los niveles de genes de survivina en la sangre periférica de pacientes con cáncer gástrico independientemente predecir la supervivencia

los niveles de genes survivina en la sangre periférica de pacientes con cáncer gástrico independientemente predecir la supervivencia
Resumen Antecedentes

La detección de células tumorales circulantes (CTC) se considera una herramienta prometedora para mejorar la estratificación del riesgo en pacientes con tumores sólidos. Hemos investigado si la expresión de genes relacionados con la CTC añade ningún poder pronóstico para el sistema de estadificación TNM en pacientes con carcinoma gástrico.
Métodos
Setenta pacientes con estadio TNM I a IV carcinoma gástrico se inscribieron de forma retrospectiva. Muestras de sangre periférica se ensayaron por medio de cuantitativa en tiempo real PCR (QRTPCR) para la expresión de cuatro genes relacionados CTC: antígeno carcinoembrionario (CEA), citoqueratina-19 (CK19), factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) y survivina (BIRC5).
resultados
de expresión génica de survivina, CK19, CEA y VEGF fue mayor que en los controles normales en 98,6%, 97,1%, 42,9% y 38,6% de los casos, respectivamente, lo que sugiere un valor de diagnóstico potencial tanto de survivina y CK19 . En el análisis de supervivencia multivariante, estadificación TNM y los niveles de ARNm de survivina se mantuvieron como factores pronósticos independientes, lo que demuestra que la expresión de survivina en la sangre periférica añade información pronóstica para el sistema TNM. En contraste con los datos publicados anteriormente, la abundancia de transcripción de la CEA, CK19 y VEGF no se asoció con el resultado clínico de los pacientes.
Conclusiones
los niveles de expresión génica de survivina añaden valor pronóstico importante para el sistema de estadificación TNM actual. La validación de estos resultados en las series con mayor prospectivo y multicéntrico podría dar lugar a la aplicación de este biomarcador en la práctica clínica de rutina con el fin de optimizar la estratificación del riesgo y, en última instancia personalizar el manejo terapéutico de estos pacientes.
Antecedentes El cáncer gástrico representa
el cuarto tipo de cáncer más común y la segunda causa principal de muerte relacionada con el cáncer en todo el mundo. La incidencia estimada actual del cáncer gástrico es de aproximadamente 16,2 /100 000 personas /año (tasa estandarizada mundo, WSR), con incidencias más altas en Asia del Este, Europa del Este y América del Sur [1]. En la actualidad el único sistema de pronóstico empleado habitualmente para el tratamiento de pacientes con cáncer gástrico se basa en el tumor-nódulo-metástasis (TNM) sistema de estadificación Internacional Union Against Cancer [2], en el que el grado de penetración del tumor (PT) y el estado ganglionar (pN) [3] son ​​los dos principales indicadores de pronóstico en pacientes sin enfermedad metastásica distante. Los pacientes en las primeras etapas son considerados candidatos para la curación mediante cirugía. Sin embargo, 50% de los pacientes con cáncer gástrico sufren de recaídas tumorales, incluso después de la cirugía radical [4, 5]. Por lo tanto, el sistema de clasificación actual no parece predecir con exactitud el riesgo del paciente individual de recurrencia del cáncer. En efecto, esta clasificación identifica con amplias categorías significativamente diferentes subgrupos de pronóstico dentro de cada etapa, que hacen que este sistema subóptimo para un enfoque terapéutico personalizado. Ejemplo de ello es el hecho de que algunos pacientes que actualmente están clasificados como de "bajo riesgo" no se someten a la terapia adyuvante, aunque sí recaída de la enfermedad experiencia. A la inversa, algunos pacientes sometidos a terapia adyuvante actualmente debido a la clasificación TNM de "alto riesgo", no necesitaría este tratamiento [6]. Para hacer frente a este problema y mejorar el pronóstico de los pacientes, se necesitan urgentemente nuevos parámetros de predicción fiable de los pacientes resultados. Los pacientes que habían sido sometidos a cirugías potencialmente curativas retienen el riesgo de recurrencia que se origina a partir de residuos tumorales microscópicas conocidas como enfermedad residual mínima (MRD). MRD puede afectar a diferentes compartimentos del cuerpo, incluyendo la médula ósea, los ganglios linfáticos y sangre periférica [7]. En los últimos años, varios estudios se han centrado en la detección de células tumorales circulantes (CTC) con respecto a sus implicaciones clínicas para los pacientes con cáncer gástrico. Como resultado, la reacción cuantitativa en tiempo real en cadena de polimerasa (QRTPCR) y las variaciones de esta técnica, que se considera que es el método más sensible para la evaluación de la expresión génica, se han utilizado en la detección de marcadores tumorales que indican la presencia de CTC en el arterial [8].
En el análisis actual, que tuvo como objetivo perfilar la sangre periférica de 70 patentes afectadas con adenocarcinoma gástrico mediante el uso de QRTPCR. Hemos probado cuatro marcadores biológicos, dos de la presencia, ad dos de la agresividad del tumor, y uno de éstos, la survivina, añadir poder pronóstico independiente para el sistema de estadificación TMN. Esto podría permitir una mejor estratificación del riesgo del paciente y por lo tanto un mejor manejo terapéutico, especialmente en el tratamiento adyuvante
Métodos Los pacientes

En este estudio se reclutó a 70 pacientes (39 hombres, 31 mujeres;. Rango de edad 28 - 90 años, edad media 68 años) que se sometieron a cirugía (gastrectomía total o parcial) para el diagnóstico histológico de carcinoma gástrico entre octubre de 1998 y noviembre de 2007, y para los que una muestra de sangre periférica estaba disponible. El estudio, que está en conformidad con la Declaración de Helsinki, fue aprobado por el comité de ética local de la Universidad de Padova (número de registro: 70/2006). escrito el consentimiento informado sobre el uso de muestras biológicas para fines de investigación se obtuvo de todos los pacientes. En el momento del análisis, 33 (47,1%) estaban vivos mientras que 37 (52,9%) habían muerto. La mediana de seguimiento fue de 15 meses (rango: 6-119 meses). La mediana de supervivencia fue de 25 meses. Las características del tumor se resumen en la Tabla 1. La profundidad de la invasión tumoral (categoría T), extensión de la metástasis de los ganglios linfáticos (categoría N) y metástasis macroscópicas (categoría M) se clasificaron de acuerdo con la estadificación TNM de la UICC system.Table 1 Pacientes y características del tumor .
Parámetros
N gratis (%)
pacientes todos los
70
(100,0)
masculina
39 gratis (55,7)
mujer
31 gratis (44.3)
Edad (años)
≤ 65
21
(30.0) Hotel > 65
49 gratis (70.0)
Ubicación y multicéntrico página 5 gratis (7.1): perfil del tercio superior página 11 gratis (15.7)
tercio medio
19 gratis (27.1)
inferior de terceros
35 (50,0): perfil del estadio TNM
I (IA + IB): perfil 10 gratis (14.3)
II página 14 gratis (20.0)
III (IIIA IIIB +) página 19 gratis (27.1)
IV
27 gratis (38.6)
líneas celulares México la línea celular de carcinoma gástrico humano NCI-N87, obtenido de la American Type Culture Collection (Manassas, EE.UU.), se incubó en medio RPMI-1640 (Invitrogen - Gibco, Carlsbad, CA, EE.UU.) que contenía suero de ternera fetal al 10% . (Euroclone - Celbio, Pero, MI), HEPES 10 mM, 1 mM de piruvato sódico (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO), a 37 ° C en 5% de CO 2
NCI-N87 es una línea celular de carcinoma gástrico derivado de una metástasis hepática de un carcinoma bien diferenciado del estómago que se toman antes de la terapia citotóxica. De acuerdo con la hoja de datos del fabricante, las células expresan el glicoproteínas de la superficie el antígeno carcinoembrionario (CEA).
Celulares experimentos de adición
un estudio spiking celular se realizó con el fin de determinar la sensibilidad de esta técnica QRTPCR para la detección de células cancerosas en la sangre periférica mononuclear células (PBMC). El PBMC se obtuvieron de voluntarios sanos, y se contó y se diluyó 1: 1 en medio RPMI. células de cáncer gástrico N87 se contaron y se diluyeron en serie a partir del 1 × 10 6 células /ml a 1 célula /mililitro en el CMSP. El ARN total se extrajo y se inversa transcribe a partir de 2 mililitros de cada fracción. QRTPCR por dos genes de interés se realiza entonces, como se describe a continuación la síntesis de recogida de muestras, la extracción de RNA y cDNA.
A 6 ml de muestra de sangre venosa se obtuvo de cada paciente en el momento de la cirugía. Procesamiento de las muestras se llevó a cabo dentro de las dos horas después de la retirada de la sangre. La muestra se centrifugó a 2000 xg durante 10 minutos, y se recogió la fracción de PBMC y se almacena en nitrógeno líquido. Se descongelaron muestras congeladas
y el ARN total se extrajo mediante el método de tiocianato de guanidinio-fenol-cloroformo (reactivo Trizol, Invitrogen, Carlsbad, CA, EE.UU.). La integridad del ARN aislado fue establecido por análisis QRTPCR de la actina beta gen endógeno de referencia (b-actina) como se describe a continuación [9].
ARN total (7 g por 100 l de volumen de reacción final) fue transcrito de forma inversa usando cebadores aleatorios y la transcriptasa inversa MultiScribe (ADNc de alta capacidad para adaptadores de transcripción, Applied Biosystems, Foster City, CA, EE.UU.). La mezcla de reacción se incubó durante 10 minutos a 25 ° C, y luego a 37 ° C durante 120 minutos. cDNA se almacenó a -80 ° C hasta su uso.
reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa en tiempo real
Los niveles de transcripción de cuatro genes (es decir, el antígeno carcinoembrionario [CEA],, survivina y endotelial vascular citoqueratina-19 [CK19] factor de crecimiento [VEGF]) se midieron en la sangre periférica de los pacientes por medio de PCR cuantitativa en tiempo real (QRTPCR) utilizando el método de cuantificación relativa (2 -ΔΔCt método) [10, 11]. Uso de la 2 -ΔΔCt método los datos se presentan como el factor de cambio en la expresión génica normalizada por un gen de referencia y con respecto a una muestra de calibrador. El propósito del proceso de normalización es ajustar el valor que representa los niveles de transcripción de cada gen por la cantidad de ARNm presente en cada muestra: esto por lo general se obtiene dividiendo los niveles de expresión de cada gen de interés por las de un gen de referencia (también llamada "limpieza" de genes). Housekeeping genes se expresan de forma constitutiva y - idealmente - no se ven afectados por las manipulaciones experimentales: por lo tanto, deben reflejar aproximadamente la cantidad total de ARNm a prueba en cada muestra [12]. A medida que el gen de referencia en este estudio se utilizó beta-actina, uno de los genes de limpieza más comúnmente utilizados.
En un estudio PCR cuantificación relativa, el llamado "calibrador" se representa por la expresión génica de una muestra elegida por el cual el perfil de expresión de cada muestra de interés se ajusta: este enfoque permite al investigador para comparar el perfil de expresión de las muestras de interés entre sí en términos de su factor de cambio con respecto a una sola muestra (calibrador)
. por lo general, el calibrador es una muestra no tratada (por ejemplo, en un estudio funcional), una muestra a tiempo cero (por ejemplo, en un estudio de evolución en el tiempo) o cualquier muestra no relacionada (por ejemplo, controles sanos en un estudio de pacientes, o los fibroblastos normales en una célula de cáncer estudio de línea) [10]. Una piscina de ADNc derivada de PBMC de 20 donantes sanos se utilizó como la fuente de calibrador en nuestro estudio. Evaluación de la 2 -ΔΔCt indica el cambio veces en la expresión de genes en relación al calibrador. Para el calibrador la ΔΔCt es igual a cero, y 2 0 es igual a uno, de manera que el factor de cambio en la expresión génica en relación con el calibrador es igual a uno, por definición.
El método fue validado para nuestro sistema experimental mediante la verificación de que la eficiencias de amplificación de los objetivos y los genes B-actina fueron similares. Ensayos de expresión TaqMan Gene específicas para CEA, CK19, survivina y VEGF se compraron de Applied Biosystems. Para evitar la amplificación de ADN genómico contaminado, el par de cebadores se colocó en la unión entre dos exones. El ensayo QRTPCR se realizó utilizando el sistema de detección de secuencias ABI PRISM 7300. La reacción de PCR proceder en una mezcla (30 l) que contiene 15 l de 2 × TaqMan PCR Universal Master Mix, 1,5 l de 20 ensayo de la expresión génica × TaqMan (todos los reactivos de Applied Biosystems), 12,5 l de agua y 1 l de molde de ADNc . Cincuenta ciclos de amplificación se realizaron a 95 ° C (15 segundos) y 60 ° C (1 minuto) y los niveles de expresión de ARNm se normalizaron contra la expresión de ARNm b-actina cuantificada para cada muestra.
Análisis estadísticos Los análisis estadísticos se
realizada mediante el software Stat View V. 4.57 (Abacus Concepts, Londres, Reino Unido) y el software V7.0.0 StatXact (Cytel software Corporation, EE.UU.). La correlación entre los niveles de genes (altos en comparación con la expresión de genes de baja, tal como se define por el valor de la mediana) y la enfermedad TNM categorías de desgravación se evaluó mediante la prueba de tendencia de Cochrane-Armitage. Las curvas de supervivencia se estimaron utilizando el método de Kaplan-Meyer, y las comparaciones de supervivencia univariante se calcularon de acuerdo con la prueba de log-rank. Los niveles de transcripción de los cuatro genes, junto con factores antropométricos y estadios TNM (de acuerdo con la quinta edición del sistema de estadificación AJCC TNM publicado en 1997), se utilizaron como variables independientes en el análisis multivariante de supervivencia, que se llevó a cabo utilizando el proporcional de Cox peligros modelo de regresión [13]. La selección de las variables que contribuyen a significativa el modelo predictivo se realizó por el método de paso a paso. . Los valores de probabilidad < 5% se consideraron estadísticamente significativa
Resultados
un rápido aumento de la célula: la sensibilidad de la técnica QRTPCR
En la línea celular N87, los niveles de mRNA de la CEA, CK19, survivina, y los genes de VEGF fueron altamente expresado (Figura 1): por lo tanto, esta línea celular de carcinoma gástrico representado un control positivo válido para nuestros experimentos. Figura niveles de expresión génica 1 de los cuatro genes de interés en las células de cáncer gástrico humano N87 (medidos por PCR cuantitativa en tiempo real: véase el texto para más detalles). El logaritmo natural de los niveles de expresión se informa en el eje y: al origen de coordenadas (0) representa la muestra de referencia (llamado calibrador) con la que todas las muestras experimentales se comparan en el método de cuantificación relativa (véase el texto para más detalles)
. para establecer el límite de detección (sensibilidad) de la técnica QRTPCR, diluciones en serie de 10 veces (en PBMC) de células de carcinoma gástrico N87 se ensayaron por triplicado por QRTPCR usando CEA y survivina como marcadores de genes. CEA y el ARNm de survivina se detectaron hasta 1 célula /10 8 dilución PBMC:. Esto corresponde a la búsqueda de 1 a 10 células malignas por cada 10 ml de sangre periférica (datos no mostrados)
marcadores de expresión en muestras de sangre
se evaluaron muestras de sangre periférica de todos los 70 pacientes para los cuatro marcadores de genes. La expresión fue positiva (más alta que calibrador) en 98,6%, 97,1%, 42,9%, 38,6% de las muestras de survivina, CK19, CEA, VEGF, respectivamente (Tabla 2). Desde Survivin y CK19 niveles gen encontrado en casi todos los pacientes son mayores que los de los controles sanos, estos resultados apuntan a un potencial de diagnóstico de ambos niveles genes.Table 2 transcripcional de cuatro marcadores de pronóstico en la sangre periférica de pacientes con cáncer gástrico.
marcador
Por encima de calibrador (%) *
A continuación calibrador (%) *
indetectable (%)

survivina
69 (98,6)
1 (1.4)
0 (0.0)
CK19
68 (97,1) página 2 (2.9)
0 (0.0 ): perfil del CEA
30 (42,9)
21 (30,0) página 19 (27,1)
VEGF
27 (38,6)
43 (61,4)
0 (0.0 ) *
niveles de expresión génica se midieron mediante PCR cuantitativa en tiempo real: utilizando el método de cuantificación relativa, las muestras se clasificaron como encima o por debajo de los niveles encontrados en el calibrador (muestras de sangre periférica de donantes sanos agrupados): perfil por otra parte,. si consideramos el 75 por ciento de los niveles de expresión de survivina por etapa, tuvimos una creciente tendencia significativa (p = 0,04) para los estadios del I al III, pero no para la etapa IV (Figura 2). Figura 2 niveles de genes Survivin medidos en la sangre periférica de 70 pacientes con estadio TNM I a IV cáncer gástrico. El análisis de la prueba de tendencia muestra un aumento significativo en los niveles de transcripción Survivin través de pacientes con estadio I de cáncer gástrico III (tendencia de la prueba de valor P = 0,04). Para cada columna se reporta la media ± SD
El análisis de supervivencia
Después de un seguimiento medio de 26 meses, la mediana de supervivencia global (OS) para el estadio TNM-I II no fue alcanzado.; la mediana de SG en estadio III y IV fue de 25 y 13 meses, respectivamente (log-rank test valor P < 0,0001, Figura 3). Figura 3 La supervivencia global para el estadio TNM I-II, III y IV para todos los pacientes (log-rank test del valor P < 0,0001).
En el análisis univariante de supervivencia, entre los cuatro genes que hemos probado, sólo se podía survivina expresión identificar dos grupos de pacientes con diferente pronóstico significativamente. De hecho, teniendo en cuenta el 75 por ciento de los niveles de transcripción de genes transformados logarítmicamente (1.508) como el punto de corte, la mediana de SG para alta (> 1.508) y baja (≤1.508) la abundancia de ARNm de survivina fueron de 14 y 41 meses, respectivamente (log rank p-valor = 0,036, Figura 4). Figura 4 de Kaplan-Meier curvas de supervivencia de los pacientes con elevada (> 75 por ciento) o baja (< 75 por ciento) los niveles de transcripción de survivina medidos en la sangre periférica. Log-rank test p-valor = 0,036. Francia El análisis de supervivencia multivariante incluyendo el estadio TNM, la edad, el género y los niveles de mRNA de los cuatro marcadores mostró que sólo por etapas TNM y los niveles de ARNm de survivina medidos en la sangre periférica predicen de forma independiente del sistema operativo de los pacientes . La razón de riesgo (HR) asociada con niveles Survivin indica el aumento en el riesgo de muerte por aumento de 100 veces en la expresión de survivina (Tabla 3) .Tabla 3 multivariado análisis de supervivencia de 70 pacientes con cáncer gástrico.
covariables
HR
95% IC
valor P


límite inferior
límite superior

estadio TNM I
1 (referencia) -
-
-
fase II
1.20 1.01

1,45
0,048
estadio III
1,34
1.05 1.70

0,017
estadio IV
3.17
1,38 6,77

0,004
survivina *
1,34
1,14 1,53
Hotel < razón de riesgo;: HR 0,001
IC: intervalo de confianza; * La HR asociada con niveles Survivin indica el aumento del riesgo de muerte por aumento de 100 veces en la expresión de survivina.
Dado que sólo estas cuatro variables independientes fueron retenidos por el modelo de Cox, este análisis sugiere que la expresión génica de survivina puede agregar información pronóstica útil a factores bien establecidos, tales como el sistema de estadificación TNM.
Discusión
en este estudio, se encontró que los niveles de transcripción de survivina medidos en la sangre periférica de pacientes con carcinoma gástrico se correlacionan de forma independiente con la supervivencia global.
Si validado en estudios prospectivos más grandes, estos resultados permitirían aumentar el poder pronóstico de los factores pronósticos convencionales, que actualmente están incorporados por los parámetros de estadificación TNM. Esto es de especial relevancia para los pacientes con estadio TNM I a III de la enfermedad, para quien la estratificación del riesgo óptima es esencial para identificar a los sujetos con la mayor probabilidad de beneficiarse de los tratamientos adyuvantes.
Nuestros hallazgos son de particular relevancia también desde el punto de vista biología del tumor porque el gen survivina codifica una proteína anti-apoptótica clave perteneciente al inhibidor de la proteína de apoptosis familia (IAP). Además de ser uno de los factores anti-apoptóticos mejor caracterizados [14], la survivina es el objeto de investigación intensa debido al hecho de que en los adultos se expresa selectivamente prácticamente solamente por los cánceres de origen diferente; Además, su expresión en el tumor primario se ha asociado con un peor pronóstico y la resistencia a agentes quimioterapéuticos convencionales [15]. Estas observaciones hacen survivina un objetivo ideal para terapias específicas de tumores, como los inhibidores de moléculas pequeñas y la inmunoterapia antígeno específico [16].
Expresión de la proteína survivina en tumores primarios, incluyendo el cáncer gástrico, ha sido investigado como un factor pronóstico, mayor niveles que se asocian a una peor evolución del cáncer [17]. Acerca de la expresión del ARN, los niveles de ARNm de survivina se han investigado como un marcador de células tumorales circulantes (CTC) en diferentes tipos de cáncer, pero los datos disponibles son escasos [18, 19]. En una serie de 26 pacientes con cáncer gástrico, la survivina ARNm (tal como se mide por medio de QRTPCR basado en ELISA) en la sangre periférica se ha informado que se correlaciona con el pronóstico de los pacientes, la estadificación TNM ser excluido de la modelo mutivariable final (forzando todas las variables en el modelo de Cox) [20]. En nuestra serie más grande (n = 70), el papel pronóstico de los niveles sanguíneos Survivin se confirma, aunque la estadificación TNM sigue siendo un factor pronóstico significativo en el modelo multivariable final (usando el modo de paso a paso para la selección de variables). A pesar de la asociación significativa con el pronóstico de los pacientes, los niveles de ARNm de survivina no aumentaron en los cuatro estadios TNM: la tendencia de una mayor abundancia de transcripción se demostró, de hecho, sólo en los pacientes con estadio I a III de la enfermedad (Figura 2). Esto podría hallazgo depende de los tamaños de muestra bajos de las etapas individuales TNM (y el consiguiente bajo poder estadístico) pero también podría indica que la survivina desempeña un papel en locorregional y no en la enfermedad metastásica distante (donde otros genes podrían ser más relevantes, como recientemente informado [21])
a diferencia de otros estudios [9, 22-26], los niveles de CK19 y CEA no se correlacionaron con la supervivencia de los pacientes de nuestra serie, ya sea en univariable (datos no mostrados) o el análisis de supervivencia multivariante:. este podría depender de varios factores. En primer lugar, la inclusión en nuestro análisis multivariable (con un modo por etapas de selección variable) de un marcador no se considera por otros autores hace que cualquier comparación inviable.
Es de destacar que algunos informes positivos sólo utilizan el análisis de supervivencia univariable, que pone en peligro la , una vez que el ajuste de los factores pronósticos bien establecidos (es decir, estadios TNM) fiabilidad y reproducibilidad de sus resultados, se aplicaron [9, 25, 27, 28]. Por otra parte, de acuerdo con nuestros resultados hacen otros investigadores informe de la falta de asociación entre la presencia de células positivas citoqueratinas y el pronóstico [29] (Tabla 4) .Tabla 4 series seleccionadas analizar el papel pronóstico de las células tumorales circulantes (CTC) en pacientes con cáncer gástrico.
Author

Year

Ref.

Patients

Method

Survival El análisis
marcadores
Hallazgos
Koga T et. al. 2008

[9]
101
RT-PCR cuantitativa
univariante
CK18, CK19, CK20, CK19
CEA es el mejor marcador, y se puede utilizar para estimar el pronóstico o para el tratamiento adyuvante
Yie SM et. al. 2008

[20]
26 (cáncer gástrico)
RT-PCR ELISA
multivariado
survivina
Estado de survivina que expresan CTC es un predictor fuerte e independiente para la recurrencia
Hiraiwa K et. Al., 2008

[22]
44 (cáncer gástrico)
sistema CellSearch
multivariado
CD45 (-) células frente a las células CK (+) guía CTSs correlacionó significativamente con estadio tumoral avanzado
Illert B et. al. 2005

[23]
70
RT-PCR cuantitativa
multivariado
CK20
CK20 es un marcador pronóstico independiente
Yeh et KH. al. 1998

[24]
34
anidados RT-PCR cuantitativa
univariante
CK19 CK19
expresar CTC están asociados con un mal pronóstico
Seo JH et. al. 2005

[25]
46
RT-PCR cuantitativa
No se realizó
CEA
ARNm de CEA se correlaciona significativamente con la recidiva clínica
Wu et CH. al. 2006

[26]
42
RT-PCR cuantitativa
No se realizó
hTERT, CK19, CK20, CEA
ARNm de CEA se correlaciona con un mayor riesgo de postoperatorio recurrencia /metástasis
Ues YH et. al. 2006

[27]
52
RT-PCR cuantitativa
univariante
c-MET, MUC1
c-Met y MUC1mRNA correlación significativa con el pronóstico
Mimori K et. al. 2008

[28]
810
RT-PCR cuantitativa
univariante
MT1-MMP
MT1-MMP es un factor independiente para determinar la recurrencia y metástasis a distancia
Pituch-Noworolska A et. Al., 2007

[29]
57
Citometría de flujo
univariante
CD45 (-) las células frente a las células CK (+): perfil La presencia de células CK (+) es de ningún valor pronóstico
Estos datos contradictorios podría depender del hecho de que CK19 y CEA son marcadores de la presencia de CTC, pero no necesariamente de la capacidad de hacer metástasis CTC: de hecho, es bien aceptado que sólo un subconjunto de CTC tiene la biológica potencial de dar lugar a depósitos metastásicos, mientras que la mayoría CTC finalmente mueren sin ser perjudicial para la acogida [7]. En consecuencia, los marcadores de la "agresividad" de CTC como survivina podrían revelan ser más informativo en cuanto a la correlación con el pronóstico de los pacientes.
Es de destacar que, en el presente estudio la abundancia de ARNm de survivina y CK19 fue siempre mayor que la encontrada en controles sanos, excepto para uno y dos casos, respectivamente. Esto pone de relieve la importancia de utilizar un método cuantitativo (QRTPCR) que nos permitió estratificar el riesgo de los pacientes en una escala continua, mientras que la PCR estándar habría clasificado como prácticamente todos los pacientes positivos. Por otro lado, este hallazgo - que a lo mejor de nuestro conocimiento nunca se ha informado antes - sugiere que estos genes podrían ser explotados también para fines de diagnóstico, aunque un estudio dedicado específicamente diseñado para se justifica este objetivo
Como. consideración final, nos gustaría observar que los métodos basados ​​en la PCR no permiten identificar la fuente de células de los marcadores medidos: de hecho, todos estos métodos requieren la lisis de las células cosechadas a partir de la sangre periférica de pacientes con el fin de extraer el mRNA utiliza para evaluar la expresión de genes diana. Además de CTC, otras fuentes potenciales de genes detectados-PCR son PBMC, las células endoteliales (CEC), la médula ósea derivada de células madre, así como células de la piel de circulación (por ejemplo, queratinocitos, fibroblastos, melanocitos) contaminación de la muestra durante la extracción de sangre circulante. Sin embargo, CTC es probable que sean la fuente de células principal de survivina como su expresión es muy limitada en tejidos adultos normales y en su lugar se limita principalmente a las células malignas [30]. En este sentido, los métodos de citometría son menos propensos a resultados falsos positivos, ya que implican celular basada en anticuerpos sorting seguido por la identificación citológica de las células tumorales que precede a su caracterización fenotípica [31].
Conclusiones
niveles de expresión génica de survivina agregar valor pronóstico significativo para el sistema de estadificación TNM actual de los pacientes con carcinoma gástrico. La validación de estos resultados en las series con mayor potencial podría conducir a optimizar la estratificación del riesgo y en última instancia, para personalizar el manejo terapéutico de estos pacientes.
Archivos originales presentados Declaraciones
de los autores de las imágenes
A continuación se presentan los vínculos con la original de los autores presentó archivos de imágenes. 'archivo original para la figura 1 12967_2009_422_MOESM2_ESM.eps autores 12967_2009_422_MOESM1_ESM.eps Autores archivo original para la figura 2 12967_2009_422_MOESM3_ESM.eps autores archivo original para la figura 3 12967_2009_422_MOESM4_ESM.eps autores archivo original de la figura 4 Conflicto de intereses
Los autores declaran que tienen intereses en competencia.

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• Stent en comparación con gastroyeyunostomía para la paliación de la obstrucción de la salida gástrica: un review