Bedeitung vun decoy receptor 3 (Dcr3) an extern-Signal reegelen kinase 1/2 (Erk1 /2) an gastric cancer

Bedeitung vun decoy receptor 3 (Dcr3) an extern-Signal reegelen kinase 1/2 (Erk1 /2) an gastric Kriibs VerfÜgung méiglech VerfÜgung Background VerfÜgung Decoy receptor 3 (DcR3), e Member vun der entholl necrosis Faktor receptor (TNFR) superfamily, ass verbonne mat anti-entholl excellence Ennerdréckung. Et ass héich an vill erhéijen, ausgedréckt, an hiren Ausdrock kënnt vun der MAPK /MEK /Erk sécher Passerelle reglementéiert gin. D'MAPK /MEK /Erk Passerelle huet gemellt gouf e regulator zu entholl Optriede, Entwécklung an clonal Expansioun ze ginn. Extern-Signal reegelen kinase (Erk) ass eng kruzial Member vun dëser Passerelle. VerfÜgung Resultater VerfÜgung Den Ausdrock vun DcR3 an ERK1 /2 an entholl Stoffer vun gastric Kriibs Patienten war vill méi héich wéi den Net-kriibserreegend Grupp (P
&Si besteet; 0,05). Et gouf kee statistesch Ënnerscheed tëschent entholl Stoffer aus Patienten mat verschiddenen Alters oder Geschlecht, a souguer vu verschiddene dat (P VerfÜgung > 0,05). Mä, ech gastric Kriibs bei Patienten mat Bühn, d'DcR3 an ERK1 /2 Niveauen sech wesentlech méi wéi Patienten mat méi fortgeschratt Etappen. VerfÜgung Konklusiounen VerfÜgung DcR3 an ERK1 /2 eng wichteg Roll an der Entwécklung vun gastric Kriibs Leeschtung, a si kënnen nei lues gin fir besot d'Effizienz vun gastric Kriibs Behandlung an d'Zukunft. VerfÜgung Background VerfÜgung Decoy receptor 3 (DcR3) ass e Member vun der entholl necrosis Faktor receptor (TNFR) superfamily. Et ass fir Sekondär ligand (FasL), LIGHT an TL1A [1-3], och bekannt als TR6 [4] de decoy receptor gewise gin. DcR3 ass meeschtens zu entholl Zellen ausgedréckt an bremst competitively TNF sécher. Overexpression vun DcR3 zu entholl Zellen schützt hinnen aus apoptosis. DcR3 schützt entholl Zellen aus immun Iwwerwaachung wéi et fir d'Ennerdréckung vun de Provider anti-entholl excellence dréit. VerfÜgung DcR3 mRNA an FAQ zu verschiddenen malignant Stoffer Implikatioune sinn, wéi haett Kriibs, Colon Kriibs, gastric Kriibs, oesophageal carcinoma, Bauchspaicheldrüs Kriibs an malignant melanoma [1, 5, 6]. Wu et al. VerfÜgung [7] gemellt dass DcR3 net an Net-entholl Patienten nogewise ginn hätt, mä kéint zu 98,8% (82/83) vu Patienten mat malignant Cancers nogewise ginn. VerfÜgung Dëse Phänomen beweist, datt de Bistum DcR3 Ausdrock ass vill mat tumorigenesis an entholl Werdegang soll. Wu et al. VerfÜgung [8] gemellt dass DcR3 war zu Mënsch gastric Kriibs (GC) héich ausgedréckt, a positiv mat der Entwécklung an Investitiounen vun gastric lesions soll. Gastric Kriibs Patienten mat engem héich DcR3 Ausdrock virgestallt eng méi fortgeschratt pN2-3 Krankheet wéi déi mat engem niddregen DcR3 Ausdrock. VerfÜgung D'DcR3 fir FasL kann an der Werdegang vun gastric Kriibs Équipe ginn. Weider Evaluatioun vun de méiglech Rollen vun DcR3 an d'Regulatioun vun DcR3 Ausdrock vun malignant Zellen ass ganz wichteg fir d'Entwécklung vun neie Strategien fir de Wuesstem vun malignant Zellen kontroléieren datt de Provider immun Iwwerwaachung geflücht. VerfÜgung Um Ufank Etapp, déi MAPK /Erk Passerelle ass am erhéijen ausgeléist, déi fir vill Zorte vun Cancers zu Mënsch e bemierkenswäerte Zeechen ass. Kuerzem, proposéiert e puer Zeilen Beweiser datt Erk spigelt fir en hätt vun verschiddenen Cancers wéi Broscht Kriibs, Colon Kriibs, Bauchspaicheldrüs Kriibs an cholangiocarcinoma ginn hätt. Wang et al. VerfÜgung [9] confirméiert, datt de Begrëff vun ERK1 /2 an cholangiocarcinoma héich war, déi mat der TNM Etappen soll. VerfÜgung Kim et al. VerfÜgung [10] fonnt dass LPe DcR3 release entschlof an Mënsch intestinal epithelial Zellen (IEC), déi wossten via d'Aktivatioun vun mitogen-ageschalt FAQ kinases (MAPK), wéi extracellular Signal-reegelen kinase 1 an 2 (ERK1 /2) an c-Jun NH2-Uschloss FAQ kinase gin ( JNK). LPe-entschlof DcR3 release zu SW480 Zellen war vun ERK1 /2 an JNK inhibitors ofgeschaf. Ausserdeem, Yang et al. VerfÜgung [11] gemellt, dass 3 g /ml DcR3 Ofstand der phosphorylation vun Erk an p38 entschlof. VerfÜgung An Aklang mat dëse Rapporten, proposéieren mir dass DcR3 an ERK1 /2 enk Zesummenhang sinn. D'DcR3 Genen enk mat der Optriede an Entwécklung vun villen Aarte vun erhéijen soll. An dëser Etude propagéieren mir den Ausdrock Niveau an Standuert vun DcR3 an ERK1 /2 an gastric Kriibs Patienten vu verschiddenen Alterskategorien, Geschlecht, Etapp an dat, d'Relatioun tëscht DcR3 /ERK1 /2 an gastric Kriibs Optriede an Entwécklung ze entdecken. Doriwwer eraus, déi mer Suggestioune fir Medeziner Diagnos vun gastric Cancers. VerfÜgung Method VerfÜgung Séminairen Echantillon VerfÜgung Saachen aus gastric Kriibs Patienten goufen déi Bild Fro oder curative Operatiounen am Zhongshan Spidol mat Xiamen Uni laizistesch weiderentwéckelt huet. Entholl Stoffer aus deem DNA an FAQ huet isoléiert sech vun frësch specimen vun resection Agrëff. All Echantillon waren mam Patient Zoustëmmung an Akraafttriede vun de Comité op Medical Ethik vun Zhongshan Hospital Xiamen Universitéit krut. VerfÜgung Mais VerfÜgung All d'Experiment 6-8 Wochen männlech Sauna Mais aus Model Déieren Research Center vun Medical College kaaft standing benotzt Xiamen Universitéit. All d'Déieren sech ënner bestëmmten pathogen gratis Konditiounen mat konstanter Accès zu Waasser a Chow waren. All experimentell Prozedure goufen folgend d'Akraafttriede vun der Comité Déieren Care an Benotzt duerchgefouert vun Xiamen University. VerfÜgung Zell Kultur VerfÜgung De Mënsch Zell gastric Kriibs Linn BGC823 an eiser Labo haten war, déi am Kréi mat Dulbecco d'geännert Eagle d'cultured war mëttel- (DMEM) mat 10% an et Bovine serum (FBS), an 1% penicillin-streptomycin bei 37 ° C an en humidified Atmosphär vu 5% CO2 ergänzt. VerfÜgung Reagents VerfÜgung DMEM, FBS an penicillin-streptomycin kaaft huet aus Hyclone Corporation (Utah, USA). Hematoxylin-a-eosin (H & E) assay Kit sech aus Chemicon International, INC (Temecula, CA, USA) kaaft. ERK1 /2 an DcR3 Abs sech vu Santa Cruz Bio Technologie kaaft. RT-RCR reagents sech aus TaKaRa (Dalian, China) kaaft. D'primer Haaptrei war vun Sangon (Shanghai, China) Wierderbuch. VerfÜgung An VIVO Déier entholl Modeller VerfÜgung Saachen vun intramuscular zu männlech Sauna Mais generéiert goufen (im) Sprëtz vun BGC823 Zellen (1.0 × 105 Zellen zu 100μL PBS) an der rietser Ofwiersäit. Entholl Mesure goufen zu entholl Volumen (V) vun der Formel (L × W2 × 0.52) Euroen, wou L a W d'Längt an Breet sinn, respektiv. Miessungen huet mat enger VERNIER caliper feieren. All entholl-Träger Mais sech zoufälleg an Gruppen (2 Mais /Grupp) agedeelt. VerfÜgung RT-Hinnen alleguer a Western blotting Analyse fir den Ausdrock vun DcR3 /Erk VerfÜgung Total RNS vun DcR3 waat an ERK1 /2 aus stimuléiert ofgebaut gouf Zellen mat Trizol. Erk /DcR3 Gentherapie Kopie Zuel, DNA aus frësch entholl Echantillon war mat RT-Hinnen alleguer analyséiert ze moossen. Den Offloss an afgerappt primers fir ERK1 mRNA sech 5'-CCTGCTCATCAACACCACC-3 'an 5'-CGTAGCCACATACTCCGTCA-3 ", a fir ERK2 mRNA sech 5'-TCTTCC AGCCCTCCTTCCTG-3' an 5'-CGTTTCTGCGCCGTTAGGT-3". D'Echantillon waren déi 35 Zykle vun amplification (; 55 ° C, 45 sec, an 72 ° C, 60 sec 95 ° C, 45 sec) fir 4 min, duerno bei 95 ° C denatured. D'Produite goufen 300-BP an 400-BP Fragmenter bzw.. Fir DcR3 mRNA, war den Offloss primer 5'- GCAAAGCCAAGGATTCCCCCTG -3 "an der afgerappt primer war 5'-GGCACTGCTCTGAGCTGGAGCTG-3". D'Echantillon waren déi 30 Zykle vun amplification (; 55 ° C, 45 sec, an 72 ° C, 60 sec 95 ° C, 45 sec) fir 4 min, duerno bei 95 ° C denatured. De Produit gouf vun engem 921-BP ofgesprengt. VerfÜgung BGC823 Zellen sech zu Zell lysis Prellbock (1% (v /v) Nonidet P-40, 150 mm NaCl, 50 mm Tris-HCl (pH 8) gesammelt an lysed, 1 mM PMSF, 2 g /ml aprotinin, an 2 g /ml leupeptin) déi DcR3 an ERK1 /2 Proteinen release konnt. Twenty-fënnef micrograms vun insgesamt lysate war vun SDS-PAGE fractionated an zu Western blotting Analyse ënnerworf der anti-Erk oder anti-DcR3 MAB- benotzt (Copie 3 H5). VerfÜgung Western blotting an Elisa assay fir den Ausdrock vun DcR3 iweerpréifen /Erk no inhibitors Behandlung VerfÜgung BGC823 Zellen Kultur supernatants sech op verschiddenen Ofschnëtter gesammelt, an Niveau vun U0126, PD98059, APDC, MEK1 /2 an ERK1 /2 Agrëffer goufen benotzt kommerziell Elisa Trikoten laachen, laut der Uweisungen d'Verkeefer. Zellen behandelt mat ERK1 /2 shRNA (5: 2, 6: 2), U0126 /PD98059 (0 μmol /L, 5 μmol /L, 10 μmol /L, 20 μmol /L, 40 μmol /L) an APDC (0 μmol /L, 10 μmol /L, 20 μmol /L, 40 μmol /L, 80 μmol /L), bzw.. No engem 5- oder 7-Dag incubation, goufen Zellen zu der cytokines wéi uginn assay ënnerworf. Twenty-fënnef micrograms vun insgesamt lysate war vun SDS-PAGE fractionated an zu Western blotting Analyse ënnerworf der anti-Erk oder anti-DcR3 MAB- benotzt (Copie 3 H5). VerfÜgung Immunohistochemistry Analyse fir den Ausdrock vun DcR3 an ERK1 /2
entholl Stoffer sech an engem formaldehyde mëttelfristeg fix an paraffin Ënnerbewosstsinn. Sektiounen 6 mm décke sech op Glas drënner schéi pretreated mat 0,1% puer dovun-L-Lysine. Si huet sech duerno an xy-Lene, léif zu graded Ethanol an eenzock an 3% H 2O 2 fir 10 min eliminéiert endogenous peroxidase Aktivitéit deparaffinaged. Next, waren der drënner fir 10 min bei 92-98 ° C an engem Schleck erëm Uewen an citrate Prellbock (pH 6.0) a gekachten dierfen. Duerno huet si 3 Mol mat PBS rinsed fir 10 min all an fir 1 HR bei Raumtemperatur mat 10% normal Geess serum vun PBS gespaart. D'drënner waren déi geklot dann mat der Affinitéit-stilvoller Kanéngchen anti-TR6 Ab (1,67 g /l) bei Raumtemperatur fir 2 HR. Nom Wäschen, goufen d'drënner fir 10 min mat biotinylated Geess-Anti-Kanéngchen antibody incubated. TR6 Signal war vun streptavidin-peroxidase benotzt botzt als Realitéiten no Instruktioune vum Histostain-Plus Kit (Zymed Laboratoiren, South San Francisco, CA) bekannt. DcR3 Signaler waren an brong verroden. Endlech, waren der drënner mat hematoxylin an zouene mat meng Opbau Media (Zymed) counterstained. VerfÜgung statistique Analyse VerfÜgung Data als mengen ± Fils presentéiert goufen. D'Bedeitung vun der Differenz tëschent Gruppe war vun Student`s zwee-tailed T-Test évaluéieren. Wahrscheinlechkeet Wäert vu manner wéi 0,05 war bedeitendst considéréiert. All heescht sech aus op d'mannst dräi onofhängeg Experimenter berechent. VerfÜgung Resultater VerfÜgung Cancer Patienten nik hunn DcR3 Niveauen VerfÜgung der Korrelatioun tëscht DcR3 Ausdrock an entholl Optriede an Entwécklung ze studéieren, erhéijen aus 50 gastric Kriibs Patienten sech gesammelt an getest fir DcR3 mRNA an FAQ Niveauen. Als zu Dorënner 1a gewisen, huet den 921 BP DcR3 Bands vun RT-Hinnen alleguer aus der entholl Stoffer vun meescht Patienten (36/50) entsteet, am Verglach mat den Net-kriibserreegend Stoffer (2/50) vun de selwechten Organer vun deene Patienten. Dës Resultater weisen, datt DcR3 Niveau bedeitend eropzesetzen (aacht Borschte Medeziner Echantillon sinn zu Dorënner 1a gewisen). Fir weider eis Resultater confirméieren, goufen d'DcR3 FAQ Niveau vum südwestlechen blotting iwwerpréift. D'Resultater weisen, datt DcR3 FAQ am meeschte Kriibs Patienten nogewise ginn hätt; DcR3 FAQ war zu 74% (37/50) vun der entholl Stoffer fonnt, mä nëmmen zu 6% (3/50) vun de Net-kriibserreegend Stoffer (Table 1 an Dorënner 1b; aacht Borschte Medeziner Echantillon sinn zu Dorënner 1b dës ). Figur 1 Den Ausdrock vun DcR3 zu gastric Kriibs an Net-kriibserreegend analyséiert Stoffer vun RT-Hinnen alleguer (Figure1a) a Western blotting (Figure1b). engem: Lane M, DNA lues; lanes1-7, entholl Stoffer; Geschäftswelt 8, Net-kriibserreegend Stoffer; DcR3 mRNA war positiv an 36 vun 50 entholl Stoffer (1-7) an negativ an Net-kriibserreegend Stoffer (8). b: lanes1-7, entholl Stoffer; Geschäftswelt 8, Net-kriibserreegend Stoffer. DcR3 FAQ war positiv an 37 vun 50 Echantillon vun entholl Otemschwieregkeeten (1-7), déi nëmmen 3 vun 50 an Net-kriibserreegend Stoffer (8). VerfÜgung Table 1 Analys vun gastric Kriibs Patienten mat DcR3 an ERK1 /2 Ausdrock vun VerfÜgung entholl an normal Stoffer VerfÜgung Cases
positiv Zuel
positiv Tarif (%)
entholl VerfÜgung 50 VerfÜgung mRNA
Protein VerfÜgung + /+ VerfÜgung mRNA VerfÜgung Protein VerfÜgung + /+ VerfÜgung DcR3 VerfÜgung 36 zu 37 zu 28 VerfÜgung 72,0 VerfÜgung 74,0 VerfÜgung 56,0 VerfÜgung ERK1 VerfÜgung 37 zu 42 zu 36 VerfÜgung 74,0 VerfÜgung 84,0 VerfÜgung 72,0 VerfÜgung P VerfÜgung > 0,05 VerfÜgung ERK2 VerfÜgung 32 zu 37 zu 27 VerfÜgung 64,0 VerfÜgung 74,0 VerfÜgung 54,0 VerfÜgung Non-kriibserreegend VerfÜgung 50 VerfÜgung DcR3 VerfÜgung 2 VerfÜgung 3 VerfÜgung 0 VerfÜgung 4.0 VerfÜgung 6.0 VerfÜgung 0 VerfÜgung ERK1 VerfÜgung 6 VerfÜgung 5 zur VerfÜgung 1 VerfÜgung 12,0 VerfÜgung 15,0 VerfÜgung 2.0 VerfÜgung ERK2
9 bis 10 VerfÜgung 3 VerfÜgung 18,0 VerfÜgung 20,0 VerfÜgung 6.0 VerfÜgung Expression vun ERK1 /2 an Séminairen Echantillon VerfÜgung der sécher Molekülle zu DcR3, den Ausdrock Niveau vun Zesummenhang ze identifizéieren ERK1 /2, JNK an p38 getest. Mir hu fonnt, datt nëmmen ERK1 /2 konnt an entholl Echantillon nogewise ginn (Daten net fir JNK an p38 gewisen). ERK1 mRNA war zu 74% vun der Echantillon (37/50) fonnt, an ERK2 mRNA war zu 64% vun der Echantillon fonnt (32/50; Table 1 an Dorënner 2a). Op d'FAQ Niveau, war ERK1 zu 84% fonnt (42/50) an ERK2 zu 74% (37/50) vun der entholl Stoffer (Table 1 an Dorënner 2b). Dës Resultater weg dass Patienten mat gastric Kriibs erhéijen hunn eng héich ERK1 /2-positiv Optriede Verglach mat den Net-kriibserreegend Stoffer (P VerfÜgung &Si besteet; 0,05). Et war e positive Korrelatioun tëscht der mRNA an FAQ Niveauen, wéi zu 42 vun 50 entholl war d'ERK1 FAQ Stoffer nik, vun deenen 36 Fäll konsequent mat der mRNA Ausdrock goufen. Am Géigesaz, war ERK1 FAQ Ausdrock nëmmen an fënnef normal Stoffer fonnt. Wann ERK2 iweerpréifen, 37 vun 50 Fäll vun entholl Stoffer sech fir ERK2 FAQ Ausdrock positiven, vun deenen 27 Fäll mat der ERK2 mRNA Ausdrock konsequent waren, iwwerdeems nëmmen zéng Fäll zu normal Stoffer positive FAQ Ausdrock gewisen. Der aacht Borschte Echantillon sinn zu Dorënner 2. Dorënner 2 d'Expressioun vun ERK1 /2 an gastric Kriibs an Net-kriibserreegend Stoffer vun RT-Hinnen alleguer (Dorënner 2a) a Western blotting (Dorënner 2b) analyséiert dës. engem: Lane M, DNA lues; lanes1-7, entholl Stoffer; Geschäftswelt 8, Net-kriibserreegend Stoffer; ERK1 an ERK2 mRNA sech zu entholl Stoffer positiv. b:. ERK1 an ERK2 FAQ zu entholl Stoffer positiv huet (1-8) VerfÜgung Location vun ERK1 /2 an gastric Kriibs Patienten VerfÜgung Fir ERK1 /2 Distributioun, erhéijen vun 50 Patiente getest goufen duerch immunohistochemistry ënnersicht. D'Resultater weisen, datt ERK1 /2 an entholl Stoffer ausgedréckt huet aus meescht vun de Patienten. ERK1 Ausdrock war an der Zytoplasma fonnt. ERK2 positiven Ausdrock war zu puer entholl Zellen (Dorënner 3) fonnt. Figur 3 D'Lag vun ERK1 /2 FAQ zu gastric Kriibs vun immunohistochemistry analyséiert get. A: Control, B: ERK1, C:. ERK2 VerfÜgung DcR3 an ERK1 /2 Niveauen vergläichen mat entholl Invasioun awer net mat Alter, Geschlecht oder dat VerfÜgung De positiven Heefegkeet vun DcR3 mRNA zu entholl Stoffer vun gastric Kriibs Patienten war 72,0% (36/50), a vun DcR3 FAQ 74,0% (37/50), déi ewéi vill méi héich war an Net-kriibserreegend Stoffer nëmmen 4% iwwerdriwwener (2/50) a 6% (3/50), bzw. ( P VerfÜgung &Si besteet; 0,05; Table 1). De positiven Optriede vun ERK1 /2 mRNA Ausdrock war 74,0% (37/50) an 64,0% (32/50), a vun FAQ Ausdrock 84,0% (42/50) an 74,0% (37/50). Zwee vun hinnen waren vill méi héich wéi den Net-kriibserreegend Stoffer, weist 12,0% (6/50) an 18,0% (9/50), an 10.0% (5/50) an 20,0% (10/50), bzw. (Table 1). Dës Resultater hindeit, datt DcR3 an ERK1 /2 Ausdrock Niveauen mat entholl Optriede an Entwécklung soll. VerfÜgung Als zu Bedeitung dës 2, 3 a 4, gouf et keen groussen Ënnerscheed tëscht entholl Stoffer aus verschiddenen Alterskategorien, Geschlecht Gruppen a Patienten mat verschiddene dat Etappe vun gastric Kriibs (P VerfÜgung > 0,05). Allerdéngs goufen DcR3 an ERK1 /2 Ausdrock Niveauen vill héich zu TNM Etapp II-IV (Table 5). Sou, soll der Ausstralung vun DcR3 an ERK1 /2 mat entholl Invasioun an TNM Etapp, mee net mam Alter, Geschlecht oder differentiation.Table 2 Korrelatioun vun Ausdrock vun DcR3 an ERK1 /2 mat Alter vun gastric Kriibs Patienten
Fäll
positiv Zuel
positiv Tarif (%)
≥50 VerfÜgung 32 VerfÜgung mRNA VerfÜgung Protein VerfÜgung + /+
mRNA VerfÜgung Protein VerfÜgung + /+ VerfÜgung DcR3 VerfÜgung 25 zu 28 zu 21 VerfÜgung 78,1 VerfÜgung 87,5 VerfÜgung 65,6 VerfÜgung ERK1 VerfÜgung 28
31 zu 26 VerfÜgung 87,5 VerfÜgung 96,9 VerfÜgung 81,2 VerfÜgung P VerfÜgung > 0,05 VerfÜgung 20 zu 22 zu 16 VerfÜgung 62,5 VerfÜgung 68,8 VerfÜgung 50,0 VerfÜgung &Si besteet VerfÜgung ERK2; 50 zu 18 VerfÜgung DcR3 VerfÜgung 11 VerfÜgung 9 VerfÜgung 5 zur VerfÜgung 61,1 VerfÜgung 50,0 VerfÜgung 27,8 VerfÜgung ERK1 VerfÜgung 13 zu 11 VerfÜgung 5 zur VerfÜgung 72,2 VerfÜgung 61,1 VerfÜgung 27,8 VerfÜgung ERK2
12 zu 15 VerfÜgung 6 VerfÜgung 66,7 VerfÜgung 83,3 VerfÜgung 33,3 VerfÜgung Table 3 Korrelatioun vun Ausdrock vun DcR3 an ERK1 /2 mat Geschlecht an VerfÜgung gastric Kriibs Patienten VerfÜgung Cases
positiv Zuel
positiv Tarif (%)
Männlech VerfÜgung 39 VerfÜgung mRNA VerfÜgung Protein VerfÜgung + /+ VerfÜgung VerfÜgung mRNA Protein VerfÜgung + /+ VerfÜgung DcR3 VerfÜgung 29 zu 29 zu 24 VerfÜgung 74,4 VerfÜgung 74,4 VerfÜgung 61,5 VerfÜgung ERK1 VerfÜgung 32 VerfÜgung VerfÜgung 35 28 VerfÜgung 82,1 VerfÜgung 89,7 VerfÜgung 71,8 VerfÜgung P VerfÜgung > 0,05 VerfÜgung 26 zu 30 zu 23 VerfÜgung 66,7 VerfÜgung 76,9 VerfÜgung 59.0 VerfÜgung Weiblech
ERK2 11 VerfÜgung DcR3 VerfÜgung 7 VerfÜgung 8
5 zur VerfÜgung 63,6 VerfÜgung 72,7 VerfÜgung 45,6 VerfÜgung ERK1 VerfÜgung 9 VerfÜgung 7 VerfÜgung 6 VerfÜgung 81,8 VerfÜgung 63,6 VerfÜgung 54,5 VerfÜgung ERK2 VerfÜgung 6 bis 7 VerfÜgung 4 VerfÜgung 54,6 VerfÜgung 63,6 VerfÜgung 36,4 VerfÜgung Table 4 Korrelatioun vun Ausdrock vun DcR3 an ERK1 /2 mat entholl dat am gastric Kriibs Patienten
Cases
positiv Zuel
positiv Tarif (%)
Ma VerfÜgung 9 VerfÜgung mRNA VerfÜgung Protein VerfÜgung + /+ VerfÜgung mRNA VerfÜgung Protein VerfÜgung + /+ VerfÜgung DcR3 VerfÜgung 7 VerfÜgung 7 VerfÜgung 5 zur VerfÜgung 77,8 VerfÜgung 77,8 VerfÜgung 55,6 VerfÜgung ERK1 VerfÜgung 7 VerfÜgung 9 VerfÜgung 6 VerfÜgung 77,8 VerfÜgung 100,0 VerfÜgung 66,7 VerfÜgung P VerfÜgung > 0,05 VerfÜgung ERK2 VerfÜgung 6 VerfÜgung 7 VerfÜgung 5 zur VerfÜgung 66,7 VerfÜgung 77,8 VerfÜgung 55,6 VerfÜgung Mëttelméisseg VerfÜgung 28 VerfÜgung DcR3 VerfÜgung 21 zu 23
20 VerfÜgung 75,0 VerfÜgung 82,1 VerfÜgung 71,4 VerfÜgung ERK1 VerfÜgung 24 zu 24 zu 22 VerfÜgung 85,7 VerfÜgung 85,7 VerfÜgung 78,6 VerfÜgung ERK2 VerfÜgung 19 zu 24 zu 17 VerfÜgung 67,9 VerfÜgung 85,7 VerfÜgung 60,7 VerfÜgung Low VerfÜgung 13 VerfÜgung DcR3 VerfÜgung 8 VerfÜgung 7 VerfÜgung 5 zur VerfÜgung 61,5
53,9 VerfÜgung 38,5 VerfÜgung ERK1 VerfÜgung 10 VerfÜgung 9 VerfÜgung 8 VerfÜgung 76,9 VerfÜgung 69,2 VerfÜgung 61,5 VerfÜgung ERK2 VerfÜgung 7 VerfÜgung 6 VerfÜgung VerfÜgung 5 53.9 VerfÜgung 46,2 VerfÜgung 38,5 VerfÜgung Table 5 Korrelatioun vun Ausdrock vun DcR3 an ERK1 /2 mat pathologic Etappe vun entholl zu gastric Kriibs Patienten VerfÜgung TNM Etapp
Cases
zu positiv Zuel
positiv Tarif (%)
ech VerfÜgung 6 VerfÜgung mRNA VerfÜgung Protein VerfÜgung + /+ VerfÜgung mRNA
Protein VerfÜgung + /+ VerfÜgung DcR3 VerfÜgung 1 zu 1 zu 1 VerfÜgung 16,7 VerfÜgung 16,7 VerfÜgung 16,7 VerfÜgung ERK1 VerfÜgung 2 VerfÜgung 2
1 VerfÜgung 33,3 VerfÜgung 33,3 VerfÜgung 16,7 VerfÜgung P VerfÜgung > 0,05 VerfÜgung ERK2 VerfÜgung 1 zu 1 VerfÜgung 0 VerfÜgung 16,7 VerfÜgung 16,7 VerfÜgung 0,0 VerfÜgung II VerfÜgung 17 VerfÜgung DcR3 VerfÜgung 12 zu 13
10 VerfÜgung 70,6 VerfÜgung 76,5 VerfÜgung 58,8 VerfÜgung ERK1 VerfÜgung 14 zu 14 zu 11 VerfÜgung 82,4 VerfÜgung 82,4 VerfÜgung 64,7 VerfÜgung P VerfÜgung > 0,05 VerfÜgung 10 zu 12 VerfÜgung 9 VerfÜgung 58,8 VerfÜgung 70,6 VerfÜgung 52,9 VerfÜgung III VerfÜgung 25 VerfÜgung ERK2 VerfÜgung DcR3 VerfÜgung 21 zu 21
21 VerfÜgung 84,0 VerfÜgung 84,0 VerfÜgung 84,0 VerfÜgung ERK1 VerfÜgung 23 zu 24 zu 22 VerfÜgung 92,0 VerfÜgung 96,0 VerfÜgung 88,0 VerfÜgung P VerfÜgung > 0,05 VerfÜgung ERK2 VerfÜgung 20 zu 23 zu 18 VerfÜgung 80,0 VerfÜgung 92,0 VerfÜgung 72,0 VerfÜgung IV VerfÜgung 2 VerfÜgung DcR3 VerfÜgung 2 VerfÜgung 2
2 VerfÜgung 100,0 VerfÜgung 100,0 VerfÜgung 100,0 VerfÜgung ERK1 VerfÜgung 2 VerfÜgung 2 VerfÜgung 2 VerfÜgung 100,0 VerfÜgung 100,0 VerfÜgung 100,0 VerfÜgung P VerfÜgung > Well dës 0,05 VerfÜgung ERK2 VerfÜgung 1 zu 1 zu 1 VerfÜgung 50,0 VerfÜgung 50,0 VerfÜgung 50,0 VerfÜgung Expression Niveau vun DcR3 an ERK1 /2 sinn zu Déiereschutz Modeller VerfÜgung Implikatioune zu Table 6, no BGC823 Zellen an der rietser Ofwiersäit vun der Sauna Mais iergendee, opgewues der erhéijen all Dag. RT-Hinnen alleguer war benotzt DcR3 an ERK1 /2 mRNA Niveauen an der erhéijen a westlech blot Analyse ze Test war benotzt FAQ Niveauen ze iwwerpréifen. An gastric Kriibs Déier Modeller, DcR3, ERK1 an ERK2 sech um 921 BP, 300 BP an 400 BP fonnt, bzw.. An dës entholl Stoffer war DcR3 mRNA vum Dag erwëscht sechs, erreecht op Daag 10, a blouf op Dag erwëscht 12. DcR3 och vum Dag sechs bis Dag 12 an Liewer nogewise gouf, wann et nëmmen op den Dag 12 zu Häerz an haett fonnt gouf ( Figur 4A). ERK1 /2 mRNA Ausdrock sech aus Dag véier an entholl Stoffer fonnt, an ERK1 mRNA erreecht op Daag 10 (Dorënner 4A an Table 7) .Table 6 Gewiicht vun BGC823 entholl an Sauna Maus (x ± den, n = 6) VerfÜgung Group
Δ Gewiicht /mg
2 d
4d
6d
8D
10 d
12 d
Normal VerfÜgung - VerfÜgung - VerfÜgung - VerfÜgung - VerfÜgung - VerfÜgung - VerfÜgung Model VerfÜgung 0. 47 ± 0. 17 △ VerfÜgung 0. 77 ± 0. 28 △ VerfÜgung 1. 01 ± 0. 39 △ VerfÜgung 1. 43 ± 0. 79. △ VerfÜgung 1. 65 ± 0. 68 △ VerfÜgung 1. 46 ± 0. 66 △ VerfÜgung Opgepasst: △ P VerfÜgung &Si besteet; 0,01 vs VerfÜgung normal; ** P VerfÜgung &Si besteet; 0,01 vs VerfÜgung Modell. VerfÜgung Table 7 Expression vun DcR3 an ERK1 /2 mRNA zu entholl Stoffer vum Déier Modeller vun RT-Hinnen alleguer VerfÜgung analyséiert
2d

4d

6d

8d

10d

12d

DcR3
—
—
+
+
++
++
ERK1
—
+
+
+
++
++
ERK2
—
+
+
+
+
+
Figur 4 Den Ausdrock vun DcR3 an ERK1 /2 an Maus Modeller analyséiert vun RT-Hinnen alleguer (Figur 4A) a Western blotting (Figur 4B). engem: Lane M, DNA Tandel; lanes1-6, Häerzer, livers, spleens, Longen, Nier an entholl Stoffer vun Maus Modeller op de véierten Dag; lanes7-12, déi op der aachte Dag; lanes13-18, op den ultimative Dag; ERK1 mRNA war positiv an lane2,8,9,12,14,15,18, war ERK2 mRNA positiv zu lane1,2,6,9,10,12,13,14,15,17,18. DcR3 mRNA war zu lane8 fonnt, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18. b: Geschäftswelt 1, Häerz; lane2, Liewer; lane3, Mëlz; lane4, haett; lane5, Nier; lane6, entholl Stoffer; Den Ausdrock vun ERK1 FAQ zu entholl Stoffer sech den Ament op gaangen, am Häerz, Liewer an Niere persisted fir 12 Deeg, den Ausdrock vun ERK2 zu Mëlz an entholl aus dem zweeten Dag kéint erwëscht déi am entholl Stoffer bis de véierten Dag positiv war an all vu fënnef Organer un der Runenzeechen Dag. Den Ausdrock vun DcR3 FAQ war positiv an entholl Stoffer a Liewer op de sechsten Dag an zu Mëlz op der zéngter Dag, deen zu Häerz, haett, Nier bis den ultimative Dag negativ war. VerfÜgung DcR3 FAQ war op den Dag sechs zu entholl fonnt Stoffer a Liewer, an den Ausdrock bis Dag 12. DcR3 FAQ op den Dag 10 an Mëlz a vum Dag 12 am Häerz, Niere haett festgestallt gouf. ERK1 FAQ war op den Dag véier an entholl Stoffer fonnt, a weider all Dag ze erhéijen. ERK1 FAQ blouf bei engem stabilen Niveau am Häerz, Liewer an Niere, mä et ofgeholl an haett an Mëlz op den Dag 10, no der Héichpunkt Erréchen. ERK2 war op den Dag zwee vun Mëlz an entholl Stoffer fonnt. Vun Dag véier, war ERK2 FAQ zu all sechs Echantillon fonnt, a weider bis Dag gestiermt 12. Des Resultater hindeit, datt ERK1 an ERK2 vläicht verschidden Effeten op entholl Optriede, Entwécklung an clonal Expansioun hunn. VerfÜgung DcR3 Ausdrock ofgeholl no der inhibiting Ausdrock oder phosphorylation vun ERK1 /2 an BGC823 Zellen VerfÜgung den Effet vun ERK1 /2 Ausdrock an phosphorylation op DcR3 Ausdrock ze ermëttelen, huet BGC823 Zellen mat ERK1 /2 shRNA oder mat inhibitors behandelt datt speziell d'Erk Passerelle regléieren. Western blot Analys confirméiert, datt d'inhibitors effizient der phosphorylation vun der MEK /Erk Passerelle Molekülle blockéiert, an datt d'shRNA reduzéiert bedeitend dem Wëllen vun ERK1 /2 (Dorënner 5). Als zu Dorënner 5A gewisen, wou BGC823 Zellen behandelt goufen Fro mat ERK1 /2 shRNA, ERK1 /2 an P-ERK1 /2 Niveauen mat der Kontroll Verglach. Figur 5 Den Ausdrock vun ERK1 /2 an P-ERK1 /2 an BGC823 Zell Linn mat plasmid Amëschen an inhibitor vun Western blotting fonnt. en: Den Ausdrock Niveau vun ERK1 /2 an P-ERK1 /2 'Fro mat der Kontroll Verglach. 1) Kontroll Grupp; 2) 5: 2 (plasmid: reagent); 3) 6: 2 (plasmid: reagent). b: ERK1 /2 phosphorylation Fro lues wéi d'Konzentratioun vun der inhibitor U0126, PD98059 fräi, mä total ERK1 /2 FAQ Ausdrock kaum geännert. 1) 0 μmol /L; 2) 5 μmol /L; 3) 10 μmol /L; 4) 20 μmol /L; 5) 40 μmol /L. c: ERK1 /2 phosphorylation Fro lues wéi d'Konzentratioun vun der inhibitor APDC. 1) 0 μmol /L; 2) 10 μmol /L; 3) 20 μmol /L; 4) 40 μmol /L; 5) 80 μmol /L. d: PD98059 kann selbstverständlech inhibit der MEK1 /2 phosphorylation Niveau, mä et huet net MEK1 /2 oder NF-κB Ausdrock Niveauen ofzeänneren. 1) 0 μmol /L; 2) 5 μmol /L; 3) 10 μmol /L; 4) 20 μmol /L; 5) 40 μmol /L. VerfÜgung U0126 ass eng ganz effikass MEK inhibitor geplatzt an d'inhibition vun Erk phosphorylation, wéi PD98059 heescht. Erk phosphorylation Fro lues wéi d'Konzentratioun vun den Drogen sech, obwuel total ERK1 /2 FAQ Ausdrock kaum geännert (Dorënner 5B). VerfÜgung APDC kënnt zu enger Rei vun Zellen NF-κB Zell Aktivéierung inhibit. Duerch de ofgeschnidden vun IκB, kann APDC der br vun NF-κB erofgoen, also NF-κB Aktivéierung erauszesichen. Als zu Dorënner 5 C, dës Distanz ënnert verschiddene Konzentratioune vun APDC, Änneren de Niveau vun NF-κB inhibition kann ERK1 /2 phosphorylation Niveau bedeitend attenuate. Allerdéngs, verlaangt de spezifeschen Mechanismus weider Enquête. VerfÜgung Fir d'Wierkung vun dësen inhibitors an shRNA op DcR3 Ausdrock kontrolléiere mir Elisa Analyse benotzt, déi bewisen, dass secreted DcR3 an der supernatant rofgaang ass no der aner Behandlungen (Dorënner 6). Statistesch Analyse gewisen, datt DcR3 secretion Niveau tëscht der Experimenter Gruppen a Kontroll Gruppen vill verschidde waren (P VerfÜgung &Si besteet; 0,05). Als zu Dorënner 6 gewisen, Amëschen mat ERK1 /2 an BGC823 zu ofgeholl DcR3 FAQ Ausdrock gefouert Zellen mat der Kontroll Grupp Verglach. Den Trend Mätscher de Erk Ausdrock Niveau vun Dorënner 5 a beweist, datt déi zwee sinn positiv soll. Ausserdeem, ofgeholl DcR3 a P-Erk Ausdrock Niveauen wann Zellen mat verschiddene Konzentratioune vun U0126, PD98059 an APDC behandelt goufen. Dës Donnéeë beweist dass secretion vun DcR3 positiv soll mat P-ERK1 /2 Ausdrock Niveauen am BGC823 gastric Zellen. Et ass Bandmembere datt an der U0126 Grupp, fräi DcR3 secretion Niveauen wann der Drogenofhängeger Konzentratioun 40 μmol /L erreecht; Ee, verlaangt de spezifeschen Mechanismus weider Enquête. An der APDC Grupp, änneren DcR3 Niveauen am Konzentratioune vill net méi héich wéi 20 μmol /L. Figur 6 Den Ausdrock vun DcR3 FAQ mat plasmid Amëschen an inhibitor vun Elisa Analyse. engem: DcR3 Ausdrock Niveauen am BGC823 Kultur supernate ofgeholl wann Zellen mat ERK1 Amëschen plasmid behandelt goufen. b: DcR3 Ausdrock Niveau ofgeholl wann Zellen mat ERK2 Amëschen plasmid behandelt goufen. c: DcR3 Ausdrock Niveau ofgeholl wann Zellen mat verschiddene Konzentratioune vun U0126, PD98059 an APDC μmol /L behandelt goufen VerfÜgung Diskussioun VerfÜgung Et bewisen ass, dass d'DcR3 Gentherapie op engem niddregen Niveau an mënschlechen Embryo ausgedréckt ass, haett,. Gehir, Liewer, Mëlz, Mo, Colon, lymph Wirbelen a kommerziell Golddrot hierkommen, et war am Cancers wéi gastrointestinal Kriibs, hepatocellular carcinoma an pancreatic Kriibs [1, 12]. VerfÜgung Wu et al op engem héijen Niveau ausgedréckt.
[8] confirméiert, datt de Begrëff vun DcR3 zu Patienten gastric Kriibs bedeitend méi héich wéi normal ass. DcR3 Ausdrock an d'Gutt-ënnerscheet gastric Kriibs war vill méi niddereg wéi dat vun Pro ënnerscheet uplanzen (P VerfÜgung &Si besteet; 0,05). VerfÜgung Den Niveau DcR3 Ausdrock war vill mat lymph Node Metastasen an agebousst Etapp verbonnen, mee vergläichen net mat entholl Gréisst, metastatic Status, oder histological Typen. Wann Patienten gefollegt-up sech fir 63 Méint, war DcR3 overexpression fonnt mat enger vill verkierzt Iwwerliewe Taux verbonne ginn [13, 14]. Vill Rapporten VerfÜgung hu gewisen, datt héich Ausdrock Niveau vun ERK1 /2 enk mat Broscht, colorectal soll an pancreatic Kriibs, souwéi malignant melanoma, Leukämie an myxoma [15-18]. VerfÜgung Eis Fuerschung gewisen datt bei Patienten mat gastric Kriibs, déi positiv Heefegkeet vun DcR3 an ERK1 /2 mRNA war méi héich wéi déi vun der Net- kriibserreegend Stoffer (P &Si besteet; 0,05). RT-Hinnen alleguer a westlech blotting gewisen, datt d'mRNA an FAQ Ausdrock Niveau vun DcR3 an ERK1 /2 an entholl Stoffer wéi déi vill méi héich waren an Net-Kriibs Stoffer, suggeréiert datt DcR3 an ERK1 /2 Niveauen mat entholl Entwécklung vergläichen awer net mam Alter , Geschlecht oder dat (P VerfÜgung > 0,05). Eis Resultater VerfÜgung gewisen, datt de positive Heefegkeet vun Ausdrock vun DcR3 an ERK1 /2 mRNA an DcR3 an ERK1 /2 FAQ all aner iwwereneestëmmen. D'immunohistochemistry Resultater bewisen, och dat an gastric erhéijen, ERK1 /2 war absolut ausgedréckt. VerfÜgung Chen et al. VerfÜgung [19] confirméiert datt den positiven Taux vun DcR3 Ausdrock 74,4% huet (32/43) an hepatocellular carcinoma, an datt et e wesentleche Korrelatioun tëscht DcR3 Ausdrock an Metastasen wéi och um Terrain, an dat war. VerfÜgung an der Maus gastric Modell, RT-Hinnen alleguer gewisen datt DcR3 mRNA zu erhéijen vum Dag sechs nogewise ginn hätt. ERK1 /2 mRNA an FAQ goufen och zu erhéijen fonnt, an ERK1 Niveauen am gastric erhéijen lues fräi. Doriwwer eraus, huet se och zu Häerz, Liewer, Mëlz, haett an Niere vun der gastric Kriibs Déier Modell fonnt, proposéiert, datt se eng wichteg Roll am entholl Werdegang hunn. ERK1 /2 mRNA war vum Dag véier an entholl Stoffer fonnt, an ERK1 mRNA erreecht wollt wëssen 10. ERK1 FAQ och op Dag véier an entholl Stoffer nogewise ginn hätt, an weider all Dag ze erhéijen. ERK1 blouf bei engem stabilen Niveau am Häerz, Liewer an Niere, mä et ofgeholl an haett an Mëlz op den Dag 10, no der Héichpunkt Erréchen. ERK2 war op den Dag zwee vun Mëlz an entholl Stoffer fonnt. Vun Dag véier, war ERK2 zu all sechs Stoffer fonnt, a weider bis Dag 12. ERK2 ze klammen net zu Häerz, haett an Mëlz vun RT-Hinnen alleguer op den Dag 12 an Déier Modeller fonnt ginn hätt, mä FAQ Niveauen nogewise ginn hätt. Dës Resultater hindeit, datt ERK1 an ERK2 vläicht verschidden Effeten op entholl Optriede, Entwécklung an clonal Expansioun hunn. Vill Studien uginn, datt de Begrëff vun ERK1 /2 mRNA an FAQ zu verschiddene erhéijen an Zellen schwankt [20, 21]. Puer rezent Rapporten ugeholl si an e puer Fäll ganz Géigendeel kéint. All Auteuren liesen an guttgeheescht der Finale mëttelalterlech Handschrëft. VerfÜgung

• MicroRNA-206 Hien gastric Kriibs Zell Wuesstem an Metastasen
• Optimal regimen vu Stad a Kombinatioun mat oxaliplatin /capecitabine am éischte-Linn Behandlung vun HER2-positiv fortgeschratt gastric Kriibs (CGOG1001): e multicenter, Phase II Prozess