Surviviinin geeni tasot ääreisverenkierrossa potilaiden mahalaukun syövän itsenäisesti ennustaa selviytymisen

Surviviini-geenin tasoja perifeerisessä veressä potilaista, joilla on mahalaukun syövän itsenäisesti ennustaa selviytymisen
Abstract
tausta
ilmaisuun verenkierrossa olevia kasvainsoluja (CTC) pidetään lupaavana keino parantaa riski kerrostuminen potilailla, joilla on kiinteitä kasvaimia. Olemme tutkineet, onko ilmaisun CTC liittyvien geenien siihen mahdollisesti ennustetekijöiden virtaa TNM lavastus järjestelmä potilailla mahalaukun syöpä. Tool Menetelmät
Seitsemänkymmentä potilaalla on TNM I-IV mahakarsinoo- otettiin takautuvasti kirjoilla. Perifeerisen veren näytettä testattiin kvantitatiivisen reaaliaikaisen PCR: llä (qrtPCR) ilmentämiseen neljän CTC liittyviä geenejä: karsinoembryonaalinen antigeeni (CEA), sytokeratiini-19 (CK19), verisuonen endoteelin kasvutekijä (VEGF) ja surviviinin (BIRC5).
tulokset
geeniekspressio surviviinin, CK19, CEA ja VEGF oli suurempi kuin normaalissa valvontaa 98,6%, 97,1%, 42,9% ja 38,6% tapauksista, vastaavasti, mikä viittaa mahdolliseen diagnostinen arvo sekä surviviinin ja CK19 . Klo monimuuttuja selviytyminen analyysi, TNM lavastus ja Surviviinin mRNA-tasot säilyivät itsenäisinä ennustavat tekijät, jotka osoittavat, että surviviinia ilmentyminen ääreisveren lisää ennustetekijöiden tietoja TNM järjestelmää. Toisin aiemmin julkaistu tietoja, transkriptio runsaasti CEA, CK19 ja VEGF ei liittynyt potilaiden kliiniseen tulokseen.
Johtopäätökset
geeniekspressiotasot surviviinin lisätä merkittävästi ennustetekijöiden arvo nykyiselle TNM lavastus järjestelmä. Validointi Näiden havaintojen suurissa mahdollisille ja multisentrinen sarja saattaa johtaa täytäntöönpanon biomarkkereiden rutiinin hoitopaikassa optimoimiseksi riski kerrostuminen ja lopulta yhdistää hoitona näille potilaille.
Tausta
Mahasyöpää edustaa neljänneksi yleisin syöpä ja toiseksi yleisin syy syöpään liittyvät kuolemat maailmanlaajuisesti. Arvioitu nykyinen esiintyvyys mahasyöpä on noin 16,2 /100 000 henkilöä /vuosi (maailman standardoitu korko, WSR), jolla on korkein ilmaantuvuus Itä-Aasiassa, Itä-Euroopassa ja Etelä-Amerikassa [1]. Tällä hetkellä ainoa ennustetekijöiden järjestelmän rutiininomaisesti hallintaan mahasyöpäpotilaista perustuu Kansainvälisen syöpää kasvain-Node-Metastasis (TNM) pysähdyspaikan järjestelmä [2], jossa aste kasvaimen levinneisyys (pT) ja imusolmukestatuksesta (pN) [3] ovat kaksi tärkeintä ennustetekijöiden indikaattoreita potilailla, joilla ei etäinen etäpesäkkeitä. Potilaat alkuvaiheessa pidetään ehdokkaita parannuskeinoa leikkauksella. Kuitenkin 50% mahasyövän potilaat kärsivät kasvain relapses jälkeenkin radikaaleja [4, 5]. Siten nykyinen pysähdyspaikan järjestelmä ei näytä ennustaa yksittäisen potilaan riski syövän uusiutumiseen. Todellakin tämä luokittelu tunnistaa pääryhmään huomattavasti eri ennustetekijöiden alaryhmä jokaisessa jaksossa, joka tämän järjestelmän optimaalisia henkilökohtainen terapeuttinen lähestymistapa. Tästä on esimerkkinä se, että jotkut potilaat luokitellaan nykyisin "matalan riskin" ei toimitettu adjuvanttihoito vaikka ne kokemuksen taudin uusiutumisen. Päinvastoin, jotkut potilaat parhaillaan adjuvanttihoito koska "korkean riskin" TNM luokittelu, ei tarvitse tätä hoitoa [6]. Ratkaistakseen tämän ongelman ja parantavat ennustetta potilaille, uusien parametrien luotettavasti ennustamaan potilaiden lopputulokseen tarvitaan kiireellisesti. Potilaat, joille oli tehty mahdollisesti parantava leikkauksia säilyttää uusiutumisen riskiä, ​​joka on peräisin mikroskooppisen kasvain jäämät tunnetaan minimaalinen jäljellä tauti (MRD). MRD voi vaikuttaa eri kehon osiin, kuten luuydin, imusolmukkeet ja ääreisverenkierron [7]. Viime vuosina useat tutkimukset ovat keskittyneet havaitsemiseen verenkierrossa olevia kasvainsoluja (CTC) suhteessa niiden kliininen merkitys potilaille, joilla on mahalaukun syöpä. Tämän seurauksena, kvantitatiivinen reaaliaikainen polymeraasiketjureaktio (qrtPCR) ja muunnelmia tämän tekniikan, jonka katsotaan olevan herkimpiä arviointimenetelmä geenin ilmentymistä, on käytetty havaitsemiseksi kasvaimen markkereita, jotka osoittavat läsnäolo CTC, että veri [8].
nykyisessä analyysissa pyrittiin profilointi ääreisveren 70 patenttia vaikuttaa mahalaukun adenokarsinoomaa käyttämällä qrtPCR. Testasimme neljä biomarkkereita, kaksi läsnäolosta, mainos kaksi aggressiivisuus kasvain, ja yksi näistä, surviviinia lisätä riippumatonta ennustetekijöiden virtaa TMN lavastus järjestelmää. Tämä saattaa mahdollistaa paremman kerrostuminen potilaan riski ja siten paremman terapeuttisen hoidon, etenkin liitännäishoitona. Tool Menetelmät
Potilaat
Tässä tutkimuksessa otettiin 70 potilasta (39 miestä, 31 ​​naista; ikäryhmä 28-90 vuotta, mediaani-ikä 68 vuotta), joille tehtiin leikkaus (kokonaan tai osittain gastrektomia) ja histologisesti todistettu mahakarsinoo- loka 1998 marraskuussa 2007 ja joille ääreisverinäytteestä oli saatavilla. Tutkimus, joka noudattaa Helsingin julistuksen, hyväksyttiin paikallisen eettisen komitean Padovan yliopisto (hyväksynnän numero: 70/2006). Kirjallinen suostumus käyttöä koskevat biologisten näytteiden osalta tutkimustarkoituksiin saatiin kaikista potilaista. Tuolloin analyysin, 33 (47,1%) oli elossa kun taas 37 (52,9%) oli kuollut. Seuranta-ajan mediaani oli 15 kuukautta (vaihteluväli: 6-119 kuukautta). Eloonjäämismediaani oli 25 kuukautta. Kasvaimen ominaisuudet on esitetty yhteenvetona taulukossa 1. syvyys tuumori-invaasio (T luokka), laajuus imusolmuke etäpesäke (N-luokan) ja makroskooppisen etäpesäkkeiden (M-luokan) luokiteltiin mukaisesti UICC TNM pysähdyspaikan system.Table 1 Potilaat ja kasvaimen ominaisuudet .
Parametrit
N
(%)
Potilaat
kaikki
70
(100,0) B male
39
(55,7) B female
31
(44,3) B Ikä (vuotta) B ≤ 65
21
(30,0) B > 65
49
(70,0) B Sijainti
multisentrinen
5
(7,1)
ylempi kolmas
11
(15,7) B keskikolmannekseen
19
(27,1) B alalaitaan
35
(50,0)
TNM
I (IA + IB)
10
(14,3)
II
14
(20,0) B III (IIIA + IIIB)
19
(27,1) B IV
27
(38,6) B Solulinjat
ihmisen mahan karsinoomasolulinja NCI-N87, saatu American Type Culture Collection (Manassas, USA), inkuboitiin RPMI-1640-alustassa (Invitrogen - Gibco, Carlsbad, CA, USA), joka sisälsi 10% vasikan sikiön seerumia (Euroclone - Celbio, Pero, MI), 10 mM Hepes, 1 mM natriumpyruvaattia (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO), 37 ° C: ssa, 5% CO 2.
NCI-N87 on mahalaukun karsinooma solulinja, joka on peräisin maksan etäpesäkkeiden hyvin eriytetty karsinooma mahan otettu ennen sytotoksisen hoidon. Mukaan valmistajan tekninen, ilmentävät pintaglykoproteiineja karsinoembryonaalinen antigeeni (CEA).
Cell tippakokeilla
Solu lisäystasot tutkimus suoritettiin, jotta voidaan määrittää herkkyyden tämän qrtPCR tekniikan havaitsemiseksi syöpäsoluja perifeerisen veren mononukleaarisissa solut (PBMC). PBMC saatiin terveiltä vapaaehtoisilta, ja laskettiin ja laimennettiin 1: 1 RPMI. Mahalaukun syöpäsolut N87 laskettiin ja laimennettiin sarjoittain 1 x 10 6 solua /millilitra 1 solu /millilitra PBMC. Kokonais-RNA uutettiin ja käännetyn transkriptoidaan 2 ml kutakin fraktiota. qrtPCR kaksi kiinnostavat geenit jälkeen suoritettiin, kuten alla on kuvattu.
Näytteiden kerääminen, RNA: n uutto ja cDNA-synteesi
A 6 ml: n erä laskimoverta saatiin kunkin potilaan aikaan leikkauksen. Näytteen käsittely suoritettiin kahden tunnin kuluttua verta peruuttamisen. Näyte sentrifugoitiin 2000 x g 10 minuuttia, ja PBMC kerättiin ja varastoitiin nestemäisessä typessä.
Pakastetut näytteet sulatettiin ja kokonais-RNA uutettiin käyttäen guanidiinitiosyanaattimenetelmää-fenoli-kloroformi-menetelmällä (Trizol Reagent, Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Eheyden eristetyn RNA määritettiin qrtPCR analyysi endogeenisen viitegeenin beta aktiini (b-aktiini), kuten alla on kuvattu. [9]
Kokonais-RNA (7 ug per 100 ui lopullisessa reaktiotilavuudessa) käänteiskopiointiin käyttäen satunnaisia ​​alukkeita ja MultiScribe käänteistranskriptaasia (High-Capacity cDNA käänteistranskriptiolle kit, Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Reaktioseosta inkuboitiin 10 minuuttia 25 ° C: ssa, sitten 37 ° C: ssa 120 minuutin ajan. cDNA säilytettiin -80 ° C: ssa käyttöön asti.
Reaaliaikainen kvantitatiivinen polymeraasiketjureaktio
transkription tasot neljän geenien (eli antigeeni, karsinoembryonaalinen antigeeni [CEA], sytokeratiini-19 [CK19] Surviviini ja verisuonen endoteelin kasvutekijä [VEGF]) mitattiin perifeerisestä verestä potilaiden kvantitatiivisen reaaliaikaisen PCR: llä (qrtPCR) käyttäen suhteellisen kvantifiointimenetelmän (2 -ΔΔCt menetelmä) [10, 11]. Käyttäen 2 -ΔΔCt menetelmä tietojen esitetään kertamuutoksen geeniekspressiossa normalisoitu viittauksella geeni ja suhteessa calibrator näyte. Tarkoituksena normalisoimiseksi on säätää arvoon, joka edustaa transkription tasoa eri geenin mRNA: n määrä kunkin näytteen: tämä saadaan tavallisesti jakamalla ekspressiotasot kunkin kiinnostavan geenin kuin viite-geenin (myös nimeltään "kodinhoitoa" geeni). Housekeeping geenit ilmentyvät konstitutiivisesti ja - mieluiten - ei vaikuta kokeellinen manipulointi: siksi ne olisi suunnilleen heijastaa kokonaismäärä mRNA testattiin kussakin näytteessä [12]. Kuten viite-geeni tässä tutkimuksessa käytimme beta-aktiini, yksi yleisimmin käytetty siivous geenejä.
Eräässä suhteelliseksi kvantitoimiseksi PCR tutkimuksessa, niin kutsuttu "calibrator" edustaa geenin ilmentymistä, joka on valittu näytteen, jonka ilmaus profiilia kunkin näytteen kohteisiin oikaistaan: tämä lähestymistapa mahdollistaa tutkijan verrata ilmaisun profiilia näytteiden kiinnostava keskenään mitattuna niiden kertamuutosta nähden yhden näytteen (kalibraattori).
yleensä kalibraattori on käsittelemätön näyte (esim toimiva tutkimus), näyte ajanhetkellä nolla (esim aikaa kurssin tutkimus) tai mihinkään ulkopuoliseen näytteestä (esimerkiksi terve valvonnan potilaiden tutkimuksessa, tai normaali fibroblastien syöpäsolu line tutkimus) [10]. Allas johdettu cDNA-PBMC: stä 20 terveiden luovuttajien käytettiin kalibraattori lähde tutkimukseen. Arviointi 2 -ΔΔCt ilmoittaa kertainen muutos geenien ilmentyminen suhteessa kalibraattorin. Sillä kalibraattori ΔΔCt on nolla, ja 2 0 on yksi, niin että kansi muutos geenien ilmentyminen suhteessa kalibraattorin on yksi, määritelmän.
Menetelmä validoitiin meidän kokeellisen järjestelmän varmistettuaan hyötysuhteet monistuminen tavoitteiden ja b-aktiini geenit olivat samankaltaisia. TaqMan Gene Expression Analyysit spesifinen CEA, CK19, Surviviinispesifisiä ja VEGF ostettiin Applied Biosystems. Välttää monistetaan saastuneen genomista DNA: ta, alukeparia asetettiin risteyksessä kahden eksonien. QrtPCR analyysi suoritettiin käyttäen ABI PRISM 7300 Sequence Detection järjestelmän. PCR-reaktion edetä seosta (30 ui), joka sisälsi 15 ui 2 x TaqMan Universal PCR Master Mix, 1,5 ui 20 x TaqMan Gene Expression määritys (kaikki reagenssit Applied Biosystems), 12,5 ui vettä ja 1 ui cDNA-templaattia . Viisikymmentä sykliä monistusta suoritettiin 95 ° C: ssa (15 sekuntia) ja 60 ° C (1 minuutti) ja mRNA: n ilmentymisen tasot normalisoitiin vastaan ​​määrälliset b-aktiinin mRNA: n ekspression jokaisesta näytteestä.
Tilastollinen analyysi
Tilastolliset analyysit olivat suoritettiin käyttäen Stat View V. 4,57 ohjelmisto (Abacus Concepts, London, UK) ja StatXact V7.0.0 ohjelmisto (Cytel Software Corporation, USA). Korrelaatio geeni tasojen (korkea verrattuna matala geeniekspressiota määrittelemän mediaani) ja sairauden TNM lavastus luokkiin arvioitiin käyttämällä Cochrane-Armitage trendi testi. Survival käyrät arvioitiin käyttämällä Kaplan-Meyer menetelmällä, ja yhden muuttujan selviytyminen vertailut laskettiin log-rank-testi. Transkriptionaalinen tasot neljän geenien yhdessä antropometristen tekijöitä ja TNM vaiheita (mukaan viides painos AJCC TNM lavastus järjestelmä julkaistiin vuonna 1997), käytettiin riippumattomien muuttujien monimuuttuja selviytyminen analyysi, joka suoritettiin käyttäen Coxin suhteellisen vaarat regressiomalli [13]. Valinta muuttujia, jotka merkittävästi edistävät ennustemallien suoritettiin vaiheittain menetelmällä. Todennäköisyyden arvot alle 5% katsottiin tilastollisesti merkittäviksi.
Tulokset
Cell lisäystasot: herkkyys qrtPCR tekniikan
Kun N87-solulinjassa, mRNA-tasot CEA, CK19, surviviinia, ja VEGF-geenit ilmennetään runsaasti (Kuvio 1): Näin ollen, tämä mahan karsinoomasolulinja edusti voimassa positiivisena kontrollina kokeissa. Kuva 1 geeniekspressiotasot neljästä kiinnostavia geenejä N87 ihmisen mahasyövän soluja (mitattuna kvantitatiivisen reaaliaikaisen PCR: katso tekstistä yksityiskohdat). Luonnollinen logaritmi ekspressiotasoja raportoidaan y-akselilla: akselin alkuperä (0) edustaa vertailunäyte (kutsutaan kalibraattori), jonka kanssa kaikki kokeellinen näytteitä verrataan suhteellisen kvantifiointimenetelmän (katso tekstistä yksityiskohdat).
perustaa detektioraja (herkkyys) on qrtPCR tekniikkaa, sarjanumero 10-kertaiset laimennokset (PBMC) ja N87 mahakarsinooman solut testattiin kolmena kappaleena qrtPCR käyttäen CEA ja surviviinia, kuten geenin markkereita. CEA ja surviviinin mRNA havaittiin jopa 1 solu /10 8 PBMC-laimennus: tämä vastaa löytää 1-10 pahanlaatuisia soluja per 10 ml perifeeristä verta (tuloksia ei ole esitetty).
Expression markkereita verinäytteistä
Oheislaitteet verinäytteet kaikilta 70 potilasta arvioitiin neljän geenimerkkejä. Ilmaisu oli positiivinen (suurempi kuin kalibraattori) on 98,6%, 97,1%, 42,9%, 38,6% näytteiden surviviinin, CK19, CEA, VEGF, vastaavasti (taulukko 2). Koska Surviviinivasteita ja CK19-geenin tasoja löytyy lähes kaikilla potilailla ovat suuremmat kuin terveillä verrokeilla, nämä havainnot viittaavat diagnostista potentiaalia molempien genes.Table 2 transkription tasoa neljä ennustetekijöitä merkkiaineiden perifeerisessä veressä potilaiden mahalaukun syöpä.
Marker
yläpuolella calibrator (%) *
Alle calibrator (%) *
havaitaan paikallistamattomasti (%)

Surviviinivasteita
69 (98,6) B 1 (1,4) B-0 (0,0)
CK19
68 (97,1) B 2 (2,9)
0 (0.0 ) B CEA
30 (42,9)
21 (30,0)
19 (27,1) B VEGF
27 (38,6)
43 (61,4) B 0 (0.0 ) B * geeniekspressiotasot mitattiin kvantitatiivisen reaaliaikaisen PCR: käyttäen suhteellista kvantifiointimenetelmän näytteet luokiteltiin ylä- tai pienemmät kuin kalibraattorin (yhdistetyt aäreisverinäytteiden terveiltä luovuttajilta).
Lisäksi jos pidetään 75. prosenttipiste surviviinin ekspressiotasoja per vaiheessa meillä oli merkittävästi lisätä suuntaus (p = 0,04) ja vaiheet I-III, mutta ei vaiheessa IV (kuvio 2). Kuvio 2 Surviviini-geenin mitatut perifeerisessä veressä 70 potilailla, joilla on TNM I-IV syöpään. Suuntaus testi analyysi osoittaa merkittävän kasvun Surviviinispesifisiä transkription tasoilla koko potilailla, joilla on vaiheen I-III mahasyövän (trendi testi P-arvo = 0,04). Kunkin sarake ilmoitetaan keskiarvo ± SD.
Survival analyysi
jälkeen keskimäärin seurata 26 kuukauden mediaani kokonaiselinaika (OS) ja TNM-luokitus I-II ei saavutettu; mediaani OS vaiheessa III ja IV oli 25 ja 13 kuukautta, vastaavasti (log-rank testi p-arvo < 0,0001, kuva 3). Kuva 3 Kokonaiselossaoloaika varten TNM I-II, III ja IV kaikille potilaille (log-rank testi p-arvo < 0,0001).
Upon univariate selviytymisen analyysin, joukossa neljä geenejä olemme testanneet vain surviviinia ilmaisu voisi tunnistaa kaksi potilasryhmät huomattavasti eri ennusteeseen. Itse asiassa, kun otetaan huomioon 75. prosenttipiste log-transformoitujen geenin transkription tasoa (1.508) cutoff pisteen, mediaani korkea (> 1,508) ja matala (≤1.508) Surviviinispesifisiä mRNA runsaus olivat 14 ja 41 kuukautta, vastaavasti (log rank p-arvo = 0,036, kuva 4). Kuva 4 Kaplan-Meierin eloonjäämiskäyristä potilailla, joilla on korkea (> 75 persentiili) tai matala (alle 75-persentiili) transkription tasot surviviinin mitattiin ääreisverenkierron. Log-rank testi p-arvo = 0,036.
Monimuuttujakalibrointi selviytyminen analyysi myös TNM, ikä, sukupuoli ja mRNA-tasot neljän markkereita osoitti, että ainoastaan ​​TNM ja Surviviinin mRNA-tasot mitattiin ääreisveren itsenäisesti ennustaa potilaiden OS . Riskisuhde (HR), joka liittyy Surviviinispesifisiä tasoja osoittaa kasvua kuolemanriski 100 kertainen nousu Surviviinispesifisiä lauseke (taulukko 3) .table 3 monimuuttuja eloonjääminen analyysi 70 potilasta, joilla mahalaukun syövän.
Kovariaatit
HR
95% CI
P-arvo


Alaraja
Yläraja

TNM I
1 (viite) -
-
-
vaiheen II
1.20
1.01
1,45
0,048
vaiheen III
1,34
1,05
1,70
0,017
vaihe IV
3.17
1,38
6,77
0,004
Surviviinispesifisiä *
1,34
1,14
1,53
< 0,001
HR: riskisuhde; CI: luottamusväli; * HR liittyy Surviviinispesifisiä tasoja osoittaa kasvua kuoleman riski 100-kertainen surviviinin ilme.
Koska vain nämä neljä riippumatonta muuttujaa jäivät Coxin mallin, tämä analyysi osoittaa, että Surviviinispesifisiä geeniekspressiota voidaan lisätä hyödyllisiä varoituksia syntymässä olevista vakiintuneiden tekijöistä, kuten TNM pysähdyspaikan järjestelmä.
keskustelu
tässä tutkimuksessa havaitsimme, että transkription tasot surviviinin mitattuna perifeerisessä veressä potilaista, joilla on mahalaukun karsinooma itsenäisesti korreloi niiden eloonjäämiseen.
Jos validoituja suuremmissa tulevaisuutta koskevia tutkimuksia, nämä tulokset olisi mahdollista lisätä ennustetekijöiden tehoa tavanomaisten ennustetekijät, joita tällä hetkellä kiteytyy TNM lavastus parametrit. Tämä on erityisen merkityksellistä potilaille, joilla TNM I-III tauti, jolle optimaalinen riskin kerrostuminen on olennaista tunnistaa potilailla, joilla on korkein todennäköisyys hyötyä adjuvanttia hoidoista.
Meidän havainnot ovat erityisen merkityksellisiä myös kasvain biologian näkökulmasta koska surviviinin geeni koodaa keskeinen anti-apoptoottista proteiinia, joka kuuluu apoptoosi-inhibiittori-proteiinin (IAP) -perheen. Rinnalla on yksi parhaista tunnettu anti-apoptoottinen tekijät [14], Surviviinispesifisiä on esine intensiivisen tutkimuksen johtuu siitä, että aikuisilla se ilmentyy selektiivisesti käytännöllisesti katsoen vain syöpien eri alkuperää; Lisäksi ilmaisunsa primaarikasvaimen on liittynyt huonompi ennuste ja vastustuskykyä perinteisille kemoterapeuttisia [15]. Nämä havainnot tekevät surviviinin ihanteellinen kohde kasvainspesifisen hoitoja, kuten pienimolekyyliset estäjät ja antigeeni-spesifisen immunoterapian [16].
Surviviinia proteiinin ilmentyminen primaaristen kasvainten, mukaan lukien mahasyöpä, on tutkittu prognostinen tekijä, korkeammat tasot liittyessä huonompi syöpään tulokseen [17]. Noin RNA ilme, surviviini mRNA-tasot on tutkittu markkerina kiertävien tuumorisolujen (CTC) erilaisissa syöpä, mutta saatavilla olevat tiedot ovat niukat [18, 19]. Sarjassa 26 mahasyöpäpotilaista, surviviinin mRNA: ta (mitattuna ELISA: n avulla, joka perustuu qrtPCR) perifeerisessä veressä on raportoitu korreloivan potilaan ennusteen, TNM pysähdyspaikan on jätetty pois lopullisesta mutivariable mallin (pakottamalla kaikki muuttujat osaksi Cox-malli) [20]. Meidän suuremmista (n = 70), ennustetyöväline rooli surviviinin veressä on vahvistettu, vaikka TNM lavastus edelleen merkittävä ennustetekijä lopullisessa monimuuttuja malli (käyttäen porrastetusti muuttujan valinta). Huolimatta merkittävää yhteyttä potilaiden ennusteeseen, Surviviinin mRNA-tasot eivät nousseet kaikissa neljässä TNM vaihetta: suuntaus lisäämään transkription runsaus oli todella osoittanut vain potilailla, joilla on vaiheen I-III tauti (kuva 2). Tämä havainto voimin riippuu alhainen otoskoot yksittäisen TNM vaiheet (ja siitä johtuva alhainen tilastollinen teho), mutta pitää myös osoittaa, että Surviviinispesifisiä on rooli Paikallista eikä etäinen etäpesäkkeitä (missä muut geenit voivat olla enemmän merkitystä, kuten äskettäin raportoitu [21]).
Toisin kuin muut tutkimukset [9, 22-26], tasot CK19 ja CEA ei korreloinut potilaiden selviytymisen meidän sarjassa, joko univariable (tuloksia ei ole esitetty) tai monimuuttuja eloonjääminen analyysi: tämä saattaa riippua useista tekijöistä. Ensinnäkin sisällyttäminen meidän monimuuttuja-analyysi (joiden porrastetusti muuttuvan valinta) markkerin ei pidetä muiden Tekijät tekee mitään vertailua mahdotonta.
Huomattavaa on, että joitakin myönteisiä raportteja käyttää vain univariable selviytyminen analyysi, joka vaarantaa luotettavuus ja toistettavuus niiden tulosten kerran säätö vakiintuneisiin ennustetekijöitä (eli TNM vaiheita) toteutettiin [9, 25, 27, 28]. Lisäksi linjassa tuloksia muut tutkijat tekevät raportti puute yhdistyksen välillä sytokeratiineja positiivisten solujen läsnäolo ja ennusteen [29] (taulukko 4) .table 4 Valittu sarja analysoidaan ennustetekijöiden rooli kiertävien tuumorisolujen (CTC) potilailla, joilla on mahalaukun syöpä.
Author

Year

Ref.

Patients

Method

Survival analyysi
merkkiaineet
Havainnot
Koga T et. al.
2008
[9]
101
Kvantitatiivinen RT-PCR
Univariate
CK18, CK19, CK20, CEA
CK19 on parempi merkki, ja on käyttökelpoinen Arvioimme ennustetta tai adjuvanttihoitona
Yie SM et. al.
2008
[20]
26 (mahalaukun syöpä) B RT-PCR-ELISA
Monimuuttujatestaus
Surviviinispesifisiä
tila Surviviinispesifiset ilmentävien CTC on vahva ja itsenäinen ennustaja uusiutumisen
Hiraiwa K et. al.
2008
[22]
44 (mahalaukun syöpä)
CellSearch järjestelmä
Monimuuttuja
CD45 (-) solut vs CK (+) solujen
CTSS korreloi merkitsevästi kehittynyt kasvain vaiheessa
Illert B et. al.
2005
[23]
70
Kvantitatiivinen RT-PCR
monimuuttujamenetelmät
CK20
CK20 on itsenäinen prognostinen markkeri
Yeh KH et. al.
1998
[24]
34
sisäkkäisiä kvantitatiivinen RT-PCR
Univariate
CK19
CK19 ilmentävät CTC liittyy huonoon ennusteeseen
Seo JH et. al.
2005
[25]
46
Kvantitatiivinen RT-PCR
Ei tehty
CEA
CEA-mRNA korreloi merkitsevästi kliinisen toistuminen
Wu CH et. al.
2006
[26]
42
Kvantitatiivinen RT-PCR
Ei tehty
hTERT, CK19, CK20, CEA
CEA mRNA korreloi suurempi riski postoperatiivisten uusiutuminen /etäpesäke
UEN YH et. al.
2006
[27]
52
Kvantitatiivinen RT-PCR
Univariate
c-MET, MUC1
c-Met ja MUC1mRNA merkittävästi korreloivat ennusteeseen
Mimori K et. al.
2008
[28]
810
Kvantitatiivinen RT-PCR
Univariate
MT1-MMP
MT1-MMP on itsenäinen tekijä määritettäessä uusiutumisen ja etäinen etäpesäke
Pituch-Noworolska A. et. al.
2007
[29]
57
Virtaussytometria
Univariate
CD45 (-) solut vs CK (+) solujen
läsnäolo CK (+) solujen ei ole mitään ennusteen arvioinnissa
Nämä ristiriitaiset tiedot saattavat riippua siitä, että CK19 ja CEA ovat markkereita CTC läsnäolon, mutta ei välttämättä CTC kyky etäispesäkkeitä: itse asiassa se on hyvin vastaan, että vain osa CTC on biologisen potentiaalia synnyttää metastaattisen talletukset, kun taas useimmat CTC lopulta kuolevat ilman haitallisia isäntä [7]. Niinpä merkkiaineiden CTC "aggressiivisuus" kuten Surviviinispesifisiä voisi paljastaa olla informatiivinen suhteen korrelaatio potilaiden ennusteeseen.
Huomattavaa on, että tässä tutkimuksessa mRNA runsaus surviviinin ja CK19 oli aina suurempi kuin todettu terveillä verrokeilla paitsi yksi ja kaksi tapausta, vastaavasti. Tämä korostaa, kuinka tärkeää on käyttää kvantitatiivista menetelmää (qrtPCR), joka mahdollisti ositusta potilaille riski jatkuvalla asteikolla, kun taas standardi PCR olisi luokiteltu miltei kaikki potilaat positiivisina. Toisaalta, tämä havainto - joka parhaan tietomme ole koskaan raportoitu aiemmin - viittaa siihen, että nämä geenit voidaan käyttää hyväksi myös diagnostisiin tarkoituksiin, vaikka asiaa koskevan tutkimuksen suunniteltu nimenomaan tämä tavoite on perusteltua.
Kuten lopullinen vastike, haluaisimme todeta, että PCR-pohjaiset menetelmät eivät mahdollista tunnistaa solun lähde mitattuna merkkiaineiden: itse asiassa kaikki nämä menetelmät vaativat hajotus solut kerättiin ääreisverenkierron potilaiden jotta ote mRNA käytetään arvioimaan ilmentymisen kohdegeenien. Sitä paitsi CTC muita potentiaalisia PCR-havaittu geenit ovat PBMC, verenkierrossa endoteelisolujen (CEC), luuytimestä peräisin verenkierrossa kantasoluja sekä ihosolut (esim keratinosyyttien, fibroblastien, melanosyyttien) kontaminoivat näytteen aikana verta peruuttamista. Kuitenkin CTC ovat todennäköisesti pääasiallinen solun lähde Surviviinispesifisiä sillä sen ilme on hyvin rajallinen normaaleissa aikuisen kudoksissa ja on sen sijaan rajoittuu pääasiassa pahanlaatuisten solujen [30]. Tässä suhteessa sytometrinen menetelmät ovat vähemmän alttiita vääriä positiivisia tuloksia, koska ne merkitsevät vasta-ainetta, joka perustuu solun lajittelua, jota seuraa sytologinen tunnistamisen tuumorisoluissa, joka edeltää niiden fenotyyppisen luonnehdinta [31].
Päätelmät
Gene ekspressiotasot surviviinin lisätä merkittävästi ennusteen arvioinnissa nykyiseen TNM lavastus järjestelmä potilaiden mahalaukun syöpä. Validointi Näiden havaintojen suurissa mahdollisille sarjassa saattaa johtaa optimoimaan riski kerrostuminen ja lopulta mukauttaa hoitona näille potilaille.
Julistukset
Kirjoittajien alkuperäinen toimitti asiakirjat kuville
Alla linkit tekijöiden alkuperäinen toimitti asiakirjat kuville. 12967_2009_422_MOESM1_ESM.eps Kirjoittajien alkuperäinen tiedosto kuvio 1 12967_2009_422_MOESM2_ESM.eps Kirjoittajien alkuperäinen tiedosto kuvio 2 12967_2009_422_MOESM3_ESM.eps Kirjoittajien alkuperäinen tiedosto kuvio 3 12967_2009_422_MOESM4_ESM.eps Kirjoittajien alkuperäinen tiedosto kuvio 4 Kilpailevat edut
Kirjoittajat ilmoittavat, että ne ei ole kilpailevia intressejä.

• Kliinis sekä varoituksia roolit KRAS, BRAF, PIK3CA ja sääntelyviranomaisten mutaatiot edennyt mahasyöpä
• Stentti vs. gastrojejunostomialetkua jolla voidaan lievittää mahalaukun pistorasiaan tukkeuma: järjestelmällinen review