Gene methyleringsprofiel van gastrische kanker weefsel volgens tumor in de maag

Genmethylatie profiel van de maag kankerweefsel volgens tumor site in de maag
Abstract achtergrond
Er is veel informatie over de methylatie van de promotorregio's van verschillende genen betrokken bij maagkanker. Echter, er is een gebrek aan informatie over hoe dit epigenetische proces verschilt in tumoren uit op verschillende plaatsen in de maag.
Het doel van deze studie is om de methylatie profielen van de MLH1
beoordelen, MGMT
, en DAPK-1
genen in kankerweefsel van verschillende maag sites.
Methods
Monsters werden verkregen van 81 patiënten die lijden maag adenocarcinoom die een operatie in het Litouwse University of Health Sciences Ziekenhuis Kaunas Clinics in 2009 onderging voor maagkanker -2012. Genmethylatie werd onderzocht met methylatie-specifieke PCR. De studie werd goedgekeurd door de Litouwse Biomedical Research Ethics Committee.
Resultaten
De frequenties van methylatie in kankerweefsel uit de bovenste, middelste en onderste derde van de maag waren 11,1, 23,1 en 45,4%, respectievelijk voor MLH1
; 22,2, 30,8 en 57,6%, respectievelijk voor MGMT
; en 44,4, 48,7 en 51,5%, respectievelijk voor DAPK-1. MLH1 Kopen en MGMT
methylatie werd vaker waargenomen in het onderste deel van de maag dan in het bovenste derde (p Restaurant < 0,05).
In het middelste derde, DAPK-1
promoter methylering was gerelateerd aan meer gevorderde ziekte in de lymfeklieren (N2-3 vergelijking met n0-1 [p
= 0,02]) en geavanceerde tumor stadium (stadium III in plaats van stadium I-II [p =
0.05]). MLH1 Kopen en MGMT-methylatie
gecorreleerd omgekeerd wanneer de tumor bevond zich in het onderste deel van de maag (coëfficiënt, -0,48; p
= 0,01). DAPK-1 Kopen en MLH1 methylatie
omgekeerd gecorreleerd tumoren in het midden-derde van de maag (coëfficiënt, -0,41; p = 0,01
).
Conclusie
Gene promoter methylatie afhankelijk de maag tumor locatie.
Sleutelwoorden
Maagkanker MLH1
DAPK-1 verkopen MGMT-methylatie
Achtergrond
Maagkanker is een ernstig gezondheidsprobleem. De verborgen klinische voortgang van de ziekte betekent dat deze ziekte typisch gediagnosticeerd in de late stadia, leidt tot een slechte prognose, ondanks de nieuwe behandelingsmogelijkheden die de jongste tijd.
Meer dan 90% van maagkanker gediagnosticeerd als adenocarcinoom [1 ]. Sinds 1965 is adenocarcinoom van de maag verdeeld in twee hoofdtypen, diffuus en intestinale (volgens Lauren [2]). Deze twee histologische types verschillen in hun etiologie en prognoses. Maag- en adenocarcinomen zijn vaak het gevolg van chronische infectie met Helicobacter pylori
, wanneer de normale maagslijmvlies transformeert acute late chronische gastritis, intestinale metaplasie en dysplasie [3]. Diffuse adenocarcinoom agressiever dan de intestinale type omdat zijn vorming niet afhangt van gastritis of metaplasie werkwijzen [4].
Recente wetenschappelijke gegevens blijkt dat de prognose maagdarmkanker hangt niet alleen af ​​van het weefseltype, maar ook op de tumor locatie in de maag. Proximale tumoren (uit de cardia), die gewoonlijk gevormd in reactie op gastro zuur /gal reflux [5], worden nu gescheiden als afzonderlijke en agressievere vorm van maagdarmkanker, die verschillen van distale maag tumoren.
Indien distaal maagkanker worden aangemerkt als uniek? Cohort studies hebben aangetoond dat het risico van de premaligne aandoening, genaamd "atrofische gastritis", ontwikkelt zich tot kanker verschilt afhankelijk van de plaats van de laesie in de maag. Het relatieve risico op maagkanker voorkomen bij patiënten met corpus-predominant gastritis is hoger dan bij met hoofdzakelijk antrale gastritis [6]. Betekent dit feit aan te geven verschillende kankerverwekkende processen in de maag antrum en corpus? Er zijn geen gegevens om ofwel sluiten of te bevestigen dit.
Epigenetische veranderingen spelen een centrale rol in de maag carcinogenese [7]. Deze processen, zoals de methylatie van CpG eilanden in gen-promotergebieden, veroorzaken omkeerbare structurele veranderingen in het DNA, waardoor genexpressie wijzigen [8]. DNA methylatie wanneer een methylgroep (CH 3) wordt overgebracht naar de 5 e plaats van cytosine [9].
Een eerdere pilotstudie door onze onderzoeksgroep gebleken dat de frequentie van methylering van de MLH1
promotor verschilt in het corpus en antrale maag weefsels aangetast door pangastritis. We hebben gemerkt dat dit epigenetische proces significant vaker voor in de antrale gastritis weefsels dan in het corpus [10], terwijl de mate van atrofische gastritis is vergelijkbaar in beide regio's. Het is onduidelijk of deze tendens geldt ook kankerweefsel.
Twee groepen genen werden geselecteerd voor deze methylatie analyse. De eerste groep (MLH1 Kopen en MGMT
) bevat twee genen die eiwitten die betrokken zijn bij reparatie van mutaties en andere DNA lesies vóór verdere celdeling coderen, en de tweede groep een tumor onderdrukkende gen (DAPK-1
) codeert voor een eiwit dat apoptose induceert in aanwezigheid van een ernstig defect genoom. Ondernemingen de MLH1
(mutL homoloog 1, colonkanker, Type nonpolyposis 2 (E. coli
)) gen vindt plaats op het 3p21 0,3 locus. Het gen gecodeerde eiwit identificeert DNA fouten na replicatie weergegeven. Hypermethylering van de MLH1
promoter en niet-mutatie veroorzaakt veranderingen in de eiwitfunctie verantwoordelijk is voor de microsatelliet instabiliteit in maagkanker [11]. Volgens de literatuur, MLH1
methylatie is verantwoordelijk voor de intestinale vorm van maagkanker en het vroege stadium van de ziekte [12-16]. Ondernemingen De functie van MGMT (O 6-methylguanine-DNA methyltransferase) is de alkylgroep van de O 6 positie van guanine [17] te verwijderen. Verstoring van de MGMT-functie kan de opkomst van mutaties veroorzaken. Wetenschappelijke publicaties blijkt dat de methylering van het MGMT
genpromotor is een van de pathogenetische pathways in maagkanker. In het bijzonder wordt genmethylatie toegeschreven aan het gevorderde stadium van de ziekte [18], en ook toegeschreven aan de slechtere prognose van de ziekte [19]. Ondernemingen De DAPK-1
(dood-geassocieerd eiwit kinase 1) gen is één van drie DAPK
familie genen die coderen calcium /calmoduline-afhankelijke serine-threonine proteïne kinasen. De functie van de DAPK-1 proteïne dat gepaard gaat met apoptose pathways en DAPK-1
hypermethylering is aangetoond dat het plaatsvindt in vaste en hematologische tumoren.
Maagkanker is geen uitzondering. Gen promoter methylatie is ook typerend voor adenocarcinomen op deze locatie. In een eerdere studie, onze groep vond een inverse associatie tussen DAPK-1 Kopen en MLH1
methylatie [20]. We testen hier de hypothese dat verschillende genen methylatie profielen voorkomen in kankerweefsel in de maag naar de plaats van de tumor (bovenste, middelste of onderste deel).
Methods
De studie werd goedgekeurd door de Litouwse regionale Biomedical Research Ethics Committee. Alle patiënten tekenden een informed consent formulier. Patiënten die behandeld worden aan de Litouwse University of Health Sciences Hospital (LUHSH) Kaunas Clinics in 2009-2012 deel aan de studie. Maag weefselmonsters werden genomen van alle patiënten met morfologisch bevestigd stadium I-III adenocarcinoom. De onderzoekspopulatie bestond uit 81 patiënten (34 mannen en 47 vrouwen) met een mediane leeftijd van 68 jaar (range 23-87 jaar; standaard deviatie [SD] 11,75). De tumoren van negen patiënten in het bovenste gedeelte van de maag, die van 39 patiënten werden in het middelste derde en die van 33 patiënten in het onderste deel van de maag. De maag weefselmonsters werden verzameld uit de tumorplaatsen tijdens chirurgie. Dit materiaal werd onmiddellijk bevroren in vloeibare stikstof en bewaard bij -80 ° C tot analyse. Tijdens het onderzoek werden de klinische gegevens van de patiënt (leeftijd bij diagnose, geslacht) en morfologische gegevens (tumorinvasie volgens de TNM-classificatie, histologische type volgens de Lauren indeling en mate van differentiatie volgens de World Health Organization indeling) verkregen medische dossiers.
methylering-specifieke polymerase kettingreactie (MSP)
DNA werd geëxtraheerd 25-30 mg ingevroren weefsel met behulp van de ZS Genomic DNA tissue ™ Mini Prep Kit (Zymo Research, USA), volgens de fabrikant. De methylatiestatus van de MLH1
, MGMT
en DAPK-1
promotoren werd bepaald door behandeling van het DNA met bisulfiet, met de EZ DNA methylatie Gold ™ Kit (Zymo Research), volgens de instructies van de fabrikant . Humaan genomisch DNA van perifere bloedlymfocyten, behandeld met bisulfiet, werd gebruikt als negatieve controle. Humaan genomisch DNA in vitro
behandeld met SSSI methyltransferase (New England Biolabs, UK) werd gebruikt als positieve controle. De methyleringsstatus van de promoters werd gedetecteerd met MSP. Ondernemingen De primers voor de gemethyleerde en niet-gemethyleerde DNA-sequenties worden opgesomd in Tabel 1. PCR werd uitgevoerd in een totaal reactievolume van 20 ul, bevattende 10 pl Maxima® Hot Start PCR Master Mix met Hot Start Taq DNA Polymerase
(Thermo Fisher Scientific, USA) en 10 pM van elke primer (Metabion International AG, Duitsland). MSP werd gedurende 38-40 cycli van denaturatie bij 94 ° C gedurende 30 s, hybridisatie gedurende 1 min bij de geschikte temperatuur voor het individu gen en verlenging bij 72 ° C gedurende 1 min. De PCR producten werden gescheiden door 3,5% agarose gelelektroforese (Fig. 1). Wanneer zowel gemethyleerd en niet-gemethyleerd signalen verscheen op een gel, werd het gen beschouwd methylated.Table te zijn 1 Primers gebruikt voor MSP
Primer naam
Forward opeenvolging
omgekeerde volgorde

Referentie
MLH1
gemethyleerde
TATATCGTTCGTAGTATTC [GenBank: NG_0071092]
TCCGACCCGAATAAACC
[40]
MLH1
gemethyleerd
TTTTGATGTAGATGTTTTATTAGGGT [GenBank: NG_0071092 ]
TACCACCTCATCATAACTACC
[40] verkopen MGMT
gemethyleerde
TTTCGACGTTCGTAGGTTTTCGC [GenBank: NG_000010.11]
GCACTCTTCCGAAAACGAAAC G
[40] verkopen MGMT
gemethyleerd
TTTGTGTTTTGATGTTTGTAGGTTTTTGT [GenBank: NG_000010.11]
AACTCCACACTCTTCCAAAAACAAAACA
[40]
DAPK-1
gemethyleerd
GGATAGTCGGATCGAGTTAACGTC [GenBank: NG_029883.1]
CCCTCCCAAACGCCG Een
[ ,,,0],40]
DAPK-1
gemethyleerd
GGAGGATAGTTGGATTGAGTTAATGTT [GenBank: NG_029883.1]
CAAATCCCTCCCAAACACCAA
[40]
bp
basenparen
Fig. 1 Representatieve monsters van MSP analyses van DNA-monsters genomen van maagkanker weefsels
Mathematisch-statistische data-analyse
statistische data-analyse werd uitgevoerd met de SPSS Statistics 19 softwarepakket (IBM SPSS Inc., USA). Kwantitatieve eigenschappen werden beschreven door de rekenkundig gemiddelde en de standaarddeviatie. Student's t-test
werd gebruikt om de hypothese van gelijke wijze controleren. De χ
2 criterium en Fisher's exact test werden gebruikt om de statistische hypothese van onafhankelijkheid van de twee variabelen te controleren. Correlaties tussen variabelen werden geëvalueerd door het berekenen van Spearman-coëfficiënt. p
< 0,05 werd als significant beschouwd.
Resultaten
De frequenties van promotor-methylering in kankerachtige weefsels uit de bovenste, middelste en onderste tweederde van de maag werden 11,1, 23,1 en 45,4%, respectievelijk voor de MLH1 gen
; 22,2, 30,8 en 57,6%, respectievelijk voor het MGMT gen
; en 44,4, 48,7 en 51,5%, respectievelijk voor de DAPK-1
gen. Methylering van de MLH1 Kopen en MGMT
genen werd vaker waargenomen in het onderste deel van de maag dan in het bovenste derde (p
< 0,05).
Nadere gegevens zijn in tabel 2 . Een seksegerelateerde subgroep analyse bleek dat MLH1
methylering in kanker weefsels van het onderste derde maag was typerend voor de vrouwelijke populatie (p
= 0,01), terwijl
MGMT methylering was alleen statistisch significant de mannelijke groep (p
= 0,03). De redenen voor deze bevindingen zijn onduidelijk en vereisen gedetailleerde analyse en verdere studies. De promotor methylering van de geanalyseerde genen was niet gerelateerd aan de patiënt age.Table 2 Verdeling van MLH1, MGMT
en DAPK-1
methylatie in kankercellen de maag weefsels volgens maag website
Maag bovenste derde kankerweefsel (9 patiënten) M /U
Maag middelbare derde kankerweefsel (39 patiënten) M /U
Maag lagere derde kankerweefsel (33 patiënten) M /U

p
waarde
MLH1
1/8
30/09
15/18
0,05 verkopen MGMT
07/02
12/27
19/14
0,01
DAPK-1
4/5
19/20
17/16
0,93
M
gemethyleerde allel, U
ongemethyleerde allel
twee histologische indelingscategorieën - darm- en diffuus typen tumoren - tijdens de differentiatie van de tumor en de neiging van de kankercellen te laten groeien en verspreiden . Daarom evalueerden we de mogelijke verbanden tussen de frequentieverdeling van DAPK-1
, MLH1
en MGMT
methylatie en Lauren morfologische tumor classificatie. De resultaten zijn weergegeven in tabel 3. Omdat slechts een klein aantal patiënten hadden histologisch bevestigd mixed-type adenocarcinoom volgens de indeling Lauren (n
= 7), deze groep werd toegewezen aan de diffuse agressievere vorm van de ziekte. tabel 3 verdeling van MLH1, MGMT, DAPK-1
methylatie volgens tumor en pathologische kenmerken
MLH1 M /U
MGMT M /U


DAPK-1 M /U
Tumor histologische parameters
Maag bovenste derde kankerweefsel
Maag middelbare derde kankerweefsel

Maag lagere derde kankerweefsel
Maag bovenste derde kankerweefsel
Maag middelbare derde kankerweefsel
Maag lagere derde kankerweefsel
maag bovenste derde kankerweefsel
Maag middelbare derde kankerweefsel
Maag lagere derde kankerweefsel
Intestinal soort
0/3
6/16
7/10
1/2
17/05
8/11
3/0
12/10
07/10
Zend soort
1/5
3/14
8/8
1/5
7/10
05/11
1/5
7/10
7 /9
p
value
0.45
0.48
0.61
0.57
0.22
0.21
0.02
0.41
0.39
T1
0/1
1/2
2/4
0/1
1/2
4/2
1/0
2/1
4/2
T2
0/2
2/2
2/3
0/2
1/3
3/2
1/1
0/4
3/2
T3
0/2
5/11
8/9
1/1
4/12
10/7
1/1
6/10
7/10
T4
1/3
1/15
3/2
1/3
6/10
2/3
1/3
11/5
3/2
p
value
0.7
0.17
0.83
0.62
0.88
0.84
0.59
0.06
0.67
N0
0/4
5/9
6/4
2/2
4/10
5/5
3/1
4/10
6/4
N1
0/2
2/4
3/5
0/2
2/4
5/3
0/2
2/4
4/4
N2
0/2
1/6
3/2
0/2
1/6
3/2
1/1
2/5
1/4
N3
1/0
1/11
3/7
0/1
5/7
6/4
0/1
11/1
6/4
p
waarde
0.29
0,33
0,48
0.36
0.66
0.95
0,27
0,01
0,46
M
gemethyleerde allel U
ongemethyleerde allel
Volgens onze gegevens, methylatie van de DAPK-1
promotor was vaker voor in de darm-type adenocarcinoom van de maag. Dit was echter slechts een trend omdat de resultaten waren niet statistisch significant (p = 0,06
). Een subgroep analyse overeenkomstig de tumor plaats blijkt dat de frequentie van DAPK-1
promoter methylering was significant gerelateerd aan de darm kankerweefsel als de tumor werd gedetecteerd in het bovenste derde van de maag (p
= 0,02; tabel 3). Er werd geen verband vastgesteld tussen de methylatie van het MLH1 golfreizen of MGMT
en de tumor type volgens de Lauren indeling.
We analyseerden ook de associatie tussen de methylatie frequentie van dezelfde genen en tumor invasie in de maagwand (categorie T). De methylering van genen MLH1 Kopen en MGMT
was niet geassocieerd met T de categorie van de TNM indeling van het kankerweefsel in een deel van de maag. Vaker methylatie van DAPK-1
waargenomen in geavanceerde tumoren in het middelste derde deel van de maag, maar dit was niet statistisch significant (p
= 0,06), hoewel deze trend in de toekomst moeten worden onderzocht.
de correlatie tussen gen promoter methylatie en lymfe-node betrokkenheid werd geanalyseerd, maar toonde geen significant verband tussen de methylering van de MLH1 Kopen en MGMT
initiatiefnemers en de tumor lymfe-node-status. Echter, de apoptose-gerelateerde gen DAPK-1
vaker gemethyleerd in het kankerachtige weefsel in het N3 categorie van de TNM (bij tumormetastase wordt gevonden bij ≥ 7 regionale lymfeknopen) dan bij de N0-2 categorie (p
= 0,05). Een subgroep analyse toonde aan dat deze associatie was alleen significant in de kankerachtige weefsels van het middelste derde deel van de maag (p
= 0,01).
Toen de tumoren werden geclassificeerd volgens het TNM systeem, vonden we geen verband tussen de methylatie van deze genen en tumor stadium. Echter een nauwkeuriger analyse van de subgroepen bleek dat de methylering van de MLH1 promotor
neiging vaker in kankerweefsel in het middelste derde deel van de maag in fase I-II tumoren dan in fase III tumoren (p
= 0,06). Epigenetische veranderingen in de DAPK
-gen werden significant vaker aangetroffen in de maag kankerweefsel van het middelste derde deel van de maag in fase III tumoren dan in fase I-II tumoren (p
= 0,05). Ondernemingen De resultaten van ons onderzoek geven een omgekeerde correlatie tussen de methylering van de MLH1 Kopen en MGMT
genen in maagkanker weefsels wanneer de tumor bevond zich in het onderste deel van de maag (coëfficiënt, -0,48; p = 0,01
). Een omgekeerde correlatie tussen de methylatie van DAPK Kopen en MLH1
blijkt ook uit het kankerweefsel in het middelste derde deel van de maag (coëfficiënt, -0,41; p = 0,01
).
Discussie
MLH1
Volgens de literatuur, de frequentie van MLH1
methylatie in kankerachtige gastrische weefsels varieert 14-43% [12-16]. Deze grote verschillen in de frequentie van MLH1
methylering kan worden toegeschreven aan de verschillende geografische regio's met name van mening studies. De anatomische verdeling van de maag tumor plaatsen is bekend dat verschillen in verschillende geografische regio's. In regio's waar de incidentie van H. pylori
infectie hoog (Oost-Europa, Oost-Azië), wordt noncardial of distale maagkanker vaakst gediagnosticeerd. In West- en Noord-Europa, waar het aantal H. pylori besmette mensen
is vrij laag, het aantal proximale maagkanker hoog. De wetenschappelijke literatuur rapporteert dat de methylering van de MLH1 promotor in
maagkanker weefsels significant gerelateerd aan de H. pylori
virulentie factor gecodeerd door het vacs1
gen [21]. Dit gen, die gewoonlijk wordt aangetroffen in het bacteriële genoom, veroorzaakt een meer intensieve ontstekingsreactie en is gerelateerd aan een verhoogd risico op maagkanker bij patiënten met atrofische gastritis [22]. Chronische maagslijmvlies ontsteking, die wordt gekenmerkt door het mucosale infiltratie van polymorfonucleaire leukocyten, macrofagen en T en B lymfocyten, leidt tot het vrijkomen van reactieve zuurstofverbindingen (ROS) van geactiveerde ontstekingscellen. ROS induceren van DNA schade en het ontbreken van een goede werking van de mismatch herstelsysteem [23]. Dit is een meerstaps proces dat afhankelijk is van de intensiteit van de ontsteking. De methylering van de MLH1
promotor optreedt in een laat stadium van atrofische gastritis, intestinale metaplasie [10, 24].
Dit consistent patroon wordt ook ondersteund door gegevens uit een studie van patiënten uit West- en Noord-Europa [13] . Bijna een derde van de patiënten werden gediagnosticeerd met proximale (cardiale) maagkanker en de frequentie van MLH1
methylering was 14,2%. Deze epigenetische verandering wordt ook vaker aangetroffen in distale maag kankerweefsel [13]. De resultaten van dit onderzoek tonen aan dat het optreden van MLH1
methylering bij maagkanker weefsel toeneemt vanaf het bovenste en middelste derde gedeelte van de maag aan het onderste deel en 11,1, 23,1 en 45,4%, respectievelijk. Zoals in de literatuur, hebben we aangetoond dat deze epigenetische verandering optreedt significant vaker in het onderste deel van de maag dan in het proximale derde, en dit effect is meer uitgesproken bij de vrouwelijke bevolking. De reden voor seks-gerelateerde verschillen onduidelijk zijn verdere onderzoeken nodig.
Bepaalde gegevens hebben aangetoond dat de methylering van de MLH1 promotor
significant vaker wordt gedetecteerd in intestinale type kankerachtige weefsels maag (volgens de indeling Lauren) dan in het diffuse soort [15, 16]. Onze resultaten tonen aan dat de verdeling van deze epigenetische verandering vergelijkbaar tussen tumortypen volgens Lauren classificatie.
Er werd geen significant verband tussen de methylatie van MLH1 Kopen en T en N criteria van kankerweefsel in een deel van de maag. Een aparte analyse op basis van de tumor bleek dat de epigenetische veranderingen (MLH1
methylering) de neiging vaker in kankerweefsel van het middelste derde deel van de maag te zijn wanneer in fase I-II tumoren dan in fase III tumoren (p
= 0,06). Dit resultaat kan niet statistisch significant zijn omdat het aantal patiënten met een vroeg stadium van de ziekte relatief klein.
Wij hebben geen gepubliceerde analyse van de relatie tussen deze epigenetische veranderingen en T, N gevonden, en getrapte criteria volgens de tumorplaats in de maag. Echter, gepubliceerde gegevens tonen aan dat, in het algemeen, de methylering van de MLH1
in kankerweefsel wordt vaker waargenomen bij regionale lymfklieren niet [14] zijn betrokken. Verkopen MGMT
De snelheid van de methylering van het MGMT
promoter in kankerweefsel verhoogd van het bovenste naar het onderste deel van de maag (22,2, 30,8 en 57,6%, respectievelijk), en dit effect is meer uitgesproken in de mannelijke bevolking. De reden voor seks-gerelateerde verschillen onduidelijk zijn verdere onderzoeken nodig. Volgens de literatuur, MGMT methylering in
maag kankerachtige weefsels varieert 7-61% [13, 25-28]. Deze grote variatie kan worden verklaard door het feit dat dit epigenetische veranderingen vaker wordt aangetroffen in distale maagkanker weefsel dan bij proximale locaties [18, 29].
Wij vonden geen significante associaties tussen MGMT
promoter methylatie en de T en N criteria of het histologische type van de tumor volgens de Lauren indeling op elk onderzocht maag website. Het verlies van het MGMT eiwit is gerelateerd aan tumor uitgezaaid naar de lymfeklieren [14, 18] en gevorderde stadia van de ziekte [18, 30]. In onze studie, het aantal patiënten met een vroeg stadium van de ziekte was relatief klein, wat onze bevindingen zou kunnen verklaren.
DAPK-1
In deze studie, de frequentie van DAPK-1
promoter methylering niet correleren met de tumor locatie. Gepubliceerde gegevens tonen aan dat de frequentie varieert 22-91% [28, 31-36]. Volgens onze gegevens, methylatie van de DAPK-1
promotor was vaker in de intestinale type maagdarmkanker. Dit was echter slechts een tendens dat de verschillen waren niet significant (p = 0,06
). Een subgroep analyse overeenkomstig de tumor plaats bleek dat de frequentie van DAPK
promotor-methylering was significant hoger in intestinale kankerweefsels in het bovenste derde van de maag. We vonden geen verenigingen in de literatuur vermeld tussen DAPK-1
promoter methylering en tumor classificatie volgens de Lauren. Onze resultaten moeten kritisch worden geïnterpreteerd door de enkele patiënten in deze subgroep.
We merkten een marginale trend waarbij DAPK-1
methylering vaker werd waargenomen in het middelste derde deel van de maag in meer gevorderde tumoren, volgens de T-criterium (p
= 0,06). We vonden ook dat wanneer de apoptose-gerelateerde gen DAPK-1
werd gemethyleerd in kankerachtige weefsels, de tumor was eerder N3 op het TNM (tumor metastasen in ≥ 7 regionale lymfeknopen) dan N0-2 (be p
= 0,05) en om een ​​geavanceerde tumor (stadium III in plaats van stadium I-II; p
= 0,05). Een subgroep analyse toonde aan dat deze associatie plaats in kankerachtige weefsels van het middelste derde deel van de maag (p-0,01), maar niet significant aan andere maag sites. Een studie gepubliceerd in 2010 bleek dat de methylatie van de pro-apoptotische gen DAPK-1
in kankercellen maag weefsels is gerelateerd aan de tumor uitbreiden tot de lymfeklieren [37], maar we hebben niet vinden alle informatie in de genoemde studie te koppelen deze bevindingen aan verschillende plaatsen van maagkanker lokalisaties.
Correlatie tussen de methylatie status van de geanalyseerde genen Ondernemingen de relaties tussen de promoter methylatie van de verschillende genen in maagkanker weefsels waren onze studie. Hebben deze correlaties afhankelijk van de tumorplaats? Wij hebben geen informatie in de wetenschappelijke literatuur over de correlatie van MGMT Kopen en MLH1
promoter methylering in de maag adenocarcinoom weefsels. De resultaten van ons onderzoek geven aan dat er een omgekeerde correlatie tussen de methylatie van MLH1 Kopen en MGMT
bij kanker weefsels wanneer de tumor bevond zich in het onderste deel van de maag (coëfficiënt, -0,48; p
= 0,01).
Deze resultaten zijn niet verrassend, omdat de methylatie van beide gen promoters wordt vaker aangetroffen in de lagere-maagkanker weefsels [13, 29]. Echter, de eiwitten die gecodeerd handeling in verschillende stadia van carcinogenese. MLH1
promoter methylering wordt vaker aangetroffen in de vroege stadia en in minder agressieve maag tumoren [12-16], terwijl MGMT
promoter methylatie is een typisch voorbeeld van een laat stadium maag adenocarcinoom en slechte prognose [18, 19] .
Meer informatie is beschikbaar over het verband tussen de promotor methylering van MLH1 Kopen en DAPK-1
. Hoge microsatelliet instabiliteit correleert omgekeerd evenredig met de methylatie van de DAPK-1
promoter [12]. Onze onderzoeksgroep ontdekte omgekeerde, zij het zwakke correlatie tussen de promotor methylering van DAPK-1
en MLH1
, het reguleren van microsatelliet functie in kankercellen maag weefsels [20].
We vonden ook dat deze correlatie optreedt in het middelste derde deel van de maag. Een inverse correlatie tussen de methylatie van DAPK-1 Kopen en MLH1
werd ook vastgesteld bij kanker weefsels bemonsterd uit het middelste derde deel van de maag. (Coëfficiënt, -0,41; p
= 0,01) Ondernemingen De specifieke beperking van deze studie is dat geen informatie over de mRNA expressie van de geanalyseerde genen verstrekt. Ons team is van plan om dit te ondernemen met kwantitatieve PCR in een toekomstige studie. De huidige bevindingen zijn belangrijk omdat ze niet alleen ons begrip van maagkanker breiden, maar ook vanuit het klinisch oogpunt. Er is een groeiende hoeveelheid bewijs dat gen methylatie in kankercellen gastrische weefsels geassocieerd met differentiële gevoeligheid voor chemotherapie. Methylering van de MLH1
gen is gerelateerd aan de weerstand tegen oxaliplatin-gebaseerde chemotherapie [38], en patiënten met DAPK-1
methylering vertonen een slechtere reactie op fluoropyrimidine gebaseerde chemotherapie [39].
Wij hopen dat onze studie zal leiden tot een beter inzicht in de verschillende trajecten van de moleculaire carcinogenese in verschillende delen van de maag.
Conclusie
onze studie resultaten tonen aan dat een epigenetische proces, de methylatie van gen promoters, in kankerweefsel afhangt op de locatie van de maag tumor
Afkortingen
bp:.
basenparen
DAPK-1 bestellen:
dood-geassocieerde proteïne kinase 1
LUHSH:
Litouws University of Health Sciences Ziekenhuis
M:
gemethyleerde allel


MGMT
:
O 6-methylguanine-DNA-methyltransferase
MC:
positieve gemethyleerde controle


MC:
negatieve gemethyleerde controle
MLH1
:
mutL homoloog 1, darmkanker, nonpolyposis type 2 (E. coli
)
mRNA:
messenger RNA
MSP:
methylering-specifieke polymerase kettingreactie

PCR:
polymerase chain reaction
ROS:
reactive oxygen species
U :
-gemethyleerde allel
UC:
positieve niet-gemethyleerd controle
UC-:
negatieve gemethyleerd controle

• Clinicopathologische kenmerken en behandelingsresultaten van hepatoid adenocarcinoom van de maag, een zeldzame, maar unieke subtype van maag cancer
• Oorsprong en evolutionaire plasticiteit van het maag-caecum in zee-egels (Echinodermata: Echinoidea)