Betydelsen av lockbete receptor 3 (DcR3) och extern signal regleras kinas 1/2 (ERK1 /2) i magcancer

Betydelsen av lockbete receptor 3 (DcR3) och extern signal regleras kinas 1/2 (ERK1 /2) i magcancer Bild Sammanfattning
Bakgrund
Decoy receptor 3 (DcR3), en medlem av tumörnekrosfaktor receptor (TNFR) super är associerad med anti-tumörimmunitet förtryck. Det är mycket uttrycks i många tumörer, och dess uttryck kan regleras av MAPK /MEK /ERK signalväg. MAPK /MEK /ERK-vägen har rapporterats vara en regulator i tumörförekomst, utveckling och klonal expansion. Extern-signal regleras kinas (ERK) är en viktig medlem av denna väg.
Resultat
Uttrycket av DcR3 och ERK1 /2 i tumörvävnad hos patienter med ventrikelcancer var betydligt högre än den godartade gruppen (P
< 0,05). Det fanns ingen statistisk skillnad mellan tumörvävnad från patienter med olika åldrar och kön, och även olika differentiering (P Hotel > 0,05). Hos patienter med stadium I magcancer, den DcR3 och ERK1 /2 våningar var betydligt lägre än patienter med mer avancerade stadier.
Slutsatser
DcR3 och ERK1 /2 spelar en viktig roll i utvecklingen av magcancer, och de kan vara nya markörer för att indikera effektiviteten av magcancer behandling i framtiden.
bakgrund
Decoy receptor 3 (DcR3) är en medlem av tumörnekrosfaktor-receptor (TNFR) superfamiljen. Det har visats sig vara den decoy receptor för Fas-ligand (FasL), LIGHT och TL1A [1-3], även känd som TR6 [4]. DcR3 oftast uttrycks i tumörceller och konkurrens hämmar TNF-signalering. Överuttryck av DcR3 i tumörceller skyddar dem från apoptos. DcR3 skyddar tumörceller från immunövervakning eftersom det bidrar till att undertrycka värdens antitumörimmunitet.
DcR3 mRNA och protein förstärks i olika maligna vävnader, såsom lungcancer, tjocktarmscancer, magcancer, esofageal cancer, bukspottkörtel cancer och malignt melanom [1, 5, 6]. Wu et al.
[7] rapporterade att DcR3 inte kunde detekteras i icke-tumörpatienter, men kunde detekteras i 98,8% (82/83) av patienterna med maligna cancerformer.
Detta fenomen visar att den förhöjda DcR3 uttryck signifikant korrelerad med tumörbildning och tumörprogression. Wu et al.
[8] rapporterade att DcR3 starkt uttrycktes i human magcancer (GC), och positivt korrelerad med utvecklingen och metastaser av magsår. Gastric patienter med hög DcR3 uttryck cancer presenterade en mer avancerad pN2-3 sjukdomen än de med låg DcR3 uttryck.
DcR3 för FasL kan vara inblandade i utvecklingen av magcancer. Ytterligare utvärdering av de möjliga roller DcR3 och reglering av DcR3 uttryck i maligna celler är mycket viktigt för utvecklingen av nya strategier för reglering av tillväxten av maligna celler som undgår värdens immunövervakning.
I ett tidigt skede, MAPK /ERK-vägen aktiveras i tumörer, vilket är en noterbar tecken för många typer av cancer hos människa. Nyligen har flera bevislinjer föreslog att ERK kan vara en parameter för att förutsäga prognosen för olika cancerformer, såsom bröstcancer, koloncancer, pankreascancer och kolangiokarcinom. Wang et al.
[9] rapporterade att uttrycket av ERK1 /2 var hög i kolangiokarcinom, vilket korrelerade med TNM stadier.
Kim et al.
[10] fann att LPS-inducerad DcR3 frisättning i humana tarmepitelceller (IEC), som föreföll vara via aktivering av mitogenaktiverade proteinkinaser (MAPK), såsom extracellulära signalreglerade kinaset 1 och 2 (ERK1 /2) och c-Jun NH2-terminala proteinkinas ( JNK). LPS-inducerad DcR3 release i SW480 celler avskaffades genom ERK1 /2 och JNK-hämmare. Dessutom Yang et al.
[11] rapporterade att 3 g /ml DcR3 markant inducerade fosforyleringen av ERK och p38.
I enlighet med dessa rapporter föreslår vi att DcR3 och ERK1 /2 är nära besläktade. De DcR3 gener nära korrelerad med förekomsten och utvecklingen av många typer av tumörer. I denna studie undersökte vi uttrycket nivå och placering av DcR3 och ERK1 /2 i mag cancerpatienter i olika åldrar, kön, scen och differentiering, för att undersöka sambandet mellan DcR3 /ERK1 /2 och magcancer förekomst och utveckling. Dessutom ger vi förslag på klinisk diagnos av magcancer.
Metoder
Kliniska prover
tumörer från magcancer patienter som genomgått endoskopisk biopsi eller botande verksamhet i Zhongshan sjukhus anslutna med Xiamen universitet. Tumörvävnad från vilken DNA och protein isolerades var från färska exemplar av resektionskirurgi. Alla prover erhölls med patientens medgivande och godkännande av kommittén för medicinsk etik i Zhongshan Hospital Xiamen University.
Möss
Alla experiment utfördes med hjälp av 6-8 veckor manliga nakna möss köpta från Model Animal Research Center i Medical College Xiamen University. Alla djur inhystes under specifika patogenfria förhållanden med ständig tillgång till vatten och chow. Alla experimentella procedurer genomfördes efter godkännande av Animal Care och användning kommittén för Xiamen University.
Cellodlings
human magcancer cellinje BGC823 hölls i vårt laboratorium, som odlades i kolvar med Dulbeccos modifierade Eagles medium (DMEM) kompletterat med 10% fetalt bovint serum (FBS) och 1% penicillin-streptomycin vid 37 ° C i en fuktad atmosfär av 5% CO2.
Reagenser
DMEM, FBS och penicillin-streptomycin köptes från Hyclone Corporation (Utah, USA). Hematoxylin-och-eosin (H & E) analyssats köptes från Chemicon International, Inc. (Temecula, CA, USA). ERK1 /2 och DcR3 Abs köptes från Santa Cruz Bio-teknik. RT-RCR reagens köptes från TaKaRa (Dalian, Kina). Primersekvensen syntetiserades från Sangon (Shanghai, Kina).
In vivo-djurtumörmodeller
Tumörer som genereras i manliga nakna möss genom intramuskulär (im) injektion av BGC823 celler (1,0 x 105 celler i 100 ^ PBS) in i på högerkanten. Tumörmätningar omvandlades till tumörvolymen (V) med formeln (L × W2 × 0,52), där L och W är längden och bredden, respektive. Mätningar gjordes med ett skjutmått. Alla tumörbärande möss delades slumpmässigt in i grupper (2 möss /grupp).
RT-PCR och Western blotting-analys för att pröva expressionen av DcR3 /ERK
Total RNA av DcR3 och ERK1 /2 extraherades från stimulerat celler med användning av Trizol. För att mäta ERK /DcR3 genkopietal, DNA från färska tumörprover analyserades med RT-PCR. Uppströms och nedströms primrar för ERK1 mRNA var 5'-CCTGCTCATCAACACCACC-3 'och 5'-CGTAGCCACATACTCCGTCA-3', och för ERK2-mRNA var 5'-TCTTCC AGCCCTCCTTCCTG-3 'och 5'-CGTTTCTGCGCCGTTAGGT-3'. Proverna denaturerades vid 95 ° C under 4 min, följt av 35 cykler av amplifiering (95 ° C, 45 sek; 55 ° C, 45 sek; och 72 ° C, 60 sek). Produkterna var 300 bp och 400-bp fragment respektive. För DcR3-mRNA, var den uppströms primern 5'GCAAAGCCAAGGATTCCCCCTG -3 'och den nedströms primem var 5'-GGCACTGCTCTGAGCTGGAGCTG-3'. Proverna denaturerades vid 95 ° C under 4 min, följt av 30 cykler av amplifiering (95 ° C, 45 sek; 55 ° C, 45 sek; och 72 ° C, 60 sek). Produkten var ett 921-bp fragment.
BGC823 Cellerna skördades och lyserades i cell lyseringsbuffert (1% (volym /volym) Nonidet P-40, 150 mM NaCl, 50 mM Tris-HCl (pH 8), 1 mM PMSF, 2 g /ml aprotinin och 2 g /ml leupeptin), som skulle kunna frigöra DcR3 och ERK1 /2-proteiner. Tjugofem mikrogram totala lysatet fraktionerades genom SDS-PAGE och utsattes för Western-blotting-analys med användning av anti-ERK eller anti-DcR3 mAb (klon 3 H5).
Western blotting och ELISA-analys för att undersöka uttrycket av DcR3 /ERK efter hämmare behandling
BGC823 celler odlingssupernatanterna samlades vid olika tidpunkter, och nivåer av U0126, PD98059, APDC, MEK1 /2 och ERK1 /2 störningar kvantifierades med användning av kommersiella ELISA-kit, enligt anvisningar leverantörens. Celler behandlade med ERK1 /2 shRNA (5: 2, 6: 2), U0126 /PD98059 (0

• MicroRNA-206 undertrycker magcancer celltillväxt och metastasis
• Optimal regim av trastuzumab i kombination med oxaliplatin /capecitabin i första linjens behandling av HER2-positiv avancerad ventrikelcancer (CGOG1001): en multicenter, fas II trial