Upptäckt av indikator och icke-sentinel lymfkörtelmikrometastaser av fullständig seriell sektionering och immunhistokemisk analys för gastric cancer

detektering av indikator och icke-sentinel lymfkörtelmikrometastaser genom fullständig seriell sektionering och immunhistokemisk analys för magcancer Bild Sammanfattning
Bakgrund
Vi undersökte förekomsten och fördelningen av sentinel och de icke-sentinel node mikrometastaser med hjälp av fullständig seriesnittning och immunhistokemisk färgning (IHC), för att inspektera om lymfkörtelmikrometastaser spridit sig till sentinel lymfkörtlar först.
metoder
A totalt 35 patienter, som genomgick gastrektomi med en sentinel lymfkörtelbiopsi för magcancer, var inskrivna i denna studie. Totalt 1028 lymfkörtlar 35 patienter med magcancer utan metastas av lymfkörtel genom permanent avsnitt med hematoxylin och eosin färgning (H & E) valdes. Det fanns 252 sentinel nodes och andra 776 var icke-sentinel nodes. Alla noder sektionerades i serie och färgades växelvis med H & E och IHC. Lymfkörtelmikrometastaser definierades som visat sig vara positiva först antingen IHC eller hela seriesnittning.
Resultat
mikrometastaser påvisades i fyra (11%) av de 35 patienter, 6 (0,58%) av 1028 noder. Av dessa 4 patienter, tre hade mikrometastaser enbart i sentinel nodes, och den andra hade mikrometastas i båda sentinel och icke-sentinel nodes. Det fanns ingen patient som hade micrometasitases endast i icke-sentinel nodes.
Slutsats
Dessa resultat stöder konceptet att lymfkörteln mikrometastas av magcancer sprider först mot indikator noder.
Bakgrund
Prognosen för patienter med magcancer påverkas primärt av närvaron av lymfkörtelmetastaser. Lymfkörtelmetastaser i gastric patienter med submukosala invasion cancer förekommer i 15 till 20% av patienterna; därför kan en lymfkörtel dissektion vara onödigt för de återstående 80 till 85% av patienterna [1]. En noggrann och tillförlitlig indikator för att förutsäga frånvaro av lymfkörtelmetastaser skulle eliminera många onödiga lymphadenectomies [1]. Därför är en preoperativ och korrekt diagnos av lymfkörtelmetastaser fortfarande viktigt [2-4]. En sentinel node biopsi för magcancer är en intraoperativ diagnostisk metod för att detektera lymfkörtelmetastaser [5-7]. År 1992, Morton et al. [8] infördes tekniken med intraoperativ färgämne injektion på platsen för melanom för att identifiera "sentinel" nod, som är den första noden att de afferenta lymfkärlen ange från tumörstället. Miwa et al. [7, 9] användes denna typ av färgämne kartläggning teknik för att identifiera sentinel nodes av magcancer, och redovisade ett högt positivt prediktivt värde och noggrannhet för sentinel node biopsi av magcancer tidigt. Å andra sidan, är närvaron av en mikrometastas i en lymfkörtel en allvarlig fråga för den kliniska tillämpningen av sentinel node biopsy för magcancer tidigt. Lymfkörtelmikrometastaser har påträffats hos patienter fast beslutna att vara nodnegativ genom rutinmässig histologisk undersökning. Tidigare forskare har rapporterat att lymfkörtelmikrometastaser kunde detekteras med hjälp av steg snitt, immunhistokemisk färgning och omvänt transkriptas-polymeraskedjereaktion [10-12]. Det har dock förekommit några rapporter om fördelningen av mikrometastaser i både indikator och icke-sentinel nodes i nod-negativ gastric cancerpatienter genom rutinmässig histologisk undersökning [13-15].
I denna studie, retrospektiva undersökningar vi förekomst och utbredning av sentinel och icke-sentinel node mikrometastaser med hjälp av fullständig seriesnittning och immunhistokemisk färgning. Dessa teknik är de mest exakta metoder för att upptäcka mikrometastaser i noder, så att vi kunde avgöra om lymfkörtelmikrometastaser hade spridit sig till sentinel lymfkörtlar först.
Metoder Review, en sentinel lymfkörtel (SLNs) biopsi för magcancer utfördes på 243 patienter vid Institutionen för gastroenterologi kirurgi, Kanazawa Universitetssjukhuset från 1993 till 2002. Innan sentinel node biopsi utfördes, var skriftligt informerat samtycke erhållits i enlighet med de etiska normer i utskottet för mänskliga experiment i Kanazawa University Hospital. Av dessa patienter inskrivna vi 35 som hade en cancer som hade invaderat till submukosa eller muscularis propria och hade ingen lymfkörtel metastas genom rutinmässig histologisk undersökning för denna studie. Ingen av patienterna hade fått preoperativ kemoterapi eller strålbehandling. Baserat på den japanska Klassificering av magcancer, alla 35 patienter genomgick en sentinel node biopsi följt av konventionell lymfkörtlar för back-up dissektion [16]. Totalt 1028 lymfkörtlar avlägsnades från 35 patienter. Av dessa 252 lymfkörtlar var SLNs och andra 776 var icke-SLNs. Alla 252 SLNs var negativa för metastaser både på intraoperativ fryst sektion undersökning och permanent avsnitt med hematoxylin och eosin färgning (H & E). De andra 776 noder var negativa för metastaser på histologisk undersökning av H & E av flera steg snitt på 0,2 cm mellanrum. De clinicopathologic uppgifterna utvärderades enligt den japanska klassificering för magcancer [16]. Patienternas egenskaper anges i tabell 1. För att upptäcka de SLNs använde vi intraoperativ endoskopisk lymfatiska kartläggning (IELM), som bestod av en intraoperativ injektion av 0,2 ml av 2% patentblått i submukosala lagret vid fyra platser runt magcancer genom en gastroskop [9]. Färgämnet omedelbart dök upp vid serosala ytan och färgas lymfkärlen och noder [5, 9]. I denna studie var den SLN definieras som den lymfkörtel som färgades blå 20 minuter efter injektionen. Det lymfatiska bassänger definierades som det område som innehåller de färgade lymfkärlen, och som kunde delas in i fem kategorier enligt anvisningarna i artärerna omgiven magen, enligt följande: den vänstra gastric artär område, rätten gastric artär område, rätt gastroepiploic artärområdet, rätten gastroepiploic artär område och den bakre gastric artär område. De utskurna SLNs sändes för fryst sektion undersökning. Lymfkörtlarna färgade med H & E på representativa sektioner skars längs planet med den största diameter som ingår noden hilus och undersöktes intraoperativt för metastases.Table 1 Patienter egenskaper
medianålder (intervall)
62 (37-85) Review Sex
Man
23
Kvinna
12
djup invasion
SM
24
MP
11
Histologisk typ
Differentierade *
18
odifferentierad * *
17
lymphatics invasion
Negativ
16 positiv
19
Vascular invasion
Negativ
30
positiv
5
SM, submukosa; MP, muscularis propuria
* Den differentierade typ, papillär, väl och måttligt differentierade rörformiga adenokarcinom
** Den odifferentierad typ,. Dåligt differentierad adenokarcinom, mucinous adenokarcinom och klackring cellscancer sälja The återstående frysta vävnader var tinades och vävnaderna och icke-SLNs rutinmässigt skära vid 0,2 cm intervall. Därefter fick flera sektione lymfkörtlar och utskurna prover fixerades i 10% formalin, bearbetas genom graderad etanol och bäddas in i paraffin för permanenta sektioner. Lymfkörtlarna färgades med H &. E och undersöktes av två patologer
I denna studie var alla utskurna lymfkörtlar sektion serie på 25-im intervall av 4-um tjocklek utöver och antingen växelvis färgas med H & E och immunhistokemisk färgning (IHC) med användning av en anti-cytokeratin antikropp. Den ENVISION teknik användes (DAKO, Carpinteria, CA) för IHC och vi använde den monoklonala anti-human cytokeratin 18/08 antikropp (Santa Cruz Biotechonology, Kalifornien, USA) [17-19]. Alla viktiga tumörprover från 35 patienter utsattes för cytokeratin färgning och användes som en positiv kontroll. En lymfkörtel mikrometastas definierades som en nod negativt för metastas av vår rutin histologiska undersökning, men positiv antingen IHC eller fullständiga seriesektione metoder.
Resultat
Det totala antalet sektioner undersöktes var 24.094. Av dessa 5986 var SLNs och 18.108 var icke-SLNs. Av de 35 patienter, fyra (11%) hade mikrometastaser. En mikrometastas hittades i sex av 1028 noder (0,6%) och 60 sektioner (0,3%) av 24094 (fig. 1, 2). Av dessa 6 noder som innefattar en mikrometastas, fyra var SLNs och de andra 2 var icke-SLNs i lymfatiska bassängen. Inga mikrometastaser upptäcktes utanför bassängen (tabell 2). Detaljerna i fördelningsmönstret, placering och storlek av mikrometastaser visas i tabellerna 3, 4 och 5. Av de 4 patienter som hade en lymfkörtel mikrometastas, hade 3 patienter mikrometastaser enbart i SLNs. Den andra patienten hade en mikrometastas i både SLN och icke-SLNs i lymfatiska bassängen. Ingen patient hade en mikrometastas endast i icke-SLNs. Ingen patient har ännu drabbats av en upprepning eller har dött i december, 2007.Table 2 antal och placering av lymfkörtlar med mikrometastas
Placering av noder
Antal noder
hotell med mikrometastas
utan mikrometastas
SLNs 4
248
icke-SLNs i lymfatiska bassäng
2
653
icke-SLNs ut ur bassängen
0
121
Alla noder
6
1022
SLNs, sentinel lymfkörtlar
Tabell 3 Fördelning mönster av lymfkörtel mikrometastas
vid Antal fall
Distribution mönster mikrometastas
Rutin histologisk undersökning
komplett seriell sektionering och IHC
SLNs (-), icke-SLNs (-) Review 35
31
SLNs (+), icke-SLNs (-) katalog 0
3
SLNs (+), icke-SLNs (+) katalog 0 1
SLNs (-), icke-SLNs (+) Review 0
0
SLNs, sentinel lymfkörtlar; IHC, immunohistochemic färgning
Tabell 4 Placering av lymfkörtel mikrometastas
fall
Placering av tumör
vid Målat lymfatiska bassänger
Antal SLNs
Antal micrometastsis
Station av mikrometastas av SLNs
Station av mikrometastas av icke-SLNs
1
M, Mindre
Vänster GA
8 1
No.3 LN -
2 Review M Post
. vänster GA Höger GEA
5 1
No.3 LN Omdömen -.
3
M, Ant
vänster GA
2 1
No.3 LN -
4
M, Mindre
Vänster GA Höger GEA
10
3
No.3 LN
No.3 LN
SLNs, sentinel lymfkörtlar; M, mittre tredjedelen av magen; Mindre, mindre krökning; Posta.; posterior vägg; Myra. främre vägg; GA, gastric artär; GEA, gastroepiploic artär; No.3 LN, LN längs den mindre krökningen
Tabell 5 Site och storlek av lymfkörtel mikrometastas
fall
Typ av lymfkörtel
Site i lymfkörtel
storlek mikrometastas (mm) katalog 1
SLN
perifera sinus
1,2 2
SLN
perifer sinus
0,3
3
SLN
perifera sinus
0,2 4
SLN
perifera sinus
0,6
icke-SLN
perifer sinus
1,0
icke-SLN
perifera sinus
1,0
SLN, sentinel lymfkörtel
Figur 1 lymfkörtel~~POS=TRUNC mircrometastasis som detekteras genom immunohistokemisk färgning med en cytokeratin antikropp. (× 400).
Figur 2 Inga cancerceller identifierades i detta avsnitt genom rutinmässig histologisk undersökning. (Hematoxylin & eosin färgning, × 40). (B) Lymfkörtel mikrometastas i representativ sektion av hela seriesnittmetoden. (Immunhistokemisk färgning, × 40). (C) mikrometastas lymfkörtel i representativ sektion av hela seriesnittmetoden. (Immunhistokemisk färgning, × 400) katalog Diskussion
Miwa et al. infört begreppet sentinel node för magcancer [7]. Den kliniska användningen av sentinel node biopsi för att bestämma den kirurgiska metoden för magcancer kräver kontrollen av detta begrepp på samma nivå som lymfkörtelmikrometastaser. I denna studie undersökte vi närvaron och fördelningen av lymfkörtelmikrometastaser hos patienter med magcancer som hade en sentinel node biopsi. Nyligen har närvaron av lymfkörtelmikrometastaser odetekterbara genom rutinmässig histologisk undersökning har rapporterats i bröst-, lung-, matstrupe, magsäck, kolon och gallblåsan cancer. Det har rapporterats att en lymfkörtel mikrometastas var en dålig prognosindikator i bröst-, lung-, och koloncancer [20-22]. Några författare har rapporterat att en lymfkörtel mikrometastas var en dålig prognostisk faktor i mag cancerpatienter [23, 24]. Således har betydelsen av att detektera en lymfkörtel mikrometastas betonats för olika neoplastiska sjukdomar. Review, en mängd olika metoder för att upptäcka lymfkörtelmikrometastaser finns, inklusive IHC och polymeraskedjereaktionsanalyser. Matsumoto et al. visade att det omvända transkriptaset-polymeraskedjereaktion (RT-PCR) är känsligare än IHC för påvisande av mikrometastaser [2]. Emellertid Yamamoto et al. [25] har föreslagit att positiva resultat med en molekyl analys såsom RT-PCR inte kan vara indikativ för förekomsten av livskraftiga tumörceller, utan snarare närvaron av tumör-DNA och sålunda, kan vara associerad med en kraftigt ökad falskt positivt takt trots högre känslighet av den molekylära analysen. Å andra sidan, har det rapporterats att den seriellt sektioneringen ökade identifiering av tumörceller i de perifera bihålor av lymfkörtlar [26]. Man tror att seriesnittning med IHC är den mest exakta metoden för detektering av lymfkörtelmikrometastaser. Därför har vi utsätts hela provet till seriesnittning och IHC. Antikroppen som används för IHC var en monoklonal anti-human cytokeratin 8/18 antikropp som är mer känslig, specifik, enkel, noggrann och ekonomisk än andra antikroppar för IHC.
Tumör insättningar inom lymfkörtlar klassificerades och iscensatt enligt reviderade riktlinjer som den internationella unionen mot cancer (UICC) 6 : e upplagan. Enligt detta klassificeringssystem, metastaser mindre än 0,2 cm ansågs mikrometastaser (MMS), och isolerade tumörceller (ITC) var ensamstående tumörceller eller små kluster av celler som mätte inte större än 0,2 mm och var oftast upptäcks av IHC eller molekylära metoder , men kan verifieras med H & E. IKT vanligtvis inte visa tecken på metastaserande aktivitet genom proliferation, induktion av en stromal reaktion eller penetrering av vaskulär eller lymfatiska sinusvägg invasion [27, 28]. Nakajo et al. [23] och Siewert et al. [29] rapporterade att lymfknutor klassificeras i klusterbildning eller encelliga former, enligt resultaten från IHC för cytokeratin. Deras resultat tyder på att enskilda celler inte kan föröka sig i lymfkörtlar eftersom de redan dödades av lokala och allmänna immunocyter. Ett kluster av celler med en stromal reaktion kan lätt föröka och har därför metastatisk potential. I vår avdelning är utskurna lymfkörtlar rutinmässigt skära på 0.2 cm mellanrum och undersöks lymfkörtlarna för metastaser. Så i denna studie, definitionen av lymfkörtel mikrometastas skilde sig från UICC klassificeringen. För denna studie definierades som en nod, negativ för metastas av vår rutin histologisk undersökning av sektioner skurna på 0,2 cm mellanrum, men positiva med fullständig seriell sektionering med H & E och IHC. Dessutom har alla enskilda celltyper och små klustertyper utan stromal reaktion av cytokeratin positiv färgning inte erkänts som cancerceller i nästa H & E färgade bilden. Sålunda uteslöt vi alla enskilda celler och små kluster utan en stromal reaktion som klassificeras som ITC i UICC klassificeringssystemet, från den positiva lymfkörtel mikrometastas grupp [27, 28].
Vi uteslöt magcancer patienter vars tumörer hade invaderat till slemhinnan i denna studie eftersom detta komplett seriesnittning och immunhistokemisk färgning var en hel del arbete, Dessutom var graden av en lymfkörtel mikrometastas låga. Följaktligen vi inskrivna 35 som hade en gastric cancer som hade invaderat till submukosa eller muscularis propria och hade inga tecken på en lymfkörtel metastas genom histologisk undersökning för denna studie.
I denna studie observerade vi en lymfkörtel mikrometastas i 4 patienter (11%) med en magcancer som hade invaderat till submukosa eller muscularis propria. I magcancer, Isozaki et al. [30] och Natsugoe et al. [31] rapporterade att lymfkörtelmikrometastaser identifierades i 10 till 30% av prover för steg-sektione eller IHC. Våra resultat var den mest korrekta av alla tidigare studier och visat de faktiska omständigheterna i lymfkörtel mikrometastas av gastric cancer som hade invaderat till submukosa eller muscularis propria.
I denna studie undersökte vi de lymfkörtelmikrometastaser av SLNs och icke -SLNs. Vi hittade lymfkörtelmikrometastaser i SLNs av 4 patienter. En patient hade också en mikrometastas i en icke-SLN av det lymfatiska bassängen, om inga mikrometastaser av icke SLNs identifierades utanför bassängen. Dessutom ingen patient hade en lymfkörtel mikrometastas bara i en icke-SLN. Våra resultat visar att de patienter som inte har en lymfkörtel mikrometastas i SLNs inte heller har en mikrometastas i de icke-SLNs. Dessa resultat kan stödja ett koncept som lymfkörtelmikrometastaser sprids först till SLNs, sedan till de icke-SLNs i lymfatiska bassängen och slutligen till icke-SLNs utanför bassängen. Därför, baserat på detta koncept, är det tillräckligt att undersöka endast SLNs att avgöra om det finns lymfkörtelmikrometastaser hos patienter med magcancer.
Det är fortfarande oklart om en lymfkörtel mikrometastas är en prognostisk faktor i magcancer . Emellertid var en lymfkörtel mikrometastas finns i gastric cancerpatienter som hade inga tecken på en lymfkörtel metastas genom rutinfärgning. Detta resultat antyder att vi försiktigt bör minska omfattningen av lymfkörtel dissektioner. Intraoperativ frånvaro av en SLN mikrometastas antyder att omfattningen av lymfkörteln dissekering kan utan risk minskas, eftersom det är osannolikt för icke-SLNs att ha mikrometastaser utan SLN mikrometastas. I fallet med bröstcancer är behovet för intraoperativ diagnos av lymfkörtelmikrometastaser inte nödvändigt, eftersom ytterligare dissektion av axillära lymfkörtlar kan enkelt utföras. Emellertid är svårt i magcancer den efterföljande dissekering av lymfkörtlar; Därför är det avgörande att intraoperativ diagnos av lymfkörtelmikrometastaser. Vi trodde att när en lymfkörtel mikrometastas var närvarande, bör vi utföra en lymfkörtel dissektion för närvarande. Vår studie utnyttjade de mest exakta metoder, men vi kunde inte få fram resultaten tillräckligt snabbt för en itraoperative diagnos. Därför måste vi skapa en noggrann metod för snabb intraoperativ identifiering. Matsumoto et al. hävdade att intraoperativ snabb immunfärgning var en enkel och användbar teknik för att upptäcka lymfkörtelmikrometastaser [32]. En ultra-snabb RT-PCR-systemet, som kan slutföra detektering av cancerceller inom cirka 70 minuter, har utvecklats. Inom en snar framtid kommer dessa metoder användas för att detektera lymfkörtelmikrometastaser i SLNs under operation [33].
Slutsats
vi har visat förmåga att upptäcka lymfkörtelmikrometastaser genom att utsätta hela provet för att slutföra seriesnittning och IHC för nod-negativa gastric cancerpatienter som har haft en sentinel node biopsi. Dessa resultat stöder konceptet att lymfkörteln mikrometastaser sprider först till SLNs. Dessutom kan intraoperativ och snabb diagnos av lymfkörtelmikrometastaser i SLNs vägleda lämplig lymfkörteln dissekering i gastric cancerpatienter. Därför kommer en snabb och korrekt intraoperativ diagnos av lymfkörtelmikrometastaser i SLNs vara nödvändiga och bör vara i fokus för framtida studier.
Förklaringar
Tack
Författarna är tacksamma mot Professor Tetsuo Ohta i Kanazawa University för detta läsa på. Och vi också tack vare före professor Koichi Miwa.
Författarnas ursprungliga inlämnade handlingarna Images of Nedan finns länkar till författarnas ursprungliga inlämnade filer för bilder. 13046_2008_7_MOESM1_ESM.tiff Författaroriginalfilen för figur 1 13046_2008_7_MOESM2_ESM.tiff Författaroriginalfilen för figur 2

• Cancerassocierade fibroblaster är positivt korrelerade med metastatisk potential av mänskliga gastric cancers
• Långa icke-kodande RNA uttrycksprofilen i human magcancer och dess kliniska betydelser