Reikšmė masalui receptorių 3 (Dcr3) ir išorinio signalo reguliuojamas kinazės 1/2 (ERK1 /2) skrandžio vėžys

Reikšmė masalui receptorių 3 (Dcr3) ir išorinio signalo reguliuojamas kinazės 1/2 (ERK1 /2) skrandžio vėžys
Anotacija
fone
Decoy receptorių 3 (DcR3), iš auglio nekrozės faktoriaus narys receptoriaus (TNFR) superšeimai, yra susijęs su anti-naviko imuniteto slopinimas. Ji yra labai išreikštas daugelyje navikų, ir jo išraiška gali būti reguliuojamas pagal MAPK /MEK /ERK signalinio kelio. MAPK /MEK /ERK kelias buvo pranešta būti naviko atsiradimo, plėtros ir klonų plėtros reguliatorius. Išorinis signalo reguliuojamas kinazės (ERK) yra gyvybiškai svarbi narys šiuo būdu.
Rezultatai Viesbutis The iš DcR3 ir ERK1 /2 išraiškos navikų audiniuose, skrandžio vėžiu sergantiems pacientams buvo reikšmingai didesnis nei nevėžinės grupėje (p
< 0,05). Nebuvo statistinio skirtumo tarp navikų audiniuose, iš pacientų, sergančių įvairaus amžiaus ar lyties, ir net įvairaus diferenciacijos (P
> 0,05). Tačiau pacientams, sergantiems I etapo skrandžio vėžiui DcR3 ir ERK1 /2 lygis buvo gerokai mažesnis nei pacientams, sergantiems daugiau stadijose.
Išvados
DcR3 ir ERK1 /2 vaidinti svarbų vaidmenį skrandžio vėžio išsivystymo, ir jie gali būti naujų žymenų, rodantys, skrandžio vėžio gydymo ateityje efektyvumą.
faktai
Decoy receptorių 3 (DcR3) yra naviko nekrozės faktoriaus receptoriaus (TNFR) superfamily narys. Tai buvo įrodyta, kad būti Decoy receptorius Fas ligandas (FasL), lengvas ir TL1A [1-3], taip pat žinomas kaip TR6 [4]. DcR3 dažniausiai išreiškiamas vėžinių ląstelių ir konkurenciniu būdu slopina TNF signalizacijos. Padidėjusi DcR3 naviko ląstelėse apsaugo juos nuo apoptozės. DcR3 apsaugo auglio ląsteles nuo imuninės priežiūros, nes ji prisideda prie priimančiosios priešnavikinis imunitetą slopinimo.
DcR3 mRNR ir baltymų yra sustiprina įvairių piktybinių audinių, pavyzdžiui, plaučių vėžio, gaubtinės žarnos vėžio, skrandžio vėžio, stemplės vėžio, kasos vėžys ir piktybinė melanoma [1, 5, 6]. Wu ir kt.
[7] pranešė, kad DcR3 nebūtų galima aptikti ne-naviko pacientams, tačiau gali būti aptikta 98,8% (82/83) pacientų, kurių piktybinių vėžio.
Šis reiškinys rodo, kad padidėjusi DcR3 išraiška yra gerokai koreliuoja su tumorigenesis ir naviko progresavimas. Wu et al.,
[8] nurodė, kad DcR3 buvo labai išreikštas žmogaus skrandžio vėžiu (GC), ir teigiamai koreliuoja su plėtra ir metastazių skrandžio pakitimų. Skrandžio vėžiu sergantys pacientai aukšto DcR3 išraiškos pristatė daugiau pažangių pN2-3 liga nei tie, su mažu DcR3 išraiška.
DcR3 už FasL gali būti įtraukti į skrandžio vėžio progresavimą. Daugiau vertinimas galimų vaidmenų DcR3 bei DcR3 raiškos reguliavimas piktybinių ląstelių yra labai svarbi naujų strategijų plėtros kontroliuoti piktybinių ląstelių, kurios pabėgti šeimininko imuninę priežiūrą augimą.
Tuo ankstyvame etape MAPK /ERK kelias yra aktyvuota navikų, kuris yra akivaizdus stebuklas, daugelio rūšių vėžio žmonėms. Neseniai, kelios linijos įrodymų pasiūlė, kad ERK gali būti parametras, kaip prognozuoti įvairių vėžio, pavyzdžiui, krūties vėžio, gaubtinės žarnos vėžio, kasos vėžio ir cholangiokarcinoma prognozę. Wang ir kt.
[9] pranešė, kad ERK1 /2 raiška buvo didelis cholangiokarcinoma, kuris koreliuoja su TNM etapais.
Kim et al.
[10] nustatė, kad LPS sukeltas DcR3 išsiskyrimą žmogaus žarnyno epitelio ląstelės (IEC), kurios, atrodo, per mitogenu aktyvinto proteino kinazės (MAPK), pavyzdžiui, tarpląstelinio signalo reguliuojamas kinazės 1 ir 2 (ERK1 /2) ir c-Birželio NH2-terminalo baltymų kinazės aktyvinimas ( JNK). LPS sukeltos DcR3 išleidimo SW480 ląstelių buvo panaikinta ERK1 /2 ir JNK inhibitorius. Be to, Yang et al.,
[11] pranešė, kad 3 g /ml DcR3 gerokai sukeltos į ERK ir p38 fosforilinimas.
Pagal šias ataskaitas, mes siūlome, kad DcR3 ir ERK1 /2 yra glaudžiai susiję. Į DcR3 genai glaudžiai koreliuoja su atsiradimo ir plėtros daugelio rūšių navikų. Šiame tyrime mes tyrė išraiška lygį ir vietą DcR3 ir ERK1 /2 skrandžio vėžiu sergantiems pacientams, įvairaus amžiaus, lyties, scenos ir diferenciacijos, ištirti ryšį tarp DcR3 /ERK1 /2 ir skrandžio vėžio atsiradimo ir plėtros santykius. Be to, mes teikiame pasiūlymus klinikine diagnoze skrandžio vėžio.
Metodai
klinikinius mėginius
navikai buvo iš skrandžio vėžiu sergantiems pacientams, kurie buvo atlikta endoskopinės biopsiją ar gydymo operacijas Zhongshan ligoninė susijęs su Siameno universitetas. Navikų audiniuose, iš kurios buvo išskirtos DNR ir baltymų buvo iš šviežių egzemplioriaus rezekcija operacijos. Visi mėginiai buvo gauti paciento sutikimo ir pritarimo dėl medicinos etikos Zhongshan ligoninė, Xiamen universiteto komitetas.
Pelės
Visi eksperimentai buvo atlikti naudojant 6-8 savaitės vyrų nuogas pelėms, pirktais iš pavyzdiniame gyvūnų tyrimų centro medicinos koledžo Xiamen universitetas. Visi gyvūnai buvo laikomi tam tikromis patogenais neužkrėstų sąlygomis nuolatinę prieigą prie vandens ir čiau. Visi eksperimentiniai procedūros buvo atliktos po gyvūnų priežiūrai ir naudojimui komiteto Siameno universitetas patvirtinimo.
Mobilusis kultūra
žmogaus skrandžio vėžio ląstelių linijos BGC823 išliko mūsų laboratorijoje, kuri buvo kultivuojamos kolbos su Dulbecco modifikuota erelio terpė (DMEM), papildytoje su 10% vaisiaus galvijų serumo (FBS), ir 1% penicilino-streptomicino 37 ° C temperatūroje, yra drėgnoje atmosferoje 5% CO2.
reagentais
DMEM, FBS ir penicilino-streptomicino buvo įsigytas nuo Hyclone Corporation (Utah, JAV). Hematoksilinu-ir-eozinas ( "H & R) tyrimas rinkinys buvo įsigytas iš Chemicon International, Inc" (Temecula, CA, JAV). ERK1 /2 ir DcR3 Abs buvo įsigytas iš Santa Cruz Bio technologija. AT-RCR reagentai buvo įsigytas iš TAKARA (Dalian, Kinija). Grunto seka buvo sintetinamas iš Sangon (Šanchajus, Kinija).
In vivo gyvūnų navikų modelius
Navikai buvo sugeneruotas vyrų nuogas pelių raumenis (im) injekcija BGC823 ląstelių (1,0 × 105 ląsteles 100μL PBS) į dešinio krašto. Naviko matavimai buvo konvertuojami į naviko tūris (V) pagal formulę (L × W2 × 0,52), kur L ir W yra tokie, ilgis ir plotis, atitinkamai. Matavimai buvo atlikti su Vernier slankmačiu. Visi naviko guolis pelėms buvo suskirstyti atsitiktinai į grupes (2 peles /grupė).
RT-PGR ir Vakarų pernašos analizę nagrinėjant DcR3 /ERK
viso RNR DcR3 ir išraiška ERK1 /2 buvo išgauti iš skatino ląstelės naudoja Trizol. Norint išmatuoti ERK /DcR3 geno kopijos numeris, DNR iš buvo analizuojami su RT-PCR šviežių navikų mėginiuose. Prieš srovę ir pasroviui gruntai ERK1 mRNR buvo 5'-CCTGCTCATCAACACCACC-3 'ir 5'-CGTAGCCACATACTCCGTCA-3', ir ERK2 mRNR buvo 5'-TCTTCC AGCCCTCCTTCCTG-3 'ir 5'-CGTTTCTGCGCCGTTAGGT-3'. Mėginiai buvo denatūruotas 95 ° C temperatūroje iki 4 min, o po to 35 ciklų amplifikacijos (95 ° C, 45 sek; 55 ° C, 45 sek; ir 72 ° C, 60 sek). Produktai buvo 300 bp ir 400 bp-fragmentai atitinkamai. Dėl DcR3 mRNR, tiekėjų gruntas buvo 5'-GCAAAGCCAAGGATTCCCCCTG -3 "ir tolesnis gruntas buvo 5'-GGCACTGCTCTGAGCTGGAGCTG-3". Mėginiai buvo denatūruotas 95 ° C temperatūroje iki 4 min, o po to 30 ciklų amplifikacijos (95 ° C, 45 sek; 55 ° C, 45 sek; ir 72 ° C, 60 sek). Produktas buvo 921-bp fragmentas.
BGC823 Ląstelės buvo surinktos ir lizuojamos į ląstelių lizės buferiniame tirpale (1% (v /v) Nonidet P-40, 150 mM NaCl, 50 mM Tris-HCl, (pH 8), 1 mM PMSF 2 g /ml aprotinino, ir 2 g /ml leupeptiną), kuri galėtų išleisti DcR3 ir ERK1 /2 baltymus. Dvidešimt penkių mikrogramų viso lizate buvo frakcionuotas SDS-PAGE ir taikomos Vakarų blotingo analizę, naudojant anti-ERK arba anti-DcR3 mAb (klonas 3 H5).
Imunoblotingo ir ELISA tyrimą dėl nagrinėjant DcR3 išraiška /ERK po inhibitorius
BGC823 ląstelių kultūrų supernatantai buvo renkami skirtingais intervalais, ir lygiai U0126, PD98059, APDC, MEK1 /2 ir ERK1 /2 trukdžių buvo įvertinami naudojant komercinius ELISA rinkiniai, atsižvelgiant į pardavėjo instrukcijas. Ląstelės gydomi ERK1 /2 shRNR (5: 2, 6: 2), U0126 /PD98059 (0 mkmol /l 5 mkmol /l 10 mkmol /l 20 mkmol /l 40 mkmol /l) ir APDC (0 mkmol /l 10 mkmol /l 20 mkmol /l 40 mkmol /l 80 mkmol /l), atitinkamai. Po 5- arba 7-dienų inkubacijos, ląstelės buvo atliktas citokinų, kaip nurodyta tyrimu. Dvidešimt penkių mikrogramų viso lizate buvo frakcionuotas SDS-PAGE ir taikomos Vakarų blotingo analizę, naudojant anti-ERK arba anti-DcR3 mAb (klonas 3 H5).
Imunohistocheminis analizę už DcR3 ir ERK1 /2 išraiškos
navikų audiniuose buvo nustatytas formaldehido terpėje ir įterpti į parafiną. 6 mm storio segmentai buvo montuojamas ant stiklo skaidres, anksčiau gydyti 0,1% poli-L-lizino. Tada jie buvo deparaffinaged į xy-Lene, dehidratuotas rūšiavo etanolio ir mirkomi 3% H 2O 2 10 min pašalinti endogeninė peroksidazės aktyvumo. Kitą, skaidres buvo panardintas į citrato buferio (pH 6,0) ir kaitinti bent 92-98 ° C, mikrobangų krosnelėje, 10 min. Vėliau, jie buvo skalaujamas 3 kartus su PBS ir kiekvienam užblokuotų su 10% normalaus ožkų serumo PBS už 1 val kambario temperatūroje 10 min. tada skaidres buvo reaguoja su afininės-gryninamas triušio anti-TR6 Ab (1,67 g /ml) kambario temperatūroje 2 val. Po plovimo, skaidres buvo inkubuojamos su Biotinilinta ožkos anti-triušio antikūno 10 min. TR6 signalas atskleidė streptavidino-peroksidazės naudojant DAB kaip substrato pagal instrukcijas iš Histostain-Plus rinkinys (Zymed Laboratories, Pietų San Franciskas, Kalifornija). DcR3 signalai buvo atskleista ruda. Galiausiai, skaidres buvo counterstained hematoksilinu ir užsandarinti su vandeniniais Tvirtinimo Media (Zymed).
Statistinė analizė
Duomenys buvo pateikti kaip vidurkis ± SD. Skirtumo tarp grupių reikšmingumas buvo įvertintas Student`s dvipusiu t-testą. Tikimybių vertė mažesnė negu 0,05 buvo laikomas reikšmingu. Visos priemonės buvo apskaičiuotos iš ne mažiau kaip trijų nepriklausomų eksperimentų.
Rezultatai
vėžiu sergantiems pacientams yra padidėjęs DcR3 lygiai
ištirti ryšį tarp DcR3 išraiška, ir naviko atsiradimo ir plėtros koreliaciją, augliai iš 50 skrandžio vėžiu sergantiems pacientams buvo surinkta ir išbandyta už DcR3 mRNR ir baltymų koncentracijos. Kaip parodyta 1a paveiksle, 921 bp DcR3 juostos buvo sukurtas RT-PGR iš naviko audiniuose daugumai pacientų (36/50), palyginti su ne-vėžinių audinių (2/50) iš tos pačios organų šių pacientų. Šie rezultatai rodo, kad DcR3 lygis žymiai padidėjo (aštuoni atsitiktinai pakėlė klinikiniai mėginiai parodė, 1a paveikslas). Siekiant dar labiau patvirtina mūsų rezultatus, kad DcR3 baltymo koncentracija nagrinėjo Imunoblotingo. Rezultatai rodo, kad DcR3 baltymas gali būti aptiktas daugelyje vėžiu sergantiems pacientams; DcR3 baltymas buvo aptikta 74% (37/50) navikų audiniuose, bet tik 6% (3/50) iš nevėžinės audinių (1 lentelė ir 1b paveiksle; aštuoni atsitiktinai pakėlė klinikinių mėginių yra parodyta 1b paveiksle ). 1 paveiksle DcR3 išraiška skrandžio vėžio ir nevėžinės audinių analizuojamu RT-PCR (Figure1a) ir Imunoblotingo (Figure1b). A: Lane, M, DNR žymenys; lanes1-7, naviko audiniuose; Lane 8, ne vėžiniai audiniai; DcR3 iRNR buvo teigiamas 36 50 naviko audiniuose (1-7) ir neigiamas nevėžinės audinių (8). B: lanes1-7, naviko audiniuose; Lane 8, ne-vėžinių audiniai. DcR3 baltymas buvo teigiamas 37 50 pavyzdžių naviko audinyje (1-7), kurių tik 3 50 ne vėžinių audinių (8).
1 lentelė analizė skrandžio vėžiu sergančių pacientų DcR3 ir ERK1 /2 išraiškos naviko ir normaliuose audiniuose

dėklai
teigiamas skaičius
Teigiamas tarifas (%)
navikas
50
iRNR
Baltymai
+ /+
mRNR
Baltymai
+ /+
DcR3
36
37
28
72,0
74,0
56,0
ERK1
37
42
36
74,0
84,0
72,0
P
> 0,05
ERK2
32
37
27
64,0
74,0
54,0
nevėžinės
50
DcR3
2
3
0
4,0
6,0
0
ERK1
6 5
1
12,0
15,0
2,0
ERK2
9
10
3
18,0
20,0
6,0
išraiška ERK1 /2 klinikinių mėginių
nustatyti signalinės molekulės, susijusios su DcR3 pasakymas lygiai ERK1 /2, JNK ir p38 buvo išbandytas. Mes nustatėme, kad gali būti aptiktas tik ERK1 /2 navikų mėginiuose (duomenys nerodomas JNK ir p38). ERK1 iRNR buvo aptikta 74% mėginių (37/50), o ERK2 iRNR buvo aptikta 64% mėginių (32/50; 1 lentelė ir 2a pav.) Tuo baltymų lygio, ERK1 buvo aptikta 84% (42/50) ir ERK2 74% (37/50) naviko audiniuose (1 lentelė ir 2b pav.) Šie rezultatai rodo, kad pacientams, sergantiems skrandžio vėžio navikų sudaryti didesnę ERK1 /2-teigiamą atsiradimo palyginti su nevėžinės audinių (P
< 0,05). Ten buvo teigiama koreliacija tarp mRNR ir baltymų koncentracijos, kaip ir 42 50 naviko Audiniuose ERK1 baltymų lygis buvo padidėjusi, iš kurių 36 atvejų atitiko iRNR raiška. Priešingai, ERK1 baltymo ekspresija buvo aptiktas tik penkis normalius audinius. Nagrinėdama ERK2, 37 50 atvejai navikų audiniuose buvo teigiami ERK2 baltymų raiškos, iš kurių 27 atvejų atitiko ERK2 iRNR išraiškos, o tik dešimt atvejų parodė teigiamą baltymo ekspresija sveikuose audiniuose. Aštuoni atsitiktinai pakėlė mėginiai parodyta 2 paveiksle 2 paveiksle ERK1 /2 ekspresija skrandžio vėžio ir nevėžinės audinių analizuojamu RT-PCR (2a pav) ir Imunoblotingo (2b pav). A: Lane, M, DNR žymenys; lanes1-7, naviko audiniuose; Lane 8, ne vėžiniai audiniai; ERK1 ir ERK2 iRNR buvo teigiamas naviko audiniuose. B:. ERK1 ir ERK2 baltymas buvo teigiamas naviko audiniuose (1-8)
Vieta ERK1 /2 skrandžio vėžiu sergantiems pacientams
išnagrinėti ERK1 /2 platinimas, augliai iš 50 pacientų buvo išbandytas imunohistocheminiu. Rezultatai rodo, kad ERK1 /2 buvo išreikštas navikų audiniuose, iš daugelio pacientų. ERK1 išraiška buvo rastas citoplazmoje. ERK2 teigiamas išraiška buvo rasta kai kurių vėžinių ląstelių (3 paveikslas). 3 paveikslas iš ERK1 /2 baltymų vieta skrandžio vėžio audiniuose analizuotų imunohistocheminiu. A: Kontrolės, B: ERK1 C:. ERK2
DcR3 ir ERK1 /2 lygis koreliuoja su naviko invazijos, bet ne su amžiumi, lytimi ar diferenciacijos Viesbutis The teigiamo dažnio DcR3 mRNR vėžinių audinių skrandžio vėžiu sergantiems pacientams buvo 72,0% (36/50), ir DcR3 baltymų 74,0% (37/50), kuri buvo gerokai didesnis nei nevėžinės audinius, kuriuose pastebėti tik 4% (2/50) ir 6% (3/50), atitinkamai ( P
< 0,05; 1 lentelė). Teigiamas atsiradimo ERK1 /2 iRNR išraiškos buvo 74,0% (37/50), o 64,0% (32/50), o baltymų raiškos 84,0% (42/50), o 74,0% (37/50). Abu jie buvo žymiai didesnis nei nevėžinės audiniuose, rodo 12,0% (6/50) ir 18,0% (9/50), o 10,0% (5/50) ir 20,0% (10/50), atitinkamai (lentelė 1). Šie rezultatai rodo, kad DcR3 ir ERK1 /2 ekspresijos lygis koreliuoja su naviko atsiradimo ir plėtros.
Kaip parodyta 2, 3 ir 4 lentelėse, nebuvo reikšmingo skirtumo tarp navikų audiniuose, iš skirtingų amžiaus grupių, lyčių grupių ir pacientams, sergantiems įvairaus diferenciacijos etapai skrandžio vėžio (P
> 0,05). Tačiau DcR3 ir ERK1 /2 ekspresijos lygis buvo žymiai aukštos II-IV TNM stadija (5 lentelė). Taigi, DcR3 ir ERK1 /2 išraiškos koreliuoja su naviko invazija ir TNM etape, bet ne su amžiumi, lytimi ar differentiation.Table 2 Koreliacija išraiškos DcR3 ir ERK1 /2 su amžiumi skrandžio vėžiu sergantiems pacientams
atvejai
teigiamas skaičius
Teigiamas tarifas (%)
≥50
32
iRNR
Baltymai
+ /+
mRNR
Baltymai
+ /+
DcR3
25
28
21
78,1
87,5
65,6
ERK1
28
31
26
87,5
96,9
81,2
P
> 0,05
ERK2
20 22
16
62,5
68,8
50,0
< 50
18
DcR3
11
9 5 61,1 50,0 27,8
ERK1
13
11
5
72,2
61,1
27,8
ERK2 <
Br> 12
15
6 66,7
83,3
33,3
3 lentelė Koreliacija išraiškos DcR3 ir ERK1 /2 su lyties skrandžio vėžiu sergantiems pacientams

bylose
teigiamas skaičius
Teigiamas tarifas (%)
Male
39
iRNR
Baltymai
+ /+
iRNR
Baltymai
+ /+
DcR3
29 ERK1
32
29
24
74,4
74,4
61,5
35
28
82,1
89,7
71,8
P
> 0,05
ERK2
26
30
23
66,7
76,9
59,0
Moteris
11
DcR3
7
8
5
63,6
72,7
45,6
ERK1
9
7
6 81,8 63,6 54,5
ERK2
6
7
4
54,6
63,6
36,4
4 lentelė Koreliacija išraiškos DcR3 ir ERK1 /2 su naviko diferenciacijos skrandžio vėžiu sergantiems pacientams

bylose

teigiamas skaičius
Teigiamas tarifas (%)
Na
9
iRNR
Baltymai
+ /+
iRNR
Baltymai
+ /+
DcR3
7
7
5
77,8
77,8
55,6
ERK1
7
9
6
77,8
100,0
66,7
P
> 0,05
ERK2
6
7
5 66,7
77,8
55,6
Vidutiniškai
28
DcR3
21
23
20 ERK1
24
24
22 85,7
85,7
78,6
ERK2
75,0
82,1
71,4
19
24
17
67,9
85,7
60,7
Žemas
13
DcR3
8
7
5
61,5
53,9 ERK1
10
9
8
76,9
69,2
61,5
ERK2
7
6
38,5
5
53,9
46,2
38,5
5 lentelė Koreliacija išraiškos DcR3 ir ERK1 /2 su patologinių etapuose naviko skrandžio vėžiu sergantiems pacientams
TNM etape

bylose

teigiamas skaičius
Teigiamas tarifas (%)
Aš
6
iRNR
Baltymai
+ /+
iRNR
Baltymai
+ /+
DcR3
1
1
1
16,7
16,7
16,7
ERK1
2
2
1
33,3
33,3
16,7
P
> 0,05
ERK2
1
1
0
16,7
16,7
0,0
II
17
DcR3
12
13
10 ERK1
14
14
11
82,4
82,4
64,7
P
70,6
76,5
58,8
> 0,05
ERK2
10 12
9
58,8
70,6
52,9
III
25
DcR3
21
21
21 ERK1
23
24
22
92,0
96,0
88,0
P
84,0
84,0
84,0
> 0,05
ERK2
20
23
18 80,0
92,0
72,0
IV
2
DcR3
2
2
2
100,0
100,0
100,0
ERK1
2
2
2
100,0
100,0
100,0
P
> 0,05
ERK2
1
1
1
50,0
50,0
50,0
raiškos lygiai DcR3 ir ERK1 /2 sustiprino gyvūnų modeliais
Kaip parodyta 6 lentelėje, po injekcijos BGC823 ląsteles į dešinio krašto ir nuogas pelių navikai kiekvieną dieną augo. RT-PGR buvo naudojama patikrinti DcR3 ir ERK1 /2 iRNR lygiui į auglių ir Western Blot analizės buvo nagrinėjama baltymų koncentracijos. Skrandžio vėžio gyvūnų modelių, DcR3, ERK1 ir ERK2 aptikta 921 bp, 300 bp ir 400 bp, atitinkamai. Be šių navikų audiniuose DcR3 iRNR buvo aptiktas nuo pirmos dienos iki šešių pasiekė apie 10 dieną, ir liko aptikta dieną 12 DcR3 taip pat buvo aptiktas nuo pirmos dienos šešių 12 dieną kepenyse, o ji buvo aptikta tik dieną 12 širdies ir plaučių ( 4a pav.) ERK1 /2 iRNR išraiškos buvo aptikta nuo pirmos dienos keturių naviko audiniuose, ERK1 iRNR pasiekė apie 10 diena (4a paveiksle ir 7 lentelė) .table 6 svoris BGC823 naviko nuogas pele (x ± S, N = 6)
grupė
Δ svoris /mg
2 d
4d

6d
8d
10 d
12 d
Normalus UAB -
- - -
- -
Modelis
0. 47 ± 0. 17 △
0. 77 ± 0. 28 △
1. 01 ± 0. 39 △
1. 43 ± 0. 79 △
1. 65 ± 0. 68 △
1. 46 ± 0. 66 △
Pastaba: △ p
< 0,01 vs
normalus; ** P
< 0,01 vs pervežimas modelį.
7 lentelė išraiška DcR3 ir ERK1 /2 mRNR naviko audinių gyvūnų modelių išnagrinėtų AT-PGR

2d

4d

6d

8d

10d

12d

DcR3
—
—
+
+
++
++
ERK1
—
+
+
+
++
++
ERK2
—
+
+
+
+
+
4 paveiksle DcR3 ir ERK1 /2 ekspresija pelės modeliai išnagrinėtų RT-PCR (4a pav) ir Imunoblotingo (4b pav.) A: Lane, M, DNR žymuo; lanes1-6, širdys, kepenys, blužnis, plaučiai, inkstai ir navikų audiniuose pele modelių ketvirtą dieną; lanes7-12, kuris aštuntą dieną; lanes13-18, dvyliktą dieną; ERK1 iRNR buvo teigiamas lane2,8,9,12,14,15,18, ERK2 iRNR buvo teigiamas lane1,2,6,9,10,12,13,14,15,17,18. DcR3 mRNR buvo aptikta lane8, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18 B: 1 takelis, širdies; lane2, kepenų; lane3, blužnis; lane4, plaučių; lane5, inkstų; lane6, naviko audiniuose; Iš ERK1 baltymo ekspresija padidėjo navikų audiniuose, kaip laikui bėgant, širdies, kepenų ir inkstų išsilaikė 12 dienų, iš ERK2 išraiška gali būti aptikta blužnies ir naviko nuo antros dienos, kuri buvo teigiamas naviko audiniuose iki ketvirtą dieną ir visi iš penkių organų dvyliktą dieną. Iš DcR3 baltymo ekspresija buvo teigiamas naviko audiniuose ir kepenyse šeštą dieną ir blužnies dešimtą dieną, kuris buvo neigiamas širdies, plaučių, inkstų, kol dvyliktą dieną.
DcR3 baltymų buvo aptikta dieną šeši naviko audiniai ir kepenų, ir išraiška išliko iki dieną 12. DcR3 baltymas aptikta 10 dieną blužnies ir 12 dieną širdies, inkstų ir plaučių. ERK1 baltymas aptinkamas dieną keturių naviko audiniuose ir toliau didėjo kiekvieną dieną. ERK1 baltymų išliko stabilios lygio širdies, kepenų ir inkstų, bet ji sumažėjo plaučių ir blužnies 10-ąją parą, po to, kai pasiekti viršūnę. ERK2 buvo aptikta dviejų dieną blužnies ir navikų audiniuose. Nuo pirmos dienos keturi, ERK2 baltymas buvo aptiktas visuose šešiuose mėginiuose, ir toliau didinti iki dienos 12. Šie rezultatai rodo, kad ERK1 ir ERK2 gali turėti skirtingą poveikį naviko atsiradimo, plėtros ir klonų plėtrą.
DcR3 išraiška sumažėjo po slopinantis išraiška arba fosforilinimas ERK1 /2 BGC823 ląstelių
ištirti ERK1 /2 saviraiškos ir fosforilinimo poveikį DcR3 išraiškos, BGC823 ląstelės buvo gydomi ERK1 /2 shRNR arba inhibitorių, kurie konkrečiai reglamentuojančių ERK kelią. Vakarų dėmė analizė patvirtino, kad inhibitoriai efektyviai blokavo MEK /ERK kelią molekulių fosforilinimas ir kad shRNR žymiai sumažino ERK1 /2 (5 paveikslas) išraiška. Kaip parodyta 5A figūra, kai BGC823 ląstelės buvo apdorotos ERK1 /2 shRNR, ERK1 /2 ir P-ERK1 /2 lygis, sumažėjo, lyginant su kontrole. 5 paveiksle ERK1 /2 ir P-ERK1 /2 ekspresija BGC823 ląstelių linijos su plazmidžių trikdžių ir inhibitorius aptikta imunoblotingo. A: Sąvoka lygiai ERK1 /2 ir P-ERK1 /2, sumažėjo, lyginant su kontrole. 1) valdymo grupė; 2) 5: 2 (plazmidė: reagentas); 3) 6: 2 (plazmidė: reagentas). B: ERK1 /2 fosforilinimo mažėjo kaip inhibitorius U0126 koncentracijos PD98059 padidėjo, tačiau bendras ERK1 /2 baltymo ekspresija beveik nepasikeitė. 1) 0 mkmol /l; 2) 5 mkmol /l; 3) 10 mkmol /l; 4) 20 mkmol /l; 5) 40 mkmol /l. C: ERK1 /2 fosforilinimo mažėjo kaip inhibitoriaus APDC koncentracijos. 1) 0 mkmol /l; 2) 10 mkmol /l; 3) 20 mkmol /l; 4) 40 mkmol /l; 5) 80 mkmol /l. D: PD98059 akivaizdžiai gali slopinti MEK1 /2 fosforilinimo lygio, tačiau ji nepakeitė MEK1 /2 arba NF-κB raiškos lygį. 1) 0 mkmol /l; 2) 5 mkmol /l; 3) 10 mkmol /l; 4) 20 mkmol /l; 5) 40 mkmol /l.
U0126 yra labai veiksminga MEK inhibitorius, todėl į ERK fosforilinimo slopinimo, kaip tai daro PD98059. ERK fosforilinimo mažėjo kaip narkotikų koncentracijos padidėjimą, nors bendras ERK1 /2 baltymo ekspresija beveik nepasikeitė (5b pav.)
APDC gali slopinti NF-κB limfocitų aktyvinimą į ląstelių įvairovė. Per IκB degradacijos, APDC gali sumažinti NF-κB perkėlimas, todėl blokuoja NF-κB aktyvacijos. Kaip parodyta 5 pav C, esant skirtingoms koncentracijoms APDC, keičiant NF-κB slopinimo lygį gali žymiai sumažinti ERK1 /2 fosforilinimo lygio. Tačiau konkretus mechanizmas reikalauja tolesnio tyrimo.
Ištirti šių inhibitorių ir shRNR apie DcR3 išraiškos mes naudojamų IFA analizė, kuri parodė, kad sekretuojamą DcR3 skystyje virš nuosėdų sumažėjo po įvairių procedūrų (6 paveikslas) poveikį. Statistinė analizė parodė, kad DcR3 sekrecijos lygis buvo gerokai skiriasi nuo eksperimento grupių ir kontrolinės grupių (p
< 0,05). Kaip parodyta 6 paveiksle, kišimasis ERK1 /2 BGC823 ląstelių lėmė sumažėjęs DcR3 baltymų raiškos palyginti su kontroline grupe. Ši tendencija atitinka ERK raiškos lygis 5 paveiksle rodo, kad du yra teigiamai koreliuoja. Be to, DcR3 ir P-ERK ekspresijos lygis sumažėjo, kai ląstelės buvo gydomi įvairių koncentracijų U0126, PD98059 ir APDC. Šie duomenys rodo, kad sekrecijos DcR3 teigiamai koreliuoja su P-ERK1 /2 ekspresijos lygį BGC823 skrandžio ląstelėse. Verta pažymėti, kad U0126 grupės DcR3 sekrecijos lygis padidėjo, kai vaisto koncentracija pasiekė 40 mkmol /L; Tačiau konkretus mechanizmas reikalauja tolesnio tyrimo. Į APDC grupės DcR3 lygiai reikšmingai nepakito koncentracija didesnė nei 20 mkmol /L. 6 paveiksle DcR3 baltymo ekspresija su plazmidžių trukdžių ir inhibitoriaus ELISA tyrimą. A: DcR3 ekspresijos lygis BGC823 kultūros supernatantas sumažėjo, kai ląstelės buvo gydomi ERK1 trukdžių plazmidės. B: DcR3 ekspresijos lygis sumažėjo, kai ląstelės buvo gydomi ERK2 trukdžių plazmidės. C: DcR3 ekspresijos lygis sumažėjo, kai ląstelės buvo gydomi įvairių koncentracijų U0126, PD98059 ir APDC mikromoliai /L
Diskusijos
Buvo įrodyta, kad DcR3 genas yra išreiškiamas žemo lygio į žmogaus embriono, plaučių,. smegenys, kepenys, blužnis, skrandis, žarnos, limfmazgiai ir stuburo smegenų, kadangi buvo išreikštas aukšto lygio vėžio, pavyzdžiui, virškinimo trakto vėžiui, kepenų ląstelių karcinoma ir kasos vėžio [1, 12].
Wu et al.,
[8] pranešė, kad DcR3 išraiška skrandžio vėžiu sergantiems pacientams buvo gerokai didesnis nei normalus. DcR3 išraiška gerai diferencijuota skrandžio vėžiu buvo žymiai mažesnė nei blogai diferencijuotų egzempliorių (p
< 0,05).
DcR3 raiškos lygis buvo reikšmingai susijęs su limfmazgių metastazių ir patologinės etape, bet ne koreliuoja su naviko dydžiu, metastazių ar histologinių tipų. Kai pacientai buvo stebimi iki 63 mėnesių, buvo nustatyta DcR3 raiška turi būti susijęs su žymiai sutrumpintas išgyvenamumas [13, 14].
Daug pranešimų parodė, kad aukštos raiškos lygiai ERK1 /2 glaudžiai koreliuoja su krūties, gaubtinės ir kasos vėžys, taip pat piktybinė melanoma, leukemija ir miksoma [15-18].
Mūsų tyrimas parodė, kad pacientams, sergantiems skrandžio vėžiu, teigiama sergamumas DcR3 ir ERK1 /2 mRNR buvo didesnis nei, kad ne- vėžinių audiniai (P < 0,05). AT-PGR ir imunoblotingu parodė, kad mRNR ir baltymų ekspresijos lygis DcR3 ir ERK1 /2 navikų audiniuose, buvo gerokai didesnis nei tų, ne vėžio audiniuose, o tai rodo, kad DcR3 ir ERK1 /2 lygis koreliuoja su naviko vystymąsi, bet ne su amžiumi , lyties ar diferenciacija (p
> 0,05).
Mūsų rezultatai parodė, kad teigiamas dažnis išraiškos DcR3 ir ERK1 /2 mRNR ir DcR3 ir ERK1 /2 baltymų suderinta tarpusavyje. Į imunohistocheminis rezultatai taip pat parodė, kad skrandžio auglių, ERK1 /2 buvo labai išreikšta.
Chen et al.,
[19] pranešė, kad teigiamas norma DcR3 išraiška buvo 74,4% (32/43) į kepenų ląstelių karcinoma, ir kad ten buvo reikšminga koreliacija tarp DcR3 saviraiškos ir metastazių, taip pat pasikartos ir diferenciacijos.
pelių skrandžio modelis, AT-PGR parodė, kad DcR3 iRNR galima aptikti navikus nuo pirmos dienos šešerių. ERK1 /2 iRNR ir baltymų, taip pat buvo aptikta navikų ir ERK1 lygiai palaipsniui padidėjo skrandžio navikų. Be to, jie taip pat buvo aptikta širdies, kepenų, blužnies, plaučių ir inkstų skrandžio vėžys gyvūno modelio, o tai rodo, kad jie turi svarbų vaidmenį naviko progresavimo. ERK1 /2 iRNR buvo aptiktas nuo pirmos dienos keturių naviko audiniuose, ERK1 iRNR pasiekė apie dieną 10 ERK1 baltymų taip pat gali būti aptikta dieną keturių naviko audiniuose ir toliau didėjo kiekvieną dieną. ERK1 išliko stabilios lygio širdies, kepenų ir inkstų, bet ji sumažėjo plaučių ir blužnies 10-ąją parą, po to, kai pasiekti viršūnę. ERK2 buvo aptikta dviejų dieną blužnies ir navikų audiniuose. Nuo pirmos dienos keturių, ERK2 buvo aptikta visų šešių audinių, ir toliau padidinti iki dieną 12. ERK2 nebūtų galima aptikti širdies, plaučių ir blužnies RT-PGR dieną 12 gyvūnų modeliais, bet gali būti aptiktas baltymo koncentracija. Šie rezultatai rodo, kad ERK1 ir ERK2 gali turėti skirtingą poveikį naviko atsiradimo, plėtros ir klonų plėtra. Daug tyrimų parodė, kad iš ERK1 /2 mRNR ir baltymo ekspresija yra skirtingas auglių ir ląstelių [20, 21]. Kai kuriuose neseniai ataskaitos pasiūlė jie gali būti visiškai priešinga kai kuriais atvejais. Visi autoriai skaityti ir patvirtino galutinį rankraštį.

• MicroRNA-206 slopina skrandžio vėžio ląstelių augimą ir metastazes
• Optimalus režimas trastuzumabo deriniu su oksaliplatina /kapecitabinu pirmos eilės gydymo HER2 teigiamas išplitusiu skrandžio vėžiu (CGOG1001): a daugiacentrėse, II etapas trial