Otkrivanje čuvara i ne-sentinel limfnih čvorova mikrometastaza potpunim serijski podjelom i imunohistokemijska analiza za rak želuca

Otkrivanje sentinel i ne-sentinel limfnih čvorova mikrometastaza potpunim serijski podjelom i imunohistokemijska analiza za rak želuca
apstraktne pregled Pozadina pregled, istražili smo prisutnost i distribuciju stražaru i ne-stražarskih čvorova mikrometastaza koristi kompletnu seriju secira i imunohistokemijska bojanje (IHH), provjeriti da li limfnih čvorova mikrometastaze proširio na sentinel limfni čvorovi na prvom mjestu.
Metode
ukupno 35 pacijenata koji su se podvrgnuli gastrektomija s sentinel limfnog čvora biopsije raka želuca, upisano u ovom istraživanju. Ukupno 1028 limfnih čvorova od 35 pacijenata koji imaju rak želuca, bez metastaza limfnog čvora od strane stalnog dijela hematoksilinom i eozinom bojenja (H &E) odabrano. Bilo je 252 sentinel čvorova, a drugi 776 su bili ne-sentinel čvora. Svi čvorovi su podijeljeni serijski i obojeni naizmjence s H &E i IHC. Limfni čvor mikrometastaze je definirana kao dokazuje da se pozitivni prvo bilo IHC ili potpuni serijski mikroskopom. Pregled Rezultati
mikrometastaza otkrivene su u 4 (11%) od 35 bolesnika, 6 (0,58%) od 1028 čvorova. Od tih 4 bolesnika, 3 imao mikrometastaza isključivo u sentinel čvorova, a drugi je imao micrometastasis u oba čuvara i ne-sentinel čvorova. Nije bilo pacijent koji je imao micrometasitases samo u ne-sentinel čvora. Pregled Zaključak
Ovi rezultati podupiru koncept da limfni čvor micrometastasis karcinoma želuca širi prvi stražarskih čvorova. Pregled Pozadina pregled prognozu bolesnika s karcinomom želuca utječe prvenstveno prisustvo metastaza u limfnim čvorovima. Metastaze limfnih čvorova u bolesnika s rakom želuca s submukozne invazije pojaviti u 15 do 20% bolesnika; dakle, limfni čvor disekcija ne mora biti nužno za preostalih 80 do 85% bolesnika [1]. Točan i pouzdan pokazatelj za predviđanje odsutnost metastaza u limfnim čvorovima će eliminirati mnoge nepotrebne lymphadenectomies [1]. Dakle, preoperativna i točna dijagnoza metastaza u limfnim čvorovima i dalje važnu [2-4]. Čuvara čvor biopsija za rak želuca je intraoperacijske dijagnostička metoda za detekciju metastaze u limfne čvorove [5-7]. Godine 1992, Morton i sur. [8] uveo tehniku ​​intraoperacijske injekcije boje na mjestu melanoma identificiranja "stražarsku" čvor, što je prvi čvor koji aferentnih lymphatics ući sa stranice tumora. Miwa et al. [7, 9] zaposleni ove vrste boja Mapping tehnike za identifikaciju stražarskih čvorova raka želuca, a izvijestio visoku pozitivnu prediktivnu vrijednost i točnost za sentinel čvora biopsije ranog karcinoma želuca. S druge strane, prisutnost micrometastasis u limfni čvor je ozbiljan problem za kliničku primjenu sentinel čvora biopsije za rano raka želuca. Limfnih čvorova mikrometastaze pronađeni su u pacijenata određuje se čvor negativni rutinskom histološki pregled. Prethodni istraživači su izvijestili da je u limfnim čvorovima mikrometastaze mogao biti otkriven pomoću korak secira, imunohistokemijskih bojanja i obrnuti lančane reakcije RT-polimeraze [10-12]. Međutim, bilo je nekoliko izvješća o raspodjeli mikrometastaza u oba sentinel i ne-sentinel čvora u čvoru negativnih pacijenata s rakom želuca rutinskom histoloških ispitivanja [13-15].
U ovoj studiji, retrospektivno smo istražili prisutnost i distribucija čuvara i ne-sentinel čvora mikrometastaza koriste kompletan serijski secira i imunohistokemijske bojenje. To je tehnika su najtočnije metode za otkrivanje mikrometastaza u čvorove, da bi se utvrdilo je li u limfnim čvorovima mikrometastaze se proširio na sentinel limfnih čvorova na prvom mjestu.
Metode
A sentinel limfnog čvora (SLNs) biopsija za rak želuca je izvršena na 243 pacijenata na Odjelu za Gastroenterologic kirurgiju Kanazawa sveučilišne bolnice od 1993. do 2002. Prije sentinel čvora biopsija, pismeni informirani pristanak dobiven u skladu s etičkim standardima odbora za ljudska eksperimentiranja Kanazawa sveučilišne bolnice. Od tih bolesnika, upisani smo 35 koji je imao rak koji su izvršili invaziju na sluznicu ili muskularis propria i nije imao limfnog čvora metastaza rutinskom histološki pregled za ove studije. Nijedan od pacijenata nije primila predoperativnu kemoterapija ili radioterapija. Na temelju japanskom klasifikaciji karcinom želuca, svih 35 pacijenata doživio sentinel čvora biopsiju zatim uobičajenim Limfadenektomija za back-up seciranja [16]. Ukupno 1028 limfnih čvorova su uklonjeni od 35 bolesnika. Od tog broja, 252 su limfni čvorovi bili SLNs a drugi 776 bili su ne-SLNs. Sve 252 SLNs su negativni za metastaze i na intraoperacijske ispita smrznuti presjeka i stalnog dijela hematoksilinom i eozinom bojenja (H &E). Ostali 776 čvorovi bili su negativni na metastaze na histološki pregled po H &E multiple korak secira u razmacima od 0,2 cm. U kliničko podaci su procijenjeni prema japanskoj klasifikaciji rak želuca [16]. Karakteristike pacijenata su prikazani u Tablici 1. Za detektiranje SLNs, koristili smo intraoperativni endoskopskog limfni mapiranje (IELM), koji se sastojao od intraoperativna injekcije 0,2 ml 2% -tne patenta plave u submukozne sloja na četiri mjesta oko želučanog karcinoma putem gastroskop [9]. Boja se odmah pojavio na površini seroznog i obojeni limfne žile i čvorove [5, 9]. U ovom istraživanju, SLN je definirana kao limfnom čvoru koji obojenog plave 20 minuta nakon injekcije. Limfne bazeni su definirani kao područja koje sadrži obojenih limfne žile, a koji su mogli biti podijeljeni u pet kategorija u skladu s uputama arterija okružen želudac, i to: lijevi područje želučane arterije, pravo područje želuca arterija, pravo područje gastroepiploic arterija, pravo područje gastroepiploic arterija i stražnji prostor želučane arterije. Izvađeni SLNs upućeno smrznute presjeka pregleda. Limfni čvorovi obojene s H &E na reprezentativnim rezovi su duž ravnine s najvećim promjerom koji je uključivao čvor hilus i ispituje intraoperativno za karakteristike metastases.Table 1 bolesnika pregled Median age (raspon) pregled, 62 (37-85)
Sex pregled muški pregled 23 pregled ženskih pregled 12 pregled Dubina invazije
SM
24 pregled MP
11 pregled histološkog tipa pregled diferenciranih * pregled 18 pregled Nediferencirani * *
17
limfne žile invaziju pregled Negativna pregled 16. pregled pozitivnih pregled 19
Vascular invazija pregled Negativna pregled 30. pregled pozitivnih pregled pet pregled SM, submukoza; MP, muscularis propuria pregled * U diferencirane tipa; papilarni, dobro i umjereno se razlikuju cjevaste adenokarcinoma pregled ** U nediferencirane tipa;. Slabo diferencirani adenokarcinom, mucinozni adenokarcinom i karcinom pečatnjak-prsten
preostale smrznutog tkiva su odmrznuti i tkiva i non-SLNs su rutinski izrezati u razmacima od 0,2 cm. Nakon toga, više prerezani limfni čvorovi i resected Uzorci su fiksirani u 10% formalinu, obrađuje kroz ocjenjuju etanolom te uklopljeno u parafin za stalne dijelove. Limfni čvorovi su obojeni s H &, E i ispitana su dva patologa
U ovoj studiji, svi reseciran limfni čvorovi su razdvojeni serijski pri 25 lm intervalima debljine 4 um, uz i ili naizmjence obojeni s H &E i imunohistokemijsko bojanje (IHH) koristeći anti-citokeratin antitijela. Tehnika isplanirati se koristi (Dako, Carpinteria, CA) za IHC i koristili smo monoklonsko anti-ljudski keratin 8/18 protutijela (Santa Cruz Biotechonology, Kalifornija, SAD) [17-19]. Svi glavni uzorci tumora iz 35 bolesnika podvrgnuto citokeratin bojenja te su korišteni kao pozitivna kontrola. Limfnog čvora micrometastasis definiran kao čvor negativnog za metastaziranje od strane našeg rutinskog histološka ispitivanja, ali pozitivne strane bilo IHC ili potpune serijske metoda za sekcioniranje. Pregled Rezultati
Ukupan broj sekcija ispitao je 24.094. Od tog broja, 5.986 su bili SLNs i 18.108 bili su ne-SLNs. Od 35 pacijenata, 4 (11%) imalo mikrometastaza. Micrometastasis pronađena je u 6 od 1028 čvorova (0,6%) i 60 dijelova (0,3%) od 24.094 (Sl. 1, 2). Od tih 6 čvorova koji uključuju micrometastasis, 4 su bili SLNs, a druga dva su ne-SLNs u limfna bazena. Nema mikrometastaze otkrivene su izvan bazena (tablica 2). Detalji strukturu distribucije, mjestu i veličini mikrometastaza prikazani su u Tablicama 3, 4 i 5. od 4 bolesnika koji su imali limfnog čvora micrometastasis, 3 bolesnika imalo mikrometastaza isključivo u SLNs. Drugi pacijent je imao micrometastasis u oba SLN i ne-SLNs u limfni bazena. Nijedan pacijent imao micrometastasis samo u ne-SLNs. Nijedan pacijent još nije doživio recidiv ili je umro od prosinca 2007.Table 2 Broj i položaj limfnih čvorova s ​​micrometastasis pregled Lokacija čvorova
Broj čvorova
pregled sa micrometastasis
bez micrometastasis
SLNs pregled 4
248 pregled ne-SLNs u limfni bazenu
2 pregled 653 pregled ne-SLNs izvan bazena
0
121
svim čvorovima pregled 6 pregled 1022
SLNs, sentinel limfni čvorovi pregled Tablica 3 Distribucija obrazac limfni čvor micrometastasis pregled pregled, Broj slučajeva

distribuciji obrazac micrometastasis
rutinskog histološki pregled
potpunu serijski secira i IHC
SLNs (-), a ne SLNs (-)
35
31 pregled SLNs (+), a ne SLNs (-) pregled, 0 pregled 3
SLNs (+), a ne SLNs (+)
0 pregled 1 pregled SLNs (-), a ne SLNs (+)
0 pregled 0 pregled SLNs, sentinel limfni čvorovi; IHC, immunohistochemic bojenje pregled Tablica 4 Lokacija limfnog čvora micrometastasis pregled Slučaj pregled
Lokacija tumora
pregled bojen limfne bazeni
Broj SLNs
Broj micrometastsis
stanicu micrometastasis od SLNs
Station of micrometastasis ne-SLNs
pregled 1 pregled M, manje
Lijevo GA
8
1 pregled No.3 LN
- 2 pregled, M, Post pregled. Lijevo GA Pravo GEA pregled 5
1 pregled No.3 LN pregled -.
3 pregled, M, Ant pregled Lijevo GA
2 pregled, 1 pregled No.3 LN
- 4 pregled, M, manje
Lijevo GA Pravo GEA pregled 10 pregled 3 pregled No.3 LN pregled No.3 LN pregled SLNs, sentinel limfnih čvorova; M, Srednja trećina želuca; Manje, manje zakrivljenosti; Post .; posterior zid; Mrav. prednji zid; GA, želučane arterije; GEA, gastroepiploic arterija; Br.3 LN, LN uz manje zakrivljenosti pregled Tablica 5 lokacija i veličina limfnih čvorova micrometastasis pregled Slučaj pregled
Tip limfnog čvora
pregled stranice u limfnom čvoru
Veličina micrometastasis (mm)
1 pregled SLN pregled perifernih sinusa pregled 1.2
2
SLN
periferna sinusa pregled 0.3 pregled 3 pregled SLN pregled perifernih sinusa pregled 0.2 pregled, 4
SLN pregled perifernih sinusa pregled 0.6 pregled ne-SLN Netlogu periferne sinusa pregled 1,0 pregled, non-SLN pregled perifernih sinusa
1,0 pregled, SLN, sentinel limfni čvor pregled Slika 1 limfnog čvora mircrometastasis kako detektirati imunokemijskim metodama s keratin antitijela. (× 400).
Slika 2 Nema stanice raka su identificirani u ovom dijelu rutinskom histološki pregled. (Hematoxylin & eozin bojenje, × 40). (B) limfnih čvorova micrometastasis u reprezentativnom dijelu po cijelom serijskom metodom sekcioniranje. (Imunohistokemijsko bojanje, × 40). (C) Micrometastasis limfni čvor u reprezentativnom dijelu po cijelom serijskom metodom sekcioniranje. (Imunohistokemijsko bojanje, × 400) pregled Rasprava pregled Miwa i sur. uveo koncept sentinel čvora biopsije raka želuca [7]. Klinička primjena sentinel čvora biopsije kako bi se utvrdilo kirurški pristup za rak želuca zahtijeva provjeru tog koncepta na razini limfnih čvorova mikrometastaza. U ovoj studiji istraživali smo prisutnost i distribuciju limfnih čvorova mikrometastaza u bolesnika s rakom želuca koji je imao sentinel čvora biopsiju. Nedavno je prisustvo limfnih čvorova mikrometastaza nemjerljivu rutinskom histološki pregled je prijavljen kod karcinoma dojke, pluća, jednjaka, želuca, debelog crijeva i žučnog mjehura. On je izvijestio da je limfni čvor micrometastasis bio siromašan prognostički pokazatelj u dojke, pluća i raka debelog crijeva [20-22]. Nekoliko autora je izvijestio da je limfni čvor micrometastasis bio siromašan prognostički faktor u bolesnika s rakom želuca [23, 24]. Dakle, važnost otkrivanja limfnog čvora micrometastasis je naglasio za razne maligne bolesti.
Razne metode za detekciju limfnog čvora mikrometastaze postoje, uključujući IHC i lančanom reakcijom polimeraze testovima. Matsumoto et al. pokazali su da je reverzne transkriptaze lančana reakcija polimeraze-(RT-PCR) je osjetljivija od IHC za detekciju mikrometastaza [2]. Međutim, Yamamoto et al. [25] sugerira da pozitivni rezultati s molekulskom testu, kao što je RT-PCR ne može biti indikativna za prisutnost žive tumorskih stanica, nego prisutnost tumora DNA i na taj način, mogu biti povezani sa značajno povećanom lažno pozitivnu stopu unatoč viša osjetljivost molekularnoj analizi. S druge strane, što je objavljeno da je serijski sekcije povećala identifikaciju tumorskih stanica u perifernim sinusa limfnih čvorova [26]. Smatra se da je serijski mikroskopom s IHC je najtočnija metoda za detekciju limfnog čvora mikrometastaza. Prema tome, podvrgava se cijeli uzorak na serijski podjelom i IHC. Antitijelo koje se koristi za IHC je monoklonsko anti-humani keratin 8/18 antitijela koja je osjetljivija, specifičan, jednostavan, točan i ekonomski od drugih antitijela za IHC.
Tumora naslage unutar limfnih čvorova su klasificirane i stupili u skladu s smjernicama koje je postavio Međunarodni unije protiv raka (UICC) 6 th Edition. Prema ovom klasifikacijskom sustavu, metastaze manje od 0,2 cm su smatrani mikrometastaze (MMS), te izolirane tumorske stanice (ITKS), bili su pojedinačni tumorske stanice ili male nakupine stanica koje se mjere ne veće od 0,2 mm te su obično otkriven IHC ili molekularnim metodama , ali može se provjeriti s H &E. ITKS obično ne pokazuju znakove metastatskog aktivnosti proliferacijom, indukcija reakciju strome, ili prodor vaskularnih ili limfna sinusa invazije [27, 28]. Nakajo et al. [23] i Siewert et al. [29] izvijestili da zahvaćeni limfni čvorovi se svrstati u formiranju klastera, odnosno oblici pojedinačnih stanica, u skladu s rezultatima IHC za citokeratin. Njihovi rezultati sugeriraju da su jedinične ćelije ne mogu razmnožavati u limfnim čvorovima, jer su već bili ubijeni od strane lokalnih i općih imunocitima. Grozd stanica s reakcijom strome lako može razmnožiti i stoga imaju metastatski potencijal. U našem odjelu, resected limfni čvorovi redovito se režu u razmacima od 0,2 cm i limfni čvorovi su ispitani na metastaze. Dakle, u ovoj studiji, definicija limfnih čvorova micrometastasis razlikovao od klasifikaciji UICC. Za potrebe ove studije je definiran kao čvor, negativna za metastaziranje naš rutinske histološki pregled sekcija izrezanih u intervalima od 0,2 cm, ali pozitivno potpunim serijski podjelom s H &E i IHC. Osim toga, sve pojedinačne vrste stanica i male vrste klastera bez strome reakcije keratin pozitivnim bojanjem nisu bili priznati kao stanice raka u sljedećem H &E obojenog slajd. Stoga smo izostavili sve pojedinačne stanice i male nakupine bez reakcija strome, koji su klasificirani kao ITKS u sustavu klasifikacije UICC, s pozitivnim limfnim čvorovima micrometastasis skupine [27, 28].
Mi smo isključeni bolesnici s rakom želuca čiji tumori napali na sluznicu u ovoj studiji, jer radi kompletan serijski secira i imunohistokemijska bojanja je puno posla; osim toga, stopa limfnog čvora micrometastasis bila niska. U skladu s tim smo upisani 35 koji je imao rak želuca koji su izvršili invaziju na sluznicu ili muskularis propria i da nema dokaza o limfnog čvora metastaziranje histološki pregled za ovu studiju.
U ovoj studiji smo primijetili limfnog čvora micrometastasis u 4 bolesnika (11%) od karcinoma želuca koje su izvršile invaziju u submukozu ili muscularis propria. U karcinomu želuca, Isozaki et al. [30] i Natsugoe et al. [31] izvijestili da su limfne čvorove mikrometastaze identificiran u 10 do 30% uzoraka po korak-podjelom ili IHC. Naši rezultati su najtočnija od svih dosadašnjih istraživanja i dokazao stvarne okolnosti limfnog čvora micrometastasis želučanog karcinoma koje su izvršile invaziju na sluznicu ili muskularis propria.
U ovom istraživanju ispitali smo limfnog čvora mikrometastaza od SLNs i ne -SLNs. Pronašli smo limfnog čvora mikrometastaza u SLNs od 4 bolesnika. Jedan pacijent je također imala micrometastasis u ne-SLN limfnog bazena, iako nema mikrometastaze ne-SLNs identificirani su izvan bazena. Nadalje, niti jedan bolesnik je imao limfnog čvora micrometastasis samo ne-SLN. Naši rezultati su otkrili da su pacijenti koji nisu imali limfnog čvora micrometastasis u SLNs također nisu imali micrometastasis u ne-SLNs. Ovi rezultati mogu podržati koncept koji limfni čvor mikrometastaze proširio najprije u SLNs, a zatim na ne-SLNs u limfni bazena i na kraju ne-SLNs izvan bazena. Dakle, na temelju ovog koncepta, dovoljno je ispitati samo SLNs kako bi se utvrdilo da li ili ne postoji limfni čvor mikrometastaza u bolesnika s karcinomom želuca.
Još uvijek je nejasno da li je limfni čvor micrometastasis je prognostički čimbenik kod raka želuca , Međutim, limfni čvor micrometastasis pronađen kod pacijenata oboljelih od raka želuca koji nisu imali znakove limfnog čvora metastaza rutinskim metodama. Ovaj rezultat sugerira da smo oprezno treba smanjiti opseg limfnih čvorova seciranja. Intraoperativna nepostojanje SLN micrometastasis sugerira da je opseg limfnog čvora disekcija može sigurno smanjiti, jer je vjerojatno za ne-SLNs imati mikrometastaza bez SLN micrometastasis. U slučaju raka dojke, potreba za intraoperacijske dijagnozu limfnih čvorova mikrometastaza nije bitno, jer dodatni disekcija od aksilarne limfne čvorove može se obaviti lako. Međutim, naknadno disekcija limfnih čvorova je teško kod raka želuca; dakle, intraoperacijske dijagnoza limfnih čvorova mikrometastaza je presudno. Smatrali smo da kada je limfni čvor micrometastasis bio prisutan, treba obaviti limfnog čvora seciranje u sadašnjosti. Naša studija koristi najtočnije metode, ali nismo mogli dobiti rezultate dovoljno brzo za itraoperative dijagnoze. Stoga, moramo uspostaviti preciznu metodu za brzu intraoperacijske identifikacije. Matsumoto et al. tvrdio da intraoperacijske brzo imunološko je jednostavna i korisna tehnika za detekciju limfnog čvora mikrometastaza [32]. Ultra-brza RT-PCR sustav, koji može završiti otkrivanje stanica raka u roku od oko 70 minuta, je razvijen. U bliskoj budućnosti, ove metode će se primijeniti za detekciju limfnog čvora mikrometastaza u SLNs tijekom operacije [33].
Zaključak pregled pokazali smo sposobnost da otkrije limfnog čvora mikrometastaza podvrgavanjem cijeli primjerak za dovršetak serijski secira i IHC za čvorova negativnih pacijenata s rakom želuca koji su imali sentinel čvora biopsiju. Ovi rezultati podupiru koncept koji limfnog čvora mikrometastaza širi prvo na SLNs. Osim toga, intraoperativna i brzog dijagnoza limfnih čvorova mikrometastaza u SLNs može pomoći će odgovarajući limfnog čvora disekciju kod pacijenata s rakom želuca. Stoga je brza i točna intraoperacijske dijagnoza limfnih čvorova mikrometastaza u SLNs će biti potrebno i treba biti u fokusu budućih studija. Pregled Izjave pregled Zahvale pregled Autori su zahvalni profesoru Tetsuo Ohta na Sveučilištu u Kanazawa za to studija. I mi također zahvaljujući pre-profesor Koichi Miwa.
Autora originalne dostavljeni datoteke za slike
Ispod su linkovi na autora originalnih dostavljenih datoteka za slike. Izvorna datoteka za Slika 1 13046_2008_7_MOESM2_ESM.tiff autorskim 13046_2008_7_MOESM1_ESM.tiff autora izvorne datoteke za slike 2

• Povezane s rakom fibroblasti u pozitivnoj korelaciji s metastatskim potencijalom ljudskih povezane s rakom želuca cancers
• Dugo nekodirajuće izraz RNK profil u ljudskom raka želuca i njegove kliničke significances