Odkrivanje kontrolnim in brez kontrolne bezgavkah micrometastases s popolno serijskega razreza in imunohistokemičnim analizo za rakom želodca

Odkrivanje kontrolnih in brez kontrolnih bezgavkah micrometastases s popolno serijskega razreza in imunohistokemičnim analize za rakom želodca
Abstract
Ozadje
smo raziskovali prisotnost in porazdelitev kontrolnim in niso bezgavke micrometastases uporabo popolno serijsko sekcijo in Imunohistokemijsko (IHC), da se preveri, ali bezgavko micrometastases razširila na divjega bezgavk prej.
Metode PODJETJA
skupno 35 bolnikov, ki so doživeli želodca z sentinel bezgavke biopsijo raka želodca, je bilo vpisanih v tej študiji. so bili izbrani; skupno 1028 bezgavk 35 bolnikov z rakom želodca brez metastaz v bezgavkah, ki ga stalno oddelku s hematoksilinom in eozinom barvanjem (E H &). Je bilo 252 kontrolnih vozlišč in druga 776 so brez kontrolne vozlišča. Vsa vozlišča so prerezana serijsko in izmenično obarvali s H &E in IHC. Bezgavkah micrometastases je opredeljena kot dokazuje, da je pozitiven prvi bodisi IHC ali popolno serijskega razreza.
Rezultati
Micrometastases so odkrili pri 4 (11%) od 35 bolnikov, 6 (0,58%) od 1028 vozlišč. Od teh 4 bolnikih, 3 imel micrometastases izključno v kontrolnih vozlišč, in drugi je imel micrometastasis v obeh kontrolnim in brez kontrolne vozlišč. Ni bilo bolniku, ki je imel micrometasitases le v ne-kontrolnih vozlišč.
Zaključek
Ti rezultati podpirajo zamisel, da bezgavka micrometastasis raka želodca se širi najprej dovzetnim vozlišč.
Ozadje
The prognozo bolniki z rakom želodca vplivajo predvsem prisotnosti bezgavkah. Bezgavkah pri bolnikih želodca z rakom, pri Submukozno invazijo pojavi v 15 do 20% bolnikov; Zato lahko bezgavko seciranju nepotrebna za preostalih 80 do 85% bolnikov [1]. Natančen in zanesljiv kazalec napovedati odsotnost bezgavkah bi odpravili številne nepotrebne lymphadenectomies [1]. Zato je pred operacijo in natančna diagnoza bezgavkah ostaja pomembno [2-4]. Kontrolna vozlišče biopsija za raka želodca je med operacijo diagnostična metoda za odkrivanje bezgavkah [5-7]. Leta 1992 je Morton et al. [8] uvedel tehniko intraoperativnim injiciranjem barvila na mestu melanoma prepozna "Sentinel" vozlišče, ki je prvo vozlišče, da aferentna limfatičen začne od mesta tumorja. Miwa sod. [7, 9] zaposlenih tovrstnega kartiranja dye tehnike za identifikacijo poskusne vozlišča raka želodca, in so poročali o visoko pozitivno napovedno vrednost in natančnost za varovalne bezgavke na zgodnjega raka želodca. Po drugi strani pa je prisotnost micrometastasis v bezgavke je resen problem za klinično uporabo varovalne bezgavke za zgodnjega raka želodca. Bezgavko micrometastases so našli pri bolnikih, ki ugotovi, da je vozlišče negativnimi z rutinskim histološko preiskavo. Prejšnji raziskovalci so poročali, da bi lahko bezgavko micrometastases odkrivati ​​s korak razdelkov Imunohistokemijsko in povratne transkriptaze-verižna reakcija s polimerazo [10-12]. Vendar pa je bilo nekaj poročil o razdelitvi micrometastases v tako kontrolnih in brez kontrolnih vozlišč v želodcu rakavih bolnikih z negativnimi bezgavkami, ki jih rutinsko histološko pregleda [13-15].
V tej študiji smo naknadno raziskali prisotnost in porazdelitev kontrolnim in niso bezgavke micrometastases uporabljajo popolno serijskega razreza in imunohistokemijsko. To tehniko so najbolj natančne metode za odkrivanje micrometastases v vozlišč, tako da bi lahko ugotovili, ali je bezgavko micrometastases razširila na varovalne bezgavke prvih.
Metode
kontrolna bezgavka (SLNs) biopsija za rakom želodca je bila izvedena na 243 bolnikov na Oddelku za Gastroenterologic kirurgijo, Univerzitetni bolnišnici Kanazawa od leta 1993 do 2002. Pred varovalne bezgavke je bila opravljena, je bila napisana privolitev pridobljena v skladu z etičnimi standardi odbora za človekovo eksperimentiranje z University Hospital Kanazawa. Od teh bolnikov, smo vpisanih 35, ki je imel raka, ki je napadel na submucosa ali muscularis proprie in ni imel limfnega vozla metastaz rutinsko histološki pregled za to študijo. Nobeden od teh bolnikov so bili preoperativno kemoterapijo ali radioterapijo. Ki temelji na japonski klasifikaciji želodca karcinomom, vseh 35 bolnikov je doživel sentinel bezgavke, ki mu sledi konvencionalne limfadenektomijo za back-up seciranje [16]. Skupno 1028 bezgavk smo odstranili iz 35 bolnikov. Od tega je bilo 252 bezgavke SLNs in drugi 776 je bilo ne-SLNs. Vse 252 SLNs so bili negativni metastaz, tako na intraoperativnim pregledu zamrznjene oddelek in stalni del s hematoksilinom in eozinom barvanjem (H & E). Drugih 776 vozlišča so bili negativni metastazami na histološko preiskavo s H & E multiple koraku odseke v intervalih 0,2 cm. V clinicopathologic Podatki so bili ocenjeni v skladu z japonsko klasifikaciji želodca raka [16]. Značilnosti bolniki so navedene v tabeli 1. Za odkrivanje SLNs smo uporabili intraoperativno endoskopsko limfni preslikave (IELM), ki je sestavljena iz intraoperativnim injekcijo 0,2 ml 2% modro v Submukozno plasti na štirih lokacijah po vsem raka želodca prek gastroskop [9]. Barvilo je takoj pojavil na serozne površino in obarvajo limfne žile in vozlišč [5, 9]. V tej študiji je bila SLN opredeljena kot bezgavke, ki obarvajo modro 20 minut po injekciji. Limfne bazeni so opredeljena kot območja, na katerem se obarvajo limfne žile, in ki so lahko razdelimo v pet kategorij, v skladu z navodili arterij obkrožen želodec, kot sledi: levo območje želodčne arterije, pravica želodca območje arterije, pravica gastroepiploic območje arterije, pravica gastroepiploic območje arterije in zadnji del želodca območje arterije. V izrezanega SLNs so bili poslani v pregled zamrznjene oddelku. Bezgavke obarvajo s H &E na reprezentativnih odsekih smo razrezali v ravnini z največjim premerom, ki je vključeval vozlišče hilus in intraoperatively pregledamo značilnosti metastases.Table 1 Bolniki
Mediana starosti (razpon)
62 (37-85)
seks
moški
23
ženski
12
globina invazije
SM
24
MP
11
histološki tip
Diferencirana *
18
Raznovrstna *
17
limfatičen invazijo
Negative
16.
pozitiven
19
Vascular invazija
Negativno
30.
pozitiven
5
SM, submucosa; MP, muscularis propuria
* Diferencialni tipa; papilarni, dobro in zmerno diferencirane cevni adenokarcinomov
** nediferencirani tipa; bilo slabo diferencirani adenokarcinom, mucinozni adenokarcinom in pečat obroč karcinom
ostale zamrznjene tkiva. odmrznjeni in tkiva in ne-SLNs rutinsko prestregla v intervalih 0,2 cm. Zato so se več prerezana bezgavke in odstranjenimi osebki določen v 10% formalinu, obdelani z stopenjski etanola in vgrajeni v parafin za trajne odseke. Bezgavke smo obarvali s H &. E in so bile pregledane z dvema patologi
V tej študiji, so bili vsi odstranjenimi bezgavke serijsko deljiva pri 25-mikrometrskimi presledkih debeline 4-um poleg in bodisi izmenično obarvali s H & E in Imunohistokemijsko (IHC) z uporabo anti-Cytokeratin protitelesa. Tehnika ENVISION je bila uporabljena (Dako, CARPINTERIA, CA) za IHC in smo uporabili monoklonsko anti-človeški citokeratinskim 8/18 protitelesa (Santa Cruz Biotechonology, California, ZDA) [17-19]. Vse glavne tumorske primerkih 35 bolnikov so podvrženi citokeratina obarvanje in jih uporabimo kot pozitivno kontrolo. Bezgavka micrometastasis je opredeljena kot vozlišča negativna za metastaze, ki ga naš rutinsko preiskavo histološki, vendar pozitivno bodisi IHC ali popolnih serijski metodi razreza.
Rezultati
Skupno število oddelkov pregleda je 24.094. Od tega je bilo 5986 SLNs in 18.108 bili ne-SLNs. Od 35 bolnikov je imelo 4 (11%) micrometastases. Micrometastasis je bilo ugotovljeno v 6 od 1028 vozlišč (0,6%) in 60 oddelkov (0,3%) od 24.094 (sl. 1, 2). Od teh 6 vozlišč, ki vključujejo micrometastasis, so bili 4 SLNs in drugi 2 je bilo ne-SLNs v limfni bazena. Ni micrometastases bile odkrite zunaj bazena (tabela 2). Podrobnosti o vzorca razširjenosti, lokacije in velikosti micrometastases so prikazani v tabelah 3, 4 in 5. Izmed 4 bolnikih, ki so imeli limfnega vozla micrometastasis, imel 3 bolniki micrometastases izključno v SLNs. Drugi bolnik je imel micrometastasis tako v SLN in niso SLNs v limfni bazena. Noben bolnik imel micrometastasis le v ne-SLNs. Noben bolnik še doživel ponovitev ali je umrl kot decembra, 2007.Table 2 Število in mesto bezgavk s micrometastasis
Lokacija vozlišč
Število vozlišč

z micrometastasis
brez micrometastasis
SLNs
4
248
ne-SLNs v limfni bazenu
2
653
non-SLNs od bazena
0
121
vseh vozliščih
6
1022
SLNs, sentinel bezgavke
Tabela 3 Porazdelitev vzorca bezgavka micrometastasis

Število primerov
Distribution vzorec micrometastasis
Redno histološki pregled
popolno serijskega razreza in IHC
SLNs (-), non-SLNs (-)
35
31
SLNs (+), non-SLNs (-)
0
3
SLNs (+), brez SLNs (+)
0
1
SLNs (-), ki niso SLNs (+)
0
0
SLNs, sentinel bezgavke; IHC, immunohistochemic obarvanje
Tabela 4 Lokacija bezgavkah micrometastasis
case
Lokacija tumorja

Stained limfne bazeni
Število SLNs
Število micrometastsis
postaji micrometastasis za SLNs
postaji micrometastasis prepovedi SLNs

1
M, manj
Levi GA
8
1
No.3 LN -
2
M, Post
. Leva GA desno GEA
5
1
No.3 LN
-.
3
M, Ant
levo GA
2
1
No.3 LN -
4
M, manj
levo GA desno GEA
10
3
No.3 LN
No.3 LN
SLNs, sentinel bezgavke; M, srednji tretjini želodca; Manj, manjša ukrivljenost; Post .; posterior steno; Mravlja. sprednjo steno; GA, želodca arterije; GEA, gastroepiploic arterije; No.3 LN, LN ob manjši ukrivljenosti
Tabela 5 strani in velikosti bezgavkah micrometastasis
case
Vrsta bezgavke

Site v bezgavkah
Velikost micrometastasis (mm)
1
SLN
periferni sinusni
1.2
2
SLN
periferni sinus
0,3
3
SLN
periferni sinus
0,2
4
SLN
periferni sinus
0,6
non-SLN
periferni sinus
1.0
ne-SLN
perifernega sinus
1,0
SLN, divjega bezgavke
Slika 1 bezgavka mircrometastasis kot ga imunohistokemičnim barvanjem s protitelesom Cytokeratin odkrita. (X 400).
Slika 2 Ni rakave celice so bile opredeljene v tem poglavju, ki ga rutinsko histološki pregled. (Hematoksilin & eozin obarvanje, × 40). (B) limfnega vozla micrometastasis v reprezentativnem oddelku, ki ga v celotnem metodo serijskega razreza. (Imunohistokemijsko, × 40). (C) Micrometastasis bezgavk v reprezentativnem oddelku, ki ga v celotnem metodo serijskega razreza. (Imunohistokemijsko, × 400)
Razprava
Miwa et al. uveden koncept varovalne bezgavke pri raku želodca [7]. Klinično uporabo varovalne bezgavke je, da se določi kirurški pristop za rakom želodca zahteva preverjanje tega koncepta na ravni bezgavk micrometastases. V tej študiji smo raziskovali prisotnost in distribucijo bezgavkah micrometastases pri bolnikih z rakom želodca, ki je imel sentinel bezgavke. Nedavno je bila prisotnost bezgavkah micrometastases nezaznavno z rutinskim histološko preiskavo so poročali v dojke, pljuč, požiralnika, želodca, debelega črevesa in žolčnika raka. Ugotovljeno je bilo, da je to bezgavk micrometastasis slaba prognostični kazalec na prsih, pljučih in debelega raka [20-22]. Nekaj ​​avtorji so poročali, da je bezgavka micrometastasis slab napovedni dejavnik pri bolnikih želodca z rakom [23, 24]. Tako je bila pomembna od zaznavanje limfnega vozla micrometastasis poudarjena zaradi različnih neoplastičnih bolezni.
A različne metode za odkrivanje obstaja bezgavk micrometastases, vključno z imunohistokemijo in verižni reakciji s polimerazo testih. Matsumoto in sod. pokazale, da je reverzne transkriptaze-verižna reakcija s polimerazo (RT-PCR) bolj občutljiva kot imunohistokemijo za odkrivanje micrometastases [2]. Vendar Yamamoto et al. [25] predlagal, da pozitivni rezultati z molekulsko testu kot RT-PCR ne sme biti indikativna za prisotnost živih tumorskih celic, ampak prisotnost tumorja DNK in tako je lahko povezana z močno povečanim lažno pozitivne stopnje kljub višjo občutljivost molekulske testu. Po drugi strani pa so poročali, da zaporedno odseke povečala identifikacijo tumorskih celic v perifernih sinusov iz bezgavk [26]. Domneva se, da je serijska na odseke z IHC najbolj natančna metoda za odkrivanje bezgavk micrometastases. Zato smo izpostavljeni celotno vzorec za serijskega razreza in IHC. Protitelo uporablja za IHC je monoklonsko anti-človeško citokeratinskim 8/18 protitelo, ki je bolj občutljiva, posebno, enostavno, natančno in gospodarski kot drugih protiteles za IHC.
Vloge tumorjev v bezgavkah so bile razvrščene in uprizorjena glede na revidirane smernice, ki jih je določila Mednarodna proti raku unije (UICC) 6 th Edition. V skladu s tem sistemom razvrščanja, metastaz manj kot 0,2 cm je štela micrometastases (MMS), in izolirani tumorske celice (ITC) so bile posamezne tumorske celice ali majhne skupin celic, ki merjene ni večja od 0,2 mm in so običajno odkrite z imunohistokemijo ali molekularnimi metodami , vendar se lahko preveri s H &E. ITC običajno ne pokažejo, metastatskega dejavnosti po širjenju, indukcijo reakcije stromalni, ali prodiranje vaskularnih ali limfnega sinus stene invazijo [27, 28]. Nakajo sod. [23] in Siewert sod. [29] poroča, da je sodelovanje bezgavko razvrščeni v oblikovanje grozdov ali oblike posameznih celic, glede na rezultate IHC za citokeratina. Njihovi rezultati kažejo, da posamezne celice ne morejo razmnožujejo v bezgavkah, ker so bili že ubili lokalnih in splošnih immunocytes. Skupek celic z reakcijo stromalni lahko hitro razmnožujejo in imajo zato metastatskega potenciala. V našem oddelku, so odstranjenimi bezgavke rutinsko prestregla v intervalih 0,2 cm in bezgavke se pregledajo za metastaz. Torej, v tej študiji, opredelitev bezgavkah micrometastasis razlikuje od razvrstitve UICC. V tej študiji je bila opredeljena kot vozlišče, negativen metastaz naš rutinsko histološko preiskavo sekcij razrezani v intervalih 0,2 cm, vendar pozitivno popolni serijskega razreza s H & E in IHC. Poleg tega so vse vrste posamezne celice in majhne vrste kasetnega brez stromalni odzvala Cytokeratin pozitivnem obarvanju niso bile priznane kot rakave celice v naslednjem H & E obarvano slide. Tako smo izločili vse posamezne celice in majhne grozde brez reakcije stromalni, ki so razvrščene kot ITC v sistemu razvrščanja UICC od micrometastasis skupine pozitiven bezgavk [27, 28].
Izključen smo bolnike želodca raka, katerih tumorji je vdrla na sluznici v tej študiji, ker to popolno serijskega razreza in Imunohistokemijsko bilo veliko dela; Poleg tega je bila stopnja v bezgavkah micrometastasis nizka. V skladu s tem smo vpisanih 35, ki je imel raka na želodcu, ki je napadel na submucosa ali muscularis proprie in imel nobenega dokaza o bezgavkah metastaze ga histološki pregled za to študijo.
V tej raziskavi smo opazili limfnega vozla micrometastasis pri 4 bolnikih (11%) z rakom želodca, ki je napadel z submucosa ali muscularis proprie. Pri raku želodca, Isozaki et al. [30] in Natsugoe sod. [31] so poročali, da so bili bezgavko micrometastases opredeljena v 10 do 30% vzorcev za korakom-odseke ali IHC. Naši rezultati so bili najbolj natančen od vseh preteklih študij in se je izkazala dejanske okoliščine bezgavk micrometastasis želodca raka, ki so vdrli v submucosa ali muscularis proprie.
V tej študiji smo preučili bezgavk micrometastases se za SLNs in ne -SLNs. Ugotovili smo, bezgavk micrometastases v SLNs po 4 bolnikov. En bolnik je imel tudi micrometastasis v ne-SLN limfnega bazena, čeprav niso bili ugotovljeni micrometastases za ne-SLNs zunaj bazena. Poleg tega ni imel bolnik limfnega vozla micrometastasis le v ne-SLN. Naši rezultati so pokazali, da so bolniki, ki niso imeli limfnega vozla micrometastasis v SLNs tudi ni imela micrometastasis v ne-SLNs. Ti rezultati podpirajo zamisel, da bezgavka micrometastases razširila najprej na SLNs, potem ne-SLNs v limfni bazenu in na koncu niso SLNs zunaj bazena. Zato se na podlagi tega koncepta, je dovolj zgolj preučiti SLNs, da ugotovi, ali obstajajo bezgavko micrometastases pri bolnikih z rakom želodca.
Še vedno ni jasno, ali je bezgavka micrometastasis prognostični dejavnik pri raku želodca . Vendar je bila bezgavko micrometastasis našel pri bolnikih želodca z rakom, ki so imeli nobenega dokaza o bezgavkah metastaze, ki ga rutinsko barvanjem. Ta rezultat kaže, da moramo previdno zmanjšati obseg bezgavkah seciranje. Odčitavanje odsotnost SLN micrometastasis predlaga, da se obseg bezgavkah seciranje lahko varno zmanjša, saj je malo verjetno, za ne-SLNs imeti micrometastases brez SLN micrometastasis. Pri raku na dojki, je potreba po intraoperativnim diagnozo bezgavkah micrometastases ni nujno, ker se lahko dodatno razčleniti na aksilarna bezgavk lahko izvedemo enostavno. Vendar pa je nadaljnje disekcija bezgavk je pri raku želodca težko; Zato je med operacijo diagnoza bezgavk micrometastases je ključnega pomena. Verjeli smo, da je, ko je bila prisotna bezgavk micrometastasis, bi morali opraviti limfnega vozla bezgavk v sedanjosti. Naša raziskava izkoriščena najbolj natančne metode, vendar nismo mogli dobiti rezultatov dovolj hitro za itraoperative diagnozo. Zato moramo vzpostaviti natančno metodo za hitro odčitavanje identifikacijo. Matsumoto in sod. trdil, da je med operacijo hiter imunskim barvanjem preprosta in uporabna metoda za odkrivanje bezgavk micrometastases [32]. Ultra-hiter sistem RT-PCR, ki lahko izpolni odkrivanje rakavih celic v približno 70 minutah, je bila razvita. V bližnji prihodnosti se bo uporabljala te metode za odkrivanje bezgavk micrometastases v SLNs med operacijo [33].
Zaključek
smo pokazali sposobnost za odkrivanje bezgavk micrometastases z izpostavitvijo celotno vzorec za dokončanje serijskega razreza in IHC za bolnike želodca z rakom z negativnimi bezgavkami, ki so imeli sentinel bezgavke. Ti rezultati podpirajo koncept, ki bezgavko micrometastases širi najprej na SLNs. Poleg tega se lahko med operacijo in hitro diagnozo bezgavkah micrometastases v SLNs pomagala usmerjati ustrezno limfnega vozla bezgavk pri bolnikih z rakom želodca. Zato bodo hitro in natančno Intraoperativno diagnoza bezgavkah micrometastases v SLNs potrebna in bi morala biti v središču prihodnje študije.
Izjave
Zahvala
Avtorji so hvaležni prof Tetsuo Ohta v Kanazawa univerzi za to študija. In smo tudi zaradi pre-profesor Koichi Miwa.
Avtorjev originalnih predloženi datoteke za slike
Spodaj so povezave do avtorjev izvirnih predloženih spisov za slike. "Izvirno datoteko na sliki 1 13046_2008_7_MOESM2_ESM.tiff avtorjev 13046_2008_7_MOESM1_ESM.tiff avtorjev prvotni datoteki sliki 2

• Rak povezano fibroblasti so pozitivni korelaciji z metastatskega potenciala želodčnega raka človekovih
• Long nekodiran RNA izraz profil v človeškega raka želodca in njenih kliničnih pomenov