivin mRNA (misurata mediante ELISA a base qrtPCR) nel sangue periferico è stato segnalato per correlare con la prognosi dei pazienti, la messa in scena TNM esclusi dal modello mutivariable finale (costringendo tutte le variabili nel modello di Cox) [20]. Nella nostra serie più grande (n = 70), si conferma il ruolo prognostico dei livelli ematici Survivin, anche se la messa in scena TNM rimane un fattore prognostico significativo nel modello multivariato finale (usando il modo graduale per la selezione delle variabili). Nonostante la significativa associazione con la prognosi dei pazienti, i livelli di mRNA Survivin non sono aumentati in tutte le quattro fasi TNM: la tendenza di una maggiore abbondanza trascrizionale è stato infatti dimostrato solo in pazienti con stadio I, II e III della malattia (Figura 2). Questo potrebbe risultato dipende dalle dimensioni basse del campione delle singole fasi TNM (e la conseguente bassa potenza statistica), ma potrebbe anche indicare che Survivin svolge un ruolo nella locoregionale e non in metastasi a distanza (dove altri geni potrebbero essere più rilevanti, come recentemente riferito [21])
a differenza di altri studi [9, 22-26], i livelli di CK19 e CEA non correlava con i pazienti la sopravvivenza della nostra serie, sia su (dati univariata non riportati) o l'analisi di sopravvivenza multivariata:. questo potrebbe dipendere da diversi fattori. Prima di tutto, l'inclusione nella nostra analisi multivariabile (con una modalità graduale di selezione variabile) di un marcatore non considerato da altri Autori rende impraticabile qualsiasi confronto. Illustrazione Di nota, alcuni rapporti positivi utilizzano solo analisi di sopravvivenza univariata, che pregiudica la affidabilità e riproducibilità dei risultati, una volta aggiustamento per i fattori prognostici ben consolidati (cioè stadi TNM) sono state implementate [9, 25, 27, 28]. Inoltre, in linea con i nostri risultati altri investigatori fanno rapporto mancanza di associazione tra le citocheratine positivo cellule presenza e la prognosi [29] (Tabella 4) .table 4 serie selezionata analizzare il ruolo prognostico delle cellule tumorali (CTC) circolanti in pazienti con cancro gastrico.
Author

Year

Ref.

Patients

Method

Survival Analisi
Marcatori
risultati
Koga T et. al.
2008
[9]
101
RT-PCR quantitativa
univariata
CK18, CK19, CK20, CEA
CK19 è il marcatore meglio, ed è utilizzabile per stimare la prognosi o per il trattamento adiuvante
Yie SM et. al.
2008
[20]
26 (cancro gastrico)
RT-PCR ELISA
multivariata
Survivin
Stato di Survivina esprimono CTC è un predittore forte e indipendente per la ricorrenza
Hiraiwa K et. . Al
2008
[22]
44 (cancro gastrico)
sistema CellSearch
multivariata
CD45 (-) cellule vs CK (+), le cellule
CTS significativamente correlata con stadio tumorale avanzato
Illert B et. al.
2005
[23]
70
RT-PCR quantitativa
multivariata
CK20
CK20 è un marcatore prognostico indipendente
Yeh KH et. al.
1998
[24]
34
Nested RT-PCR quantitativa
univariata
CK19 CK19
esprimere CTC sono associate a prognosi infausta
Seo JH et. al.
2005
[25]
46
RT-PCR quantitativa
Non eseguita
CEA
CEA mRNA è significativamente correlata con recidiva clinica
Wu CH et. al.
2006
[26]
42
RT-PCR quantitativa
Non eseguita
hTERT, CK19, CK20, CEA
CEA mRNA è correlato con più alto rischio di post-operatorio recidive /metastasi
Uen YH et. al.
2006
[27]
52
RT-PCR quantitativa
univariata
c-MET, MUC1
c-Met e MUC1mRNA correlare in modo significativo con la prognosi
Mimori K et. al.
2008
[28]
810
RT-PCR quantitativa
univariata
MT1-MMP
MT1-MMP è un fattore indipendente per determinare recidive e metastasi a distanza
Pituch-Noworolska A et. . Al
2007
[29]
57
citometria a flusso
univariata
CD45 (-) cellule vs CK (+), le cellule
La presenza di CK (+), le cellule non ha alcun valore prognostico
Questi dati contrastanti potrebbe dipendere dal fatto che CK19 e CEA sono indicatori di presenza CTC, ma non necessariamente di CTC capacità di metastatizzare: infatti, è ben accettato che solo un sottoinsieme di CTC ha il biologico potenzialità di dare origine a depositi metastatici, mentre la maggior parte CTC infine muoiono senza essere dannoso per l'host [7]. Di conseguenza, i marcatori di CTC "aggressività", come Survivin potrebbero rivelare di essere più informativo in termini di correlazione con la prognosi dei pazienti.
Da segnalare, nel presente studio l'abbondanza mRNA di Survivin e CK19 era sempre superiore a quello trovato in controlli sani eccezione di uno e due casi rispettivamente. Questo sottolinea l'importanza di utilizzare un metodo quantitativo (qrtPCR), che ci ha permesso di stratificare il rischio i pazienti su una scala continua, mentre la PCR standard sarebbe classificato praticamente tutti i pazienti come positivo. D'altra parte, questo risultato - che al meglio della nostra conoscenza non è mai stata rilevata prima - suggerisce che questi geni potrebbero essere sfruttati anche per scopi diagnostici, sebbene uno studio dedicato specificamente progettato per questo scopo è giustificata
Come. considerazione finale, vorremmo osservare che i metodi basati sulla PCR non consentono di identificare la fonte cellulare dei marcatori misurati: infatti, tutti questi metodi richiedono la lisi delle cellule raccolte dal sangue periferico di pazienti al fine di estrarre il mRNA utilizzato per valutare l'espressione di geni bersaglio. Oltre CTC, altre potenziali fonti di geni PCR-rilevati sono PBMC, cellule endoteliali (CEC), derivate dal midollo osseo cellule staminali e le cellule della pelle in circolazione (ad esempio cheratinociti, fibroblasti, melanociti) che contaminano il campione durante il ritiro sangue circolante. Tuttavia, CTC sono suscettibili di essere la fonte delle cellule principale per Survivin come la sua espressione è molto limitata nelle normali tessuti adulti ed è invece essenzialmente limitato a cellule maligne [30]. A questo proposito, i metodi di citometria sono meno inclini a falsi risultati positivi, in quanto implicano cella a base di anticorpi ordinamento seguita dall'identificazione citologica delle cellule tumorali che precede la loro caratterizzazione fenotipica [31].
Conclusioni
livelli di espressione genica di Survivin aggiungere notevole valore prognostico per l'attuale sistema di stadiazione TNM dei pazienti con carcinoma gastrico. La convalida di questi risultati in una serie più ampia prospettiva potrebbe portare ad ottimizzare la stratificazione del rischio e, infine, per personalizzare la gestione terapeutica di questi pazienti.
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Gli autori dichiarano di avere interessi in gioco.

• caratteristiche clinico-patologici e ruoli prognostici di KRAS, BRAF, PIK3CA e le ANR mutazioni nel cancro gastrico avanzato
• Stent contro gastrodigiunostomia per la palliazione di ostruzione gastrica: una revisione sistematica