Ravni survivin genov v periferni krvi bolnikov z rakom želodca neodvisno napovedujejo survival

ravni survivin genov v periferni krvi bolnikov z rakom želodca neodvisno napovedujejo preživetje
Abstract
Ozadje
odkrivanje obtoku tumorske celice (CTC) se šteje obetavno orodje za izboljšanje razslojevanje tveganja pri bolnikih s čvrstimi tumorji. Ugotavljali smo, ali je izraz, povezanih CTC genov dodaja napovedno moč za sistem odrov TNM pri bolnikih z rakom želodca.
Metode
Sedemdeset bolniki s stopnjo TNM I do IV karcinom želodca so naknadno vpisanih. Periferne krvne vzorce smo testirali s pomočjo kvantitativnega PCR v realnem času (qrtPCR) za izražanje štirih povezanih CTC genov: karcinoembrionski antigen (CEA), citokeratinskim 19 (CK19), vaskularni endotelijski rastni faktor (VEGF) in survivin (BIRC5).
Rezultati
genska ekspresija survivin, CK19, CEA in VEGF je bila višja kot v običajnih kontrol, 98,6%, 97,1%, 42,9% in 38,6% primerov, oziroma, da gre za potencialno diagnostično vrednost obeh survivin in CK19 . Na multivariabilnega analizi preživetja, so TNM uprizoritev in ravni survivin mRNA zadrži kot neodvisnih napovednih dejavnikov, ki dokazuje, da survivin izraz v periferni krvi dodaja napovedni informacije sistemu TNM. V nasprotju z že objavljenimi podatki, prepis obilo CEA, CK19 in VEGF ni bila povezana s kliničnim izidom bolnikov.
Sklepi
ravni genske ekspresije survivin dodati pomembno napovedno vrednost v sedanjem sistemu TNM počivališču. Potrditev teh ugotovitev v večjem prihodnost in Multicentrična serije lahko vodi k izvajanju tega biomarker v rutinski klinični praksi, da bi optimizirali stratifikacijo tveganja in na koncu prilagodite terapevtski upravljanje teh bolnikov.
Ozadje
Rak želodca predstavlja četrti najpogostejši rak in drugi najpogostejši vzrok smrti zaradi raka po vsem svetu. Ocenjena sedanja incidenca raka želodca je približno 16,2 /100 000 oseb /leto (world standardizirana stopnja, WSR), z najvišjih stopenj v vzhodni Aziji, vzhodni Evropi in Južni Ameriki [1]. Trenutno je edini prognostični sistem redno zaposleni za obravnavo bolnikov z rakom želodca, ki temelji na tumor-Node-metastaze (TNM) sistema počivališču Mednarodna zveza proti raku [2], v katerem je stopnja penetracije tumorja (PT) in bezgavk statusa (pN) [3] sta dve glavni napovedni kazalci pri bolnikih brez oddaljenih metastaz. Bolniki v zgodnjih fazah, se štejejo kandidati za zdravljenje z operacijo. Vendar pa 50% bolnikov z rakom želodca trpijo tumorskih recidivov tudi po radikalni operaciji [4, 5]. Tako je sedanji sistem uprizoritev ne zdi, da natančno napovedati posamezno bolnikovo tveganje ponovitve raka. Dejansko ta klasifikacija opredeljuje širše kategorije z zelo različnimi prognostičnega podskupine znotraj vsake faze, ki bi ta sistem optimalno za osebno terapevtskega pristopa. To ponazarja dejstvo, da so nekateri bolniki, trenutno uvrščena kot "nizko tveganje" niso predložene adjuvantno zdravljenje, čeprav ne ponovitve izkušnja bolezni. Obratno, pri nekaterih bolnikih je trenutno v postopku adjuvantno zdravljenje zaradi "visokega tveganja" klasifikaciji TNM, ne bi bilo treba te obravnave [6]. Da bi rešili to vprašanje in izboljšanje ob prognozo bolnikov, so nujno potrebne nove parametre zanesljivo napovedujejo izid bolnikov. Bolniki, ki so bili izpostavljeni potencialno kurativni operacije ohraniti možnost ponovitve, ki izvira iz mikroskopskih ostankov tumorskih znan kot minimalne rezidualne bolezni (MRD). MRD lahko vpliva na različne telesne predele, tudi kostni mozeg, bezgavke in periferne krvi [7]. V zadnjih letih so številne študije osredotočila na odkrivanje obtoku tumorske celice (CTC) v zvezi z njihovimi kliničnih posledic za bolnike z rakom želodca. Kot rezultat, kvantitativno realnem času verižne reakcije s polimerazo (qrtPCR) in različice te tehnike, ki velja za najbolj občutljiva metoda za ocenjevanje genske ekspresije, ki so bili uporabljeni pri odkrivanju tumorskih markerjev, ki kažejo na prisotnost CTC v krvi [8].
v sedanji analizi smo želeli profiliranje periferno kri 70 patentov prizadetih z adenokarcinomom želodca s pomočjo qrtPCR. Testirali smo štiri biomarkerjev, dve prisotnosti, oglas dva od agresivnosti tumorja, in ena od teh je survivin, dodali neodvisno napovedno moč za sistem odrov TMN. To bi omogočilo boljšo stratifikacijo bolnikovega tveganja in s tem boljše terapevtske upravljanja, zlasti v adjuvantnem
Metode
Bolniki
V tej študiji smo vključenih 70 bolnikov (39 moških, 31 žensk,. Starostna skupina 28 - 90 let, mediana starost 68 let), ki so imeli operacijo (popolna ali delna želodca) za histološko dokazano raka želodca med oktobrom 1998 in novembrom 2007, in za katere je bilo na voljo periferne krvi vzorec. Študija, ki je v skladu z Helsinške deklaracije, ki ga je odobrila lokalni etični odbor Univerze v Padovi (številka odobritve: 70/2006). Pisna privolitev glede uporabe bioloških vzorcev za znanstvene namene je bila pridobljena iz vseh bolnikih. V času analize so bili živi 33 (47,1%), medtem ko je 37 (52,9%) umrli. Mediano spremljanje bila 15 mesecev (razpon: 6-119 mesecev). Mediana preživetja je bila 25 mesecev. značilnosti tumorja so povzeti v tabeli 1. globine tumorske invazije (T) kategorijo, obseg bezgavkah metastaz (N) kategorijo in makroskopski metastaz (M kategorija) so razvrščeni po UICC TNM uprizoritev system.Table 1 Bolniki in značilnosti tumorja .
Parametri
N
(%)
Bolniki
vse
70
(100,0)
moški
39
(55,7)
ženski
31
(44,3)
Starost (leta)
≤ 65
21
(30,0)
> 65
49
(70,0)
Lokacija
Multicentrična
5
(7.1)
zgornji tretji
11
(15,7)
srednji tretjini
19
(27,1)
spodnje tretjine
35
(50.0)
stopnjo TNM
I (IA + IB)
10
(14,3)
II
14
(20,0)
III (IIIA + IIIB)
19
(27,1)
IV
27
(38,6)
celičnih linijah
želodčnega karcinoma celične linije humanega NCI-N87, pridobljen iz American Type Culture Collection (Manassas, ZDA), smo inkubirali v RPMI-1640 medija (Invitrogen - Gipco, Carlsbad, CA, ZDA), ki vsebuje 10% fetalnega telečjega seruma . (Euroclone - Celbio, Pero, MI), 10 mM Hepes, 1 mM natrijev Piruvat (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO), pri 37 ° C v 5% CO 2
NCI-N87 je želodcu karcinom linija izvedena iz jeter metastazami dobro diferenciranega raka želodca, odvzetem pred citotoksična terapija. Po obrazcu proizvajalca, celice izražajo površinskih glikoproteinov karcinoembrionski antigen (CEA).
Cell vozlanje poskusi
študija celica vozlanje bila izvedena, da se določi občutljivost te tehnike qrtPCR za odkrivanje rakavih celic v periferni krvi mononuklearnimi celice (PBMC). PBMC so bili pridobljeni iz zdravih prostovoljcih in preštejemo in razredčena 1: 1 v RPMI mediju. Želodčne rakave celice N87 bili prešteti in serijsko razredčena z 1 x 10 6 celic /ml do 1 celic /ml v PBMC. Celotno RNA smo ekstrahirali in reverzno prepisana iz 2 ml vsake frakcije. qrtPCR dveh genov interesa je bilo nato, kot je opisano v nadaljevanju.
zbiranje vzorcev, ekstrakcijo RNA in cDNA sintezo
je A 6 ml alikvot venske krvi, pridobljene iz vsakega bolnika v času operacije. obdelava vzorca je bila izvedena v dveh urah po odvzemu krvi. Vzorec smo centrifugirali pri 2000 x g 10 minut in frakcijo PBMC zberemo in shranimo v tekočem dušiku. Odtajamo
Zamrznjene vzorce in skupno RNA smo ekstrahirali z metodo Gvanidinijevhidrokl- Tiocianat-fenol-kloroform (TRIzola reagent, Invitrogen, Carlsbad, CA, ZDA). Celovitost izolirane RNA je bila ustanovljena z qrtPCR analizo beta aktina endogeni referenčna genov (b-aktina), kot je opisano v nadaljevanju [9].
Total RNA (7 ug na 100 ml končnega volumna reakcije) so obrnjene prepisal uporabo naključni temelji in MultiScribe reverzne transkriptaze (cDNA High-Capacity povratne prepisu kit, Applied Biosystems, Foster City, CA, ZDA). Reakcijsko zmes inkubirali 10 minut pri 25 ° C, nato pa pri 37 ° C 120 min. cDNA je bila shranjena pri -80 ° C do uporabe.
realnem času kvantitativno polimerazne verižne reakcije
transkripcijske ravni štirih genov (tj karcinoembrionski antigena [CEA], citokeratina-19 [CK19], survivin in vaskularne endotelijske rastni dejavnik [VEGF]) smo izmerili v periferni krvi pacientov s pomočjo kvantitativne PCR v realnem času (qrtPCR) z relativno metodo količinsko (2 -ΔΔCt metoda) [10, 11]. Uporaba 2 -ΔΔCt metodo podatki so predstavljeni kot kratno-spremembe v izražanju genov, ki jih referenčni genom in glede na kalibratorja vzorca normalizirane. Namen procesa normalizacije je nastavitev vrednosti zastopa transkripcijske ravni vsakega gena glede na količino mRNA prisotne v vsakem vzorcu: to je običajno dobimo z deljenjem vrednosti izražanja vsakega gena tisti referenčnega gena (ki je prav imenovano "gospodinjstvo" gen). Gospodinjstvo geni so izražene konstitutivno in - v najboljšem primeru - ki jih eksperimentalnih manipulacij ne vpliva: zato morajo približno odraža skupno količino mRNA testiran v vsakem vzorcu [12]. Kot referenčna gena v tej raziskavi smo uporabili beta-aktin, eden izmed najpogosteje uporabljanih oskrbniška genov.
V relativna kvantifikacija študiji PCR, je tako imenovani "kalibrator" predstavlja genske ekspresije izbranega vzorca, s katerim izraz profil vsakega vzorca interesa naravnamo: ta pristop omogoča raziskovalec primerjavo profila ekspresije vzorcev interesa s seboj v smislu njihove kratno-sprememba glede na enem vzorcu (kalibrator)
. običajno kalibrator je neobdelani vzorec (npr funkcionalne študije), vzorec v času nič (na primer v študiji časovnega seveda) ali nepovezana vzorca (npr zdravi v študiji bolnikov, ali običajne fibroblasti v rakavi celici študija linija) [10]. Bazen cDNA, pridobljenega iz PBMC 20 zdravih darovalcev je bil uporabljen kot vir kalibrator v naši raziskavi. Vrednotenje 2 -ΔΔCt kaže kratno spremembo izražanja genov relativno na kalibrator. Za kalibratorjem ΔΔCt enaka nič, in 2 0 enaka ena, tako da pokrovček sprememba izražanje genov glede na kalibrator enaka ena, po definiciji.
Metoda je bila potrjena za naš poskusni sistem s preverjanjem, da je izkoristki pomnoževanje ciljev in b-aktina genov so bili podobni. TaqMan Gene Expression Testi specifični za CEA, CK19, survivin in VEGF so bili kupljeni od Applied Biosystems. Da bi se izognili ojačanje kontaminirano genomske DNA, je primerski par postavljen na stičišču med dvema eksonov. QrtPCR Test je bil izveden s pomočjo ABI PRISM 7300 sistem Sequence Detection. Reakcija PCR nadaljuje v zmesi (30 ml), ki vsebuje 15 xl 2 × TaqMan Universal PCR Master Mix, 1,5 xl 20 × TaqMan Gene Expression testu (vse reagente iz Applied Biosystems), 12,5 xl vode in 1 xl cDNA predloge . Petdeset ciklov pomnoževanja smo opravili pri 95 ° C (15 sekund) in 60 ° C (1 minuto) in nivoji mRNA izraz smo normalizirali glede določljive b-aktina mRNA ekspresije za vsak vzorec.
Statistična analiza
bili Statistične analize izvede z uporabo Stat Pogled opremo V. 4.57 (Abacus Concepts, London, Velika Britanija) in V7.0.0 opremo StatXact (Cytel Software Corporation, ZDA). Korelacija med ravnmi genov (visoke v primerjavi z nizko izražanje genov, kot je opredeljeno s srednjo vrednostjo) in TNM bolezen počivališča kategorije je bila ocenjena s pomočjo testa trend Cochrane-Armitage. Krivulji preživetja so bile ocenjene po metodi Kaplan-Meyer, in univariatne primerjave preživetja smo izračunali po test log-rank. Transkripcijsko ravni štirih genov, skupaj z antropometričnih dejavnikov in TNM faze (po 5. izdaji sistem odrov AJCC TNM sprosti v letu 1997), so bili uporabljeni kot neodvisne spremenljivke v analizi Večvariantna preživetja, ki je bila opravljena z uporabo Cox sorazmerna nevarnosti regresijski model [13]. Izbor spremenljivk, ki znatno prispeva k napovedno vzorcu smo izvedli s stopenjsko metodo. . Vrednosti verjetnosti < 5% so ocenili statistično značilno
Rezultati
Cell vozlanje: občutljivost za qrtPCR tehnike
in celične linije N87, nivoji mRNA za CEA, CK19, survivin in VEGF geni so zelo izražena (slika 1): zato je ta želodčni karcinom linija predstavljala veljavno pozitivno kontrolo naših eksperimentih. Ravni Slika 1 izražanja genov štirih genov interesa za N87 človeške želodčne rakavih celic (merjeno s kvantitativno PCR v realnem času: glej besedilo za podrobnosti). Naravni logaritem ravni izražanja poročajo na y osi: os izvora (0) je referenčni vzorec (imenovano kalibrator), pri katerem so vsi eksperimentalni vzorci v primerjavi relativne metode določanja količine (glej besedilo za podrobnosti)
. za določitev meje detekcije (občutljivost) v tehniki qrtPCR so serijska 10-krat razredčitve (v PBMC) za N87 karcinoma želodca celic testiramo v treh izvodih, ki jih qrtPCR uporabo CEA in survivin kot genskih označevalcev. CEA in survivin mRNA smo zaznali do 1 celico /10 8 redčenja PBMC:. To ustreza ugotovitvi 1 do 10 malignih celic na 10 ml periferne krvi (podatki niso prikazani)
Expression markerji v krvnih vzorcih
vzorcev periferne krvi iz vseh 70 bolnikov, so bili ocenjeni za štiri genskih označevalcev. Izraz je bil pozitiven (več kot kalibratorja) v 98,6%, 97,1%, 42,9%, 38,6% vzorcev za survivin, CK19, CEA, VEGF, oziroma (tabela 2). Ker je ugotovila, survivin in CK19 ravni genov pri skoraj vseh bolnikih so večje od tistih pri zdravih kontrolah, te ugotovitve kažejo na diagnostični potenciala obeh ravneh genes.Table 2 transkripcijske štirih prognostičnih označevalcev v periferni krvi bolnikov z rakom želodca.
Marker
Nad kalibratorja (%) *
Spodaj kalibratorja (%) *
nezaznavno (%)

survivin
69 (98,6)
1 (1.4)
0 (0.0)
CK19
68 (97,1)
2 (2.9)
0 (0,0 )
CEA
30 (42,9)
21 (30,0)
19 (27,1)
VEGF
27 (38,6)
43 (61,4)
0 (0,0 )
* ravni izražanja genov smo izmerili s kvantitativno PCR v realnem času: z relativno metodo kvantifikacije, so bili vzorci razvrščeni kot zgoraj ali spodaj, ki jih najdemo v kalibratorja ravni (vzorci, zbranimi periferne krvi iz zdravih darovalcev)
Poleg tega. če smo upoštevali 75. percentil ravni survivin izražanja na odru, smo imeli veliko večjo trend (p = 0,04) za faze od I do III, ne pa tudi za fazo IV (slika 2). Slika 2 survivin ravni genov, izmerjene v periferni krvi 70 bolnikov z TNM stopnjo I do IV rakom želodca. Analiza test trend kaže znatno povečanje transkripcijskih ravni survivin vsej bolnikov s I. stopnjo raka III želodca (trend preizkus P-vrednost = 0,04). Za vsak stolpec poročajo povprečje ± SD
preživetje analize
Po povprečno spremljanje 26 mesecev, mediana celokupnega preživetja (OS) za fazo TNM I-II ni bil dosežen.; mediano OS za stopnjo III in IV, 25 in 13 mesecev, v tem zaporedju (log-rank testu vrednost P < 0,0001, slika 3). Slika 3 Celokupno preživetje za TNM stopnjo I-II, III in IV, za vse bolnike (log-rang test P-vrednosti < 0,0001).
Upon univariantne analizi preživetja, med štirimi genov, ki smo jih testirali, le survivin izraz lahko opredeliti dve skupini pacientov z bistveno drugačno prognozo. Dejstvo je, glede na 75. percentil ravni genov prepisu-log preoblikovala (1.508) kot mejno točko, srednji OS za visoko (> 1,508) in nizko (≤1.508) survivin mRNA številčnost bilo 14 in 41 mesecev, v tem zaporedju (log- rang P-vrednost = 0,036, slika 4). Slika 4 Kaplan-Meier krivulji preživetja bolnikov z visoko (> 75 percentil) ali nizko (< 75. Percentil) transkripcijski ravni survivin merjeno v periferni krvi. Log-rank preizkus P-vrednost = 0,036.
Multivariatno analizo preživetja vključno fazi TNM, starost, spol in mRNA štirih markerjev je pokazala, da je le faza TNM in ravni survivin mRNA merjeno v periferni krvi neodvisno napovedujejo OS bolnikov . Razmerje tveganja (HR), povezane s stopnjami survivin kaže na povečanje tveganja za smrt za 100-kratno povečanje survivin izražanja (tabela 3) .table 3 Multivariatno analizo preživetja 70 bolnikov z rakom želodca.
Kovariable
HR

95% CI
P-vrednost


Spodnja meja
Zgornja meja

fazi TNM sem
1 (referenčna) -
-
-
faza II
1.20
1.01
1,45
0,048
faze III
1.34
1,05
1.70
0.017
faza IV
3.17
1,38
6.77
0.004
survivin *
1.34
1.14
1,53
< 0,001
HR: razmerje ogroženosti; CI: interval zaupanja; * VP povezana z ravnmi survivin kaže povečanje smrtne nevarnosti za 100-kratno povečanje survivin izražanja.
Ker so bile le te štiri neodvisne spremenljivke obdrži modelu Cox, ta analiza kaže, da lahko survivin izražanje genov dodati koristne napovedni informacije dobro uveljavljenih dejavnikov, kot so sistem TNM počivališču.
Razprava
v tej raziskavi smo ugotovili, da transkripcijski ravni survivin izmerjene v periferni krvi bolnikov z rakom želodca neodvisno korelaciji z njihovo splošno preživetje.
Če validirani v večjih prospektivnih študij, bi ti rezultati omogočajo povečanje napovedni moči konvencionalnih prognostičnih dejavnikov, ki so trenutno zajetimi s parametri TNM počivališča. To je zlasti pomembno za bolnike z TNM stopnjo I do III bolezni, za katere je stratifikacija optimalno tveganje bistveno, da se opredelijo preizkušance z največjo verjetnostjo, da koristi od adjuvans zdravljenja.
Naše ugotovitve so posebnega pomena tudi tumor biologije vidika je ker gen survivin kodira ključno anti-apoptotske protein spada k inhibitor apoptoze proteina (IAP) družini. Poleg je eden izmed najbolj označen anti-apoptotskih dejavnikov [14], survivin je predmet intenzivne preiskave zaradi dejstva, da je pri odraslih je selektivno izražen praktično le raka različnega izvora; poleg tega je njegova ekspresija primarnega tumorja povezana s slabšo prognozo in odpornost na običajnih kemoterapevtiki [15]. Te ugotovitve, da survivin idealen cilj za tumor specifične terapije, kot so mala inhibitorjev molekul in antigensko specifične imunoterapije [16].
Survivin beljakovin izraz v primarnih tumorjev, vključno z rakom želodca, so raziskovali kot prognostični dejavnik, višja ravni so povezane s slabši rezultat raka [17]. O RNK ekspresije so nivoji survivin mRNA raziskovali kot označevalec v obtoku tumorske celice (CTC) v različnih vrst raka, vendar razpoložljivi podatki so omejeni [18, 19]. V seriji 26 bolnikov z rakom želodca, je survivin mRNA (merjeno s sedežem ELISA qrtPCR) v periferni krvi poročali v korelaciji z prognozo bolnikov, pri čemer je TNM odrne izključena iz končnega mutivariable modela (silijo vse spremenljivke v modelu Cox) [20]. V naše večje serije (n = 70), se potrdi napovedni vloga ravneh v krvi survivin, čeprav TNM uprizoritev ostaja pomemben napovedni dejavnik pri končni multivariabilnega modela (z uporabo postopen način za spremenljivo izbor). Kljub občutnemu povezavi s prognozo bolnikov, raven survivin mRNA ni povečala v vseh štirih TNM fazah: trend k večjemu transkripcijske številčnost je v resnici dokazali le pri bolnikih s stadijem I do III bolezni (slika 2). Ta ugotovitev premoč je odvisna od velikosti, od majhnih vzorcev iz posameznih faz TNM (in posledično nizke statistično močjo), temveč bi lahko tudi kaže, da ima survivin vlogo pri Lokoregionalno in ne v daljni metastaz (kjer bi drugi geni lahko bolj pomembno, kot je bilo nedavno poročali [21])
za razliko od drugih študij [9, 22-26], ravni CK19 in CEA ni bilo povezano z bolnikom preživetje v naši seriji, bodisi na univariablinega (podatki niso prikazani) ali multivariabilnega analize preživetja. to morda je odvisna od več dejavnikov. Najprej, naj se v našem multivariabilnega analizo (s postopnim načinom spremenljive izbire) markerja ne štejejo druge Avtorji naredi nobene primerjave neizvedljivo.
Pomembno je omeniti, nekatere pozitivne poročila uporabijo le univariablinega analizo preživetja, ki ogroža Izvedene so bile zanesljivost in ponovljivost njihovih rezultatov, enkrat prilagoditve za uveljavljenih napovednih dejavnikov (tj TNM faze) [9, 25, 27, 28]. Poleg tega je v skladu z našimi rezultati druge preiskovalci narediti poročilo pomanjkanje povezovanja med citokeratinov pozitivne celice prisotnosti in prognozo [29] (tabela 4) .table 4 Izbrano vrsto analizo napovedni vlogo v obtoku tumorske celice (CTC), pri bolnikih z rakom želodca.
Author

Year

Ref.

Patients

Method

Survival Analiza
markerji
Ugotovitve
Koga T et. al.
2008
[9]
101
Kvantitativne RT-PCR
univariatne
CK18, CK19, CK20, CEA
CK19 je bolje dvojno podajo, in če je uporabna za Ocenjujemo, prognozo ali za adjuvantno zdravljenje
Yie SM et. al.
2008
[20]
26 (rak želodca)
RT-PCR ELISA
multivariatnih
survivin
Status survivin-izraža CTC je močna in neodvisna napovedovalec ponovitve
Hiraiwa K et. . Al
2008
[22]
44 (rak želodca)
CellSearch sistem
multivariatnih
CD45 (-) celice vs CK (+) celice
CTSs močno povezana z faza tumor
Illert B et. al.
2005
[23]
70
kvantitativno RT-PCR
Multivariatno
CK20
CK20 je neodvisen napovedni dvojno podajo
Yeh KH et. al.
1998
[24]
34
Vgnezdeno kvantitativni RT-PCR
Univariatna
CK19
CK19 izražanje CTC so povezane s slabo prognozo
Seo JH et. al.
2005
[25]
46
Kvantitativne RT-PCR
ne izvaja
CEA
CEA mRNA je pomembno povezana s kliničnim ponovitve
Wu CH et. al.
2006
[26]
42
Kvantitativne RT-PCR
ne izvaja
hTERT, CK19, CK20, CEA
CEA mRNA je povezana z večjim tveganjem za pooperacijske ponovitev /metastaze
UEN YH et. al.
2006
[27]
52
kvantitativno RT-PCR
univariatne
c-MET, MUC1
c-Met in MUC1mRNA pomembno korelira z prognoze
Mimori K et. al.
2008
[28]
810
Kvantitativne RT-PCR
univariatne
MT1-MMP
MT1-MMP je neodvisen dejavnik za določanje ponovitev in oddaljenih metastaz
Pituch-Noworolska et. . Al
2007
[29]
57
pretočno citometrijo
univariatne
CD45 (-) celice vs CK (+) celice
prisotnost CK (+) celice je brez prognostično vrednost
Te nasprotujoče si podatke, pa je odvisno od dejstva, da so CK19 in CEA označevalcev CTC prisotnosti, ne pa nujno CTC sposobnost metastaze: v resnici, je dobro znano, da ima le podmnožica CTC biološki potencial povzroča metastatskih depozitov, medtem ko je večina CTC na koncu umre, ne da bi škodljivo za gostitelja [7]. V skladu s tem bi označevalci CTC "agresivnosti", kot so survivin razkrivajo, da je bolj informativen glede korelaciji s prognozo bolnikov.
Opombe, v tej študiji mRNA obilo survivin in CK19 je bila vedno večja od tiste, ki so v zdravi, razen za enega, dveh primerov, oz. To poudarja pomen uporabe kvantitativno metodo (qrtPCR), ki nam je omogočila stratifikacija bolnikov tveganje za neprekinjeno lestvici, medtem ko bi bile standardne PCR uvrščajo skoraj vse paciente kot pozitiven. Na drugi strani pa je to ugotovitev - ki bi po našem najboljšem znanju nikoli ni bil zabeležen pred - predlaga, da bi se ti geni izkoristiti tudi za diagnostične namene, čeprav je namenjen študija posebej za ta cilj je upravičeno
Kot. Zadnji premislek, želimo poudariti, da metode, ki temeljijo na PCR ne omogočajo ugotoviti izvor celic izmerjenih označevalcev: dejansko vse te metode zahtevajo lizo celic pridobljenih iz periferne krvi pacientov z namenom ekstraktu mRNA uporablja za oceno izražanja ciljnih genov. Poleg CTC, drugi možni viri PCR-odkritih genov so PBMC, ki kroži endotelijskih celic (CEC), kostnega mozga izhaja obtoku matičnih celic, kot tudi kožne celice (npr keratinociti, fibroblasti, melanociti) onesnažujejo vzorec med umikom v krvi. Kljub temu, CTC verjetno glavni vir celic za survivin, saj je njegov izraz zelo omejen v normalnih odraslih tkivih in je namesto tega v glavnem omejena na malignih celic [30]. V zvezi s tem, citometrije metode so manj nagnjeni k lažno pozitivnih rezultatov, saj pomenijo, ki temelji na protitelesa celico razvrščanje sledi PAP citološki identifikacijo tumorskih celic, ki je pred svojo fenotipske karakterizacijo [31].
Sklepe
ravni genske ekspresije survivin dodaj pomembno napovedno vrednost na trenutno TNM sistem odrov bolnikov z rakom želodca. Potrditev teh ugotovitev v večjem bodoči seriji lahko vodi k optimizaciji stratifikacijo tveganja in na koncu, da prilagodite terapevtski upravljanje teh bolnikov.
Originalne oddane datoteke deklaracij
avtorjev za slike
Spodaj so povezave do prvotni avtorjev prenosov datotek za slike. "Izvirno datoteko na sliki 1 12967_2009_422_MOESM2_ESM.eps avtorjev 12967_2009_422_MOESM1_ESM.eps avtorjev prvotne datoteke za sliko 2 12967_2009_422_MOESM3_ESM.eps avtorjev prvotne datoteke za sliko 3 12967_2009_422_MOESM4_ESM.eps avtorjev prvotni datoteki številka 4 nasprotujočimi si interesi
Avtorji izjavljajo, da nimajo konkurenčnih interesov.

• Clinicopathological lastnosti in prognostične vloge KRAS, BRAF, PIK3CA in nacionalni regulativni organi mutacij v napredovalem raku želodca
• Stent v primerjavi gastrojejunostomy za ublažitev obstrukcije želodca izstopne: sistematični pregled