Gen metylácie profil žalúdočné rakovinové tkanivá podľa nádoru miesta v žalúdku

Gen metylácie profil žalúdočné rakovinové tkanivá podľa nádoru miesta v žalúdku
abstraktné
pozadia
K dispozícii je značné množstvo informácií o metylácii promotorové oblasti z rôznych génov, podieľajúcich sa na žalúdočné karcinogenéze. Avšak, tam je nedostatok informácií o tom, ako tento proces epigenetické líši v nádoroch pochádzajúcich na rôznych miestach v žalúdku.
Cieľom tejto štúdie je vyhodnotiť metylačnej profily MLH1
MGMT
, a DAPK-1
gény v rakovinových tkanív z rôznych žalúdočných stránok.
metódy
Vzorky boli získané od 81 pacientov trpiacich žalúdočné adenokarcinóm, ktorí podstúpili operáciu pre rakovinu žalúdka v litovskom University of Health Sciences nemocnice Kaunas kliniky v roku 2009 -2012. Gen metylácie bola skúmaná s metylácie špecifické PCR. Štúdia bola schválená etickou komisiou Research litovský biomedicínskeho.
Výsledky
frekvenciách metylácie v rakovinových tkanív z hornej, strednej a dolnej tretiny žalúdka boli 11,1, 23,1, a 45,4%, v uvedenom poradí, pre MLH1
; 22,2, 30,8, a 57,6%, v danom poradí, pre MGMT
; a 44,4, 48,7 a 51,5%, v danom poradí, pre DAPK-1. MLH1 stroje a MGMT
metylácie bola pozorovaná častejšie v spodnej tretine žalúdka než v hornej tretine (s Hotel &0,05).
V jednej tretine, DAPK-1
metylácie promótorom bol spojený s viacerými-pokročilého ochorenia v lymfatických uzlinách (N2-3 v porovnaní s N0-1 [p
= 0,02]) a pokročilom štádiu nádoru (štádium III a nie fáz I-II [p =
0,05]). MLH1 stroje a MGMT
metylácie koreluje nepriamo, keď bol nádor sa nachádza v dolnej tretine žalúdka (koeficient -0,48, p = 0,01)
. DAPK 1 stroje a MLH1
metylácie korelovala negatívne u nádorov v strednej tretine žalúdka (koeficientu, -0,41; p
= 0,01).
Záver
promótor génu metylácie závisí na tom, žalúdočné umiestnenia nádoru.
Kľúčové
rakovina žalúdka MLH1
DAPK-1
MGMT
metylácie pozadí
rakovina žalúdka je závažný zdravotný problém. Skrytý klinický priebeh ochorenia znamená, že táto choroba je zvyčajne diagnostikovaná v jeho neskorých štádiách, čo vedie k zlej prognózy, a to napriek nové možnosti liečby, ktoré sa v poslednej dobe objavili.
Viac ako 90% rakoviny žalúdka sú diagnostikované ako adenokarcinóm [1 ]. Od roku 1965, adenokarcinóme žalúdka bola rozdelená do dvoch hlavných typov, difúzna a črevné (podľa Lauren [2]). Tieto dva histologické typy sa líšia v ich etiológie a prognóz. Črevné a žalúdočné adenokarcinómy sú často následkom chronickej infekcie Helicobacter pylori
, ak je bežná žalúdočnej sliznice sa transformuje na akútne neskorej chronickej gastritídy, črevné metaplázia, dysplázia a [3]. Difúzny adenokarcinóm je agresívnejší než črevného typu, pretože jeho tvorba nie je závislá na žalúdočnej sliznice alebo metaplázia procesov [4].
Nedávne vedecké údaje ukazujú, že prognóza adenokarcinómu žalúdka, závisí nielen na jeho histologickom typu, ale aj na lokalizácia nádoru v žalúdku. Proximálny nádory (pochádzajúce z kardio), ktorá zvyčajne tvorí v reakcii na refluxnej kyselina /žlčové kyseliny refluxu [5], sú teraz oddelené ako zreteľný a agresívnejší formu adenokarcinóme žalúdka, ktoré sa líšia od distálnej žalúdočnej nádory.
Ak distálnej rakovina žalúdka byť klasifikované ako jedinečný? Kohorty štúdie ukázali, že riziko, že premalígnych stave, s názvom "atrofická gastritída", sa vyvíjať do rakoviny sa líši v závislosti na mieste lézie v žalúdku. Relatívne riziko karcinómu žalúdka vyskytujúce sa u pacientov s corpus prevládajúcou gastritídy je vyššia ako u pacientov s prevažne antrálnej gastritídu [6]. Znamená to fakt indikujú rôzne karcinogénne procesy v žalúdku antra a corpus? Nie sú k dispozícii žiadne údaje buď vylúčiť alebo potvrdiť.
Epigenetických modifikáciou hrajú ústrednú úlohu v žalúdočnej karcinogenéze [7]. Tieto procesy, ako je metylácia CPG ostrovov v promotorové oblasti génu, spôsobovať reverzibilné štrukturálne zmeny v DNA, ktoré zase upravujú expresiu génov [8]. DNA metylácie nastane, keď metylová skupina (-CH 3) sa prenesie do 5 th poloha cytozín [9].
Predchádzajúci pilotnej štúdii našej výskumnej skupiny preukázali, že frekvencia metylácie MLH1
promotér sa líšia v corpus a antrálnej žalúdočné tkanív postihnutých pangastritis. Zistili sme, že tento proces je značne epigenetické častejšia v antrálnej gastritídy tkanivách ako v korpuse [10], pričom je stupeň atrofickej gastritídy, je podobná v oboch oblastiach. Nie je jasné, či táto tendencia platí aj rakovinových tkanív.
Boli vybrané dve skupiny génov pre túto analýzu metylácie. Prvá skupina (MLH1 stroje a MGMT
) obsahuje dva gény, ktoré kódujú proteíny zapojené do opravy mutácií a iných poškodení DNA pred ďalším delenie buniek, a druhá skupina obsahuje gén nádoru potláčajúce (DAPK-1
) kódujúci proteín, ktorý indukuje apoptózu v prítomnosti závažného genómovej vady.
MLH1
(Mutl homológov 1, rakovina hrubého čreva, typ nonpolyposis 2 (E. coli
)) gén sa vyskytuje na 3p21 .3 locus. Proteín gén kódovaný identifikuje chyby DNA, ktoré sa objavujú po replikácie. Hypermetylace zo MLH1
promótor, a to mutácie spôsobené zmeny vo funkcii proteínu, je zodpovedný za mikrosatelitních nestabilita v karcinómu žalúdka [11]. Podľa literatúry, MLH1
metylácie je zodpovedný za črevné formy rakovinou žalúdka a skorej fáze ochorenia [12-16].
Funkciu MGMT (O 6-metylguanín-DNA metyltransferáza) je odstrániť alkylovú skupinu od o 6 pozícii guanínu [17]. Narušenie funkcie MGMT môže spôsobiť vznik mutácie. Vedecké publikácie ukazujú, že metylácia MGMT
promótorom génu je jednou z patogénnych dráh v karcinómu žalúdka. Najmä gén metylácie je pripočítaný k pokročilej fáze ochorenia [18], a je tiež pripisovaná prognózou horší ochorenia [19].
DAPK-1
(úmrtia súvisiace s proteín kinázy 1) génu je jedným z troch DAPK
rodina génov, ktoré kódujú vápnik /kalmodulin-dependentný serín-treonín proteínkinázy. Funkcia proteínu DAPK-1 úzko súvisí s rôznymi cestami apoptózy, a DAPK-1
hypermetylace bolo preukázané, že sa vyskytujú v pevných a hematologických nádorov.
Karcinóm žalúdka nie je výnimkou. Promótor génu metylácie je tiež typická adenokarcinómov v tomto mieste. V skoršej štúdii, naša skupina zistené, inverzný vzťah medzi DAPK-1 stroje a MLH1
metylácie [20]. Testujeme tu hypotézu, že rôzni génová metylácie profily sa vyskytujú v rakovinových tkanív v žalúdku v závislosti na mieste nádoru (horné, stredné alebo dolnej tretine).
Metódy
štúdie bol schválený litovským regionálnym Biomedical výskum Etická komisia. Všetci pacienti podpísali informovaný súhlas formulár. Pacienti liečení v litovskom University of Health Sciences nemocnice (LUHSH) Kaunas klinike v rokoch 2009-2012 podieľala na štúdii. Vzorky žalúdočnej tkanivá boli odobraté zo všetkých subjektov s morfologicky potvrdeným adenokarcinómom štádium I-III. Súbor pacientov tvorilo z 81 pacientov (34 mužov a 47 žien) s priemerným vekom 68 rokov (rozmedzie 23-87 rokov; štandardná odchýlka [SD] 11,75). Nádory z deviatich pacientov boli v hornej tretine žalúdka, tých z 39 pacientov bolo v strednej tretine, a tie, ktoré z 33 pacientov bolo v spodnej tretine žalúdka. Vzorky žalúdočnej tkaniva boli odobraté z nádorových miest v priebehu chirurgického zákroku. Tieto materiály boli okamžite zmrazený v kvapalnom dusíku a skladované pri teplote -80 ° C až do analýzy. V priebehu štúdie boli získané klinické údaje jednotlivých pacientov (vek v čase stanovenia diagnózy, pohlavie) a morfologické dáta (invázia tumoru podľa klasifikácie TNM, histologický typ podľa klasifikácie Lauren a stupeň diferenciácie podľa klasifikácie Svetovej zdravotníckej organizácie) z lekárskych záznamov.
metylácie špecifickej polymerázovej reťazovej reakcie (MSP)
DNA bola extrahovaná z 25-30 mg zmrznuté tkaniva s použitím ZS genómovej DNA ™ Tissue Mini Prep Kit (Zymo Research, USA), presne podľa pokynov výrobcu. Stav metylácie MLH1
, MGMT stroje a DAPK-1
promótory bolo stanovené, že sa na DNA s bisulfitového použitím EZ metylácie DNA Gold Kit ™ (Zymo Research), v súlade s pokynmi výrobcu , Ľudské genómovej DNA z lymfocytov periférnej krvi, ošetrené bisulfitového, bola použitá ako negatívna kontrola. Ľudské genómovej DNA spracuje in vitro
s SSSI metyltransferáza (New England Biolabs, UK) bol použitý ako pozitívna kontrola. bol detekovaný stav metylácie promotorov s MSP.
priméry pre metylesterov a nemethylovaných DNA sekvencie sú uvedené v tabuľke 1. PCR bola vykonávaná v celkovom reakčnom objeme 20 ul, obsahujúci 10 ul Maxima® hot štart PCR master Mix s Horúci štart Taq
DNA polymerázy (Thermo Fisher Scientific, USA) a 10 uM každého priméru (Metabion International AG, Nemecko). MSP bola vykonávaná po dobu 38-40 cyklov denaturácie pri 94 ° C počas 30 s, žíhanie po dobu 1 min pri teplote s ohľadom na individuálne gén, a predĺženie pri 72 ° C po dobu 1 min. PCR produkty boli oddelené elektroforézou na 3,5% agarózovom géli (obr. 1). Keď obaja methylata a nemethylované signály objavil na gélu, gén bol považovaný za methylated.Table 1 Primery použité pre územné plánovanie námorného
Primer meno
Forward poradí
obrátenom poradí

Referenčné číslo
MLH1
methylata
TATATCGTTCGTAGTATTC [GenBank: NG_0071092]
TCCGACCCGAATAAACC
[40]
MLH1
nemethylovaný
TTTTGATGTAGATGTTTTATTAGGGT [GenBank: NG_0071092 ]
TACCACCTCATCATAACTACC
[40]
MGMT
methylata
TTTCGACGTTCGTAGGTTTTCGC [GenBank: NG_000010.11]
GCACTCTTCCGAAAACGAAAC G
[40]
MGMT
nemethylovaný
TTTGTGTTTTGATGTTTGTAGGTTTTTGT [GenBank: NG_000010.11]
AACTCCACACTCTTCCAAAAACAAAACA
[40]
DAPK-1
methyluje
GGATAGTCGGATCGAGTTAACGTC [GenBank: NG_029883.1]
CCCTCCCAAACGCCG systémom
[ ,,,0],40]
DAPK-1
nemethylovaný
GGAGGATAGTTGGATTGAGTTAATGTT [GenBank: NG_029883.1]
CAAATCCCTCCCAAACACCAA
[40]
bp
bázových párov
obr. 1 reprezentatívne vzorky MSP analýz vzoriek DNA odobratých z rakovinových tkanív žalúdka
matematicko-štatistickej analýzy dát
Štatistická analýza dát bola vykonaná pomocou softvérového balíka SPSS Statistics 19 (IBM SPSS Inc., USA). Kvantitatívne vlastnosti boli popísané aritmetický priemer a štandardná odchýlka. Student t-test
bol použitý na overenie hypotézy rovnakých prostriedkov. Χ
2 kritériom a Fisherov presný test sa používa na kontrolu štatistickú hypotézu o nezávislosti dvoch premenných. Korelácia medzi premennými boli hodnotené výpočtom Spearmanův koeficient. p Hotel < 0,05 bola považovaná za dôležitú.
Výsledky
frekvenciách metylácie promótorom v rakovinových tkanív z hornej, strednej a dolnej tretiny žalúdka boli 11,1, 23,1 a 45,4% v uvedenom poradí, pokiaľ ide o MLH1
génu; 22,2, 30,8, a 57,6%, v danom poradí, pre MGMT
génu; a 44,4, 48,7 a 51,5%, v danom poradí, pre
génu DAPK-1. Metylácia
MLH1 a MGMT
génov bola pozorovaná častejšie v spodnej tretine žalúdka, než v hornej tretine (p
menšie ako 0,05).
Podrobné údaje sú uvedené v tabuľke 2 . analýza podskupín sex na báze bolo zistené, že MLH1
metylácie v rakovinových tkanivách nižšej tretej žalúdka bol typický pre ženskej populácie (p
= 0,01), zatiaľ čo MGMT
metylácie bola iba štatisticky významné muž skupina (p
= 0,03). Dôvody týchto nálezov sú nejasné a vyžadujú podrobnú analýzu a ďalšie štúdie. Promotér metylácie analyzovaných génov nebol spojený s pacientom age.Table 2 Rozdelenie MLH1, MGMT stroje a DAPK-1
metylácie v rakovinových žalúdočných tkanivách podľa žalúdka mieste
Žalúdok vrchnú tretinu rakovinovú tkanivo (9 pacientov) M /U
Žalúdok prostrednej tretina rakovinové tkanivá (39 pacientov) M /U
Žalúdok nižšia tretej rakovinové tkanivá (33 pacientov) M /U

p
hodnota
MLH1
1/8
9/30
15/18
0,05
MGMT
2/7
12/27 19/14
0,01
DAPK-1
4/5
19 dvadsatiny
17/16
0,93
M
methylata alela, U
nemethylovaný alely
dvoch hlavných kategórií - histologické klasifikácie črevnej a difúzne typy nádorov - odrážajú diferenciáciu nádoru a tendenciu rakovinových buniek, proliferácie a šírenie , Z tohto dôvodu sme hodnotili možné spojenie medzi frekvenčných distribúciou DAPK-1
MLH1 stroje a MGMT
metylácie a klasifikáciu morfologický nádoru Lauren. Výsledky sú uvedené v tabuľke 3. Vzhľadom k tomu, len malý počet pacientov sa histologicky potvrdené zmiešané typu adenokarcinóm podľa klasifikácie Lauren (n
= 7), táto skupina bola pridelená do agresívnejší difúzne formou ochorenia. Tabuľka 3 Distribúcia MLH1, MGMT, DAPK-1
metylácie podľa nádoru mieste a patologických vlastnostiach
MLH1 M /U
MGMT M /U


DAPK-1 M /U
Nádorové histologické parametre
Žalúdok hornej tretinu rakovinové tkanivá
Žalúdok stredného tretej rakovinové tkanivá

Žalúdok nižšia tretej rakovinové tkanivá
Žalúdok horná tretina rakovinové tkanivá
Žalúdok stredného tretej rakovinové tkanivá
Žalúdok nižšia tretej rakovinové tkanivá
žalúdok hornej tretinu rakovinové tkanivá
žalúdok stredného tretej rakovinové tkanivá
žalúdok nižšia tretej rakovinové tkanivá
Črevné typovej
0/3
6/16
7/10
1/2
5/17
8/11
3/0
12/10
10/7
rozptyľovať typ
1/5
3/14
8/8 1/5
7/10
11/5
1/5
7/10
7 /9
p
value
0.45
0.48
0.61
0.57
0.22
0.21
0.02
0.41
0.39
T1
0/1
1/2
2/4
0/1
1/2
4/2
1/0
2/1
4/2
T2
0/2
2/2
2/3
0/2
1/3
3/2
1/1
0/4
3/2
T3
0/2
5/11
8/9
1/1
4/12
10/7
1/1
6/10
7/10
T4
1/3
1/15
3/2
1/3
6/10
2/3
1/3
11/5
3/2
p
value
0.7
0.17
0.83
0.62
0.88
0.84
0.59
0.06
0.67
N0
0/4
5/9
6/4
2/2
4/10
5/5
3/1
4/10
6/4
N1
0/2
2/4
3/5
0/2
2/4
5/3
0/2
2/4
4/4
N2
0/2
1/6
3/2
0/2
1/6
3/2
1/1
2/5
1/4
N3
1/0
1/11
3/7
0/1
5/7
6/4
0/1
11/1
6/4
p
hodnota
0,29
0,33
0,48
0,36
0,66
0,95
0,27
0,01
0,46
M
metylalkoholom alely , U
nemethylovaný alely
Podľa našich údajov, metylácie promótorom
DAPK-1 bola častejšia v črevnej typu adenokarcinóme žalúdka. Avšak, toto bolo len trend, pretože výsledky neboli štatisticky významné (p = 0,06
). Analýza podskupín v závislosti na polohe nádoru bolo zistené, že frekvencia DAPK-1
metylácie promótorom bola významne súvisí s črevné rakovinové tkanivá, kedy došlo k detekcii nádoru v hornej tretine žalúdka (p = 0,02
Tabuľka 3). Žiadny vzťah bol identifikovaný medzi metylácie MLH1
alebo MGMT stroje a typu nádoru podľa klasifikácie Lauren.
Tiež sme analyzovali metylačnej súvislosť medzi frekvenciou rovnakých génov a invázie nádoru do žalúdočnej steny (kategória T). Metylácia génov MLH1 stroje a MGMT
nebola spojená s kategóriou T klasifikácie TNM z nádorovom tkanive, v akejkoľvek časti žalúdka. Častejšie metyláciou DAPK-1
bola pozorovaná u pokročilých nádorov v strednej tretine žalúdka, ale tento nebol štatisticky významný (p = 0,06
), aj keď tento trend by mali byť skúmané v budúcnosti.
korelácia medzi promótor génu metylácie a zapojenie lymfatické uzliny bola analyzovaná, ale neodhalili žiadnu významnú súvislosť medzi metylácie MLH1 stroje a MGMT
promotérov a statusu nádor lymfatické uzliny. Avšak, apoptózy súvisiace s génom DAPK-1
sa častejšie methyluje v rakovinových tkanivách v kategórii N3 klasifikácie TNM (ak je nádorové metastázy nájsť v ≥ 7 regionálnych lymfatických uzlín), než v tých, v N0-2 kategórie (p
= 0,05). Analýza podskupín ukázala, že toto spojenie bolo len významný v rakovinových tkanivách v strednej tretine žalúdka (p
= 0,01).
Keď boli nádory klasifikované podľa TNM systém, sme zistili, že žiadny vzťah medzi metylácie z týchto génov a štádiu nádoru. Avšak, Presnejšia analýza podskupín ukázala, že metylácie promótorom MLH1
tendenciu byť častejšie v rakovinových tkanivách v strednej tretine žalúdka v stupni nádory I-II, ako v stupni nádory III (p
= 0,06). Epigenetické zmeny v DAPK
génu bola zistená významne častejšie v žalúdočnej rakovinové tkanivá strednej tretine žalúdka v stupni III nádory ako v stupni nádory I-II (p
= 0,05). Výsledky
našej štúdie ukazujú, inverzný koreláciu medzi metylácie MLH1 stroje a MGMT
génov v žalúdku rakovinové tkanive, kedy bol nádor sa nachádza v dolnej tretine žalúdka (koeficient, -0,48, p = 0,01
). Korelácia medzi inverzný metylácie DAPK stroje a MLH1
preukázal aj v nádorovom tkanive, v strednej tretine žalúdka (koeficientu, -0,41, p
= 0,01).
Diskusia
MLH1
Podľa literatúry, frekvencia MLH1
metylácie v rakovinových tkanivách žalúdku sa pohybuje v rozmedzí od 14 do 43% [12-16]. Tieto veľké rozdiely vo frekvencii MLH1
metylácie možno pripísať na vrub rôznych geografických oblastí považovaných najmä štúdie. Anatomická distribúcia nádorových miest žalúdka je známe, že sa líši v rôznych geografických oblastiach. V regiónoch, kde je vysoký výskyt infekcie Helicobacter pylori
(Východná Európa, Východná Ázia), je noncardial alebo distálny rakovina žalúdka diagnostikovaná najčastejšie. Avšak, v západnej a severnej Európe, kde je pomerne nízky počet H. pylori-
nakazených ľudí, počet proximálnych karcinómov žalúdka je vysoká. Vedecká literatúra uvádza, že metylácie MLH1
promótorom v rakovinových tkanivách žalúdku sa významne súvisí s H. pylori
faktor virulencie kódovaného vacs1
génu [21]. Tento gén, ktorý je zvyčajne detekovaná v bakteriálnom genóme, vyvoláva ďalšie náročné zápalovú odpoveď a súvisí so zvýšeným rizikom rakoviny žalúdka u pacientov s atrofickej gastritídy, [22]. Chronický zápal žalúdočnej sliznice, ktorá sa vyznačuje tým, slizničnej infiltráciou polymorfonukleárnych leukocytov, makrofágov a T a B lymfocytov, vedie k uvoľňovaniu reaktívnych foriem kyslíka (ROS), z aktivovaných zápalových buniek. ROS vyvolať poškodenie DNA a nedostatok správnu funkciu nesúlad opravy systému [23]. Ide o viacstupňový proces, ktorý závisí od intenzity zápalu. Metylácia na MLH1
promótor sa vyskytuje v neskorom štádiu atrofickej gastritídy, črevná metaplázia [10, 24].
Konzistentné vzor je tiež podporená údajmi zo štúdie pacientov zo západnej a severnej Európy [13] , Takmer tretina pacientov bolo diagnostikovaných s proximálnej (kardiálne) rakovinou žalúdka, a frekvencia MLH1
metylácie bola 14,2%. Táto epigenetické zmena je tiež častejšie detekované v distálnej žalúdočnej rakovinové tkanivá [13]. Výsledky našej štúdie ukazujú, že výskyt MLH1
metylácie v zvyšuje žalúdočné rakovina tkaniva z hornej a strednej tretine žalúdka do spodnej tretiny, a bol 11,1, 23,1, a 45,4%, v uvedenom poradí. Ako je v literatúre, sa tiež ukázala, že tento epigenetické zmeny nastane významne častejšie v spodnej tretine žalúdka, ako v jeho proximálnej tretiny, a tento účinok je výraznejší v ženskej populácii. Dôvodom pre rozdiely súvisiace pohlavia je nejasná, sú potrebné ďalšie skúmanie.
Niektoré údaje ukázali, že metylácie MLH1
promótor je zistená významne častejšie v črevnej typu rakovinové tkanivá žalúdočné (podľa klasifikácie Laurena) než v difúzneho typu [15, 16]. Naše výsledky ukazujú, že distribúcia tohto epigenetické zmeny je podobný u všetkých typov nádorov v súlade s Lauren klasifikácie.
Zistili sme žiadnu významnú súvislosť medzi metyláciou MLH1 stroje a T a n kritériá na rakovinové tkanivá v akejkoľvek časti žalúdok. Samostatná analýza v závislosti na mieste nádoru ukazuje, že epigenetické zmeny (MLH1
metylácie) tendenciu byť častejšie v rakovinové tkanive od strednej tretine žalúdka, keď vo fáze nádory I-II, ako v stupni nádory III (p
= 0,06). Tento výsledok nemusí byť štatisticky významný, pretože počet pacientov s ochorením v ranom štádiu bola relatívne malá.
Zistili sme žiadne publikovanej analýzy vzťahu medzi týmto epigenetické zmeny a T, N, a kritériá fázy v závislosti na nádor miesto v žalúdku. Avšak, publikované údaje ukazujú, že všeobecne platí, že metylácie MLH1
v rakovinových tkanivách je detekovaná častejšie, keď sú miestne lymfatické uzliny nepodieľa [14].
MGMT
Miera metylácie Mgmt
promótor v rakovinových tkanivách zvýšil z hornej do dolnej tretine žalúdka (22,2, 30,8 a 57,6%, v uvedenom poradí), a tento účinok je výraznejší u mužskej časti populácie. Dôvodom pre rozdiely súvisiace pohlavia je nejasná, sú potrebné ďalšie skúmanie. Podľa literatúry, MGMT
metylácie v rakovinových tkanivách žalúdku sa pohybuje v rozmedzí od 7 do 61% [13, 25-28]. Táto široká zmena by mohla byť vysvetlená skutočnosťou, že táto zmena je detekovaná epigenetické častejšie v distálnom rakoviny žalúdka tkaniva než na proximálnej miest [18, 29].
Zistili sme žiadne významné spojenie medzi MGMT
metylácie promótorom a T a N kritériá alebo histologický typ nádoru podľa klasifikácie v ktoromkoľvek skúmanom žalúdku mieste Lauren. Strata funkcie MGMT proteínu sa týka nádoru sa šíri do lymfatických uzlín [14, 18] a pokročilých štádiách ochorenia [18, 30]. V našej štúdii, počet pacientov s ochorením v ranom štádiu bola pomerne malá, čo by mohlo vysvetliť naše výsledky.
DAPK-1
v tejto štúdii, je frekvencia DAPK-1
metylácie promótorom nekoreluje s umiestnením nádoru. Publikované informácie ukázali, že jeho frekvencia sa pohybuje od 22 do 91% [28, 31-36]. Podľa našich údajov, metylácie promótorom
DAPK-1 bola častejšia v črevnom typu adenokarcinóme žalúdka. Avšak, toto bolo len trend, pretože rozdiely neboli štatisticky významné (p = 0,06
). Analýza podskupín v závislosti na polohe nádoru ukázalo, že frekvencia DAPK
metylácie promótorom bola významne vyššia u črevných nádorových tkanivách v hornej tretine žalúdku. Zistili sme žiadne združenia uvedené v literatúre medzi DAPK-1
metylácie promótorom a klasifikácie nádorov podľa Lauren. Naše výsledky by mali byť interpretované kriticky, pretože z mála pacientov v tejto podskupine.
Sme zaznamenali okrajovou trend, ktorý bol detekovaný DAPK-1
metylácie častejšie v strednej tretine žalúdka v pokročilejších nádorov, v závislosti na kritérium T (p
= 0,06). Tiež sme zistili, že keď sa apoptózy súvisiace s génom DAPK-1
methyluje v rakovinových tkanivách, nádor bol viac pravdepodobné, že bude N3 na klasifikácie TNM (nádorové metastázy nájsť v ≥ 7 regionálnych lymfatických uzlín), ako N0-2 ( p
= 0,05) a byť pokročilého nádorového ochorenia (stupeň III a nie fáz i-II, p
= 0,05). Analýza podskupín ukázala, že toto spojenie sa vyskytuje v rakovinových tkanivách v strednej tretine žalúdka (p-0,01), ale nie je významný na iných miestach žalúdka. Štúdia zverejnená v roku 2010 ukázala, že metylácie proapoptotický génu DAPK-1
v rakovinových žalúdočných tkanivách súvisí šírenie nádoru do lymfatických uzlín [37], ale nenašli sme všetky informácie v uvedenej štúdii spájajúcej tieto nálezy na rôznych miestach na rakovinu žalúdka lokalizáciách.
Korelácia medzi metylačného statusu analyzovaných génov
vzťahy medzi metylácie promótorom rôznych génov v nádorových tkanivách žalúdku boli skúmané našej štúdie. Tieto korelácie závisia na mieste nádoru? Zistili sme vo vedeckej literatúre žiadnu informáciu o koreláciu MGMT stroje a MLH1
metylácie promótorom v žalúdku adenokarcinómu tkanivách. Výsledky našej štúdie ukazujú, že existuje inverzný korelácia medzi metylácie MLH1 stroje a MGMT
v nádorových tkanivách, kedy bol nádor, umiestnených v spodnej tretine žalúdka (koeficient -0,48, p
= 0,01).
Tieto výsledky nie sú prekvapivé, pretože metylácie oboch promotorov génov je častejšie detekovaná v tkanivách nižšej rakovina žalúdka [13, 29]. Avšak, proteíny kódované akt v rôznych štádiách rakoviny. MLH1
promótor Metylácia sa častejšie detekované v počiatočnej fáze a v menej agresívnych nádorov žalúdka [12-16], vzhľadom na to, MGMT
metylácie promótorom je typickejší pre neskorej fáze žalúdočné adenokarcinómov a zlé prognózy [18, 19] .
Viac informácií je k dispozícii o pridružení medzi promótorom metylácie MLH1 stroje a DAPK-1
. Vysoká mikrosatelitních nestabilita koreluje nepriamo úmerne s metyláciou DAPK-1
promótor [12]. Naša výskumná skupina zistila inverzný, hoci slabé, korelácia medzi promótorom metylácie DAPK-1 stroje a MLH1
regulačné funkcie mikrosatelitov v rakovinových tkanivách žalúdku [20].
Tiež sme zistili, že táto korelácia sa vyskytuje v prostrednej tretine žalúdku. Korelácia medzi inverzný metylácie DAPK-1 stroje a MLH1
bol tiež identifikovaný v rakovinových tkanivách vo vzorke od strednej tretine žalúdka. (Koeficient -0,41, p = 0,01
)
Konkrétne obmedzenie tejto štúdie je, že žiadne informácie o expresiu mRNA analyzovaných génov bola poskytnutá. Náš tím má v pláne začať to s kvantitatívnej PCR v budúcej štúdii. Súčasné poznatky sú dôležité nielen preto, že rozšíri naše chápanie žalúdočné karcinogenéze, ale aj z klinického hľadiska. Tam je stále viac dôkazov, že génová metylácie v rakovinových tkanivách žalúdka je spojený s diferenciálnym citlivosťou k chemoterapii. Metylácia MLH1
génu sa vzťahuje k rezistencii na báze oxaliplatiny chemoterapia [38], a pacienti s DAPK-1
metylácie vykazujú horšie odozvu na fluoropyrimidín chemoterapia [39].
Veríme, že naše štúdie povedie k lepšiemu pochopeniu rôznych ciest molekulárnej karcinogenézy v rôznych častiach žalúdku.
Záver
Naša štúdia výsledky ukazujú, že epigenetické proces, metylácie promotorov génov, v rakovinové tkanive závisí na umiestnenie žalúdočné nádoru
Skratky
varu.
párov báz
DAPK-1
:
smrti spojené proteín kináza 1
LUHSH:
Lithuanian University of Health Sciences nemocnice
M:
methylata alela


MGMT
:
O 6-metylguanín-DNA-metyltransferáza
MC:
pozitívna methylata kontrola

MC:
negatívna methylata kontrola
MLH1
:
Mutl homolog 1, rakoviny hrubého čreva, nonpolyposis typu 2 (E. coli
)
mRNA:
messenger RNA
MSP:
metylácie špecifická polymerázová reťazová reakcia

PCR:
polymerázovej reťazovej reakcie
ROS:
reaktívne formy kyslíka
U :
nemethylovaný alely
UC:
pozitívna nemethylovaný kontrola
úč-:
negatívna nemethylovaný kontrola

• Patologickým vlastnosti a výsledky liečby z hepatoid adenokarcinóm žalúdka, vzácne, ale unikátnym podtypom žalúdočné cancer
• Pôvod a evolučné plasticity žalúdočnej slepého čreva v morských ježkov (ECHINODERMATA: Echinoidea)