Détection des sentinelles et non-sentinelles micrométastases des ganglions lymphatiques par tronçonnage série complète et analyse immunohistochimique pour le cancer gastrique

Détection des sentinelles et non-sentinelles des ganglions lymphatiques micrométastases par tronçonnage série complète et analyse immunohistochimique pour le cancer gastrique
Résumé de l'arrière-plan
Nous avons étudié la présence et la distribution de la sentinelle et les micrométastases des ganglions non sentinelles en utilisant série complète sectionner et la coloration immunohistochimique (IHC), pour inspecter si micrométastases ganglionnaires se propager à la lymphe de sentinelle nœuds premier.
Méthodes
un total de 35 patients, qui ont subi une gastrectomie avec une biopsie du ganglion lymphatique sentinelle pour le cancer gastrique, ont été inscrits dans cette étude. 1028 total de ganglions lymphatiques de 35 patients atteints d'un cancer gastrique sans métastases de ganglions lymphatiques par la section permanente avec l'hématoxyline et l'éosine (H & E), ont été sélectionnés. Il y avait 252 ganglions sentinelles et 776 autres étaient des nœuds non-sentinelles. Tous les noeuds ont été sectionnés et colorés en série en alternance avec H &E et IHC. Résultats de ganglion lymphatique micrométastases a été définie comme la preuve d'être positif en premier soit l'IHC ou la complète série tronçonnage.
Micrométastases ont été détectés dans 4 (11%) des 35 patients, 6 (0,58%) de 1028 nœuds. Parmi ces 4 patients, 3 avaient des micrométastases exclusivement dans les ganglions sentinelles, et l'autre avait micrométastases dans les deux sentinelles et les nœuds non-sentinelles. Il n'y avait aucun patient qui avait les micrometasitases que dans les nœuds non-sentinelles.
Conclusion
Ces résultats appuient l'idée que les ganglions lymphatiques micrométastases du cancer gastrique se propage d'abord des ganglions sentinelles.
Contexte
Le pronostic de les patients atteints d'un cancer gastrique est influencée principalement par la présence de métastases de ganglions lymphatiques. Métastases des ganglions lymphatiques chez les patients atteints de cancer gastrique avec envahissement sous-muqueux se produisent dans 15 à 20% des patients; Par conséquent, une dissection des ganglions lymphatiques peut être inutile pour le reste de 80 à 85% des patients [1]. Un indicateur précis et fiable pour prédire l'absence de métastases ganglionnaires éliminerait de nombreux Lymphadénectomies inutiles [1]. Par conséquent, un diagnostic pré-opératoire et précis des métastases des ganglions lymphatiques reste importante [2-4]. Une biopsie du ganglion sentinelle pour le cancer gastrique est une méthode de diagnostic peropératoire pour détecter les métastases ganglionnaires [5-7]. En 1992, Morton et al. [8] a introduit la technique d'injection de colorant intraopératoire au niveau du site du mélanome pour identifier le nœud "sentinelle", qui est le premier noeud que les vaisseaux lymphatiques afférents pénètrent à partir du site de la tumeur. Miwa et al. [7, 9] employé ce type de technique de cartographie de colorant pour identifier les ganglions sentinelles du cancer gastrique, et fait état d'une forte valeur prédictive positive et la précision de la biopsie du ganglion sentinelle du cancer gastrique précoce. D'autre part, la présence d'un micrométastases dans un ganglion lymphatique est un grave problème pour l'application clinique de biopsie du ganglion sentinelle pour le cancer gastrique au début. micrométastases ganglionnaires ont été trouvés chez les patients jugés ganglionnaire par examen histologique de routine. investigateurs antérieurs ont rapporté que micrométastases des ganglions lymphatiques peuvent être détectés en utilisant l'étape de sectionnement, la coloration immunohistochimique et la réaction en chaîne de polymérase-transcriptase inverse [10-12]. Cependant, il y a eu quelques rapports sur la distribution des micrométastases dans les ganglions à la fois la sentinelle et non-sentinelles gastriques patients atteints de cancer ganglionnaire par examen histologique de routine [13-15].
Dans cette étude, nous avons rétrospectivement étudié la présence et la distribution de sentinelle et micrométastases des ganglions non sentinelles utilisant tronçonnage série complète et la coloration immunohistochimique. Ces techniques sont les méthodes les plus précises pour détecter les micrométastases dans les ganglions afin que nous puissions déterminer si micrométastases des ganglions lymphatiques avaient propagé aux ganglions sentinelles premiers.
Méthodes
Un ganglion sentinelle (SLN) biopsie pour le cancer gastrique a été réalisée sur 243 patients au Département de Gastroenterologic chirurgie, Hôpital universitaire de Kanazawa de 1993 à 2002. Avant la biopsie du ganglion sentinelle a été effectuée, le consentement éclairé a été obtenu en conformité avec les normes éthiques du Comité sur l'expérimentation humaine de l'hôpital universitaire de Kanazawa. Parmi ces patients, nous avons inscrit 35 qui avait un cancer qui avait envahi la sous-muqueuse ou musculeuse et n'a eu aucune métastase ganglionnaire par examen histologique de routine pour cette étude. Aucun des patients avaient reçu une chimiothérapie ou une radiothérapie préopératoire. Sur la base de la classification japonaise de gastrique Carcinome, les 35 patients ont subi une biopsie du ganglion sentinelle suivie par lymphadénectomie classique pour back-up dissection [16]. Un total de 1028 ganglions lymphatiques ont été retirés des 35 patients. Parmi ceux-ci, 252 ganglions lymphatiques étaient SLN et 776 autres étaient des non-SLN. Tous les 252 SLN ont été négatifs pour les métastases à la fois sur peropératoire examen frozen-section et la section permanente avec hématoxyline et éosine (H & E). Les 776 autres noeuds ont été négatifs pour les métastases sur l'examen histologique par H & E de l'étape multiple sectionnant à 0.2 cm d'intervalle. Les données clinicopathologiques ont été évaluées selon la classification japonaise du cancer gastrique [16]. Les caractéristiques des patients sont énumérés dans le tableau 1. Pour détecter les SLN, nous avons utilisé peropératoire cartographie lymphatique endoscopique (IELM), qui consistait en une injection peropératoire de 0,2 ml de 2% de bleu de brevet dans la couche sous-muqueux sur quatre sites autour du carcinome gastrique par gastroscope [9]. Le colorant est apparu immédiatement à la séreuse et tachés les vaisseaux lymphatiques et les ganglions [5, 9]. Dans cette étude, la SLN a été défini comme le ganglion lymphatique qui coloré au bleu de 20 minutes après l'injection. Les bassins lymphatiques ont été définis comme la zone contenant les vaisseaux lymphatiques tachées, et qui ont pu être divisé en cinq catégories selon les directions des artères entouré l'estomac, comme suit: la zone gastrique gauche de l'artère, la zone de l'artère gastrique droite, la partie droite de l'artère gastro, la zone de l'artère gastro-droite et la zone de l'artère gastrique postérieure. Les SLN excisées ont été envoyés pour congelés section Examen. Les ganglions lymphatiques colorées avec H & E sur des sections représentatives ont été coupés le long du plan avec le plus grand diamètre qui comprenait le hile de noeud, et examiné peropératoire pour metastases.Table 1 Caractéristiques des patients
Âge médian (intervalle)
62 (37-85)
12
Profondeur de Sexe Masculin 23
Femme d'invasion
SM
24
MP
11
Le type histologique
dIFFÉRENCIÉS *
18
indifférencié * *
17
invasion Lymphatics
négatif
16
positif
19
Vascular invasion
négatif
30
positif 5
SM, sous-muqueuse; MP, musculeuse propuria
* Le type différencié; papillaire, adénocarcinomes tubulaires bien et modérément différenciées
** Le type indifférencié;. Adénocarcinome peu différencié, adénocarcinome mucineux et le carcinome à cellules chevalière bague
Les tissus congelés restants étaient décongelés et les tissus et les non-SLN ont été systématiquement coupés à 0,2 cm d'intervalle. Par la suite, les multiples ganglions lymphatiques sectionnée et spécimens réséqués ont été fixés dans 10% de formaline, traitées par l'éthanol gradué, et inclus dans la paraffine pour les sections permanentes. Les ganglions lymphatiques ont été colorées avec H &. E et ont été examinées par deux pathologistes
Dans cette étude, tous les ganglions lymphatiques réséqués ont été sectionnés en série à des intervalles de 25 um d'épaisseur de 4 um, en plus et soit alternativement colorées avec H &E et la coloration immunohistochimique (IHC) en utilisant un anticorps anti-cytokératine. La technique de ENVISION a été utilisé (DAKO, Carpinteria, CA) pour IHC et nous avons utilisé l'anticorps anti-humain cytokératine 8/18 anticorps monoclonal (Santa Cruz Biotechonology, Californie, États-Unis) [17-19]. Tous les principaux échantillons tumoraux provenant de 35 patients ont été soumis à une coloration de la cytokératine et ont été utilisées comme témoin positif. Résultats d'un ganglion micrométastases a été défini comme un nœud négatif pour les métastases par notre routine examen histologique, mais positive soit par l'IHC ou les complets de série sectionnement méthodes.
Le nombre total de sections examiné était 24.094. Parmi ceux-ci, 5986 étaient SLN et 18.108 étaient des non-SLN. Parmi les 35 patients, 4 (11%) avaient des micrométastases. Un micrométastases 6 a été trouvé dans des nœuds 1028 (0,6%) et 60 parties (0,3%) de 24.094 (fig. 1, 2). Parmi ces 6 nœuds impliquant un micrométastases, 4 étaient SLN et les 2 autres étaient des non-SLN dans le bassin lymphatique. Aucun des micrométastases ont été détectés à l'extérieur du bassin (tableau 2). Les détails de la configuration de distribution, l'emplacement et la taille des micrométastases sont présentés dans les tableaux 3, 4 et 5. Sur les 4 patients qui avaient une micrométastases des ganglions lymphatiques, 3 patients avaient des micrométastases exclusivement dans les SLN. L'autre patient avait un micrométastases tant dans le SLN et les non-SLN dans le bassin lymphatique. Aucun patient n'a présenté une micrométastases que dans les non-SLN. Aucun patient n'a encore subi une récidive ou est mort à partir de Décembre, 2007.Table 2 Nombre et emplacement des ganglions lymphatiques avec micrométastases
Lieu de noeuds
Nombre de nœuds

avec micrométastases
sans micrométastases
SLN 4
248
non-SLN dans le bassin lymphatique
2
653
non-SLN sur le bassin
0
121
Tous les nœuds
6
1022
SLN, ganglions sentinelles
Tableau modèle 3 Répartition des ganglion micrométastases

Nombre de cas

modèle de distribution de micrométastases
examen histologique de routine
complète sectionnement série et IHC
SLN (-), non-SLN (-)
35
31
SLN (+), non-SLN (-)
0
3
SLN (+), non-SLN (+)
0 1
SLN (-), non-SLNS (+)
0
0
SLN, ganglions sentinelles; IHC, coloration immunohistochemic
Tableau 4 Localisation des ganglions lymphatiques micrométastases
cas
Localisation de la tumeur

Stained bassins lymphatiques
de Nombre de SLN
Nombre de micrometastsis
gare de micrométastases de SLN
gare de micrométastases de non-SLN
1
M, Moins
gauche GA
8 1
No.3 LN
- 2
M, post
. gauche GA droit GEA
5 1
No.3 LN
-. 3
M, Ant
gauche GA
2 1
No.3 LN
- 4
M, Moins
gauche GA droit GEA
10 3
No.3 LN
No.3 LN
SLN, les ganglions lymphatiques sentinelles; M, troisième Moyen de l'estomac; Moins, petite courbure; Poster.; paroi postérieure; Fourmi. paroi antérieure; GA, artère gastrique; GEA, artère gastroépiploïque; No.3 LN, LN le long de la petite courbure
Tableau 5 Site et la taille des ganglions lymphatiques micrométastases
cas
Type de ganglions lymphatiques

site ganglionnaire
Taille de micrométastases (mm)
1

SLN sinusal périphérique
1.2 2
SLN
sinus périphérique
0,3 3
sinus périphérique de la SLN
sinus périphérique de 0,2 4
SLN
0,6
non-SLN sinus périphérique
sinus périphérique de 1,0
non-SLN
1.0
SLN, ganglion sentinelle
Figure 1 ganglionnaire mircrometastasis détectée par une coloration immunohistochimique avec un anticorps cytokératine. (× 400).
Figure 2 Pas de cellules cancéreuses ont été identifiées dans cette section par l'examen histologique de routine. (Hématoxyline & éosine, × 40). noeud (b) lymphe micrométastases dans la section représentative par l'ensemble de la méthode de découpe série. (Coloration immunohistochimique, × 40). (C) de micrométastases des ganglions lymphatiques dans la partie représentative de l'ensemble du procédé de découpe série. (Coloration immunohistochimique, × 400)
Discussion
Miwa et al. introduit le concept de biopsie du ganglion sentinelle pour le cancer gastrique [7]. L'utilisation clinique de la biopsie du ganglion sentinelle pour déterminer l'approche chirurgicale pour le cancer gastrique nécessite la vérification de ce concept au niveau des ganglions micrométastases des ganglions. Dans cette étude, nous avons étudié la présence et la distribution de micrométastases des ganglions lymphatiques chez les patients atteints de cancer gastrique qui a eu une biopsie du ganglion sentinelle. Récemment, la présence de micrométastases des ganglions lymphatiques indétectables par l'examen histologique de routine a été rapporté dans les cancers du sein, du poumon, de l'œsophage, de l'estomac, du colon et de la vésicule biliaire. Il a été rapporté qu'un micrométastases des ganglions lymphatiques est un indicateur de mauvais pronostic dans le sein, le poumon et les cancers du côlon [20-22]. Quelques auteurs ont rapporté qu'une micrométastases des ganglions lymphatiques est un facteur de mauvais pronostic chez les patients atteints de cancer gastrique [23, 24]. Ainsi, l'importance de la détection d'un micrométastases des ganglions lymphatiques a été soulignée pour diverses maladies néoplasiques.
Une variété de méthodes pour la détection de micrométastases des ganglions lymphatiques existent, y compris des essais IHC polymerase chain reaction. Matsumoto et al. a démontré que la réaction en chaîne de polymérase-transcriptase inverse (RT-PCR) est plus sensible que l'IHC pour la détection de micrométastases [2]. Cependant, Yamamoto et al. [25] ont suggéré que des résultats positifs avec un test moléculaire tel que la RT-PCR peut ne pas être représentative de la présence de cellules tumorales viables, mais plutôt la présence de l'ADN de la tumeur et, par conséquent, peut être associé à un taux de faux positifs fortement augmenté malgré la une plus grande sensibilité de l'essai moléculaire. D'autre part, il a été rapporté que la série augmente le sectionnement de l'identification de cellules tumorales dans les sinus périphériques des ganglions lymphatiques [26]. On pense que les coupes sériées avec IHC est la méthode la plus précise pour la détection de micrométastases des ganglions lymphatiques. Par conséquent, nous avons soumis le spécimen à tronçonnage série et IHC. L'anticorps utilisé pour IHC était un anti-humain cytokératine 8/18 anticorps monoclonal qui est plus sensible, spécifique, simple, précis et économique que d'autres anticorps pour IHC.
Dépôts de tumeur dans les ganglions lymphatiques ont été classés et mis en scène selon le lignes directrices révisées établies par l'Union internationale contre le Cancer (UICC) 6 e édition. Selon ce système de classification, les métastases de moins de 0,2 cm ont été considérés comme des micrométastases (SMM) et des cellules tumorales isolées (CII) sont les cellules tumorales individuelles ou de petits amas de cellules qui mesurent pas supérieure à 0,2 mm et sont habituellement détectés par immunohistochimie ou par des méthodes moléculaires mais elles peuvent être vérifiées avec H & E. CTI ne montrent généralement pas preuve d'une activité par une prolifération métastatique, l'induction d'une réaction de stroma ou la pénétration vasculaire ou lymphatique envahissement de la paroi du sinus [27, 28]. Nakajo et al. [23] et Siewert et al. [29] ont rapporté que l'implication des ganglions lymphatiques est classé dans la formation de grappes ou de formes de cellules individuelles, selon les résultats de IHC pour cytokératine. Leurs résultats ont suggéré que les cellules individuelles ne peuvent pas proliférer dans les ganglions lymphatiques, car ils ont déjà été tués par des immunocytes locaux et généraux. Un groupe de cellules avec une réaction stromale peut facilement proliférer et ont donc un potentiel métastatique. Dans notre département, les ganglions lymphatiques réséqués sont régulièrement coupés à 0,2 cm d'intervalle et les ganglions lymphatiques sont examinés pour les métastases. Ainsi, dans cette étude, la définition des ganglions lymphatiques micrométastases différait de la classification UICC. Pour cette étude, il a été défini comme un nœud, négatif pour les métastases par notre examen histologique de routine des sections coupées à 0,2 cm d'intervalle, mais positif par tronçonnage série complète avec H & E et IHC. En outre, tous les types de cellules uniques et types de clusters petits sans une réaction stromale par coloration positive cytokératine ne sont pas reconnus comme des cellules cancéreuses dans la prochaine H & E lame colorée. Ainsi, nous avons exclu toutes les cellules individuelles et de petits groupes sans une réaction stromale, qui sont classés à titre de CTI dans le système de classification UICC, dans le groupe des ganglions lymphatiques positifs de micrométastases [27, 28].
Nous avons exclu les patients atteints de cancer gastrique dont les tumeurs avait envahi la muqueuse dans cette étude parce que faire des coupes sériées complète et la coloration immunohistochimique était beaucoup de travail; En outre, le taux de micrométastases des ganglions lymphatiques était faible. En conséquence nous avons inscrit 35 qui avait un cancer de l'estomac qui avait envahi la sous-muqueuse ou musculeuse et avait aucune preuve d'une métastase ganglionnaire par examen histologique pour cette étude.
Dans cette étude, nous avons observé une micrométastases des ganglions lymphatiques chez 4 patients (11%) avec un cancer de l'estomac qui avaient envahi la sous-muqueuse ou de la musculeuse. Dans le cancer gastrique, Isozaki et al. [30] et Natsugoe et al. [31] ont rapporté que micrométastases des ganglions lymphatiques ont été identifiés dans 10 à 30% des échantillons par étape de sectionnement ou IHC. Nos résultats ont été les plus précis de toutes les études passées et ont prouvé les circonstances réelles de ganglions lymphatiques micrométastases des cancers gastriques qui avaient envahi la sous-muqueuse ou musculeuse.
Dans cette étude, nous avons examiné les micrométastases des ganglions lymphatiques de SLN et non -SLNs. Nous avons trouvé micrométastases des ganglions lymphatiques dans les SLN de 4 patients. Un patient avait également une micrométastase dans un non-SLN du bassin lymphatique, mais aucune de micrométastases non-SLN ont été identifiés à l'extérieur du bassin. En outre, aucun patient avait un micrométastases des ganglions lymphatiques que dans un non-SLN. Nos résultats ont révélé que les patients qui ne disposent pas d'un micrométastases des ganglions lymphatiques dans les SLN n'a pas non plus ont un micrométastases dans les non-SLN. Ces résultats peuvent soutenir le concept que les ganglions micrométastases des ganglions se propagent d'abord aux SLN, puis aux non-SLN dans le bassin lymphatique et enfin à des non-SLN en dehors du bassin. Par conséquent, sur la base de ce concept, il est suffisant d'examiner les SLN pour déterminer si oui ou non il y a des ganglions micrométastases des ganglions chez les patients atteints de cancer gastrique.
On ignore encore si un micrométastases des ganglions lymphatiques est un facteur pronostique dans le cancer gastrique . Cependant, un micrométastases des ganglions lymphatiques a été constaté chez les patients atteints de cancer gastrique qui ont eu aucune preuve d'une métastase des ganglions lymphatiques par une coloration de routine. Ce résultat suggère que nous devrions prudemment réduire l'ampleur des dissections des ganglions lymphatiques. L'absence peropératoire d'un micrométastases SLN suggère que l'étendue de la dissection des ganglions lymphatiques peut être réduite en toute sécurité, car il est peu probable pour les non-SLN d'avoir micrométastases sans micrométastases SLN. Dans le cas du cancer du sein, de la nécessité pour le diagnostic intra-opératoire de micrométastases des ganglions lymphatiques est pas indispensable, car la dissection supplémentaire des ganglions lymphatiques axillaires peut être réalisée facilement. Cependant, la dissection ultérieure des ganglions lymphatiques est difficile dans le cancer gastrique; Par conséquent, le diagnostic intra-opératoire des ganglions micrométastases des ganglions est cruciale. Nous avons cru que quand un micrométastases des ganglions lymphatiques était présent, nous devrions effectuons une dissection des ganglions lymphatiques à l'heure actuelle. Notre étude a utilisé les méthodes les plus précises, mais nous ne pouvions pas obtenir les résultats assez rapidement pour un diagnostic itraoperative. Par conséquent, nous avons besoin de mettre en place une méthode précise pour l'identification peropératoire rapide. Matsumoto et al. a affirmé que immunocoloration rapide peropératoire était une technique simple et utile pour détecter des micrométastases ganglionnaires [32]. Un système de RT-PCR ultra-rapide, qui peut achever la détection de cellules cancéreuses à l'intérieur de 70 minutes environ, a été développé. Dans un avenir proche, ces méthodes seront appliquées pour détecter les micrométastases des ganglions lymphatiques dans SLN lors de la chirurgie [33].
Conclusion
nous avons démontré la capacité à détecter les micrométastases des ganglions lymphatiques en soumettant le spécimen à remplir tronçonnage série et IHC pour les patients atteints de cancer gastrique ganglionnaire qui ont eu une biopsie du ganglion sentinelle. Ces résultats soutiennent l'idée que la lymphe micrométastases des ganglions se propage d'abord aux SLN. En outre, le diagnostic peropératoire et rapide de micrométastases des ganglions lymphatiques dans SLN peut aider à guider la dissection des ganglions lymphatiques appropriée chez les patients atteints de cancer gastrique. Par conséquent, un diagnostic peropératoire rapide et précis de micrométastases des ganglions lymphatiques dans le SLN sera nécessaire et devrait faire l'objet de futures études. Déclarations de
Remerciements
Les auteurs sont reconnaissants au professeur Tetsuo Ohta à l'Université de Kanazawa pour cette étude. Et nous aussi grâce à une pré-professeur Koichi Miwa.
Auteurs fichiers originaux soumis pour les images
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• fibroblastes associés au cancer sont positivement corrélés avec le potentiel métastatique des fibroblastes associés au cancer de l'estomac cancers
• Longue non codante profil d'expression de l'ARN dans le cancer gastrique humain et sa longue non codante profil d'expression de l'ARN significances