Kimutatása sentinel és nem sentinel nyirokcsomó mikrometasztázi- által teljes sorozatszámot szakaszoló és immunhisztokémiai vizsgálatok gyomor cancer

kimutatása sentinel és nem sentinel nyirokcsomó mikrometasztázi- által teljes sorozatszámot szakaszoló és immunhisztokémiai vizsgálatok gyomorrák katalógusa Abstract Background katalógusa
Megvizsgáltuk a jelenlétét és eloszlását a sentinel és a nem sentinel nyirokcsomó mikrometasztázi- segítségével teljes sorozatszámot szakaszoló és immunhisztokémiai festéssel (IHC), hogy vizsgálja meg, hogy a nyirokcsomó mikrometasztázi- átterjedt a sentinel nyirokcsomó az első. katalógusa módszerek katalógusa a összesen 35 beteg átesett gastrectomián a sentinel nyirokcsomó biopszia gyomorrák, vontunk be a vizsgálatba. Összesen 1028 nyirokcsomók 35 betegek gyomorrák nélkül metasztázis nyirokcsomó állandó szakasz hematoxilinnel és eozin-festés (H &E) választottunk ki. Voltak 252 sentinel csomópontok és a többi 776 nem voltak sentinel csomópontok. Minden csomópont metszetekre sorozathígítást és megfestettük felváltva H &E és IHC. Nyirokcsomó mikrometasztázisok definiáltuk bizonyul pozitív első vagy az IHC vagy a teljes soros vágási.
Eredménye
mikrometasztázisok detektáltunk 4 (11%), a 35 beteg, 6 (0,58%) 1028 csomópontok. Közülük 4 beteg, 3 volt mikrometasztázisok kizárólag sentinel csomópontok, és a többi volt mikrometasztázisok mind sentinel és nem sentinel csomópontok. Nem volt beteg, aki a micrometasitases csak nem sentinel csomópontok. Katalógusa Következtetés
Ezek az eredmények alátámasztják azt az elgondolást, hogy a nyirokcsomó mikrometasztázisok gyomorrák terjed első sentinel csomópontok. Katalógusa Háttér
prognózisa gyomorrákos betegeknél befolyásolja elsősorban a jelenléte nyirokcsomó-metasztázisok. Nyirokcsomó metasztázisok gyomorrákos betegekben a nyálkahártya alatti invázió fordulnak elő 15-20% -ánál; Ezért egy nyirokcsomó-eltávolítás szükségtelen lehet, a fennmaradó 80-85% -ánál [1]. Pontos és megbízható mutatója megjósolni hiányában nyirokcsomóáttétek megszüntetné sok felesleges lymphadenectomies [1]. Ezért a műtét előtti és pontos diagnózist nyirokcsomóáttétek továbbra is fontos [2-4]. A sentinel node-biopszia gyomorrák intraoperatív diagnosztikus módszer kimutatására nyirokcsomóáttétek [5-7]. 1992-ben, Morton et al. [8] bevezette a technika intraoperatív festék injekció helyén a melanoma, hogy azonosítsa a "sentinel" csomópont, amely az első csomópont, amely az afferens nyirokrendszerbe be a daganat helyén. Miwa és munkatársai. [7, 9] alkalmazott ilyen típusú festék mapping technika azonosítani a sentinel csomópontok gyomorrák, és jelentette a nagy pozitív prediktív értéke és pontossága a sentinel nyirokcsomó biopszia korai gyomorrák. Másrészt, a jelenléte egy mikrometasztázisok egy nyirokcsomó komoly kérdés a klinikai alkalmazása sentinel nyirokcsomó-biopszia korai gyomorrák. Nyirokcsomó mikrometasztázisok találtak betegeknél határoztuk meg, hogy a nyirokcsomó-negatív rutin szövettani vizsgálat. Előző kutató arról számolt be, hogy a nyirokcsomó mikrometasztázi- lehetett kimutatni a lépés metszetek immunhisztokémiai festéssel és a reverz transzkriptáz-polimeráz láncreakció [10-12]. Azonban már néhány tudósít az elosztó mikrometasztázisok mind a sentinel és nem sentinel csomópontok nyirokcsomó-negatív gyomorrákos betegek rutin szövettani vizsgálat [13-15].
Ebben a tanulmányban azt visszamenőleg vizsgálta a jelenléte és eloszlása ​​sentinel és nem sentinel node mikrometasztázi- segítségével teljes sorozatszámot szakaszoló és immunhisztokémiai festéssel. Ezek a technika a legpontosabb módszer kimutatására mikrometasztázisok csomópontok, így meg tudtuk állapítani, hogy a nyirokcsomó mikrometasztázi- átterjedt a sentinel nyirokcsomó az első. Katalógusa Módszerek
A sentinel nyirokcsomó (SLN) biopszia gyomorrák végeztek 243 beteg Tanszékén gasztroenterológiai sebészet, Kanazawa Egyetemi Kórház 1993-tól 2002-Mielőtt a sentinel nyirokcsomó biopszia, írásos beleegyezését adta összhangban etikai bizottság az emberi kísérletezés Kanazawa Egyetemi Kórház. E betegek, mi bevont 35, aki egy rák, amely behatolt a submucosa vagy muscularis propria és nem volt nyirokcsomó-metasztázis által rutin hisztológiai vizsgálat ebben a vizsgálatban. Egyik beteg kapott preoperatív kemoterápia vagy sugárkezelés. Alapján a japán osztályozása gyomorrák, mind a 35 betegnél a sentinel nyirokcsomó biopszia, majd hagyományos nyirokcsomó back-up boncolás [16]. Összesen 1028 nyirokcsomókat eltávolítottuk a 35 beteg. Ezek közül 252 nyirokcsomók nem voltak SLN és a többi 776 nem voltak SLN. Minden 252 SLN negatívak voltak metasztázisok mind intraoperatív fagyasztott szakasz vizsgálata és állandó szakasz hematoxilinnel és eozin-festés (H &E). A másik 776 csomópontok negatívak voltak metasztázisok szövettani vizsgálat a H & E többlépcsős szakaszoló 0,2 cm-enként. A klinikai és patológiai adatok alapján értékeltük a japán osztályozása gyomorrák [16]. A betegek jellemzőit a táblázatban felsorolt ​​1. detektálására SLN, használtuk intraoperatív endoszkópos nyirokrendszeri térképezés (IELM), amely abból állt, egy intraoperatív injekció 0,2 ml 2% -os Patent Blue a nyálkahártya alatti réteg négy üzem körül gyomorkarcinóma keresztül egy gasztroszkóp [9]. A festék azonnal megjelent a savós felszíni és foltos a nyirokerek és csomópontok [5, 9]. Ebben a vizsgálatban az SLN definiáltuk a nyirokcsomó, hogy foltos kék után 20 perccel az injekció beadása. A nyirokrendszer medencék az a terület, amely a foltos nyirokerek, és amelyek képesek voltak, hogy öt csoportba oszthatók utasítása szerint az artériák körül a gyomor, az alábbiak szerint: a bal oldali gyomor artéria környékén, a jobb gyomor artéria környékén, a jobb oldali gastroepiploica artéria környékén, a jobb oldali gastroepiploica artéria környékén és a hátulsó gyomor artéria környékén. A kimetszett SLN küldtek fagyasztott-szakasz vizsgálata. A nyirokcsomók megfestettük H &E reprezentatív metszeteket síkja mentén a legnagyobb átmérő, amely tartalmazta a csomópont hilus, és megvizsgáltuk intraoperatív számára metastases.Table 1 Betegek jellemzői
Az átlagéletkor (tartomány) katalógusa 62 (37-85) hotelben szex katalógusa Férfi katalógusa 23 fiatal női katalógusa 12 katalógusa mélysége invázió
SM
24 katalógusa MP katalógusa 11
szövettani típus katalógusa Differenciált * katalógusa 18 katalógusa differenciálatlan * *
17 katalógusa nyirokerek invázió katalógusa Negatív katalógusa 16
pozitív katalógusa 19 katalógusa Vascular invázió katalógusa Negatív katalógusa 30 katalógusa pozitív katalógusa 5 katalógusa SM, submucosát; MP, muscularis propuria katalógusa * A differenciált típus, papilláris, jól és közepesen differenciált adenocarcinoma csöves katalógusa ** A differenciálatlan típus; rosszul differenciált adenocarcinoma, mucinosus adenocarcinoma és pecsétgyűrű sejtes carcinoma.
A maradék fagyasztott szöveteket felengedett, és a szövetek és nem SLN rutinszerűen vágjuk 0,2 cm-enként. Ezt követően, a többszörös szekcionált nyirokcsomók és kimetszett mintákat fixáltuk 10% -os formalin, a feldolgozott keresztül osztályozzák etanol, és paraffinba ágyaztuk állandó szakaszok. A nyirokcsomók megfestettük H &E és vizsgáltuk Két patológus.
Ebben a vizsgálatban az összes kimetszett nyirokcsomókat szekcionált sorosan 25-um időközönként 4-um vastagságú Amellett, és vagy váltakozva megfestettük H &E és immunhisztokémiai festést (IHC) segítségével egy anti-citokeratin antitest. ENVISION technikát alkalmaztunk (DAKO, Carpinteria, CA) IHC és használtuk monoklonális anti-humán citokeratin 8/18 antitesttel (Santa Cruz Biotechonology, California, USA) [17-19]. Minden fő tumor származó mintákban 35 beteg vetettük alá citokeratin festéssel és használtunk pozitív kontrollként. A nyirokcsomó mikrometasztázisok definiálták csomópont negatív metasztázis által rutin szövettani vizsgálat, de pozitív akár a IHC vagy a teljes sorozatszámot vágási módszerekkel. Katalógusa Eredmények katalógusa A teljes szakaszok száma vizsgált volt 24.094. Ezek közül 5986 volt SLN és 18.108 volt nem-SLN. A 35 beteg közül 4 (11%) volt mikrometasztázi-. A mikrometasztázisok találtak 6 1028 csomópontok (0,6%) és 60 szakaszok (0,3%) a 24.094 (ábra. 1, 2). Ezen 6 csomópontok bevonásával mikrometasztázisok, 4 volt SLN és a másik 2 nem voltak SLN a nyirok-medencében. Nem mikrometasztázisok mutattunk kívül a medence (2. táblázat). A részleteket a eloszlási mintázatát, helye és mérete a mikrometasztázisok táblázatban mutatjuk be a 3., 4. és 5. a 4 beteg, aki egy nyirokcsomó mikrometasztázisok, 3 betegnél mikrometasztázisok kizárólag az SLN. A többi betegnél a mikrometasztázisok mind a SLN és non-SLN a nyirok-medencében. Betegnél sem mikrometasztázisok csak nem SLN. Nem beteg még szenvedett kiújulás vagy pusztult el december 2007.Table száma 2 és helye nyirokcsomók mikrometasztázisok katalógusa Hely csomópontok Matton Csomópontok száma Matton katalógusa a mikrometasztázisok
nélkül mikrometasztázisok
SLN katalógusa 4 katalógusa 248 katalógusa nem SLN limfatikus medencében katalógusa 2
653
nem SLN ki medence katalógusa 0 katalógusa 121 Tanuld az összes csomópont katalógusa 6 katalógusa 1022 katalógusa SLN, sentinel nyirokcsomó katalógusa 3. táblázat eloszlását nyirokcsomó mikrometasztázisok katalógusa katalógusa esetek száma
eloszlását mikrometasztázisok
rutin szövettani vizsgálat Matton teljes soros szakaszoló és IHC Matton SLN (-), a nem-SLN (-) hotelben 35 katalógusa 31 katalógusa SLN (+), nem SLN (-) hotelben 0 katalógusa 3
SLN (+), a nem-SLN (+)
0
1
SLN (-), a nem-SLN (+)
0
0
SLN, sentinel nyirokcsomók IHC, immunhisztokémiai festést katalógusa 4. táblázat helye nyirokcsomó mikrometasztázisok katalógusa Case Matton elhelyezkedése tumor
katalógusa Foltos nyirok medencék
száma SLN Matton száma micrometastsis Matton Station mikrometasztázisok az SLN
Station mikrometasztázisok nem SLN
1 katalógusa M, kevesebb
Bal GA
8 katalógusa 1 katalógusa No.3 LN -
2 | M, Post. katalógusa bal GA Jobb GEA katalógusa 5 katalógusa 1 katalógusa No.3 LN -
3 katalógusa M, Ant. katalógusa bal GA
2 | 1 katalógusa No.3 LN -
4 katalógusa M, kevesebb
Bal GA Jobb GEA katalógusa 10 katalógusa 3 katalógusa No.3 LN katalógusa No.3 LN katalógusa SLN, sentinel nyirokcsomó; M, a Közel-harmada a gyomorban; Kevesebb, kisebb görbület; Hozzászólás .; hátsó fal; Hangya. elülső falát; GA, gyomor artéria; GEA, gastroepiploica artéria; No.3 LN, LN mentén kisebb görbület katalógusa 5. táblázat és méretüktől nyirokcsomó mikrometasztázisok katalógusa Case Matton típusa nyirokcsomó

Site nyirokcsomó Matton mérete mikrometasztázisok (mm) Matton 1 katalógusa SLN katalógusa perifériás sinus katalógusa 1.2 katalógusa 2 | SLN
perifériás sinus katalógusa 0.3 katalógusa 3 katalógusa SLN katalógusa perifériás sinus katalógusa 0.2 katalógusa 4 katalógusa SLN katalógusa perifériás sinus katalógusa 0.6 katalógusa nem SLN katalógusa kerületi sinus katalógusa 1.0 katalógusa nem SLN katalógusa perifériás sinus katalógusa 1.0 katalógusa SLN, sentinel nyirokcsomó katalógusa 1. ábra nyirokcsomó mircrometastasis mint immunhisztokémiai festés egy citokeratint antitest. (X 400).
2. ábra Nem rákos sejteket azonosítottak ebben a részben rutin szövettani vizsgálat. (Hematoxilin & eozin festéssel, × 40). (B) Nyirokcsomó mikrometasztázisok reprezentatív részén az egész soros vágási módszer. (Immunhisztokémiai, × 40). (C) mikrometasztázisok nyirokcsomó reprezentatív részén az egész soros vágási módszer. (Immunhisztokémiai, × 400) hotelben Vita katalógusa Miwa és mtsai. bevezette a sentinel nyirokcsomó biopszia gyomorrák [7]. A klinikai alkalmazása a sentinel nyirokcsomó biopszia, hogy meghatározzák a sebészeti megközelítés gyomorrák előírja az ellenőrző e fogalom szintjén nyirokcsomó mikrometasztázi-. Ebben a tanulmányban azt vizsgáltuk, hogy jelenléte és eloszlása ​​nyirokcsomó mikrometasztázisok gyomorrákos betegeknél, akiknek a sentinel nyirokcsomó biopszia. A közelmúltban, a jelenléte a nyirokcsomó mikrometasztázisok kimutathatatlan által rutin hisztológiai vizsgálat számoltak be emlő, tüdő, nyelőcső, gyomor, vastagbél és az epehólyag rák. Leírták, hogy a nyirokcsomó mikrometasztázisok volt rossz prognosztikai indikátor mell-, tüdő-, és vastagbélrák [20-22]. Néhány szerző beszámolt, hogy a nyirokcsomó mikrometasztázisok volt rossz prognosztikai faktor gyomorrákos betegek [23, 24]. Így a fontosságát, hogy a detektáló nyirokcsomó mikrometasztázisok hangsúlyozták különböző daganatos betegségek.
Különféle módszerek detektálására nyirokcsomó mikrometasztázisok létezik, beleértve IHC és polimeráz láncreakció vizsgálatokban. Matsumoto et al. Kimutattuk, hogy a reverz transzkriptáz-polimeráz láncreakció (RT-PCR) sokkal érzékenyebb, mint az IHC kimutatására mikrometasztázisok [2]. Azonban Yamamoto et al. [25] azt javasolta, hogy pozitív eredményeket a molekuláris vizsgálati eljárások, mint például RT-PCR nem lehet jelenlétére utaló életképes tumorsejtek, hanem a jelenléte a tumor DNS, és így, kapcsolatba hozható egy jelentősen megnövekedett hamis pozitív arány ellenére magasabb érzékenység a molekuláris vizsgálat. Másfelől, azt is leírták, hogy a sorosan sectioning fokozott azonosítására a tumorsejtek a perifériás orrmelléküregek nyirokcsomók [26]. Úgy gondolják, hogy a soros szeletelés IHC a legpontosabb módszer kimutatására nyirokcsomó mikrometasztázisok. Ezért kitéve a teljes mintából soros vágási és IHC. Az antitest használt IHC volt egy monoklonális anti-humán citokeratin 8/18 antitest, amely sokkal érzékenyebb, specifikus, egyszerű, pontos, és gazdaságosabb, mint más ellenanyagok IHC.
Tumordepozitummal belül nyirokcsomókat besorolása és rendeztek szerinti felülvizsgált iránymutatások a Nemzetközi Rákellenes Unió (UICC) 6 th Edition. E szerint a besorolási rendszer, metasztázis kevesebb, mint 0,2 cm tekintettük mikrometasztázisok (MMS), és izolált tumorsejtek (ITC) voltak egyetlen tumorsejtek vagy kis sejtcsoportok, hogy mért nem nagyobb, mint 0,2 mm, és rendszerint detektáltuk IHC vagy molekuláris módszerekkel , de lehet ellenőrizni H &E. ITC általában nem mutatnak bizonyítékot a metasztatikus aktivitás által proliferáció indukciója egy stromális reakció, vagy behatolása érrendszeri vagy nyirok sinus fal invázió [27, 28]. Nakajo et al. [23] és Siewert et al. [29] számolt be, hogy a nyirokcsomók érintettsége sorolják klaszterképződést vagy egyetlen sejt formája szerint az eredmények IHC a citokeratin. Az eredmények arra utalnak, hogy egyes sejtek nem szaporodnak a nyirokcsomókban, mert már megölte a helyi és általános immunsejtek. A klaszter a sejtek egy stromális reakció könnyen szaporodnak, és ezért metasztatikus potenciálját. A mi osztály, kimetszett nyirokcsomókat rutinszerűen vágjuk 0,2 cm-enként, és a nyirokcsomók megvizsgáljuk áttétek. Így, ebben a tanulmányban, amelynek meghatározása nyirokcsomó mikrometasztázisok eltértek a UICC besorolás. Ebben a vizsgálatban azt határoztuk meg, mint egy csomópont, negatív metasztázis által rutin hisztológiai vizsgálata metszeteket 0,2 cm-enként, de pozitív teljes soros szeletelés H &E és IHC. Ezen kívül minden egyes sejttípus és a kis cluster típusú nélkül stromális reakció citokeratin pozitív festődés nem ismerték, mint a rák sejtek a következő H &E festett csúszda. Így kizárt minden egyes sejtek és a kis fürtök nélkül stroma reakció, amelyek besorolásuk szerint az ITC az UICC osztályozási rendszer, a pozitív nyirokcsomó mikrometasztázisok csoport [27, 28].
Kizártuk a gyomorrákos betegek, akiknek a daganata megszállták a nyálkahártya ebben a vizsgálatban, mert ezzel teljes sorozatszámot szakaszoló és immunhisztokémiai festés volt a sok munkát; Ezen túlmenően, a mértéke egy nyirokcsomó mikrometasztázisok alacsony volt. Ennek megfelelően mi beiratkozott 35, aki egy gyomorrák, hogy betört a nyálkahártya alatti vagy muscularis propria és nem volt bizonyíték a nyirokcsomó metasztázis szövettani vizsgálat ebben a vizsgálatban.
Ebben a tanulmányban azt tapasztaltuk, nyirokcsomó mikrometasztázisok 4 betegnél (11%), a gyomorrák, hogy betört a nyálkahártya alatti vagy muscularis propria. A gyomorrák, Isozaki et al. [30] és Natsugoe et al. [31] számolt be, hogy a nyirokcsomó mikrometasztázisok azonosítottak 10-30% példányok lépésre-szeletelés vagy IHC. Eredményeink a legpontosabb az összes korábbi tanulmányok és bizonyított a valós helyzetet: nyirokcsomó mikrometasztázisok a gyomorrák, hogy betört a nyálkahártya alatti vagy muscularis propria.
Ebben a tanulmányban megvizsgáltuk a nyirokcsomó mikrometasztázist az SLN és non -SLNs. Találtunk nyirokcsomó mikrometasztázisok SLN 4 betegnél. Egy beteg is volt mikrometasztázisok egy nem SLN a nyirok-medence, bár nem mikrometasztázisok nem SLN azonosítottak kívül a medence. Továbbá nem beteg volt nyirokcsomó mikrometasztázisok csak egy nem-SLN. Az eredményeink azt mutatták, hogy a betegek, akik nem rendelkeznek a nyirokcsomó mikrometasztázisok az SLN is nem volt mikrometasztázisok a nem-SLN. Ezek az eredmények alátámasztják azt az elgondolást, hogy a nyirokcsomó mikrometasztázi- terjedt először a SLN, majd a nem-SLN a nyirok-medencében, és végül a nem SLN kívül a medence. Ennek alapján, ez a koncepció, elegendő csak azt vizsgálják, az SLN az határozza meg, hogy vannak nyirokcsomó mikrometasztázisok gyomorrákos betegeknél.
Még mindig nem világos, hogy a nyirokcsomó mikrometasztázisok prognosztikai tényező a gyomorrák . Azonban egy nyirokcsomó mikrometasztázisok találtak gyomorrákos betegek, akiknek nem volt bizonyíték a nyirokcsomó-metasztázis rutin festéssel. Ez az eredmény arra utal, hogy meg kell óvatosan csökkenteni a mértékét nyirokcsomó boncolás. Az intraoperatív hiánya SLN mikrometasztázisok arra utal, hogy milyen mértékben nyirokcsomók lehet biztonságosan csökkenteni, mert nem valószínű, nem SLN hogy mikrometasztázi- nélkül SLN mikrometasztázisok. Abban az esetben, a mellrák, a szükségességét, hogy az intraoperatív diagnosztizálására nyirokcsomó mikrometasztázisok nem lényeges, mivel a kiegészítő boncolása hónalji nyirokcsomók könnyen végrehajtható. Azonban az ezt követő boncolás nyirokcsomók nehéz a gyomorrák; ezért a műtéti diagnózis nyirokcsomó mikrometasztázi- elengedhetetlen. Azt gondoljuk, hogy ha a nyirokcsomó mikrometasztázisok jelen volt, akkor végre kell hajtani a nyirokcsomók jelenleg. A vizsgálatban használt legpontosabb módszer, de nem tudtuk megszerezni a gyors eredményeket elég egy itraoperative diagnózist. Ezért meg kell létrehozni egy pontos eljárást gyors intraoperatív azonosítás. Matsumoto et al. azt állította, hogy az intraoperatív gyors immunfestődést egy egyszerű és hasznos módszer kimutatására nyirokcsomó mikrometasztázi- [32]. Egy ultra-gyors RT-PCR rendszer, amely lehet teljes kimutatására rákos sejtek belül körülbelül 70 perc, került kialakításra. A közeljövőben, ezeket a módszereket kell alkalmazni, hogy észlelni nyirokcsomó mikrometasztázisok SLN a műtét során [33]. Katalógusa Következtetés katalógusa már bizonyították, hogy képesek érzékelni nyirokcsomó mikrometasztázi- vetjük alá a teljes mintából teljes soros vágási és IHC a nyirokcsomó-negatív gyomorrákos betegek, akiknél a sentinel nyirokcsomó biopszia. Ezek az eredmények alátámasztják azt az elgondolást, hogy a nyirokcsomó mikrometasztázisok terjed először a SLN. Ezen túlmenően, a műtéti és gyors diagnosztizálása nyirokcsomó mikrometasztázisok SLN segíthet irányítani a megfelelő nyirokcsomók olyan gyomorrákos betegek. Ezért a gyors és pontos diagnózis intraoperatív nyirokcsomó mikrometasztázisok SLN lesz szükség, és a hangsúly a jövőkutatás. Katalógusa nyilatkozatok katalógusa Köszönetnyilvánítás katalógusa A szerzők hálás professzor Tetsuo Ohta Kanazawa Egyetem erre tanulmány. És mi is köszönhető, hogy előre professzor Koichi Miwa. Katalógusa Szerzők eredeti beküldötteknek képeket
alábbiakban a linkeket a szerzők eredeti beküldötteknek képeket. 13046_2008_7_MOESM1_ESM.tiff A szerzők eredeti fájlt az 1. ábra szerinti 13046_2008_7_MOESM2_ESM.tiff A szerzők eredeti fájlt a 2. ábrán

• Rákhoz kapcsolódó fibroblasztok pozitívan korrelál a metasztatikus potenciálja a humán gyomor cancers
• Hosszú nem-kódoló RNS-expressziós profil humán gyomorrák és klinikai significances