Обнаружение дозорных и недозорных лимфатических узлов микрометастаз полным серийным секционирования и иммуногистохимического анализа рака желудка

Обнаружение дозорных и не дозорных лимфатических узлов микрометастаз полным серийным секционирования и иммуногистохимического анализа рака желудка
Аннотация
Справочная информация
Мы исследовали наличие и распределение дозорных и недозорных узла микрометастазов, используя полный серийный секционирования и иммуногистохимическое окрашивание (IHC), чтобы проверить узлы ли лимфатические узлы микрометастазов распространились на дозорного лимфы в первую очередь.
Методы
в общей сложности 35 пациентов, которым была выполнена гастрэктомия с биопсией сторожевого лимфоузла для рака желудка, были зачислены в этом исследовании. был произведен отбор Всего 1028 лимфатических узлов 35 пациентов, имеющих рак желудка без метастаз лимфоузла перманентной секции гематоксилином и эозином (H &E АМФ). Были 252 сторожевые узлы, а другой 776 были недозорных узлы. Все узлы были последовательно секционного и окрашивали попеременно с H &Amp; E и IHC. узел микрометастазов Лимфатические определяли как оказывается положительным первым либо ВВК или полный серийный секционирования.
Результаты
микрометастазов были обнаружены в 4 (11%) из 35 пациентов, 6 (0,58%) 1028 узлов. Из этих 4 пациентов, 3 имели микрометастазов исключительно в дозорных узлах, а другой имел микрометастазов в обоих дозорных и недозорных узлов. Там не было ни у одного пациента, который имел micrometasitases только в недозорных узлах.
Вывод изображения Эти результаты поддерживают концепцию, что лимфатический узел микрометастазов рака желудка распространяющийся первым дозорного узлов.
Фон
прогнозе у пациентов с раком желудка зависит прежде всего наличием метастазов в лимфатических узлах. Метастазов в лимфоузлах в больных раком желудка с подслизистой инвазии происходит в 15 до 20% больных; Таким образом, узел лимфодиссекция может оказаться ненужным для остальных от 80 до 85% больных [1]. Точным и надежным индикатором для прогнозирования отсутствие метастазов в лимфатических узлах позволит устранить многие ненужные lymphadenectomies [1]. Таким образом, предоперационная и точный диагноз метастазов лимфатических остается важным [2-4]. Биопсия сторожевого узла для рака желудка является интраоперационная диагностический метод для обнаружения метастазов в лимфатических узлах [5-7]. В 1992 году Мортон и др. [8] представил методику инъекции интраоперационной красителя на месте меланому, чтобы идентифицировать "Эпидемиологическое" узел, который является первым узлом, который афферентные лимфатические сосуды поступают с сайта опухоли. Мива и др. [7, 9] использовали этот тип метода картирования красителя для выявления сторожевого узлов рака желудка, а также сообщили о высокой прогностической ценности положительного результата и точности для сторожевого узла биопсии раннего рака желудка. С другой стороны, наличие микрометастазов в лимфатических узлах является серьезной проблемой для клинического применения биопсии сторожевого узла для раннего рака желудка. Лимфатического узла микрометастазов были обнаружены у пациентов, определенных быть отрицательными лимфоузлами рутинным гистологическое исследование. Предыдущие исследователи сообщали, что лимфатический узел микрометастазов может быть обнаружен с помощью шага секционирования, иммуногистохимического окрашивания и обратной транскриптазы-полимеразной цепной реакции [10-12]. Тем не менее, было несколько сообщений о распределении микрометастаз как в дозорных и недозорных узлов в лимфоузлов у больных раком желудка с помощью рутинного гистологического исследования [13-15].
В этом исследовании мы ретроспективно исследовали наличие и распределение дозорных и недозорных узла микрометастаз с использованием полного последовательного секционирования и иммуногистохимического окрашивания. Эти технологии являются наиболее точные методы для обнаружения микрометастазов в узлах, чтобы мы могли определить, были ли лимфоузлов микрометастазов распространился на сторожевых лимфатических узлов в первую очередь.
Методы
дозорный лимфоузел (SLNS) биопсии для рака желудка была выполнена на 243 больных на кафедре гастроэнтерологических хирургии, Канадзава университетской больницы с 1993 по 2002 г. до биопсии сторожевого узла был выполнен, письменное информированное согласие было получено в соответствии с этическими нормами Комитета по населенным экспериментированию больницы Канадзава университета. Из этих пациентов мы зачислены 35, у которого был рак, который вторгся в подслизистой или мышечная и не имели метастазов в лимфатических узлах путем рутинного гистологического исследования для данного исследования. Ни один из пациентов не получал предоперационной химиотерапии или лучевой терапии. На основании японской классификации карциноме желудка, все 35 пациентов подверглись биопсии сторожевого узла с последующим обычным лимфаденэктомии для резервного рассечения [16]. В общей сложности 1028 лимфатических узлов были удалены из 35 пациентов. Из них 252 лимфатические узлы были SLNS, а другой 776 не имели SLNS. Все 252 SLNS были отрицательными для метастазов как на интраоперационной замороженного раздела обследования и постоянного сечения с гематоксилином и эозином (H &Amp; E). Остальные узлы 776 были отрицательными для метастазов на гистологическое исследование по H &Amp; E многократного шага секционирования с интервалом 0,2 см. Эти клиникопатологическими данные были оценены в соответствии с японской классификации рака желудка [16]. Характеристики пациентов приведены в таблице 1. Для обнаружения SLNS мы использовали интраоперационного эндоскопического лимфатическую отображение (IELM), который состоял из интраоперационного инъекции 0,2 мл 2% -ного патента синего в подслизистый слой на четырех участках вокруг рака желудка путем гастроскоп [9]. Краситель сразу же появился на поверхности серозной и окрашивали лимфатические сосуды и узлы [5, 9]. В этом исследовании СЛУ был определен как лимфатический узел, который окрашен в голубой цвет через 20 минут после инъекции. Лимфатические бассейны были определены как области, содержащие окрашенный лимфатические сосуды, и которые могли быть разделены на пять категорий в соответствии с направлениями артерий окружении желудка, следующим образом: область левого желудочка артерии, правая часть желудка артерии, правая часть желудочно-сальниковый артерии, область правой желудочно-сальниковый артерии и область задней желудочной артерии. Вырезанные SLNS были посланы для замороженного гистологическое исследование. Лимфоузлы окрашивали H &Amp; E на репрезентативных участках были вырезаны вдоль плоскости с наибольшим диаметром, который включал хилус узел, и исследовали интраоперационно для metastases.Table 1 Пациенты характеристики
Медиана возраста (диапазон)
62 (37-85) Любительские секс
Мужской
23
Female
12
Глубина вторжения
SM
24
MP
11
гистологического типа
Дифференцированный *
18
Недифференцированный * *
17
лимфатической инвазии
Негативный
16
положительный
19
сосудистый вторжение
Негативный
30
положительная страница 5 СМ, подслизистая; MP, мышечная propuria
* Дифференцированный тип; папиллярный, хорошо и умеренно дифференцированные трубчатые аденокарциномы
** Недифференцированная типа;. Низкодифференцированная аденокарциномы, коллоидный аденокарциномы и карциномы печатка кольцо клеток
Остальные замороженные ткани были размораживают, а ткани, так и не были SLNS обычно сократить с интервалом 0,2 см. Впоследствии многочисленные секционного лимфатических узлов и резецированные образцы фиксировали в 10% формалине, обрабатываются с помощью градуированного этанола, и заключали в парафин для постоянных секций. Лимфатические узлы окрашивали H &Amp;. Е и исследовали с помощью двух патологов
В этом исследовании все резецированные лимфатические узлы разрезали серийно в 25-мкм интервалами толщиной 4 мкм в дополнение и либо попеременно окрашивали H &Amp; E и иммуногистохимического окрашивания (IHC) с использованием анти-цитокератин антитела. Методика ENVISION была использована (Dako, Carpinteria, CA) для IHC и мы использовали моноклональные антитела против человеческого цитокератин 8/18 антитела (Santa Cruz Biotechonology, Калифорния, США) [17-19]. Все основные опухолевые образцы из 35 пациентов были подвергнуты цитокератин окрашивания и использовались в качестве положительного контроля. Микрометастазов лимфатических узлов был определен как узел отрицательного для метастазирования по нашей рутинной экспертизы гистологического, но положительного либо ВВК или полных серийных методов секционирования.
Результаты
Общее количество секций рассмотрены было 24094. Из них 5986 были SLNS и 18108 не имели SLNS. Из 35 пациентов, 4 (11%) имели микрометастазов. Микрометастазами был обнаружен в 6 из 1028 узлов (0,6%) и 60 участков (0,3%) из 24094 (фиг. 1, 2). Из этих 6-ти узлов, включающих микрометастазов, 4 были SLNS и другие 2 не имели SLNS в лимфатическую бассейне. Нет микрометастазов не было обнаружено за пределами бассейна (таблица 2). Детали картины распределения, расположения и размеров микрометастазов приведены в таблицах 3, 4 и 5. Из 4-х пациентов, которые имели микрометастазов лимфатических узлов, у 3 больных микрометастазов исключительно в SLNS. Другой пациент имел микрометастазов в обоих СЛН и не являющимися SLNS в лимфатическую бассейне. Ни один пациент не имел микрометастазов только в не-SLNS. Ни один пациент не страдал еще рецидив или умер по состоянию на декабрь, 2007.Table 2 Количество и расположение лимфатических узлов с микрометастазами
Расположение узлов

Количество узлов

<й>
с микрометастазами

без микрометастазами

SLNS 4
248
не являющиеся SLNS в лимфатической бассейне
2
653
не являющиеся SLNS из бассейна
0
121
Все узлы
6
1022
SLNS, дозорного лимфатических узлов
Таблица модель 3 Распределение микрометастазов лимфатических узлов
<й>
Количество случаев

картина распределения микрометастазами

Рутинное гистологическое исследование

полный последовательный секционирования и IHC

SLNS (-), не SLNS (-)
35
31
SLNS (+), не SLNS (-) 0

3
SLNS (+), без SLNS (+) 0

1
SLNS (-) без SLNS (+)
0 0

SLNS, дозорного лимфатических узлов; IHC, immunohistochemic окрашивание
Таблица 4 Расположение лимфатических узлов микрометастазами
кейс

Местонахождение опухоли <бр>
Витраж лимфатической бассейны

Количество SLNS

Количество micrometastsis

станции микрометастазами из SLNS

станции микрометастазами не-SLNS

1
M, Меньше
Left GA
8
1
No.3 LN
- страница 2 M, сообщение
. Left Right GA GEA страница 5 из 1
No.3 LN
-. страница 3 М, Ant
левый GA страница 2 1
No.3 LN
- 4
M, Меньше
Left Right GA GEA
10 страница 3 No.3 LN
No.3 LN
SLNS, дозорного лимфатических узлов; М, в средней трети желудка; Меньше, меньшая кривизна; После.; задней стенки; Муравей. передняя стенка; Г.А., желудочная артерия; GEA, желудочно-сальниковый артерии; No.3 LN, LN вдоль малой кривизны
Таблица 5 сайтов и размер лимфатических узлов микрометастазами
кейс

тип лимфатического узла <бр>
сайта в лимфатических узлах

Размер микрометастазами (мм)

1
SLN
периферийное синусового
1.2 страница 2 СЛН <бр> периферийное синусового
0,3 страница 3 SLN
периферийное синусового
0,2 4
SLN
периферийное синусового
0,6
без СЛН
периферическая синусового
1.0
NON-SLn
периферического пазухи
1,0
СЛН, сторожевого лимфатического узла Рисунок узла
mircrometastasis 1 в лимфатических обнаруженной иммуногистохимического окрашивания с цитокератина антителом. (× 400). Рисунок 2
Нет раковые клетки не были идентифицированы в этом разделе рутинными гистологического исследования. (Гематоксилин &Amp; эозином, × 40). узел микрометастазами (б) Лимфодренаж в репрезентативной секции по всем серийным методом секционирования. (Иммуногистохимическое окрашивание, × 40). (С) микрометастазов лимфатических узлов в репрезентативной секции по всем серийным методом секционирования. (Иммуногистохимическое окрашивание, × 400)
Обсуждение
Мива и др. ввел понятие биопсии сторожевого узла для рака желудка [7]. Клиническое применение биопсии сторожевого узла, чтобы определить хирургический подход для рака желудка требует проверки этой концепции на уровне узла микрометастазов лимфатических. В данном исследовании мы исследовали наличие и распределение лимфатических узлов микрометастаз у пациентов с раком желудка, который имел биопсию сторожевого узла. В последнее время наличие лимфатических узлов микрометастаз неопределяемых рутинным гистологическим исследованием было сообщено в груди, легких, пищевода, желудка, толстой кишки и желчного пузыря рака. Сообщалось, что лимфатический узел микрометастазами был плохим прогностическим индикатором при раке молочной железы, легких и рака толстой кишки [20-22]. Несколько авторов сообщают о том, что лимфатический узел микрометастазами был плохим прогностическим фактором у больных раком желудка [23, 24]. Таким образом, важность обнаружения микрометастазов лимфатических узлов было подчеркнуто на различных опухолевых заболеваний.
Разнообразные методы для обнаружения существуют лимфатических узлов микрометастазов, включая IHC и анализы цепной реакции полимеразы. Мацумото и др. показали, что обратной транскриптазы-полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР) является более чувствительным, чем IHC для обнаружения микрометастазов [2]. Тем не менее, Ямамото и др. [25] Предполагается, что положительные результаты с молекулярным анализом, таких как RT-PCR, не может свидетельствовать о наличии жизнеспособных опухолевых клеток, а присутствие ДНК опухоли и, таким образом, может быть связано со значительно увеличенной ложных срабатываний, несмотря на более высокая чувствительность молекулярного анализа. С другой стороны, сообщалось о том, что серийно секционирования увеличили идентификацию опухолевых клеток в периферической синусов лимфатических узлов [26]. Считается, что серийный секционирования с IHC является наиболее точным методом для обнаружения микрометастазов лимфатических узлов. Таким образом, мы подвергли весь образец к последовательному секционирования и IHC. Антитела, используемые для IHC было моноклональное антитело к человеческому цитокератин 8/18 антитело, которое является более чувствительным, конкретные, простые, точные и экономичен, чем другие антитела для IHC.
Опухолевые депозиты в пределах лимфатических узлов были классифицированы и ступенчатым согласно пересмотренные руководящие принципы, установленные Международным союзом против рака (UICC) 6 е издание. В соответствии с этой системой классификации, метастазами менее 0,2 см считались микрометастазов (ММС), а также единичные опухолевые клетки (ММСК) были единичные опухолевые клетки или небольшие скопления клеток, которые не измеряются не более 0,2 мм и обычно обнаруживаемых IHC или молекулярных методов , но может быть проверено с H &Amp; E. ММСК обычно не показывают свидетельства метастатической активности путем пролиферации, индукции реакции стромы, или проникновение сосудистой или лимфатической пазухи стенки вторжения [27, 28]. Nakajo и др. [23] и Зиверт и др. [29] сообщили, что вовлечение лимфатических узлов подразделяются на образование кластеров или единичных форм клеток, в соответствии с результатами IHC для цитокератином. Их результаты свидетельствуют о том, что отдельные клетки не могут размножаться в лимфатических узлах, так как они уже были убиты местными и общими иммуноцитов. Скопление клеток с реакцией стромы может легко пролиферируют и, следовательно, имеют метастатический потенциал. В нашем отделе, резецированные лимфатические узлы обычно сократить с интервалом 0,2 см и лимфатические узлы проверяются на метастазов. Таким образом, в данном исследовании, определение лимфатических узлов микрометастазами отличается от классификации UICC. Для этого исследования было определено как узел, отрицательным для метастаз нашей рутинной гистологического исследования участков, вырезанных с интервалом 0,2 см, но положительный полным серийным секционирования с H &Amp; E и IHC. Кроме того, все одиночные клеточные типы и малые типы кластеров без реакции стромы путем цитокератина положительного окрашивания не были признаны как раковые клетки в следующем H &Amp; E, окрашенном слайде. Таким образом, мы исключили все одиночные клетки и небольшие кластеры без реакции стромы, которые классифицируются как ММСК в системе классификации UICC, с положительным лимфатических узлов микрометастазами группы [27, 28].
Мы исключили больных раком желудка, у которых опухоли вторгся на слизистую оболочку в этом исследовании, потому что делает полный серийный секционирования и иммуногистохимическое окрашивание было много работы; Кроме того, скорость в микрометастазов лимфатических узлов была низкой. Соответственно, мы зачислены 35, у которого был рак желудка, который вторгся в подслизистой или мышечная и не имели никаких признаков метастазирования лимфатических узлов путем гистологического исследования для данного исследования.
В этом исследовании мы наблюдали микрометастазов лимфатических узлов у 4 больных (11%) с раком желудка, которая захвачена в подслизистую или мышечная. При раке желудка, Исозаки и др. [30] и Natsugoe и др. [31] сообщили, что лимфатический узел микрометастазов были идентифицированы в 10 до 30% образцов с помощью ступенчатого секционирования или IHC. Наши результаты были наиболее точными из всех прошлых исследований и доказал фактические обстоятельства лимфатических узлов микрометастазами от рака желудка, которые вторгались в подслизистой или мышечная.
В этом исследовании мы изучали лимфатический узел микрометастазов из SLNS и не -SLNs. Мы нашли лимфатических узлов микрометастазов в SLNS 4-х пациентов. Один пациент также имел микрометастазов в не-СЛН лимфатического бассейна, хотя нет микрометастазов неметаллов SLNS выявлено не было за пределами бассейна. Кроме того, ни один пациент не имел микрометастазов лимфатических узлов только в не-СЛН. Наши результаты показали, что пациенты, которые не имеют микрометастазов лимфатических узлов в SLNS также не имеют микрометастазов в не-SLNS. Эти результаты могут поддержать концепцию, что лимфатический узел микрометастазов распространился сначала в SLNS, а затем к не-SLNS в лимфатическую бассейне и, наконец, не являющимися SLNS за пределами бассейна. Поэтому, основываясь на этой концепции, достаточно рассмотреть только SLNS, чтобы определить, действительно ли есть узел микрометастазов лимфатических у больных раком желудка.
До сих пор неясно лимфатический узел микрометастазами является ли прогностическим фактором при раке желудка , Тем не менее, лимфатический узел микрометастазами был обнаружен в больных раком желудка, которые не имели никаких признаков метастазирования лимфатических узлов с помощью обычного окрашивания. Этот результат наводит на мысль, что нам следует осторожно уменьшить степень иссечение лимфатических узлов. Интраоперационное отсутствие СЛН микрометастазами предполагает, что степень лимфодиссекция может быть безопасно уменьшен, потому что это маловероятно, не являющиеся SLNS иметь микрометастазов без СЛН микрометастазами. В случае рака молочной железы, потребность в интраоперационной диагностике лимфатических узлов микрометастазов не является существенным, так как дополнительное рассечение подмышечных лимфатических узлов может быть выполнена легко. Однако последующее рассечение лимфатических узлов трудно при раке желудка; Таким образом, интраоперационная диагностика узлов микрометастазов лимфатических имеет решающее значение. Мы считали, что, когда лимфоузел микрометастазами присутствовал, мы должны выполнить лимфодиссекции в настоящее время. Наше исследование используются самые точные методы, но мы не смогли получить результаты достаточно быстро для itraoperative диагноза. Поэтому, нам нужно установить точный метод для быстрого интраоперационной идентификации. Мацумото и др. утверждал, что интраоперационная быстрый иммунное был простой и полезный метод для обнаружения микрометастазов лимфатических узлов [32]. Сверхбыстрая система RT-PCR, который может завершить обнаружение раковых клеток в течение примерно 70 минут, была разработана. В ближайшее время эти методы будут применяться для обнаружения лимфатических узлов микрометастазов в SLNS во время операции [33].
Заключение
мы продемонстрировали возможность обнаружения микрометастазов лимфатических узлов, подвергая весь образец, чтобы закончить последовательный секционирования и IHC для лимфоузлов у больных раком желудка, у которых были биопсию сторожевого узла. Эти результаты подтверждают, что концепция лимфатического узла микрометастазов распространяется сначала в SLNS. Кроме того, интраоперационной и экспресс-диагностика лимфатических узлов микрометастазов в SLNS среде может помочь соответствующий лимфодиссекция в больных раком желудка. Таким образом, быстрый и точный интраоперационная диагностика лимфатических узлов микрометастазов в SLNS будут необходимы и должны быть в центре внимания будущих исследований.
Заявления
Благодарности
Авторы выражают благодарность профессору Тэцуо Охты в Канадзава университете для этого изучение. И мы также благодаря предварительно профессор Коити Мива.
Авторов оригинальные представленные файлы для изображений изображения Ниже приведены ссылки на авторов оригинальных представленных файлов для изображений. 'Исходный файл для Рисунок 1 13046_2008_7_MOESM2_ESM.tiff Авторского 13046_2008_7_MOESM1_ESM.tiff авторов исходного файла для фигуры 2

• Рак-ассоциированные фибробласты положительно коррелирует с метастатическим потенциалом желудка человека ca…
• Длинные некодирующих профиль экспрессии РНК при раке желудка человека и его клиническая significances