Detecção de sentinela e não-sentinela micrometástases em linfonodos por cortes seriados completa e análise de imuno-histoquímica para detecção de cancer

gástrica de sentinela e não-sentinela micrometástases em linfonodos por cortes seriados completa e análise de imuno-histoquímica para câncer gástrico arte abstracta
Fundo
Foi investigada a presença e distribuição da sentinela e as micrometástases nó não-sentinela usando cortes seriados completos e coloração imuno-histoquímica (IHQ), para inspecionar se micrometástases em linfonodos espalhou para os linfonodos sentinela em primeiro lugar.
Methods of a total de 35 pacientes, submetidos a gastrectomia com uma biópsia de linfonodo sentinela para o câncer gástrico, foram incluídos neste estudo. Foram selecionados; total de 1028 nódulos linfáticos de 35 pacientes com câncer gástrico, sem metástase de linfonodo por secção permanente com hematoxilina e eosina (E H &). Havia 252 linfonodos sentinelas e os outros 776 foram nós não-sentinela. Todos os nós foram seccionados e corados alternadamente com H & E e IHC. micrometástases linfonodais foi definida como a revelar-se positiva primeiro ou o IHC ou a cortes seriados completa.
Resultados
Micrometástases foram detectados em 4 (11%) dos 35 pacientes, 6 (0,58%) de 1028 nós. Desses 4 pacientes, 3 apresentaram micrometástases exclusivamente em linfonodos sentinela, eo outro tinha micrometástases em ambos sentinela e nós não-sentinela. Não havia nenhum paciente que teve os micrometasitases apenas em nós de não-sentinela.
Conclusão
Estes resultados suportam o conceito de que linfonodo micrometástases do cancro gástrico se espalha primeiro a sentinela nós.
Fundo
O prognóstico da pacientes com câncer gástrico é influenciada principalmente pela presença de metástases linfáticas. A linfa metástases em doentes com cancro gástrico com invasão submucosa ocorrem em 15 a 20% dos pacientes; por conseguinte, um nó de linfa dissecção pode ser desnecessário para os restantes 80 a 85% dos pacientes [1]. Um indicador preciso e confiável para prever a ausência de metástases linfáticas, eliminaria muitos linfadenectomias desnecessários [1]. Portanto, um diagnóstico pré-operatório e precisa de metástases linfáticas continua a ser importante [2-4]. A biópsia do linfonodo sentinela para o câncer gástrico é um método de diagnóstico intra-operatório para detectar metástases em linfonodos [5-7]. Em 1992, Morton et al. [8] introduziu a técnica de injecção intra-operatória de corante no local do melanoma para identificar o nó "sentinela", que é o primeiro nó que os vasos linfáticos aferentes entra a partir do local do tumor. Miwa et al. [7, 9] empregou este tipo de técnica de mapeamento corante para identificar os linfonodos sentinela de câncer gástrico, e relatou um alto valor preditivo positivo e precisão para a biópsia do linfonodo sentinela no câncer gástrico precoce. Por outro lado, a presença de um micrometástases em linfonodo é um problema sério para a aplicação clínica da biópsia do linfonodo sentinela para o câncer gástrico precoce. micrometástases de nódulos linfáticos foram encontrados em pacientes com determinados como nó-negativos por meio de exame histológico de rotina. Investigadores anteriores relataram que micrometástases de nódulos linfáticos poderia ser detectada utilizando seccionamento passo, coloração imuno-histoquímica e a reacção em cadeia da polimerase-transcriptase reversa [10-12]. No entanto, tem havido alguns relatórios sobre a distribuição de micrometástases em ambos os sentinelas e não-sentinela nós em pacientes com câncer gástrico nó-negativos por exame histológico de rotina [13-15].
Neste estudo, nós investigados retrospectivamente o presença e distribuição de sentinela e micrometástases nó não-sentinela usando cortes seriados completos e coloração imuno-histoquímica. Estas técnicas são os métodos mais precisos para detectar micrometástases em nós, para que pudéssemos determinar se micrometástases em linfonodos se espalhou para os linfonodos sentinela primeiros.
Métodos
Um linfonodo sentinela (SLNs) biópsia para câncer gástrico foi realizada em 243 pacientes no Departamento de gastroenterológico Cirurgia do Hospital Universitário Kanazawa de 1993 a 2002. Antes da biópsia do linfonodo sentinela foi realizada, consentimento informado foi obtido de acordo com os padrões éticos da Comissão de Experimentação Humana do Hospital Universitário de Kanazawa. Destes pacientes, inscritos de 35 anos que tinha um câncer que tinham invadido a submucosa ou muscular própria e não tinha metástases em linfonodos por exame histológico de rotina para este estudo. Nenhum dos pacientes tinham recebido quimioterapia pré ou radioterapia. Com base na classificação japonesa de carcinoma gástrico, todos os 35 pacientes foram submetidos a biópsia de linfonodo sentinela seguida de linfadenectomia convencional para dissecção back-up [16]. Um total de 1028 nódulos linfáticos foram removidos a partir dos 35 pacientes. Destes, 252 foram SLNs nódulos linfáticos e os outros 776 eram não-NLS. Todos os 252 SLNs foram negativos para metástases, tanto no intra-operatório de exame de congelação e de secção permanente com hematoxilina e eosina (H & E). Os outros nós 776 foram negativos para metástases no exame histológico por H & E de passo múltiplo de corte em intervalos de 0,2 cm. Os dados clínico-patológicas foram avaliadas de acordo com a Classificação Japonesa de Câncer Gástrico [16]. As características dos doentes estão listados na Tabela 1. Para detectar os SLNs, utilizou-se intra-operatória mapeamento linfático endoscópica (IELM), que consistia de uma injecção intra-operatória de azul patente 0,2 ml de 2% para a camada da submucosa em quatro locais ao redor do carcinoma gástrico através um endoscópio [9]. O corante imediatamente apareceu na superfície serosa e coradas os vasos linfáticos e dos gânglios [5, 9]. Neste estudo, o LS foi definida como a que linfonodo corado com azul de 20 minutos após a injecção. As bacias linfáticas foram definidos como a área que contém os vasos linfáticos corados e que foram capazes de ser dividido em cinco categorias, de acordo com as instruções das artérias rodeado do estômago, da seguinte forma: a área da artéria gástrica esquerda, a área da artéria gástrica direita, a área da direita gastroepiplóica artéria, a área artéria gastroepiplóica direita ea área artéria gástrica posterior. Os SLNs excisadas foram encaminhadas para exame de congelação. Os gânglios linfáticos corados com H & E em secções representativas foram cortadas ao longo do plano com o maior diâmetro, que incluiu o hilo nó, e examinadas no intra-operatório para as características metastases.Table 1 doentes
A idade mediana (intervalo)
62 (37-85)
Sexo Masculino

23
Feminino
12
profundidade de invasão
SM
24
MP
11
tipo histológico
diferenciado *
18
indiferenciado * *
17
linfáticos invasão
negativo
16
positiva
19
Vascular invasão
negativo
30
positiva
5
SM, submucosa; MP, muscularis propuria
* O tipo diferenciado; papilar, adenocarcinomas tubulares bem e moderadamente diferenciados
** O tipo indiferenciado;. Adenocarcinoma pouco diferenciado, adenocarcinoma mucinoso e carcinoma de células em anel de sinete of the tecidos congelados restantes eram descongeladas, e os tecidos e não-SLNs foram rotineiramente cortar a intervalos de 0,2 cm. Subsequentemente, os múltiplos nodos linfáticos seccionados e espécimes ressecados foram fixados em formalina a 10%, processado através de etanol graduadas e embutida em parafina para secções permanentes. Os nódulos linfáticos foram coradas com H &. E e foram examinados por dois patologistas
Neste estudo, todos os gânglios linfáticos ressecados foram seccionados a intervalos de 25 ^ m de espessura de 4 uM Além disso, e seja alternadamente coradas com H & E e coloração imuno-histoquímica (IHQ) utilizando um anticorpo anti-citoqueratina. A técnica utilizada foi ENVISION (DAKO, Carpinteria, CA) para a IHQ e utilizou-se a citoqueratina 8/18 anticorpo monoclonal anti-humano (Santa Cruz Biotechonology, Califórnia, EUA) [17-19]. Todas as principais espécies de tumores a partir de 35 doentes foram submetidos a coloração com citoqueratina e foram utilizadas como um controlo positivo. A micrometástases linfonodo foi definido como um nó negativo para metástase por nosso exame histológico de rotina, mas positiva, quer pela IHC ou os métodos de cortes seriados completos.
Resultados
O número total de seções examinadas era 24.094. Destes, 5986 foram SLNs e 18.108 eram não-SLNs. Dos 35 pacientes, 4 (11%) tiveram micrometástases. Um micrometástases foi encontrada em 6 de 1028 nós (0,6%) e 60 partes (0,3%) de 24094 (Figs. 1, 2). Destes 6 nós envolvendo um micrometástases, 4 eram SLNs e os outros 2 eram não-SLNs na cadeia linfática. Sem micrometástases foram detectados fora da bacia (Tabela 2). Os detalhes do padrão de distribuição, localização e tamanho das micrometástases são mostrados nas Tabelas 3, 4 e 5. Dos 4 pacientes que tiveram um micrometástases linfonodo, 3 pacientes tiveram micrometástases exclusivamente nas SLNs. O outro paciente teve uma micrometástases tanto na SLN e não-SLNs na cadeia linfática. Nenhum paciente teve uma micrometástases apenas em não-SLNs. Nenhum paciente ainda sofreu uma recorrência ou morreu em dezembro de 2007.Table 2 Número e localização dos linfonodos com micrometástases
Localização de nós
Número de nós

com micrometástases
sem micrometástases
SLNs 4
248
não-SLNs em cadeia linfática Página 2
653
não-SLNs fora da bacia
0
121
Todos os nós
6
1022
SLNs, linfonodos sentinela
Tabela padrão 3 Distribuição de linfonodo micrometástases

Número de casos
padrão de Distribuição
de micrometástases
exame histológico de rotina
completa seccionamento de série e IHC
SLNs (-), não SLNs (-)
35
31
SLNs (+), não SLNs (-)
0
3
SLNs (+), não SLNs (+)
0
1 | SLNs (-), não SLNs (+)
0
0
SLNs, linfonodos sentinela; IHC, coloração immunohistochemic
Tabela 4 Localização de linfonodo micrometástases
caso
Localização de tumor

manchado bacias linfáticas
Número de SLNs
Número de micrometastsis
Estação de micrometástases de SLNs
Estação de micrometástases de não SLNs
1 | M, Menos
Esquerda GA
8
1 | No.3 LN
- 2
M, Cartão Postal de. esquerda GA direito GEA
5
1 | No.3 LN Restaurant -. Sims 3
M, Ant
esquerda GA
2
1 | no.3 LN
- 4
M, Menos
Esquerda GA direito GEA
10 Sims 3
no.3 LN
no.3 LN
SLNs, linfonodos sentinela; M, terço médio do estômago; Menos, curvatura menor; Postar.; parede posterior; Formiga. parede anterior; GA, artéria gástrica; GEA, artéria gastroepiplóica; LN No.3, LN ao longo da curvatura menor
Tabela 5 Site e tamanho do nódulo linfático micrometástases
caso
Tipo de nó de linfa

site em linfonodo
Tamanho de micrometástases (mm)
1 | SLN
seio periférica
1.2 Página 2
SLN
seio periférica
0,3 Sims 3
SLN
seio periférica
0,2 4
SLN
seio periférica
0,6
não-SLN sinus periférica
1.0
não-SLN
seio periférica
1.0
SLN, linfonodo sentinela
Figura 1 linfonodos mircrometastasis conforme detectado por coloração imuno-histoquímica com um anticorpo citoqueratina. (× 400).
Figura 2 Sem células cancerosas foram identificados nesta seção pelo exame histológico de rotina. (Hematoxilina & eosina, × 40). micrometástases nó (b) A linfa na seção representante por todo o método de cortes seriados. (Coloração imuno-histoquímica, × 40). (C) linfonodo Micrometástase na seção representante por todo o método de cortes seriados. (Coloração imuno-histoquímica, × 400)
Discussão
Miwa et al. introduziu o conceito de biópsia de linfonodo sentinela para o câncer gástrico [7]. O uso clínico da biópsia do linfonodo sentinela para determinar a abordagem cirúrgica para câncer gástrico exige a verificação deste conceito no nível de micrometástases nos linfonodos. Neste estudo, foi investigada a presença e distribuição de micrometástases em linfonodos em pacientes com câncer gástrico que tinha uma biópsia do linfonodo sentinela. Recentemente, a presença de micro-metástases dos nódulos linfáticos indetectável por exame histológico de rotina foi reportado nos cancros da mama, pulmão, esófago, estômago, cólon e cancros da vesícula biliar. Tem sido relatado que um micrometástases nódulo linfático foi um indicador de prognóstico pobre na mama, pulmão, e cólon [20-22]. Alguns autores relatam que um micrometástases linfonodo foi um factor de mau prognóstico em pacientes com câncer gástrico [23, 24]. Assim, a importância da detecção de micrometástases um nó de linfa tem sido enfatizada por várias doenças neoplásicas.
Uma variedade de métodos para detectar micrometástases existem nódulos linfáticos, incluindo IHC e ensaios de reacção em cadeia da polimerase. Matsumoto et ai. demonstraram que a reacção em cadeia da polimerase-transcriptase reversa (RT-PCR), é mais sensível do que o IHC para a detecção de micrometástases [2]. No entanto, Yamamoto et ai. [25] sugeriram que os resultados positivos com um ensaio molecular, tais como RT-PCR pode não ser indicativa da presença de células tumorais viáveis, mas sim à presença de ADN de tumor e, assim, pode ser associada com uma muito maior taxa de falso positivo, apesar da maior sensibilidade do ensaio molecular. Por outro lado, tem sido relatado que o seccionamento em série aumentou a identificação de células tumorais nos seios de linfonodos periféricos [26]. Pensa-se que cortes seriados com IHC é o método mais preciso para a detecção de micrometástases nos linfonodos. Por isso, submetido a amostra inteira para cortes seriados e IHC. O anticorpo utilizado para IHC foi uma citoqueratina 8/18 anticorpo anti-humano monoclonal que é mais sensível, específica, simples, precisa e econômica do que outros anticorpos para IHC. Depósitos tumorais
dentro gânglios linfáticos foram classificados e encenado de acordo com a orientações revistas estabelecidas pela União Internacional Contra o Câncer (UICC) 6 th Edition. De acordo com este sistema de classificação, metástases menos de 0,2 cm foram considerados micrometástases (MMS), e as células tumorais isoladas (ITC) foram células tumorais individuais ou pequenos grupos de células que mediam não superior a 0,2 mm e foram geralmente detectados por métodos moleculares IHC ou , mas pode ser verificada com H & e. ITC normalmente não mostram evidência de atividade metastática pela proliferação, a indução de uma reação estromal ou penetração de invasão vascular ou linfática parede do seio [27, 28]. Nakajo et ai. [23] e Siewert et ai. [29] relatou que o envolvimento do linfonodo é classificada em formação de cluster ou formas de células individuais, de acordo com os resultados de IHC para citoqueratina. Seus resultados sugerem que as células individuais não podem proliferar nos gânglios linfáticos, porque eles já foram mortos por immunocytes locais e gerais. Um aglomerado de células com uma reacção do estroma podem facilmente proliferar e, por conseguinte, ter um potencial metastático. Em nosso departamento, linfonodos ressecados são rotineiramente cortar em intervalos de 0,2 cm e os gânglios linfáticos são examinados para metástases. Assim, no presente estudo, a definição de linfonodo micrometástases diferia da classificação UICC. Para este estudo foi definido como um nó, negativo para a metástase por nosso exame histológico de rotina de secções cortadas em intervalos de 0,2 cm, mas positiva por cortes seriados completo com H & E e IHC. Além disso, todos os tipos de células individuais e tipos de fragmentação pequena, sem uma reacção do estroma por coloração positiva citoqueratina não foram reconhecidos como células cancerosas no próximo H & E lâmina corada. Assim, excluímos todas as células individuais e pequenos grupos, sem uma reação estromal, que são classificadas como as TIC no sistema de classificação UICC, do grupo linfonodo positivo micrometástases [27, 28].
Foram excluídos os pacientes com câncer gástrico cujos tumores tinham invadido a mucosa neste estudo porque fazer cortes seriados completos e coloração imuno-histoquímica foi um monte de trabalho; Além disso, a taxa de micrometástases um nódulo linfático foi baixa. Consequentemente, nós inscritos de 35 anos que tinha um câncer gástrico que tinham invadido a submucosa ou muscular própria e não tinha nenhuma evidência de uma metástase em linfonodo por exame histológico para este estudo.
Neste estudo, observou-se micrometástases linfonodo em 4 pacientes (11%) com um câncer gástrico que tinham invadido a submucosa ou muscular própria. No cancro gástrico, Isozaki et ai. [30] e Natsugoe et ai. [31] relataram que micrometástases de nódulos linfáticos foram identificadas em 10 a 30% dos espécimes por passo-seccionamento ou IHC. Nossos resultados foram os mais precisos de todos os estudos anteriores e provou as circunstâncias reais de micrometástases linfonodo de cancros gástricos que tinham invadido a submucosa ou muscular própria.
Neste estudo, nós examinamos as micrometástases em linfonodos de SLNs e não -SLNs. Encontramos micrometástases em linfonodos nas SLNs de 4 pacientes. Um paciente também tinha um micrometástases em um não-SLN da base linfática, embora não micrometástases de não-SLNs foram identificados fora da bacia. Além disso, nenhum paciente teve uma micrometástases linfonodo apenas em um não-SLN. Os resultados revelaram que os pacientes que não têm uma micrometástases linfonodo nas SLNs também não tinha um micrometástases nos não-SLNs. Estes resultados podem apoiar o conceito de que a linfa micrometástases nó espalhar pela primeira vez aos SLNs, em seguida, para os não-SLNs na cadeia linfática e finalmente para os não-SLNs fora da bacia. Portanto, com base nesse conceito, é suficiente examinar apenas os SLNs para determinar se existem ou não micrometástases linfonodais em pacientes com câncer gástrico.
Ainda não está claro se um micrometástases linfonodo é um fator prognóstico no câncer gástrico . No entanto, um micrometástases linfonodo foi encontrada em pacientes com câncer gástrico que não tiveram nenhuma evidência de uma metástase em linfonodo por coloração de rotina. Este resultado sugere que devemos reduzir cautelosamente a extensão da dissecção de linfonodos. A ausência intra-operatória de um micrometástases SLN sugere que a extensão da dissecção de linfonodos pode ser reduzida de forma segura, porque é improvável para não-SLNs ter micrometástases sem micrometástases SLN. No caso de cancro da mama, a necessidade para o diagnóstico intra-operatório de micrometástases de nódulos linfáticos não é essencial, porque dissecção adicional dos gânglios linfáticos axilares pode ser realizada facilmente. No entanto, a dissecção posterior dos gânglios linfáticos é difícil em câncer gástrico; Portanto, o diagnóstico intra-operatório de micrometástases linfonodais é crucial. Acreditávamos que quando um micrometástases linfonodo estava presente, deve-se realizar uma dissecção de linfonodos no presente. Nosso estudo utilizou os métodos mais precisos, mas não conseguimos obter os resultados rapidamente o suficiente para um diagnóstico itraoperative. Portanto, é preciso estabelecer um método preciso para uma rápida identificação intra-operatória. Matsumoto et ai. afirmou que imuno rápida intra-operatória foi uma técnica simples e útil para detectar micrometástases em linfonodos [32]. Um sistema de RT-PCR ultra-rápida, o qual pode completar a detecção de células de cancro dentro de aproximadamente 70 minutos, foi desenvolvido. Num futuro próximo, estes métodos serão aplicados para detectar micrometástases em linfonodos em SLNs durante a cirurgia [33].
Conclusão
temos demonstrado a capacidade de detectar micrometástases em linfonodos sujeitando a amostra inteira para completar cortes seriados e IHC para pacientes com câncer gástrico linfonodos negativos que tiveram uma biópsia do linfonodo sentinela. Estes resultados suportam o conceito de que linfa micrometástases nó se espalha pela primeira vez aos SLNs. Além disso, o diagnóstico intra-operatório e rápida de micrometástases linfonodais no SLNs pode ajudar a guiar a dissecção de linfonodos apropriada em pacientes com câncer gástrico. Portanto, o diagnóstico intra-operatória rápida e precisa de micrometástases em linfonodos na SLNs será necessária e deve ser o foco de estudos futuros.
Declarações
Agradecimentos
Os autores são gratos ao Professor Tetsuo Ohta na Universidade Kanazawa para este estude. E também graças ao pré-professor Koichi Miwa.
Autores 'arquivos enviados originais para imagens
Abaixo estão os links para os autores' arquivos enviados originais de imagens. 'arquivo original para a figura 1 13046_2008_7_MOESM2_ESM.tiff Autores' 13046_2008_7_MOESM1_ESM.tiff Autores arquivo original para a figura 2

• fibroblastos associados ao câncer são positivamente correlacionados com o potencial metastático de fibroblastos associados ao câncer gástrico cancers
• não codificante perfil de expressão RNA longa no câncer gástrico humano e seus significados clínicos