Survivin gen niveauer i det perifere blod af patienter med gastrisk cancer uafhængigt forudsige survival

survivin gen niveauer i det perifere blod af patienter med gastrisk cancer uafhængigt forudsige overlevelse
Abstract
Baggrund
påvisning af cirkulerende tumorceller (CTC) betragtes som en lovende redskab til at forbedre risiko lagdeling i patienter med solide tumorer. Vi undersøgte, om ekspressionen af ​​CTC relaterede gener tilføjer nogen prognostisk effekt til TNM hos patienter med gastrisk karcinom.
Metoder
Halvfjerds patienter med TNM stadie I-IV gastrisk karcinom blev retrospektivt indskrevet. Perifere blodprøver blev testet ved hjælp af kvantitativ realtids-PCR (qrtPCR) til ekspression af fire CTC beslægtede gener: carcinoembryonisk antigen (CEA), cytokeratin-19 (CK19), vaskulær endothelial vækstfaktor (VEGF) og Survivin (BIRC5).
Resultater
genekspression af Survivin, CK19, CEA og VEGF var højere end i normale kontroller i 98,6%, 97,1%, 42,9% og 38,6% af tilfældene, henholdsvis, hvilket tyder på en potentiel diagnostiske værdi af både Survivin og CK19 . Ved multivariabel overlevelse analyse blev TNM staging og Survivin mRNA niveauer bibeholdes som selvstændige prognostiske faktorer, som viser, at Survivin ekspression i det perifere blod tilføjer prognostisk information til TNM system. I modsætning til tidligere offentliggjorte data blev afskrift overflod af CEA, CK19 og VEGF ikke forbundet med patienternes kliniske resultat.
Konklusioner
Gene ekspressionsniveauer af Survivin tilføjer betydelig prognostisk værdi til den nuværende TNM. Valideringen af ​​disse resultater i større prospektive og multicentrisk serie kan føre til gennemførelse af denne biomarkør i rutinemæssig klinisk indstilling for at optimere risikoen lagdeling og i sidste ende personliggøre den terapeutiske styring af disse patienter.
Baggrund
mavekræft repræsenterer den fjerde mest almindelige cancer og næststørste årsag til kræft-relaterede dødsfald på verdensplan. Den anslåede nuværende forekomst af mavekræft er ca. 16,2 /100 000 personer /år (verden standardiseret sats, WSR), med højeste forekomster i det østlige Asien, Østeuropa og Sydamerika [1]. På nuværende tidspunkt kun prognostiske systemet rutinemæssigt til forvaltning af mavecancerpatienter er baseret på Den Internationale Union Against Cancer Tumor-Node-Metastase (TNM) iscenesættelse [2], hvor graden af ​​tumor penetration (PT) og nodal status (pN) [3] er de to vigtigste prognostiske indikatorer i patienter uden fjernt metastatisk sygdom. Patienter i tidlige stadier betragtes kandidater til helbredelse ved operation. Dog lider 50% af mavecancerpatienter fra tumor tilbagefald, selv efter radikal kirurgi [4, 5]. Således giver den nuværende iscenesættelse systemet ikke ud til præcist at forudsige enkelte patients risiko for kræft tilbagefald. Faktisk denne klassificering identificerer brede kategorier med væsentligt anderledes prognostisk undergruppe inden for hver fase, som gør dette system suboptimal for en personlig terapeutisk tilgang. Dette er eksemplificeret ved det faktum, at nogle patienter i øjeblikket er klassificeret som "lav-risiko" er ikke forelægges adjuverende behandling, selv om de gør erfaring sygdomstilbagefald. Vice versa, nogle patienter i øjeblikket undergår adjuverende behandling på grund af TNM klassifikationen "høj risiko", ville ikke brug for denne behandling [6]. For at løse dette problem og forbedre prognosen for patienter, der er et presserende behov for nye parametre pålideligt forudsige patienternes resultat. Patienter, som havde gennemgået potentielt helbredende indgreb bevarer risikoen for recidiv, der stammer fra mikroskopiske tumor rester kendt som minimal residual sygdom (MRD). MRD kan påvirke forskellige organ rum, herunder knoglemarv, lymfeknuder og perifert blod [7]. I de senere år har flere undersøgelser fokuseret på påvisning af cirkulerende tumorceller (CTC) med hensyn til deres kliniske implikationer for patienter med gastrisk cancer. Som følge heraf har kvantitativ realtids polymerasekædereaktion (qrtPCR) og variationer af denne teknik, som anses for at være den mest følsomme metode til evaluering af genekspression, er blevet anvendt til detektion af tumormarkører, der indikerer tilstedeværelsen af ​​CTC i blod [8].
i den aktuelle analyse, vi havde til formål at profilere det perifere blod fra 70 patenter ramt med gastrisk adenocarcinom ved hjælp qrtPCR. Vi testede fire biomarkører, to af tilstedeværelsen, ad to af aggressivitet af tumoren, og en af ​​disse, Survivin, tilføje uafhængig prognostisk strøm til TMN staging system. Dette kan give mulighed for en bedre lagdeling af patientens risiko og dermed en bedre terapeutisk behandling, især i adjuverende
Metoder
Patienter
I denne undersøgelse vi indskrevet 70 patienter (39 mænd, 31 kvinder. Aldersgruppe 28 - 90 år, medianalder 68 år), som gennemgik kirurgi (hel eller delvis gastrektomi) til histologisk påvist gastrisk karcinom mellem oktober 1998 og november 2007, og for hvem var til rådighed en blodprøve perifer. Undersøgelsen, som er i overensstemmelse med Helsinki-erklæringen, blev godkendt af den lokale etiske komité ved universitetet i Padova (autorisationsnummer: 70/2006). Skriftligt informeret samtykke om brugen af ​​biologiske prøver til undersøgelsesformål blev opnået fra alle patienter. På tidspunktet for analysen, 33 (47,1%) var i live mens 37 (52,9%) var død. Median opfølgning var 15 måneder (interval: 6-119 måneder). Median overlevelse var 25 måneder. Tumor egenskaber er opsummeret i tabel 1. Dybden af ​​tumorinvasion (T kategori), blev omfanget af lymfeknudemetastase (N kategori) og makroskopisk metastase (M kategori) kategoriseret efter UICC TNM staging system.Table 1 Patienter og tumorkarakteristik .
Parametre
N
(%)
Patienter
alle 70
(100,0)
male
39
(55,7)
kvindelige
31
(44,3)
Alder (år)
≤ 65
21
(30,0)
> 65
49
(70,0)
Beliggenhed
multicentrisk
5 fotos (7.1)
øverste tredjedel
11
(15,7)
midterste tredjedel
19 Hotel (27.1)
nederste tredjedel
35 Hotel (50,0)
TNM stadie
I (IA + IB)
10 Hotel (14.3)
II
14
(20,0)
III (IIIA + IIIB)
19 Hotel (27.1)
IV
27 Hotel (38,6)
Cellelinjer
den humane gastriske carcinoma-cellelinie NCI-N87, opnået fra American Type Culture Collection (Manassas, USA), blev inkuberet i RPMI-1640-medium (Invitrogen - Gibco, Carlsbad, CA, USA) indeholdende 10% føtalt kalveserum . (Euroclone - Celbio, Pero, MI), 10 mM Hepes, 1 mM natriumpyruvat (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO), ved 37 ° C i 5% CO 2
NCI-N87 er en gastrisk carcinom cellelinie afledt fra en levermetastase af en brønd differentieret carcinom i maven er taget før cytotoksisk behandling. Ifølge producentens datablad, celler udtrykker overfladeglycoproteiner carcinoembryonisk antigen (CEA). Salg Cell standardtilsætningsforsøg
En celle spiking studie blev udført for at bestemme følsomheden af ​​denne qrtPCR teknik til påvisning af cancerceller i perifere mononukleære celler (PBMC). PBMC blev opnået fra raske frivillige, og blev talt og fortyndet 1: 1 i RPMI-medium. Gastriske cancerceller N87 blev talt og serielt fortyndet fra 1 × 10 6 celler /ml til 1 celle /ml i PBMC. Totalt RNA blev ekstraheret og reverse transkriberet fra 2 ml af hver fraktion. qrtPCR for to gener af interesse blev derefter udført som beskrevet nedenfor.
Prøveindsamling, RNA-ekstraktion og cDNA syntese
A 6 ml prøve af venøst ​​blod blev opnået fra hver patient på tidspunktet for kirurgi. Prøve behandling blev udført inden for to timer efter blod tilbagetrækning. Prøven blev centrifugeret ved 2000 x g i 10 minutter, og PBMC-fraktionen blev opsamlet og opbevaret i flydende nitrogen. Salg Frosne prøver blev optøet og totalt RNA blev ekstraheret under anvendelse af guanidiniumthiocyanat-phenol-chloroform fremgangsmåden (Trizol Reagent, Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Integriteten af ​​det isolerede RNA blev oprettet ved qrtPCR analyse af det endogene henvisning genet beta actin (b-actin), som beskrevet nedenfor [9].
Totalt RNA (7 ug pr 100 pi endeligt reaktionsvolumen) blev revers-transkriberet under anvendelse af tilfældige primere og MultiScribe revers transkriptase (High-Capacity cDNA revers transkription kit, Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Reaktionsblandingen blev inkuberet i 10 minutter ved 25 ° C, derefter ved 37 ° C i 120 minutter. cDNA blev lagret ved -80 ° C indtil anvendelse.
Real-time kvantitativ polymerasekædereaktion Salg The transkriptionelle niveauer af fire gener (dvs. carcinoembryonisk antigen [CEA], cytokeratin-19 [CK19], Survivin og vaskulær endotel vækstfaktor [VEGF]) blev målt i perifert blod fra patienter ved hjælp af kvantitativ realtids-PCR (qrtPCR) under anvendelse af den relative kvantificering metode (2 -ΔΔCt metode) [10, 11]. Brug af 2 -ΔΔCt metode dataene præsenteres som fold-ændring i genekspression normaliseret ved en reference-gen og i forhold til en kalibrator prøve. Formålet med normalisering processen er at justere værdien repræsenterer de transkriptionelle niveauer af hvert gen af ​​mængden af ​​mRNA til stede i hver prøve: Det opnås normalt ved at dividere ekspressionsniveauerne af hvert gen af ​​interesse af dem med en reference-genet (også kaldet "housekeeping" gen). Housekeeping generne udtrykkes konstitutivt og - ideelt - berøres ikke af eksperimentelle manipulationer: derfor bør de tilnærmelsesvis afspejler den totale mængde mRNA testet i hver prøve [12]. Som reference-genet i denne undersøgelse anvendte vi beta-actin, en af ​​de mest almindeligt anvendte husholdningsgener.
I en relativ kvantificering PCR undersøgelse, er den såkaldte "kalibrator", repræsenteret ved genekspressionen af ​​en udvalgt prøve ved hvilken udtrykket profil af hver prøve af interesse justeres: denne tilgang gør det muligt for investigator at sammenligne udtrykket profil af de prøver af interesse med hinanden i form af deres fold-ændring i forhold til en enkelt prøve (kalibratoren)
. Normalt kalibratoren er en ubehandlet prøve (fx i en funktionel undersøgelse), en prøve på tidspunkt nul (f.eks i en tid-retters studie) eller enhver relateret prøve (f.eks raske kontrolpersoner i en patienter studie, eller normale fibroblaster i en kræftcelle line undersøgelse) [10]. En pulje af cDNA afledt fra PBMC fra 20 raske donorer blev anvendt som kalibrator kilde i vores undersøgelse. Evaluering af 2 -ΔΔCt angiver gange ændring i genekspression i forhold til kalibratoren. For kalibratoren den ΔΔCt lig med nul, og 2 0 er lig med én, så folden ændring i genekspression i forhold til kalibratoren er lig med en, per definition.
Metoden blev valideret for vores eksperimentelle system ved at kontrollere, at effektiviteten af ​​amplifikation af målene og b-actin gener var ens. TaqMan Gene Expression Assays specifikke for CEA, CK19, Survivin og VEGF blev købt fra Applied Biosystems. At undgå amplifikation forurenet genomisk DNA, blev primerparret placeret ved forbindelsen mellem to exoner. Den qrtPCR assay blev udført under anvendelse af ABI PRISM 7300 Sequence Detection system. PCR-reaktionen forløbe i en blanding (30 ul) indeholdende 15 pi 2 x TaqMan Universal PCR Master Mix, 1,5 pi 20 x TaqMan Gene Expression assay (alle reagenser fra Applied Biosystems), 12,5 pi vand og 1 pi cDNA template . Halvtreds amplifikationscykler blev udført ved 95 ° C (15 sekunder) og 60 ° C (1 minut) og mRNA ekspressionsniveauer blev normaliseret mod kvantificerede b-actin mRNA-ekspression for hver prøve.
Statistisk analyse
Statistiske analyser blev udføres ved hjælp af Stat View V. 4,57 software (Abacus Concepts, London, UK) og StatXact V7.0.0 software (Cytel software Corporation, USA). Sammenhængen mellem gen niveauer (høj versus lav genekspression, som defineret af median værdi) og sygdomme TNM mellemstationer kategorier blev vurderet ved hjælp af Cochrane-Armitage trend test. Overlevelse kurver blev estimeret ved hjælp af Kaplan-Meyer-metoden, og univariate overlevelse sammenligninger blev beregnet efter log-rank test. De transkriptionelle niveauer af de fire gener, sammen med antropometriske faktorer og TNM trin (ifølge den 5. udgave af AJCC TNM udgivet i 1997), blev anvendt som uafhængige variable i den multivariate overlevelsesanalyse, som blev udført ved anvendelse af Cox proportional farer regressionsmodel [13]. Udvælgelsen af ​​variabler, som signifikant bidrager til den prædiktive model blev udført ved trinvis fremgangsmåde. . Sandsynlighedsværdier < 5% blev betragtet som statistisk signifikant
Resultater
Cell spiking: følsomhed qrtPCR teknik
I N87 cellelinie, mRNA niveauer af CEA, CK19, Survivin, og VEGF gener blev stærkt udtrykt (figur 1): derfor er denne gastrisk carcinom cellelinie repræsenterede en gyldig positiv kontrol for vores eksperimenter. Figur 1 Gene ekspressionsniveauer for de fire gener af interesse i N87 humane gastriske kræftceller (målt ved kvantitativ real time PCR: se tekst for detaljer). Den naturlige logaritme til de ekspressionsniveauerne er rapporteret på y-aksen: aksen oprindelse (0) repræsenterer referenceprøven (kaldet kalibrator), som alle eksperimentelle prøver sammenlignes i den relative kvantificering metode (se tekst for detaljer)
. at etablere detektionsgrænsen (følsomhed) i qrtPCR teknik blev serielle 10 gange fortyndinger (i PBMC) af N87 gastrisk carcinomceller analyseret tre gange ved qrtPCR hjælp CEA og Survivin som genmarkører. CEA og Survivin mRNA blev detekteret op til 1 celle /10 8 PBMC fortynding:. Dette svarer til at finde 1 til 10 maligne celler pr 10 ml perifert blod (data ikke vist)
Expression markører i blodprøver
Perifer blodprøver fra alle 70 patienter blev vurderet for de fire genmarkører. Ekspressionen var positiv (højere end kalibrator) i 98,6%, 97,1%, 42,9%, 38,6% af prøver til Survivin, CK19, CEA, VEGF (tabel 2). Da survivin og CK19 gen niveauer findes i næsten alle patienter er større end dem i raske kontrolpersoner, disse resultater peger på en diagnostisk potentiale både genes.Table 2 Transkriptionelle niveauer af fire prognostiske markører i det perifere blod af patienter med mavekræft.
Marker
Over kalibrator (%) *
Nedenfor kalibrator (%) *
målbart (%)

Survivin
69 (98,6)
1 (1.4)
0 (0,0)
CK19
68 (97,1)
2 (2.9)
0 (0,0 )
CEA
30 (42,9)
21 (30,0)
19 (27,1)
VEGF
27 (38,6)
43 (61,4)
0 (0,0 )
* Gene ekspressionsniveauer blev målt ved kvantitativ realtids-PCR: ved hjælp af den relative kvantificering metode blev prøver klassificeret som over eller under de niveauer, der findes i kalibratoren (poolede perifere blodprøver fra raske donorer)
Endvidere. hvis vi betragtede den 75. percentil af Survivin ekspressionsniveauerne pr scenen, havde vi en signifikant øget tendens (p = 0,04) for trin fra i-III, men ikke for trin IV (figur 2). Figur 2 survivin gen niveauer målt i perifert blod fra 70 patienter med TNM stadie I-IV gastrisk cancer. Tendensen test analyse viser en signifikant stigning i survivin transkriptionelle niveauer tværs patienter med stadium I-III gastrisk cancer (trend test p-værdi = 0,04). For hver kolonne rapporteres middelværdien ± SD
Survival analyse
Efter en gennemsnitlig opfølgning på 26 måneder, den mediane samlede overlevelse (OS) for TNM stadie I-II blev ikke nået.; medianen OS til fase III og IV var 25 og 13 måneder, henholdsvis (log-rank test P-værdi < 0,0001, figur 3). Figur 3 Samlet overlevelse for TNM stadie I-II, III og IV for alle patienter (log-rank test P-værdi < 0,0001).
Upon univariat overlevelse analyse, blandt de fire gener, vi har testet, kun Survivin udtryk kunne identificere to patientgrupper med signifikant forskellig prognose. Faktisk overvejer den 75. percentil af log-transformerede gen transskription niveauer (1,508) som cutoff point, median OS til høj (> 1,508) og lav (≤1.508) Survivin mRNA overflod var 14 og 41 måneder, henholdsvis (log- rang P-værdi = 0,036, figur 4). Figur 4 Kaplan-Meier-overlevelseskurverne for patienter med høj (> 75. percentil) eller lav (< 75. percentil) transkriptionelle niveauer af Survivin målt i det perifere blod. Log-rank test P-værdi = 0,036.
Multivariat overlevelsesanalyse herunder TNM stadie, alder, køn og mRNA niveauerne af de fire markører viste, at kun TNM stadie og Survivin mRNA-niveauer målt i det perifere blod uafhængigt forudsige patienternes OS . Den hazard ratio (HR) i forbindelse med survivin niveauer indikerer øget risiko for død for 100 fold stigning i Survivin udtryk (tabel 3) .table 3 Multivariat overlevelse analyse af 70 patienter med mavekræft.
Kovariater
HR
95% CI
P-værdi


Nedre grænse
Øvre grænse

TNM stadie I
1 (reference) -
-
-
fase II
1,20
1.01
1.45
0,048
fase III
1,34
1,05
1,70
0,017
stadie IV
3,17
1,38
6,77
0.004
Survivin *
1,34
1,14
1.53
< 0,001
HR: hazard ratio; CI: konfidensinterval; * HR forbundet med survivin niveauer indikerer øget dødsrisiko for 100-dobling i Survivin udtryk.
Siden kun disse fire uafhængige variable blev tilbageholdt af Cox modellen, denne analyse tyder på, at Survivin genekspression kan tilføje nyttige prognostisk information til veletablerede faktorer såsom TNM.
diskussion
i denne undersøgelse fandt vi, at transkriptionelle niveauer af Survivin målt i perifert blod fra patienter med gastrisk karcinom uafhængigt korrelerer med deres samlede overlevelse.
Hvis valideret i større prospektive studier, ville disse resultater muligt at øge den prognostiske magt konventionelle prognostiske faktorer, som i øjeblikket er indeholdt af TNM mellemstationer parametre. Dette er særlig relevant for patienter med TNM stadium I-III sygdom, for hvem optimal risiko lagdeling er afgørende for at identificere personer med den højeste sandsynlighed for at drage fordel af adjuvans behandlinger.
Vores resultater er af særlig relevans også fra tumor biologi synspunkt fordi Survivin genet koder for et nøgle anti-apoptotisk protein, der tilhører inhibitor af apoptose protein (IAP) familie. Udover at være en af ​​de bedst karakteriserede anti-apoptotiske faktorer [14], Survivin er genstand for intens undersøgelse på grund af det faktum, at hos voksne er det udtrykkes selektivt praktisk talt kun af cancere af forskellig oprindelse; desuden har sit udtryk i den primære tumor blevet forbundet med dårligere prognose og modstandsdygtighed over for konventionelle kemoterapeutiske midler [15]. Disse observationer gør survivin et ideelt mål for tumorspecifikke terapier såsom småmolekylære inhibitorer og antigen-specifik immunterapi [16].
Survivin proteinekspression i primære tumorer, herunder mavecancer, er blevet undersøgt som prognostisk faktor, højere niveauer er forbundet med dårligere resultat kræft [17]. Om RNA udtryk, har Survivin mRNA-niveauer blevet undersøgt som en markør af cirkulerende tumorceller (CTC) i forskellige slags kræft, men de tilgængelige data er knappe [18, 19]. I en serie på 26 mavecancerpatienter har Survivin mRNA (som målt ved hjælp af ELISA-baserede qrtPCR) i det perifere blod blevet rapporteret at korrelere med patienternes prognose, idet TNM staging udelukket fra den endelige mutivariable model (tvinge alle variabler i Cox model) [20]. I vores større serier (n = 70), er den prognostiske rolle survivin blodniveauer bekræftet, selv TNM staging fortsat en betydelig prognostisk faktor i den endelige multivariable model (ved hjælp af trinvis mode for variabel selektion). På trods af den signifikant sammenhæng med patienternes prognose, havde Survivin mRNA-niveauer ikke stige på tværs af alle fire TNM faser: tendensen for øget transkriptionel overflod var faktisk demonstreret kun hos patienter med stadium I-III sygdom (figur 2). Dette fund måske afhænger af de lave stikprøvestørrelser af de enkelte TNM stadier (og den deraf følgende lave statistisk styrke), men måske også indikerer, at Survivin spiller en rolle i locoregional og ikke i fjern metastatisk sygdom (hvor andre gener kunne være mere relevant, som for nylig rapporteret [21])
modsætning til andre undersøgelser [9, 22-26], niveauerne af CK19 og CEA ikke korrelerer med patienter overlevelse i vores serie, enten på univariable (data ikke vist) eller multivariable overlevelse analyse:. dette kan afhænge af adskillige faktorer. Først og fremmest, at der i vores multivariabel analyse (med en trinvis form for variabel udvælgelse) af en markør ikke behandlet af andre forfattere gør enhver sammenligning umulig.
Notatet nogle positive rapporter kun bruge univariable overlevelse analyse, der truer pålidelighed og reproducerbarhed af resultaterne heraf, en gang justering for veletablerede prognostiske faktorer (dvs. TNM stadier) blev gennemført [9, 25, 27, 28]. Desuden i overensstemmelse med vores resultater andre efterforskere gøre rapport manglende sammenhæng mellem cytokeratiner positive celler tilstedeværelse og prognose [29] (tabel 4) .table 4 Valgt serie analyserer den prognostiske rolle af cirkulerende tumorceller (CTC) i patienter med mavekræft.
Author

Year

Ref.

Patients

Method

Survival analyse
Markers
Fund
Koga T et. al.
2008
[9]
101
Kvantitativ RT-PCR
univariate
CK18, CK19, CK20, CEA
CK19 er en bedre markør, og er anvendeligt til estimere prognosticering eller til adjuverende behandling
Yie SM et. al.
2008
[20]
26 (mavekræft)
RT-PCR ELISA
Multivariat
Survivin
Status for Survivin-udtrykkende CTC er en stærk og uafhængig prædiktor for tilbagefald
Hiraiwa K et. . Al
2008
[22]
44 (mavekræft)
CellSearch system,
Multivariate
CD45 (-) celler vs CK (+) celler
CTSS signifikant korreleret med avanceret tumor stadie
Illert B et. al.
2005
[23]
70
Kvantitativ RT-PCR
Multivariate
CK20
CK20 er en uafhængig prognostisk markør
Yeh KH et. al.
1998
[24]
34
Indlejrede kvantitativ RT-PCR
univariate
CK19
CK19 udtrykker CTC er forbundet med dårlig prognose
Seo JH et. al.
2005
[25]
46
Kvantitativ RT-PCR
Ikke udført
CEA
CEA mRNA signifikant korreleret med klinisk recidiv
Wu CH et. al.
2006
[26]
42
Kvantitativ RT-PCR
Ikke udført
hTERT, CK19, CK20, CEA
CEA mRNA er korreleret med højere risiko for postoperative gentagelse /metastaser
Uen YH et. al.
2006
[27]
52
Kvantitativ RT-PCR
univariate
c-MET, MUC1
c-Met og MUC1mRNA væsentligt korrelere med prognose
Mimori K et. al.
2008
[28]
810
Kvantitativ RT-PCR
univariate
MT1-MMP
MT1-MMP er en uafhængig faktor til bestemmelse af tilbagefald og fjernmetastaser
Pituch-Noworolska A et. . Al
2007
[29]
57
Flowcytometri
univariate
CD45 (-) celler vs CK (+) celler
Tilstedeværelsen af ​​CK (+) celler er uden prognostisk værdi
Disse modstridende data kan afhænge af det forhold, at CK19 og CEA er markører for CTC tilstedeværelse, men ikke nødvendigvis af CTC evne til at metastasere: i virkeligheden er det vel anerkendt, at kun en delmængde af CTC har den biologiske potentiale for at give anledning til metastatiske aflejringer, mens de fleste CTC i sidste ende dø uden at være skadeligt for værten [7]. Følgelig kan markører for CTC "aggressivitet" såsom Survivin afsløre at være mere informativ med hensyn til korrelation med patienternes prognose.
Af note, i den foreliggende undersøgelse mRNA overflod af Survivin og CK19 var altid større end den, der findes i raske kontrolpersoner med undtagelse af én og to tilfælde henholdsvis. Dette understreger vigtigheden af ​​at anvende en kvantitativ metode (qrtPCR), der gjorde det muligt at stratificere patienterne risiko på en kontinuerlig skala, hvorimod standard PCR ville have klassificeret stort set alle patienter som positiv. På den anden side, dette fund - som til vores bedste overbevisning er aldrig blevet rapporteret før - antyder, at disse gener også kan udnyttes til diagnostiske formål, selv om en dedikeret undersøgelse specielt designet til dette mål er berettiget
Som. sidste overvejelse, vil vi gerne bemærke, at PCR-baserede metoder ikke tillader at identificere cellekilde af de målte markører: i virkeligheden er alle disse metoder kræver lysis af cellerne høstet fra perifert blod fra patienter med henblik på at udtrække mRNA anvendes til at vurdere ekspression af målgener. Udover CTC, andre potentielle kilder til PCR-detekterede gener er PBMC, cirkulerende endotelceller (CEC), knoglemarv afledte cirkulerende stamceller samt hudceller (fx keratinocytter, fibroblaster, melanocytter) kontaminerende prøven under blod tilbagetrækning. Alligevel CTC sandsynligvis vil være den vigtigste celle kilde til Survivin som dens ekspression er meget begrænset i normale voksne væv og er i stedet hovedsageligt begrænset til maligne celler [30]. I denne henseende cytometriske metoder er mindre tilbøjelige til falsk positive resultater, da de indebærer antistof-baserede celle sortering efterfulgt af cytologisk identifikation af tumorceller, der går forud deres fænotypiske karakterisering [31].
Konklusioner Salg Gene ekspressionsniveauer af Survivin tilføje væsentlig prognostisk værdi til den nuværende TNM af patienter med gastrisk karcinom.
validering af disse fund i større prospektive serier kan føre til at optimere risikoen lagdeling og i sidste ende at personliggøre den terapeutiske styring af disse patienter. Erklæringer
Forfattere 'originale indsendte filer til Images of Nedenfor er links til forfatternes oprindelige indsendt filer til billeder. 12967_2009_422_MOESM1_ESM.eps Forfatternes oprindelige fil til figur 1 12967_2009_422_MOESM2_ESM.eps Forfatternes oprindelige fil til figur 2 12967_2009_422_MOESM3_ESM.eps Forfatternes oprindelige fil til figur 3 12967_2009_422_MOESM4_ESM.eps Forfatternes oprindelige fil til figur 4 konkurrerende interesser
Forfatterne erklærer, at de har ingen konkurrerende interesser.

• Klinisk-patologisk funktioner og prognostiske roller KRAS, BRAF, PIK3CA og de nationale tilsynsmyndigheder mutationer i fremskreden ventrikelkræft
• Stent versus gastrojejunostomy til lindring af gastrisk stikkontakt obstruktion: en systematisk gennemgang