Gene metylering profil gastric cancervävnad enligt tumörstället i magen

Gen metylering profilen för gastrisk cancervävnad enligt tumörstället i magen Bild Sammanfattning
Bakgrund Review Det finns en betydande information om metylering av promotorregionerna av inblandade i gastrisk karcinogenes olika gener. Det finns dock en brist på information om hur denna epigenetisk process skiljer sig i tumörer med ursprung på olika platser i magen.
Syftet med denna studie är att bedöma metylering profiler i MLH1
,
MGMT, Metoder Köpa och DAPK-1
gener i cancervävnader från olika magen platser.
Prover förvärvades från 81 patienter som lider magen adenokarcinom som opererades för magcancer i litauiska University of Health Sciences sjukhus Kaunas Clinics 2009 -2012. Gene metylering undersöktes med metylering-specifik PCR. Studien godkändes av den litauiska Biomedical Research etikkommitté.
Resultat
Frekvenserna av metylering i cancervävnader från övre, mellersta och nedre tredjedelar av magen var 11,1, 23,1 och 45,4%, respektive, för MLH1
; 22,2, 30,8 och 57,6%, respektive, för MGMT
; och 44,4, 48,7 och 51,5%, respektive, för DAPK-1. MLH1 Mössor och MGMT
metylering observerades oftare i den nedre tredjedelen av magen än i den övre tredjedelen (p Hotel < 0,05).
I mitten tredje, DAPK-1
promotor metylering var relaterad till mer avancerad sjukdom i lymfkörtlarna (N2-3 jämfört med N0-1 [p
= 0,02]) och avancerade tumörstadium (stadium III snarare än stadier i-II [p
= 0,05]). MLH1 Mössor och MGMT
metylering korrelerade omvänt när tumören fanns i den nedre tredjedelen av magen (koefficienten, -0,48; p
= 0,01). DAPK-1
och MLH1
metylering korrelerade omvänt i tumörer i mitten tredjedel av magen (koefficienten, -0,41; p
= 0,01).
Slutsats
genpromotor metylering beror på gastric tumörlokalisation.
Nyckelord
Magcancer MLH1
DAPK-1
MGMT
metylering bakgrund
gastric cancer är ett allvarligt hälsoproblem. Den dolda kliniska utvecklingen av sjukdomen innebär att denna sjukdom är oftast diagnostiseras i dess sena stadier, vilket leder till dålig prognos, trots de nya behandlingsmöjligheter som har dykt upp på senare tid.
Mer än 90% av stomachcancer diagnostiseras som adenokarcinom [1 ]. Sedan 1965 har magcancer delats in i två huvudtyper, diffus och tarm (enligt Lauren [2]). Dessa två histologiska typer skiljer sig åt i sina etiologier och prognoser. Intestinala och magen adenocarcinom är ofta en följd av kronisk infektion med Helicobacter pylori
, när den normala magslemhinnan förvandlas till akut sen kronisk gastrit, intestinal metaplasi och dysplasi [3]. Diffus adenocarcinom är mer aggressiv än tarm typ, eftersom dess bildande inte beror på gastrit eller metaplasi processer [4]. Nybyggt vetenskapliga data visar att prognosen för magcancer beror inte bara på dess histologiska typ, utan även på tumörplacering i magen. Proximal tumörer (med ursprung i den övre magmunnen), som vanligtvis bildas som svar på gastroesofageal syra /galla reflux [5], nu separeras som en distinkt och mer aggressiv form av magcancer, som skiljer sig från distala magen tumörer.
Ska distalt magcancer klassificeras som unikt? Kohortstudier har visat att risken för premaligna tillstånd, som kallas "atrofisk gastrit", utvecklas till cancer varierar beroende på platsen för skadan i magen. Den relativa risken för magcancer förekommer hos patienter med corpus-dominerande gastrit är högre än i de med övervägande antral gastrit [6]. Innebär detta faktum indikera olika cancerogena processer i magen antrum och corpus? Det finns inga data till antingen utesluta eller bekräfta detta.
Epigenetiska förändringar spelar en central roll i gastric cancer [7]. Dessa processer, såsom metylering av CpG-öar i gen promotorregioner, orsakar reversibla strukturella förändringar i DNA, vilket i sin tur modifierar genuttryck [8]. DNA-metylering inträffar när en metylgrupp (-CH 3) överförs till 5 th ställning cytosin [9]. Review, en tidigare pilotstudie av vår forskargrupp visade att frekvensen av metylering av MLH1
promotor skiljer sig i corpus och antral magen vävnader som berörs av pangastrit. Vi märkte att det epigenetiska process är betydligt vanligare i antral gastrit vävnader än i corpus [10], medan graden av atrofisk gastrit är likartad i de båda regionerna. Det är oklart om denna tendens är också sant av cancervävnader.
Två grupper av gener valdes ut för denna metyleringsanalys. Den första gruppen (MLH1
och MGMT
) innehåller två gener som kodar för proteiner som är inblandade i reparation av mutationer och andra DNA-lesioner före ytterligare celldelning, och den andra gruppen innehåller en tumörundertryckande gen (DAPK-1
) som kodar för ett protein som inducerar apoptos i närvaro av en allvarlig genomisk defekt.
MLH1
(mutL homolog 1, koloncancer, nonpolyposis typ 2 (E. coli
)) -genen inträffar vid 3p21 .3 locus. Genen-kodade proteinet identifierar DNA-fel som dyker upp efter replikering. Hypermetylering av MLH1
promotor, och inte mutations orsakade förändringar i proteinfunktionen, är ansvarig för mikrosatellitinstabilitet i magcancer [11]. Enligt litteraturen, är ansvarig för tarm form av magcancer och ett tidigt skede av sjukdomen [12-16] MLH1
metylering.
Funktion MGMT (O 6-metylguanin-DNA- metyltransferas) är att avlägsna alkylgruppen från O 6-positionen av guanin [17]. Avbrott av MGMT funktion kan orsaka uppkomsten av mutationer. Vetenskapliga publikationer indikerar att metylering av MGMT
genpromotorn är en av de patogenetiska vägar i magcancer. I synnerhet, är genen metylering hänföras till framskridet stadium av sjukdomen [18], och också tillskrivas det sämre sjukdomsprognos [19].
DAPK-1
(döds associerat proteinkinas 1) genen är en av tre DAPK
familj gener som kodar för kalcium /kalmodulin-beroende serin-treonin-proteinkinaser. Funktionen hos den DAPK-1-proteinet är nära relaterad till olika apoptosreaktionsvägar, och DAPK-1
hypermetylering har visat sig förekomma i fasta och hematologiska tumörer.
Gastric cancer är inte ett undantag. Genpromotor metylering är också typiskt för adenocarcinom i den här platsen. I en tidigare studie, vår grupp fann ett omvänt samband mellan DAPK-1 Mössor och MLH1
metylering [20]. Vi testar här hypotesen att olika gen metylering profiler förekommer i cancervävnader i magen enligt platsen för tumören (övre, mellersta eller nedre tredjedelen).
Metoder
Studien godkändes av den litauiska regionala Biomedical forsknings~~POS=TRUNC kommittén. Alla patienter undertecknat ett informerat medgivande. Patienter som behandlas vid den litauiska University of Health Sciences Hospital (LUHSH) Kaunas kliniker 2009-2012 deltog i studien. Mage vävnadsprover togs från alla patienter med morfologiskt bekräftat stadium I-III adenokarcinom. Studiepopulationen bestod av 81 patienter (34 män och 47 kvinnor) med en medianålder på 68 år (intervall 23-87 år, standardavvikelse [SD] 11,75). Tumörerna hos nio patienter var i den övre tredjedelen av magen, de 39 patienter var i mitten tredje, och de av 33 patienter var i den nedre tredjedelen av magen. Magen vävnadsprover samlades från tumörsätena under operation. Dessa material frystes omedelbart i flytande kväve och lagrades vid -80 ° C fram till analys. Under studien var patienternas kliniska data (ålder vid diagnos, kön) och morfologiska data (tumörinvasion enligt TNM klassificering, histologiska typen enligt Lauren klassificering, och graden av differentiering enligt Världshälsoorganisationen klassificering) erhålls från journaler.
Metylering specifika polymerase chain reaction (MSP) Review DNA extraherades 25-30 mg fryst vävnad med hjälp av ZS Genomic DNA ™ Tissue Mini Prep Kit (Zymo Research, USA), i enlighet med tillverkarens anvisningar. Metylering status MLH1
,
MGMT, och DAPK-1
promotorer bestämdes genom behandling av DNA med bisulfit, genom att använda EZ DNA-metylering Gold Kit ™ (Zymo Research), enligt tillverkarens instruktioner . Humant genom-DNA från perifera blodlymfocyter, behandlades med bisulfit, användes som negativ kontroll. Humant genomiskt DNA behandlades in vitro hotell med SSSI metyltransferas (New England Biolabs, UK) användes som positiv kontroll. Metylering status promotorerna detekterades med MSP. Sälja The primers för de metylerade och ometylerade DNA-sekvenser är listade i tabell 1. PCR utfördes i en total reaktionsvolym av 20

• Clinicopathologic egenskaper och behandlingsresultat för hepatoid adenocarcinom i magen, en sällsynt men unik subtyp av gastric cancer
• Ursprung och evolutionära plasticitet av mag blindtarmen i sjöborrar (echinodermata: Echinoidea)