Уровни генов Survivin в периферической крови больных раком желудка независимо предсказывают выживание

Уровни генов Survivin в периферической крови пациентов с раком желудка независимо предсказывают выживание
Аннотация
Справочная информация
выявления циркулирующих опухолевых клеток (КТК) считается перспективным инструментом для улучшения стратификации риска у пациентов с солидными опухолями. Мы исследовали на добавляет ли экспрессия генов, связанных CTC любой прогностическую силу системы ступенчатого TNM у больных раком желудка.
Методы
Семьдесят пациентов со стадией TNM I к IV карциномы желудка были ретроспективно зачислены. Образцы периферической крови были протестированы с помощью ПЦР в Реальном Времени (qrtPCR) для экспрессии четырех генов, связанных ЦКК: карциноэмбриональный антиген (СЕА), цитокератина-19 (CK19), фактор роста сосудистого эндотелия (VEGF), и сурвивин (BIRC5).

Результаты экспрессия генов сурвивина, CK19, CEA и VEGF был выше, чем у нормальных контрольных в 98,6%, 97,1%, 42,9% и 38,6% случаев, соответственно, что указывает на потенциальную диагностическую ценность как сурвивина и CK19 , При многофакторном анализе выживаемости, ТНМ постановка и уровни мРНК сурвивина были сохранены в качестве независимых прогностических факторов, демонстрируя, что экспрессия сурвивина в периферической крови добавляет прогностическую информацию к системе TNM. В отличие от ранее опубликованных данных, транскрипт обилие CEA, CK19 и VEGF не был связан с клиническим исходом пациентов.
Выводы
уровней экспрессии генов сурвивина добавить значительную прогностическую ценность к существующей системе TNM постановка. Проверка достоверности этих результатов в большей перспективной и мультицентрическим серии может привести к осуществлению этого биомаркера в рутинной клинической практике с целью оптимизации стратификации риска и в конечном счете, персонализировать терапевтическое лечение этих больных.
Фон
Рак желудка представляет четвертым наиболее распространенным видом рака и второй ведущей причиной рака, связанных смерти во всем мире. По оценкам, текущая заболеваемость раком желудка составляет около 16,2 /100 000 человек /год (мир стандартизированный показатель, WSR), с высоких показателей в Восточной Азии, Восточной Европы и Южной Америки [1]. В настоящее время единственным прогностическим система обычно применяется для лечения больных раком желудка основан на опухолевого-узле метастазы (TNM) постановка системы Международный союз против рака [2], в которой степень проникновения опухоли (рТ) и узловой статус (Pn) [3] являются двумя основными прогностические показатели у больных без отдаленных метастазов заболевания. Пациенты на ранних стадиях считаются кандидатами на лечение хирургическим путем. Тем не менее, 50% больных раком желудка страдают от рецидивов опухоли даже после радикальной операции [4, 5]. Таким образом, существующая система постановка не кажется точно предсказать индивидуальный подход к пациенту риск рецидива рака. На самом деле эта классификация определяет широкие категории с существенно различной прогностической подгруппы в рамках каждой стадии, которые делают эту систему неоптимальным для индивидуального терапевтического подхода. Примером этого может служить тот факт, что у некоторых пациентов в настоящее время классифицируется как "низкого риска" не представлен адъювантной терапии, хотя они и рецидива заболевания опыт. И наоборот, у некоторых пациентов, перенесших адъювантной терапии из-за "высокого риска" TNM классификации, было бы не нужно это лечение [6]. Для решения этой проблемы и улучшить прогноз больных, срочно необходимы новые параметры надежного прогнозирования исхода пациентов. Пациенты, перенесшие потенциально лечебные операции сохраняют риск рецидива, который берет свое начало от микроскопических опухолевых остатков, известных как минимальной остаточной болезни (МОБ). МОБ может повлиять на различные отсеки для тела, в том числе костный мозг, лимфатические узлы и периферической крови [7]. В последние годы несколько исследований были сосредоточены на выявлении циркулирующих опухолевых клеток (КТК) в отношении их клинических последствий для пациентов с раком желудка. В результате количественное в реальном времени полимеразной цепной реакции (qrtPCR) и вариации этого метода, который считается наиболее чувствительным методом для оценки экспрессии генов, которые были использованы при обнаружении опухолевых маркеров, которые указывают на наличие ТХМ, установленный в крови [8].
в данном анализе мы стремились профилирование периферической крови 70 патентов, страдающих аденокарциномы желудка с помощью qrtPCR. Мы протестировали четыре биомаркеров, два присутствия, объявление двух агрессивности опухоли, и один из них, Survivin, добавить независимую прогностическую силу системы ступенчатого TMN. Это может позволить для лучшей стратификации риска пациента и, следовательно, лучше терапевтического лечения, особенно в условиях адъювантной
Методы
Пациенты
В этом исследовании мы зачислены 70 пациентов (39 мужчин, 31 женщин;. Возрастная группа 28 - 90 лет, средний возраст 68 лет), которые перенесли операцию (полное или частичное) резекции желудка для гистологически доказанным раком желудка в период с октября 1998 года по ноябрь 2007 года, и для которых периферийный образец крови был доступен. Исследование, которое находится в соответствии с Хельсинской декларацией, был одобрен локальными этическими комитетом Университета Падуи (номер официального утверждения: 70/2006) путем. Письменное информированное согласие относительно использования биологических образцов для исследовательских целях было получено у всех пациентов. Во время анализа, 33 (47,1%) были живы в то время как 37 (52,9%) умерли. Медиана наблюдения составила 15 месяцев (диапазон: 6-119 месяцев). Медиана выживаемости составила 25 месяцев. Опухолевые характеристики приведены в таблице 1. Глубина инвазии опухоли (Т) категории, степени метастазов в лимфатических узлах (N категория) и макроскопического метастазирования (М категории) были отнесены к категории в соответствии с UICC TNM постановки system.Table 1 Пациенты и характеристики опухоли .
Параметры

N

(%)

Пациенты
все
70
(100,0)
самца
39
(55,7)
женский
31
(44,3)
Возраст (лет)
≤ 65
21 <бр> (30,0)
> 65
49
(70,0)
Локация
многоцентровое страница 5 (7.1)
верхней трети
11
(15.7)
средней трети
19
(27,1)
нижней трети
35
(50,0)
TNM стадии
I (IA + IB)
10
(14.3) <бр> II
14
(20,0)
III (IIIA + IIIB)
19
(27.1)
IV
27
(38,6)
клеточных линий
человеческой линии клеток карциномы желудка NCI-N87, получена из американской коллекции типовых культур (Manassas, США), инкубировали в среде RPMI-1640 (Invitrogen - Gibco, Carlsbad, CA, США), содержащей 10% эмбриональной телячьей сыворотки . (Euroclone - Celbio, Перо, MI), 10 мМ HEPES, 1 мМ пирувата натрия (Sigma-Aldrich, St. Louis, МО), при 37 ° с в атмосфере 5% СО <суб> 2
NCI-N87 является желудочный линии клеток карциномы происходит от метастаза печени хорошо дифференцированного рака желудка, принятых до цитотоксической терапии. Согласно спецификации производителя, клетки экспрессируют поверхностных гликопротеинов карциноэмбриональный антиген (СЕА).
Клеточные наблюдаются пики эксперименты
Исследование клеточного подсадки проводили для того, чтобы определить чувствительность данного метода qrtPCR для обнаружения раковых клеток в периферической крови одноядерных клетки (РВМС). РВМС получали от здоровых добровольцев, и подсчитывали и разводили в соотношении 1: 1 в RPMI среде. Клетки рака желудка N87 были подсчитаны и серийно разбавленные от 1 × 10 6 клеток /мл до 1 клеток /миллилитр в МНПК. Суммарную РНК экстрагировали и реверс-транскрибируются с 2 мл каждой фракции. qrtPCR для двух интересующих генов были затем проводили, как описано ниже.
сбора проб, экстракции РНК и синтез кДНК
A 6 мл аликвоты венозной крови получали от каждого пациента во время операции. Обработка проб проводили в течение двух часов после забора крови. Образец центрифугировали при 2000 х г в течение 10 мин, и собирают фракцию РВМС собирали и хранили в жидком азоте.
Замороженные образцы оттаивают и Суммарную РНК экстрагировали с использованием метода гуанидин тиоцианат-фенолхлороформом (Trizol Реагент, Invitrogen, Карлсбад, Калифорния, США). Целостность выделенной РНК была создана путем qrtPCR анализа эндогенной контрольного гена бета-актина (б-актин), как описано ниже, [9].
Суммарную РНК (7 мкг на 100 мкл конечного объема реакции) подвергали обратной транскрипции с использованием случайные праймеры и MultiScribe обратной транскриптазы (кДНК высокой емкости обратного набора транскрипции, Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Реакционную смесь инкубировали в течение 10 минут при 25 ° С, а затем при 37 ° С в течение 120 минут. кДНК хранили при -80 ° С до использования.
в реальном масштабе времени количественной полимеразной цепной реакции
транскрипционной уровни четырех генов (т.е. раково антигена [СЕА], цитокератина-19 [CK19], сурвивина и сосудистый эндотелиальный фактор роста [VEGF]) были измерены в периферической крови пациентов с помощью количественной ПЦР в реальном времени (qrtPCR) с использованием метода относительной квантификации (2 -ΔΔCt метод) [10, 11]. Используя 2 -ΔΔCt метод данные представлены в виде загнутой изменения в экспрессии генов, нормализуют с помощью контрольного гена и относительно образца калибратора. Целью процесса нормализации является для регулировки значения, представляющий транскрипционные уровни каждого гена на количество мРНК, присутствующей в каждом образце: это, как правило, получают путем деления на уровни экспрессии каждого гена теми ссылочного гена (также под названием "домашнее хозяйство" ген). гены, ведение домашнего хозяйства экспрессируются и - в идеале - не зависят от экспериментальных манипуляций: следовательно, они должны примерно отражать общее количество мРНК протестирована в каждом образце [12]. В качестве эталонного гена в данном исследовании мы использовали бета-актина, один из наиболее часто используемых генов домашнего хозяйства.
В исследовании относительной количественной оценки ПЦР, так называемый "калибратор" представлен генной экспрессии выбранного образца, с помощью которого выражение профиль каждого образца интерес корректируется: этот подход позволяет следователю сравнить профиль экспрессии образцов, представляющих интерес друг с другом с точки зрения их сгиба изменения в отношении одного образца (калибратора)
. Обычно калибратор необработанный образец (например, в функциональном исследовании), образец в нулевой момент времени (например, в исследовании времени курса) или любой несвязанный образец (например, здоровых в исследовании пациентов, или нормальные фибробласты в клетки рака линия исследования) [10]. Пул кДНК, происходящей из РВМС у 20 здоровых доноров использовали в качестве источника калибратора в нашем исследовании. Оценка 2 -ΔΔCt указывает на кратное изменение экспрессии гена относительно калибратора. Для калибратор ΔΔCt равна нулю, а 2 0 равен единице, так что складка изменение в экспрессии генов по отношению к калибратора равен единице, по определению.
Метод был апробирован для нашей экспериментальной системы путем проверки того, что эффективность амплификации мишеней и B-актина генов были сходными. TaqMan Gene Expression, специфичные для Анализы CEA, CK19, сурвивина и VEGF были приобретены у Applied Biosystems. Для того, чтобы избежать амплификации геномной ДНК загрязненную, пара праймеров была помещена на стыке между двумя экзонов. Анализ qrtPCR проводили с использованием системы обнаружения последовательностей ABI PRISM 7300. ПЦР-реакцию протекать в смеси (30 мкл), содержащую 15 мкл 2 × TaqMan Универсальный PCR Master Mix, 1,5 мкл 20 × TaqMan анализа экспрессии гена (все реагенты от Applied Biosystems), 12,5 мкл воды и 1 мкл матрицы кДНК , Пятьдесят циклов амплификации проводили при 95 ° С (15 секунд) и 60 ° C (1 минута) и уровни экспрессии мРНК нормализовали против квантифицированного В-актина экспрессии мРНК для каждого образца.
Статистический анализ
Статистический анализ осуществляется с использованием Stat View V. 4,57 программное обеспечение (Abacus Concepts, Лондон, Великобритания) и версия 7.0.0 программного обеспечения StatXact (Cytel Software Corporation, США). Корреляция между уровнями генов (высоким и низким уровнем экспрессии генов, как это определено среднее значение) и TNM заболевания категорий стадирования оценивали с помощью теста тренда Кокрановскому-Armitage. Кривые выживаемости оценивались по методу Каплана-Мейера, и одномерные сравнения выживаемости были рассчитаны в соответствии с испытанием логарифмического. Транскрипционной уровни четырех генов, наряду с антропометрическими факторов и стадий TNM (в соответствии с 5-го издания постановка системы AJCC TNM, выпущенный в 1997 году), были использованы в качестве независимых переменных в многомерный анализ выживаемости, который был выполнен с использованием Кокса пропорционального опасности регрессионной модели [13]. Выбор переменных, которые вносят вклад в значительное прогнозной модели была выполнена ступенчатым методом. . Значения вероятностей и ЛТ, 5% были признаны статистически значимыми
Результаты
Cell: чувствительность пики из qrtPCR техники
В клеточной линии N87, уровни мРНК СЕА, CK19, сурвивина, и гены VEGF были высоко выражены (Рисунок 1): Таким образом, эта линия желудка карцинома представляет собой действительный положительный контроль для наших экспериментов. уровни экспрессии генов 1 Рисунок из четырех генов, представляющих интерес в N87 клеток рака желудка человека (как измерено с помощью количественной ПЦР в реальном времени: см текст для подробностей). Натуральный логарифм уровней экспрессии сообщается на оси у: ось координат (0) представляет собой эталонный образец (так называемый калибратора), с которой все экспериментальные образцы по сравнению с относительным методом количественной оценки (см текст для деталей)
. Для того, чтобы установить предел обнаружения (чувствительность) метода qrtPCR, разбавление серийный 10-кратный (в МНПК) из N87 клеток карциномы желудка анализировали в трех экземплярах с использованием qrtPCR СЕА и Survivin в качестве маркеров генов. СЕА и мРНК сурвивина были обнаружены до 1 клетка /10 8 РВМС разбавление:. Это соответствует нахождению от 1 до 10 злокачественных клеток на 10 мл периферической крови (данные не показаны)
экспрессия маркеров в образцах крови
образцы периферической крови от всех 70 пациентов были оценены для четырех маркеров генов. Выражение было положительным (выше, чем калибратора) в 98,6%, 97,1%, 42,9%, 38,6% образцов для сурвивина, CK19, CEA, СЭФР, соответственно (таблица 2). Поскольку уровни гена сурвивина и CK19 найти почти все пациенты больше, чем у здоровых людей, эти данные указывают на диагностический потенциал обоих уровней genes.Table 2 транскрипционные четырех прогностических маркеров в периферической крови больных раком желудка.
Маркер

Над калибратора (%) *

Ниже калибратора (%) *

Undetectable (%) <бр>
Survivin
69 (98,6)
1 (1.4)
0 (0,0)
CK19
68 (97,1)
2 (2.9) 0
(0.0 )
CEA
30 (42,9) 21
(30,0)
19 (27.1)
VEGF
27 (38,6)
43 (61,4)
0 (0.0 )
* уровни экспрессии генов определяли с помощью количественной ПЦР в реальном времени: применяется метод относительного количественного определения, образцы были классифицированы, как описано выше или ниже уровней, обнаруженных в калибраторе (образцы объединяли периферической крови здоровых доноров)
более того,. если бы мы рассматривали 75-й процентиль уровней экспрессии Survivin на стадии, мы имели значительное усиление тенденции (р = 0,04) для стадии от I до III, но не для стадии IV (рисунок 2). Уровни 2 гена сурвивина Фигура, измеренные в периферической крови 70 пациентов со стадией TNM I к IV рака желудка. Анализ теста тенденция показывает значительное увеличение транскрипционных уровней Survivin через пациентов со стадией I до III рака желудка (тенденция тест P-значение = 0,04). Для каждого столбца сообщается среднее значение ± SD
Survival анализ
После среднего периода наблюдения до 26 месяцев, медиана общей выживаемости (ОВ) для стадии TNM I-II не была достигнута. медиана ОС для стадии III и IV было 25 и 13 месяцев, соответственно (лог-ранговый критерий P-значение &л; 0,0001, рисунок 3). Рисунок 3 Общая выживаемость для TNM стадии I-II, III и IV для всех пациентов (лог-ранговый критерий P-значение &л; 0,0001).
Upon однофакторного анализа выживаемости среди четырех генов, мы проверили, только Survivin выражение может выделить две группы пациентов с существенно различным прогнозом. На самом деле, принимая во внимание 75-й процентиль уровней транскрипции генов лог-трансформированных (1.508) в качестве точки отсечки, медиана ОС для высокой (> 1,508) и низким (≤1.508) Survivin мРНК изобилие было 14 и 41 месяцев, соответственно (логарифмическая Оценка P-значение = 0,036, рис 4). Рисунок 4 Кривые Каплана-Мейера выживаемости пациентов с высоким (> 75-го процентиля) или низкой (&л; 75-й процентиль) транскрипционные уровни сурвивина, измеренные в периферической крови. Лог-ранговый критерий P-значение = 0,036.
Многомерный анализ выживаемости, включая стадии TNM, возраста, пола и уровня мРНК четырех маркеров показал, что только стадия TNM и уровни Survivin мРНК, измеренные в периферической крови независимо друг от друга предсказать OS пациентов , Отношение риска (HR), связанный с уровнями Survivin указывает на увеличение риска смерти на 100-кратному увеличению экспрессии сурвивина (Таблица 3) .table 3 Многофакторный анализ выживаемости 70 больных раком желудка.
ковариатами

HR

95% ДИ

P-значение

<й>
<й>
Нижний предел


Верхний предел


<й>
стадии TNM I
1 (ссылка)
- Форум -
-
этап II
1.20
1.01
1,45
0,048
стадии III
1,34
1.05
1,70
0,017
этап IV
3,17
1,38
6,77
0,004
Survivin *
1,34
1,14
1,53
&л; коэффициент опасности;: HR 0,001
CI: доверительный интервал; * По кадрам, связанный с уровнями Survivin указывает на увеличение риска смерти для 100-кратное увеличение экспрессии сурвивина.
Так как только эти четыре независимые переменные были сохранены с помощью модели Кокса, этот анализ позволяет предположить, что экспрессия гена Survivin может добавить полезную прогностическую информацию хорошо установленных факторов, таких, как система TNM постановка.
Обсуждение
в этом исследовании мы обнаружили, что транскрипционные уровни сурвивина, измеренные в периферической крови пациентов с карциномой желудка независимо коррелирует с их общей выживаемости.
Если подтверждено в больших перспективных исследованиях, эти результаты позволили бы повысить прогностическую силу обычных прогностических факторов, которые в настоящее время, воплощенных параметрами TNM постановки. Это имеет особое значение для пациентов со стадией TNM I к III болезни, для которых стратификация риска оптимальным является существенным для выявления субъектов с наибольшей вероятностью получить выгоду от адъювантной терапии.
Наши результаты имеют особое значение и с точки зрения биологии опухоли так как ген сурвивина кодирует ключевую антиапоптозную белок, относящийся к семейству ингибитора апоптоза белка (IAP). Кроме того одним из наиболее хорошо охарактеризованных антиапоптотических факторов [14], сурвивин является объектом интенсивных исследований в связи с тем, что у взрослых он избирательно экспрессируется практически только раковых заболеваний различного происхождения; Более того, его экспрессия в первичной опухоли было связано с плохим прогнозом и устойчивостью к традиционным химиотерапевтическим средствам [15]. Эти наблюдения Survivin идеальной мишенью для опухолевых-специфической терапии, такие как низкомолекулярные ингибиторы и антиген-специфической иммунотерапии [16].
Экспрессию белка сурвивина в первичных опухолей, включая рак желудка, был исследован в качестве прогностического фактора, выше уровни ассоциируется с худшим исходом рака [17]. О экспрессии РНК, уровни Survivin мРНК были исследованы в качестве маркера циркулирующих опухолевых клеток (КТК) в различного рода рака, однако имеющиеся данные недостаточны [18, 19]. В серии из 26 больных раком желудка, мРНК сурвивина (как измерено с помощью ELISA на основе qrtPCR) в периферической крови, как сообщается, коррелируют с прогнозом пациентов, то ТНМ постановка, исключаются из окончательной mutivariable модели (форсирует все переменные в модель Кокса) [20]. В нашей крупной серии (п = 70), прогностическая роль уровней крови Survivin подтверждается, хотя TNM постановка остается значительным прогностическим фактором в конечной многовариантной модели (используя пошаговый режим для выбора переменной). Несмотря на значительные ассоциации с прогнозом пациентов, уровни мРНК Survivin не увеличивалась во всех четырех TNM этапах: тенденция к увеличению транскрипционной изобилия было фактически продемонстрировано только у пациентов со стадией I до III болезни (рис 2). Это открытие может зависит от низких объемах выборки из отдельных стадий TNM (и, как следствие, низкой статистической мощности), но может также указывает на то, что сурвивин играет определенную роль в локорегионального, а не в отдаленном метастазирование (где другие гены могут быть более актуальной, поскольку в последнее время сообщили [21])
в отличие от других исследований [9, 22-26], уровни CK19 и CEA не коррелируют с выживаемостью пациентов в нашей серии, либо на univariable (данные не показаны) или анализа многофакторной выживания:. это может зависеть от нескольких факторов. Прежде всего, включение в нашем многофакторном анализе (с пошаговым режимом выбора переменной) маркера не рассматривается другими авторами делает любое сравнение неосуществимой.
Следует отметить, что некоторые положительные отчеты только использовать univariable анализ выживаемости, который ставит под угрозу надежность и воспроизводимость их результатов, один раз для корректировки хорошо установленных прогностических факторов (т.е. TNM стадии) были реализованы [9, 25, 27, 28]. Кроме того, в соответствии с нашими результатами других исследователей сообщают о отсутствие связи между Цитокератины положительным присутствием клеток и прогноз [29] (таблица 4) .table 4 Отдельные серии анализа прогностической роли циркулирующих опухолевых клеток (КТК) у пациентов с раком желудка.
Author

Year

Ref.

Patients

Method

Survival анализ

Маркеры

Результаты

Кога T и др. и др.
2008
[9]
101
Количественный RT-PCR
однофакторном
CK18, CK19, CK20, CEA
CK19 является лучшим маркером, и может использоваться для оценить прогноз и для адъювантной терапии
Yie С.М. и др. и др.
2008
[20]
26 (рак желудка)
RT-PCR ELISA
мультивариантном
Survivin
Статус Survivin-выражающей КТК является сильным и независимым предиктором для повторения
Hiraiwa K и др. . Аль
2008
[22]
44 (рак желудка)
CellSearch системы
мультивариантном
CD45 (-) клетки против CK (+) клетки
CTSS значительно коррелирует с продвинутой стадии опухоли
Illert B и др. и др.
2005
[23]
70
Количественный RT-PCR
Мультивариантный
CK20
CK20 является независимым прогностическим маркером
Yeh KH и др. и др.
1998
[24]
34
Уплотненный количественный RT-PCR
Одномерный
CK19
CK19 выражения КТК связаны с плохим прогнозом
Seo JH и др. и др.
2005
[25]
46
Количественный RT-PCR Не
выполнена
CEA CEA
мРНК достоверно коррелирует с клиническим рецидивом
Ву CH и др. и др.
2006
[26]
42
Количественный RT-PCR
Не выполняется
hTERT, CK19, CK20, CEA CEA
мРНК коррелирует с повышенным риском послеоперационной рецидив /метастаз
Uen YH и др. и др.
2006
[27]
52
Количественный RT-PCR
однофакторном
с-Met, MUC1
с-Met и MUC1mRNA достоверно коррелирует с прогнозом
Mimori K и др. и др.
2008
[28]
810
Количественный RT-PCR
однофакторном
МТ1-ММР
МТ1-ММР является независимым фактором для определения рецидивов и отдаленных метастазов
Питуч-Noworolska и др. . Аль
2007
[29]
57
Проточная цитометрия
однофакторном
CD45 (-) клетки против CK (+) клетки
Наличие CK (+) клетки не имеет прогностическое значение
Эти противоречивые данные могут зависеть от того факта, что CK19 и СЕА являются маркерами присутствия КТК, но не обязательно способности КТК к метастазированию: на самом деле, хорошо принято считать, что только подмножество КТК имеет биологическое потенциал порождая метастатических отложений, в то время как большинство КТК, в конечном счете умирают, не будучи вредным для хозяина [7]. Соответственно, маркеры CTC "агрессивностью", такие как сурвивина может выявить более информативным с точки зрения корреляции с прогнозом пациентов. Каталог записки, в настоящем исследовании мРНК обилие сурвивина и CK19 всегда было больше, чем во здоровых для одного и двух случаев, соответственно, за исключением. Это подчеркивает важность использования количественного метода (qrtPCR), что позволило нам стратифицировать пациентов группы риска по непрерывной шкале, в то время как стандартная ПЦР бы классифицировали практически у всех больных как положительные. С другой стороны, этот вывод - что в меру наших знаний никогда не сообщалось ранее - позволяет предположить, что эти гены могли бы быть использованы также для диагностических целей, хотя специальная исследование, специально предназначенные для этой цели является оправданным
Как. окончательное рассмотрение, мы хотели бы отметить, что основанные на ПЦР методы не позволяют определить источник клеток измеренных маркеров: на самом деле, все эти методы требуют лизис клеток, полученных из периферической крови пациентов с тем, чтобы извлечь мРНК использовали для оценки экспрессии генов-мишеней. Кроме того, КТК, другие потенциальные источники ПЦР-обнаруженных генов РВМС, циркулирующих эндотелиальных клеток (ЦИК), из костного мозга циркулирующих стволовых клеток, а также клеток кожи (например, кератиноциты, фибробласты, меланоциты) контаминирующие образца во время забора крови. Тем не менее, КТК, вероятно, будут основным источником клеток для сурвивина, как его экспрессия очень ограничена в нормальных тканях взрослого организма, и вместо этого в основном ограничивается злокачественными клетками [30]. В связи с этим, цитометрии методы менее склонны к ложным положительным результатам, так как они подразумевают антитела на основе сортировки клеток с последующим цитологическим идентификации опухолевых клеток, предшествующую их фенотипическую характеристику [31].
Выводы
уровни экспрессии генов сурвивина добавить существенное прогностическое значение для текущей TNM промежуточной системы пациентов с карциномой желудка. Проверка достоверности этих результатов в большей перспективной серии может привести к оптимизации стратификации риска и в конечном счете, персонализировать терапевтическое лечение этих больных.
Оригинальные файлы, представленные декларациях
Авторского для изображений
Ниже приведены ссылки на оригинальный авторов представлены файлы для изображений. "Исходный файл для фигурного 1 12967_2009_422_MOESM2_ESM.eps Авторского 12967_2009_422_MOESM1_ESM.eps авторов исходного файла для фигурного 2 12967_2009_422_MOESM3_ESM.eps Авторского исходного файла для фигурного 3 12967_2009_422_MOESM4_ESM.eps Авторского исходного файла для фигурного 4 конкурирующими интересами
Авторы заявляют, что они нет конкурирующих интересов.

• Клинико-патологическими особенности и прогностические роли KRAS, BRAF, PIK3CA и NRAS мутаций в передовых желудка cancer
• Стент по сравнению с гастроэнтероанастомоз для паллиативного желудочного выпускном обструкции: систематиче…