Detectie van sentinel en non-schildwachtklier micrometastasen door volledige seriële snijden en immunohistochemische analyse voor de maag cancer

opsporen van sentinel en non-schildwachtklier micrometastasen door volledige seriële snijden en immunohistochemische analyse voor maagkanker
De abstracte Achtergrond
We onderzochten de aanwezigheid en de verdeling van de sentinel en de niet-sentinel node micrometastasen met behulp van volledige seriële snijden en immunohistochemische kleuring (IHC), om te onderzoeken of lymfeklieren micrometastasen verspreid naar de schildwachtklier eerste.
Methods Hotels A in totaal 35 patiënten, die gastrectomie ondergingen met een schildwachtklierbiopsie voor maagkanker, werden geïncludeerd in deze studie. Totaal 1028 lymfklieren van 35 patiënten met maagkanker zonder metastase van lymfeknopen door vaste gedeelte met hematoxyline en eosine (H &E) geselecteerd. Er waren 252 sentinel nodes en de andere 776 waren niet-sentinel nodes. Alle knooppunten werden serieel coupes afwisselend gekleurd met H &E en IHC. Lymfeknoop micrometastasen werd gedefinieerd als test om positieve eerste ofwel de IHC of totale seriële snijden zijn.
Resultaten
micrometastasen werden gedetecteerd in 4 (11%) van de 35 patiënten, 6 (0,58%) van 1028 nodes. Van deze 4 patiënten hadden 3 micrometastasen uitsluitend schildwachtklier, en de andere had micrometastasen in zowel sentinel en niet- sentinel nodes. Er was geen enkele patiënt die micrometasitases alleen in niet-sentinel nodes gehad.
Conclusie
Deze resultaten ondersteunen het concept dat lymfeklier micrometastasen van maagkanker verspreidt eerste nodes sentinel. Achtergrond
De prognose van patiënten met maagkanker primair beïnvloed door de aanwezigheid van lymfkliermetastasen. Lymfkliermetastasen bij maagkanker patiënten met submucosale invasie voorkomen bij 15 tot 20% van de patiënten; Daarom kan een lymfeklierdissectie hoeft het resterende 80-85% van de patiënten [1] zijn. Een nauwkeurige en betrouwbare indicator voor de afwezigheid van lymfeknoopmetastasen voorspellen zou veel onnodige lymphadenectomies elimineren [1]. Daarom is een preoperatieve en accurate diagnose van lymfekliermetastasen blijft belangrijk [2-4]. Een sentinel node biopsie voor maagkanker is een intra-operatieve diagnostische methode om lymfkliermetastasen [5-7] op te sporen. In 1992, Morton et al. [8] is de techniek van intraoperatieve kleurstof injectie op de plaats van melanoom de "sentinel" knooppunt, dat het eerste knooppunt dat de afferente lymfevaten voeren van de tumorplaats te identificeren. Miwa et al. [7, 9] in dienst van dit soort kleurstof mapping techniek om de sentinel nodes van maagkanker te identificeren, en meldde een hoge positief voorspellende waarde en nauwkeurigheid voor de sentinel node biopsie van de vroege maagkanker. Anderzijds, de aanwezigheid van micrometastasen in een lymfklier is een ernstig probleem voor de klinische toepassing van schildwachtklierprocedure voor vroege maagkanker. Lymfeklier micrometastasen zijn gevonden bij patiënten die vastbesloten om kliernegatieve door routine histologisch onderzoek zijn. Eerdere onderzoekers hebben gemeld dat lymfklier micrometastasen kan worden gedetecteerd onder gebruikmaking stap snijden, immunohistochemische kleuring en de reverse transcriptase-polymerasekettingreactie [10-12]. Toch zijn er een aantal rapporten over de verdeling van micrometastasen in zowel de sentinel en non-sentinel nodes in kliernegatieve maagkanker patiënten door routine histologisch onderzoek [13-15] geweest.
In deze studie hebben we retrospectief onderzoek gedaan naar de aanwezigheid en de verdeling van de sentinel en non-sentinel node micrometastasen met behulp van volledige seriële snijden en immunohistochemische kleuring. Deze techniek zijn de meest nauwkeurige methoden om micrometastasen in de klieren te detecteren zodat we konden bepalen of lymfeklier micrometastasen had verspreid naar de schildwachtklier eerste.
Methods
Een schildwachtklier (SLN) biopsie voor maagkanker werd uitgevoerd op 243 patiënten op de afdeling Heelkunde gastroenterologic, Kanazawa Universitaire Ziekenhuis van 1993 tot 2002. voor de sentinel node biopsie werd uitgevoerd, werd schriftelijk toestemming verkregen in overeenstemming met de ethische normen van de commissie Human Experimentation van Kanazawa University Hospital. Van deze patiënten ingeschreven wij 35 die een kanker die tot de submucosa en muscularis propria waren binnengedrongen en hadden geen lymfeklier door routine histologisch onderzoek voor deze studie had. Geen van de patiënten had preoperatieve chemotherapie of radiotherapie. Gebaseerd op de Japanse classificatie van maagcarcinoom, alle 35 patiënten ondergingen een schildwachtklierprocedure gevolgd door gebruikelijke lymfadenectomie voor back-up dissectie [16]. Een totaal van 1028 lymfeklieren werden verwijderd uit de 35 patiënten. Hiervan waren 252 lymfeknopen SLN en de andere 776 waren niet-SLN. Alle 252 SLN negatief metastasen zowel intraoperative bevroren secties onderzoek en permanente gedeelte met hematoxyline en eosine (H &E). De andere knooppunten 776 negatief voor metastasen op histologisch onderzoek door H &E van meerstaps snijden bij 0,2 cm intervallen. De clinicopathologic gegevens werden geëvalueerd volgens de Japanse classificatie van maagkanker [16]. De patiënten gegevens zijn vermeld in tabel 1. Voor het detecteren van de SLN, gebruikten we intraoperatieve endoscopische lymfatische mapping (Language Weaver iELM), dat bestond uit een intraoperatieve injectie van 0,2 ml van 2% patentblauw in de submucosa op vier plaatsen rond de maagcarcinoom tot een gastroscoop [9]. De kleurstof onmiddellijk verscheen aan het serosal oppervlak en gekleurd de lymfevaten en knooppunten [5, 9]. In deze studie werd de SLN gedefinieerd als lymfeknoop die blauw gekleurd 20 minuten na de injectie. De lymfatische bassins werden gedefinieerd als het gebied met de gebrandschilderde lymfevaten, en die kunnen worden onderverdeeld in vijf categorieën op basis van de aanwijzingen van de slagaders waren omringd de maag, als volgt: de linker maag slagader gebied, de juiste maag slagader gebied, zich het recht voor gastro slagader gebied, de juiste gastro slagader gebied en de posterior maag slagader omgeving. De uitgesneden SLN's werden gestuurd voor bevroren-sectie onderzoek. De lymfeknopen gekleurd met H &E coupes werden op representatieve langs het vlak met de grootste diameter dat het knooppunt hilus opgenomen gesneden en onderzocht op intra metastases.Table 1 patiënten eigenschappen
mediane leeftijd (traject)
62 (37-85)
Sex
Man
23
Female
12
Diepte van de invasie
SM
24
MP
11
histologische soort
Gedifferentieerde *
18
Onzichtbare * *
17
lymphatische invasie
Negatief
16
positieve
19
Vascular invasie
Negatieve
30
positieve
5
SM, submucosa; MP, muscularis propuria
* De gedifferentieerde soort; papillaire, goed en matig gedifferentieerde buisvormige adenocarcinomen
** De ongedifferentieerde soort;. Slecht gedifferentieerd adenocarcinoom, mucinous adenocarcinoom en zegelring cell carcinoma Ondernemingen De resterende ingevroren weefsels waren ontdooid, en de weefsels en non-SLN werden routinematig bij 0,2 cm intervallen gesneden. Vervolgens, de meervoudige doorsnede lymfeknopen en resectiepreparaten werden gefixeerd in 10% formaline, verwerkt door gegradeerde ethanol en ingebed in paraffine voor permanente afdelingen. De lymfeknopen werden gekleurd met H &. E en werden door twee pathologen
In deze studie werden alle weggesneden lymfeknopen serieel coupes 25 um intervallen van 4 pm dikte naast en alternerend gekleurd met H &E en immunohistochemische kleuring (IHC) door een anti-cytokeratine antilichaam. Envision werd toegepast (DAKO, Carpinteria, CA) voor IHC en we gebruikten het monoklonale anti-humaan cytokeratine 8/18 antilichaam (Santa Cruz Biotechonology, California, USA) [17-19]. Alle belangrijke tumormonsters van 35 patiënten ondergingen cytokeratine kleuring en werden gebruikt als positieve controle. Een lymfeklier micrometastasen werd gedefinieerd als een knooppunt negatief voor metastase door onze routine histologisch onderzoek, maar positief door ofwel de IHC of de complete seriële snijden methoden.
Resultaten
Het totaal aantal secties onderzocht was 24.094. Van deze 5986 waren SLN's en 18.108 waren niet-SLN. Van de 35 patiënten, 4 (11%) hadden micrometastasen. Een micrometastasen werd gevonden in 6 van 1028 knooppunten (0,6%) en 60 delen (0,3%) van 24.094 (fig. 1, 2). Van deze 6 knopen met een micrometastasen, 4 waren SLN's en de andere 2 waren niet-SLN's in de lymfatische bekken. Nr micrometastasen gedetecteerd buiten het bassin (tabel 2). De data van het distributiepatroon, locatie en grootte van de micrometastasen worden in tabellen 3, 4 en 5. Van de 4 patiënten die een lymfeklier micrometastasen had, 3 patiënten hadden micrometastasen uitsluitend de SLN. De andere patiënt had een micrometastasen in zowel de SLN SLN en niet in de lymfatische bekken. Geen van de patiënten had een micrometastasen slechts in niet SLN. Geen enkele patiënt heeft nog niemand een herhaling geleden of is overleden vanaf december 2007.Table 2 Aantal en locatie van de lymfeklieren met micrometastasen
Locatie knooppunten
aantal knooppunten
hotels met micrometastasen
zonder micrometastasen
SLN's verhuur 4
248
non-SLN in lymfatische bassin Pagina 2
653
non-SLN uit bassin
0
121 Leer Alle nodes
6
1022
SLN's, schildwachtklier
Tabel 3 verdeling patroon van de lymfeklier micrometastasis

Aantal gevallen
verspreidingspatroon van micrometastasen
Routine histologisch onderzoek
compleet seriële snijden en IHC
SLN's (-), non-SLN (-)
35
31
SLN's (+), non-SLN (-)
0
3
SLN's (+), non-SLN (+)
0 1
SLN's (-), non-SLN (+)
0
0
SLN's, schildwachtklier; IHC, histochemische kleuring
Tabel 4 Locatie van de lymfeklier micrometastasen
case
locatie van de tumor

Stained lymfatische bassins
Aantal SLN's
Aantal micrometastsis
Station van micrometastasen van SLN's
Station van micrometastasen van niet-SLN
1
M, Minder
Left GA
8 1
No.3 LN
- 2
M, post
. Left Right GA GEA
5 1
No.3 LN
-.
3
M, Ant
links GA
2 1
No.3 LN
- 4
M, Minder
Left Right GA GEA
10 | 3
No.3 LN
No.3 LN
SLN's, schildwachtklier; M, het Midden-derde van de maag; Minder, minder kromming; Post.; achterwand; Mier. voorste wand; GA, maag slagader; GEA, gastro slagader; No.3 LN, LN langs de mindere kromming
Tabel 5 Site en de grootte van de lymfeklieren micrometastasen
case
Type lymfklier

Site in lymfklier
Grootte van micrometastasen (mm)
1
SLN
perifere sinus
1.2 2
SLN
perifere sinus
0.3
3
SLN
perifere sinus
0,2 verhuur 4
SLN
perifere sinus
0,6
non-SLN
perifere sinus
1,0
non-SLN
perifere sinus
1,0
SLN, schildwachtklier
Figuur 1 lymfeklier mircrometastasis zoals gedetecteerd door immunohistochemische kleuring met een cytokeratine antilichaam. (× 400).
Figuur 2 Geen kankercellen werden geïdentificeerd in deze sectie door routine histologisch onderzoek. (Hematoxyline & eosinekleuring, × 40). (B) Lymfeklier micrometastasen in de representatieve sectie door het hele seriële snijden methode. (Immunohistochemische kleuring × 40). (C) micrometastasen lymfeklieren in de representatieve sectie door het hele seriële snijden methode. (Immunohistochemische kleuring, × 400)
Discussie
Miwa et al. introduceerde het concept van de sentinel node biopsie voor maagkanker [7]. Het klinisch gebruik van de schildwachtklier biopsie de chirurgische benadering voor maagkanker bepalen moet de verificatie van dit concept op het niveau van lymfeklier micrometastasen. In dit onderzoek onderzochten we de aanwezigheid en verdeling van lymfeklier micrometastasen bij patiënten met maagkanker die een schildwachtklier biopsie had. Onlangs is de aanwezigheid van lymfeklieren micrometastasen stellen bij routinematig histologisch onderzoek gerapporteerd in de borst, longen, slokdarm, maag, dikke darm en galblaas kanker. Er werd gemeld dat een lymfeklier micrometastasen was een slechte prognostische indicator in borstkanker, longkanker en darmkanker [20-22]. Enkele auteurs hebben gemeld dat een lymfeklier micrometastasis een slechte prognostische factor bij maagkanker patiënten [23, 24]. Aldus is het belang van het detecteren van een lymfeknoop micrometastasen benadrukt voor verschillende neoplastische ziekten.
Verschillende werkwijzen voor het detecteren lymfeklier micrometastasen bestaan, zoals IHC en polymerasekettingreactie assays. Matsumoto et al. toonde aan dat de reverse transcriptase-polymerasekettingreactie (RT-PCR) is gevoeliger dan IHC voor de detectie van micrometastasen [2]. Echter, Yamamoto et al. [25] heeft die positieve resultaten met een moleculaire assay zoals RT-PCR geen indicatie voor de aanwezigheid van levensvatbare tumorcellen kunnen zijn, maar de aanwezigheid van tumor DNA en daardoor kan worden geassocieerd met een sterk verhoogd vals positieven ondanks hogere gevoeligheid van de moleculaire assay. Anderzijds, is gerapporteerd dat het serieel Opdeling verhoogde de identificatie van tumorcellen in perifere sinussen lymfklieren [26]. Men denkt dat seriële coupes met IHC is de meest nauwkeurige methode voor de detectie van micrometastasen lymfeklier. Daarom hebben we onderwierp de gehele specimen serial snijden en IHC. Het antilichaam voor IHC een monoklonaal anti-humaan cytokeratine 8/18 antilichaam dat gevoeliger, specifieke, eenvoudige, nauwkeurige en economische dan andere antilichamen voor IHC.
Tumordeposits binnen lymfeknopen geclassificeerd en getrapte volgens de herziene richtlijnen van de International Union Against Cancer (UICC) 6 e editie te stellen. Volgens deze classificatiesysteem, metastasen minder dan 0,2 cm werden beschouwd micrometastasen (MMS) en geïsoleerde tumorcellen (ITC) waren enkele tumorcellen of kleine clusters van cellen die gemeten niet groter dan 0,2 mm en werden gewoonlijk gedetecteerd door IHC of moleculaire methoden maar kan worden geverifieerd met H &E. ITC's meestal niet het bewijs van metastatische activiteit door proliferatie, inductie van een stromale reactie, of de penetratie van vasculaire of lymfatische sinus muur invasie [27, 28] tonen. Nakajo et al. [23] en Siewert et al. [29] gemeld dat lymfeklieren wordt ingedeeld in clustervorming of eencellige vormen, volgens de resultaten van IHC voor cytokeratine. Hun resultaten suggereerden dat enkele cellen zich niet kan verspreiden in de lymfklieren, omdat ze al door de lokale en algemene immunocyten werden gedood. Een cluster van cellen met een stromareactie gemakkelijk verspreiden en daarom metastatisch potentieel. In onze afdeling, worden weggesneden lymfeknopen routinematig geknipt bij 0,2 cm intervallen en de lymfeklieren worden onderzocht op metastasen. Dus, in deze studie, de definitie van lymfeklier micrometastasen verschilde van de UICC indeling. Voor dit onderzoek werd gedefinieerd als een knooppunt negatief voor metastase door onze routine histologisch onderzoek van coupes op 0,2 cm intervallen, maar positief door volledige seriële coupes met H &E en IHC. Bovendien werden alle enkele celtypes en soorten kleine cluster zonder stromareactie van cytokeratine positieve kleuring niet als kankercellen in het volgende H &E gekleurd slide. Zo uitgesloten we alle afzonderlijke cellen en kleine clusters zonder stromale reactie, die zijn ingedeeld als ITC in het UICC classificatiesysteem, van de positieve lymfklier micrometastasis groep [27, 28].
We sloot de maagkanker patiënten met tumoren in dit onderzoek waren binnengevallen aan het slijmvlies omdat dit compleet seriële snijden en immunohistochemische kleuring was een hoop werk; Daarnaast is de snelheid van een lymfeklier micrometastasen laag. Dienovereenkomstig we ingeschreven 35 die maagkanker die de submucosa en muscularis propria waren binnengedrongen en had geen bewijs van een lymfeknoop metastase door histologisch onderzoek voor deze studie had.
In deze studie zagen we een lymfeklier micrometastasen bij 4 patiënten (11%) met een maagkanker die de submucosa en muscularis propria was binnengedrongen. Bij maagkanker, Isozaki et al. [30] en Natsugoe et al. [31] gemeld dat lymfeknoop micrometastasen werden in 10 tot 30% van specimens stap-snijden of IHC. De resultaten waren de meest nauwkeurige van de eerdere studies en bleek de concrete omstandigheden van lymfeklier micrometastasen van maagkanker die de submucosa en muscularis propria waren binnengedrongen.
In dit onderzoek onderzochten we de lymfeklieren van micrometastasen SLN en non -SLNs. We vonden lymfeklier micrometastasen in de SLN's van 4 patiënten. Eén patiënt had ook een micrometastasen in een niet-SWK van het lymfatische bekken, hoewel geen micrometastasen van niet-SLN buiten het bekken geïdentificeerd. Bovendien is er geen patiënt een lymfeklier micrometastasen slechts een niet-SWK. Onze resultaten lieten zien dat patiënten die geen lymfklier micrometastasen had in de SLN ook niet een micrometastasen in de niet-SLN hebben. Deze resultaten kunnen het concept dat lymfklier micrometastasen eerst verspreid naar de SLN ondersteunen, is de niet-SLN in de lymfatische bekken en uiteindelijk niet-SLN buiten het bekken. Daarom, gebaseerd op dit concept, is het voldoende om alleen de SLN onderzoeken om te bepalen of er lymfeklier micrometastasen bij patiënten met maagkanker.
Het blijft onduidelijk of een lymfklier micrometastasen is een prognostische factor bij maagkanker . Er werd echter een lymfeklier micrometastasen in maagkanker patiënten die geen bewijs van een lymfeknoop metastase door routine kleuring had. Dit resultaat suggereert dat we voorzichtig moeten beperken de omvang van lymfklierdissecties. De intraoperatieve ontbreken van een SWK micrometastasen suggereert dat de mate van lymfklierdissectie veilig kan worden verminderd, omdat het onwaarschijnlijk is voor niet-SLN micrometastasen te hebben zonder SLN micrometastasen. Bij borstkanker, de noodzaak voor de intra-operatieve diagnose lymfklier micrometastasen is niet essentieel, omdat er extra dissectie van de axillaire lymfeklieren gemakkelijk uitvoerbaar. De daaropvolgende dissectie van lymfeklieren moeilijk bij maagkanker; derhalve de intra-operatieve diagnose lymfklier micrometastasen cruciaal. We geloven dat wanneer een lymfeklier micrometastasen aanwezig was, zouden we een lymfeklierdissectie optreden op het moment. Onze studie gebruik gemaakt van de meest nauwkeurige methoden, maar we konden de resultaten snel genoeg voor een itraoperative diagnose niet te verkrijgen. Daarom moeten we een nauwkeurige methode voor de snelle intra-operatieve identificatie vast te stellen. Matsumoto et al. beweerde dat intraoperatieve snelle immunokleuring was een eenvoudige en nuttige techniek voor het detecteren lymfeknoop micrometastasen [32]. Een ultrasnelle RT-PCR-systeem, waarbij de detectie van kankercellen in ongeveer 70 minuten kan voltooien, ontwikkeld. In de nabije toekomst zullen deze methoden worden toegepast op lymfeklier micrometastasen in SLN's te detecteren tijdens de operatie [33].
Conclusie
we de mogelijkheid om lymfeklier micrometastasen te detecteren door het onderwerpen van de gehele specimen serial snijden voltooien en hebben aangetoond IHC voor kliernegatieve maagkanker patiënten die een sentinel node biopsie hebben gehad. Deze resultaten ondersteunen het idee dat knooppunt micrometastasen lymfe verspreidt eerste de SLN. Bovendien kunnen de intraoperatieve en snelle diagnose van lymfeklier micrometastasen SLN helpen de juiste lymfeklier dissectie bij maagkanker patiënten. Daarom is een snelle en accurate diagnose van intra-operatieve lymfklier micrometastasen in SLN's zal nodig
zijn en moet de focus van de toekomstige studies. Verklaringen
Dankwoord
De auteurs zijn dankbaar Professor Tetsuo Ohta in Kanazawa University voor deze studie. En we ook te danken aan een pre-professor Koichi Miwa.
Authors 'originele ingediende dossiers voor afbeeldingen
Hieronder staan ​​de links naar de auteurs oorspronkelijke ingediende dossiers voor afbeeldingen. 'Originele bestand voor figuur 1 13046_2008_7_MOESM2_ESM.tiff Authors' 13046_2008_7_MOESM1_ESM.tiff Auteurs originele bestand voor figuur 2

• Kanker geassocieerde fibroblasten zijn positief gecorreleerd met metastatische potentieel van menselijke maagkanker
• Lange niet-coderende RNA-expressieprofiel in menselijke maagkanker en de klinische betekenissen