Gen metilacija profil želodca rakasto tkivo po katerem mestu tumorja v profilu stomach

gena metilacije želodčne rakasto tkivo po katerem mestu tumorja na želodcu
Abstract
Ozadje
je precej informacije o metilacije promotorja regij iz različnih genov, ki sodelujejo pri želodčnem rakotvornost. Vendar pa je pomanjkanje informacij o tem, kako to epigenetsko proces razlikuje v tumorjih poreklom na različnih lokacijah v želodcu.
Cilj te študije je oceniti profile metilacije za MLH1
, MGMT
, in DAPK-1
genov v rakastih tkiv iz različnih želodčnih mestih.
metod
Vzorci so bili pridobljeni od 81 bolnikov, ki trpijo želodčne adenokarcinom, ki so bili operirani zaradi raka želodca v litovski University of Health Sciences Hospital Kaunas klinike v letu 2009 -2012. Gene metilacija smo raziskali z metilacije specifične PCR. Študija je odobril odbor za litovski biomedicinske raziskave etiko.
Rezultati
frekvencah metilacije v rakastih tkiv zgornji, srednji in spodnji tretjini želodca je bila 11,1, 23,1 in 45,4%, v tem zaporedju, za MLH1
; 22.2, 30.8 in 57.6%, v tem zaporedju, za MGMT
; in 44,4, 48,7 in 51,5%, oziroma za DAPK-1. MLH1
and MGMT
metilacija opazili pogosteje v spodnji tretjini želodca kot v zgornjem tretjem (p
< 0,05).
V srednji tretjini, DAPK-1
promotor metilacija bila povezana z bolj napredovalo boleznijo v bezgavkah (N2-3 primerjavi z N0-1 [p
= 0,02]) in poznejši fazi tumorja (stadiju III namesto fazah I-II [p
= 0,05]). MLH1
and MGMT
metilacija korelaciji obratno, ko je tumor nahaja v spodnji tretjini želodca (koeficient -0,48; p
= 0,01). DAPK-1
and MLH1
metilacije povezana obratno v tumorjih v srednji tretjini želodca (koeficient, -0,41; p
= 0,01).
Zaključek
promotor gena metilacije je odvisna od želodca lokacije tumorja.
Ključne besede
rak želodca MLH1
DAPK-1
MGMT
metilacije Ozadje
raka želodca je resen zdravstveni problem. Skrita klinični potek bolezni pomeni, da je ta bolezen običajno diagnosticirana v svojih poznih fazah, ki vodijo do slabe napovedi, kljub nove možnosti zdravljenja, ki so se pred kratkim pojavile.
Več kot 90% v želodcu raka zboli kot adenokarcinomom [1 ]. Od leta 1965 je bil želodčni adenokarcinom razdeljen v dve glavni vrsti, razširjen in črevesne (po Lauren [2]). Ti dve histološke vrste razlikujejo v svojih etiologij in napovedi. Črevesne in želodčne adenokarcinomi so pogosto posledica kronične okužbe s Helicobacter pylori
, ko običajna sluznico želodca transformira akutne pozno kronično gastritis, intestinalno metaplazijo in displazija [3]. Difuzna adenokarcinom je bolj agresiven kot črevesno tipa, ker je njegova tvorba ni odvisna od procesov, gastritis ali metaplazijo [4].
Nedavni znanstveni podatki kažejo, da prognoza adenokarcinomom želodca ni odvisna samo na histološki tip, ampak tudi na lokacija tumorja na želodcu. Proksimalni tumorji (poreklom v Kardije), ki običajno tvorijo kot odziv na gastroezofagealno kislina /žolčnega refluksa [5], so sedaj ločeni kot posebno in bolj agresivni obliki adenokarcinomom želodca, ki se razlikujejo od distalnih želodčnih tumorjev.
Bi distalni rak želodca se razvrstijo kot edinstven? Kohorte študije so pokazale, da tveganje predrakavih stanje, imenovano "atrofičnega gastritisa" razvija v raka razlikuje glede na mestu lezije v želodcu. Relativno tveganje za raka želodca, ki se pojavljajo pri bolnikih s korpus-prevladujočo gastritis višja kot pri tistih s pretežno antralnih gastritis [6]. Ali to dejstvo kažejo različne rakotvorne procese v želodcu antruma in korpusa? Ni podatkov za bodisi izločiti ali potrditi.
Epigenetske spremembe osrednjo vlogo v rakotvornost želodca [7]. Ti procesi, kot metitiranjem CpG otokov v genski promotor regijah povzroča reverzibilne strukturne spremembe v DNA, kar spreminjajo izražanje genov [8]. DNA metilacija pojavi, ko je metilna skupina (CH 3) prenese na 5 th položaj citozin [9].
A prejšnji pilotno študijo naše raziskovalne skupine je pokazala, da je pogostost metilacije izmed MLH1
promotor razlikuje v corpus in antralnih želodca tkivih pangastritis prizadela. Opazili smo, da je to epigenetsko proces bistveno bolj pogoste v antralnih gastritis tkivih kot v korpusu [10], medtem ko je stopnja atrofični gastritis podobna v obeh regijah. Ni jasno, ali je ta težnja res tudi rakavih tkiv.
Dve skupini genov so za to analizo metilacije izbrali. Prva skupina (MLH1
in MGMT
) vsebuje dva gene, ki kodirajo proteine, vpletene v popravilo mutacij in drugih poškodb DNA pred nadaljnjo delitev celic, in druga skupina vsebuje s tumorjem zatirati gen (DAPK-1
), ki kodira protein, ki inducira apoptozo v prisotnosti hude genomske defekta.
MLH1
(mutL homolog 1, raka debelega črevesa, tip nonpolyposis 2 (E.coli
)) gena pojavi na 3p21 .3 locus. The-gen kodira protein identificira napake DNK, ki se pojavijo po replikacije. Hypermethylation zaradi tega MLH1
promotorja, in ne-mutacij povzroča spremembe v funkciji beljakovin, je odgovoren za mikrosatelitnih nestabilnosti rakom želodca [11]. Glede na literaturo, MLH1
metilacija je odgovoren za črevesno obliko raka želodca in zgodnji fazi bolezni [12-16].
Funkcijo MGMT (O 6-metilgvanina-DNA- metiltransferaza) je odstraniti alkilne skupine od 6 položaja o gvanina [17]. Motnje funkcije MGMT lahko povzroči nastanek mutacij. Znanstvenih publikacijah kažejo, da je metilacija v MGMT
promotor gena eden patogenetske poti za rak želodca. Zlasti je gen metilacija pripisati fazi bolezni [18], in je pripisati tudi prognozo na slabše bolezni [19].
DAPK-1
(smrt povezana protein kinazo 1) gena je eden od treh DAPK
družini genov, ki kodirajo kalcija /kalmodulinske odvisni serin-treonin protein kinaz. Funkcija proteina DAPK-1 je tesno povezana z različnimi apoptoze poti in DAPK-1
hypermethylation Dokazano je, da pride do trdne in hematološke tumorjev.
Rak želodca ni izjema. Gene promotor metilacija je značilno za adenokarcinomov na tej lokaciji tudi. V prejšnji raziskavi, naša skupina je našla inverzno povezavo med DAPK-1
in MLH1
metilacije [20]. Mi test sem hipotezo, da so se pojavile različne profile gen metilacije v rakastih tkivih v želodcu po mestu tumorja (zgornji, srednji ali spodnji tretjini).
Metode
študija je bila odobrena s litovski regionalni Biomedical Odbor za raziskave etiko. Vsi bolniki so podpisali informirano obrazec o soglasju. Bolniki, zdravljeni na litovskega University of Sciences Hospital zdravje (LUHSH) Kaunas klinike v obdobju 2009-2012 so sodelovali v raziskavi. Vzorci z želodcem tkiva so bili odvzeti iz vseh predmetov z morfološko potrjena adenokarcinom faza I-III. Populacija študije je sestavljalo 81 bolnikov (34 moških in 47 žensk), s srednjo starostjo 68 let (razpon 23-87 let, standardni odklon [SD] 11,75). Tumorji devetih bolnikov je bilo v zgornji tretjini želodca, tiste od 39 bolnikov je bilo v srednji tretjini, in tiste od 33 bolnikov je bilo v spodnji tretjini želodca. Vzorci tkiva želodčne so zbrani iz tumorskih mestih med operacijo. Ti materiali so bili takoj zamrznili v tekočem dušiku in shranili pri -80 ° C do analize. V študiji so bili pridobljeni s kliničnimi podatki bolnikov (starost ob diagnozi, spol) in morfoloških podatkov (tumor invazijo po klasifikaciji TNM, histološki tip v skladu s klasifikacijo Lauren, in stopnja diferenciacije po klasifikaciji Svetovne zdravstvene organizacije) iz zdravstvenih kartotek.
metilacije specifične verižne reakcije s polimerazo (PPN)
DNA je bila vzeta iz 25-30 mg zamrznjenega tkiva z uporabo ZS genomske DNA ™ Tissue Mini Prep Kit (Zymo Research, ZDA) se je po podatkih navodila proizvajalca. Status metilacija MLH1
, MGMT
in DAPK-1
predlagateljev je bila določena z obdelavo DNA z bisulfit, z EZ DNA metilacije Gold Kit ™ (Zymo Research), v skladu z navodili proizvajalca . Človeški genomsko DNA iz perifernih krvnih limfocitov, obdelamo z bisulfitom, smo uporabili kot negativno kontrolo. Human genomsko DNA obravnavati in vitro
s SssI methyltransferase (New England BioLabs, UK) je bila uporabljena kot pozitivno kontrolo. Metilacijskega statusa promotorjev bila odkrita PPN.
Primerji za metilnim in nemetiliran DNA sekvence so navedeni v tabeli 1. PCR smo izvedli v celotnem reakcijskem volumnu 20 ul, ki vsebuje 10 xl od Maxima® Hot začetek PCR Master Mix z vročega zagona Taq
DNK polimerazo (Thermo Fisher Scientific, ZDA) in 10 iM vsak primer (Metabion International AG, Nemčija). PPN smo izvedli za 38-40 ciklov denaturacijo pri 94 ° C 30 sekund, žarjenje za 1 minuto pri temperaturi, primerni za posameznega gena, in podaljšanje pri 72 ° C 1 min. PCR produkt smo ločili s 3,5% agaroznem gelu (sl. 1). Ko sta metilni in nemetiliran signali pojavil na gel, se je gen šteje methylated.Table 1 premazi, ki se uporabljajo za PPN
primerjem imena
Forward zaporedju
Proste obratnem zaporedju

Referenčna številka
MLH1
methylated
TATATCGTTCGTAGTATTC [GenBank: NG_0071092]
TCCGACCCGAATAAACC
[40]
MLH1
nemetiliran
TTTTGATGTAGATGTTTTATTAGGGT [GenBank: NG_0071092 ]
TACCACCTCATCATAACTACC
[40]
MGMT
methylated
TTTCGACGTTCGTAGGTTTTCGC [GenBank: NG_000010.11]
GCACTCTTCCGAAAACGAAAC G
[40]
MGMT
nemetiliran
TTTGTGTTTTGATGTTTGTAGGTTTTTGT [GenBank: NG_000010.11]
AACTCCACACTCTTCCAAAAACAAAACA
[40]
DAPK-1
metilirani
GGATAGTCGGATCGAGTTAACGTC [GenBank: NG_029883.1]
CCCTCCCAAACGCCG
[ ,,,0],40]
DAPK-1
nemetiliran
GGAGGATAGTTGGATTGAGTTAATGTT [GenBank: NG_029883.1]
CAAATCCCTCCCAAACACCAA
[40]
bp
baznih parov
sl. 1 Reprezentativni vzorci PPN analize vzorcev DNK, odvzetih iz želodca rakavih tkiv
Matematično-statistične analize podatkov
je Statistična analiza podatkov izvaja z SPSS Statistics 19 programski paket (IBM SPSS Inc., ZDA) je. Kvantitativne lastnosti so opisana z aritmetično sredino in standardni odklon. Študentska t
je -test uporabljajo za preverjanje hipoteze enakih sredstev. Χ
2 merilo in Fisherjev natančni test smo uporabili za preverjanje statističnih hipotez neodvisnosti dveh spremenljivk. Korelacije med spremenljivkami so bile ocenjene z izračunom koeficienta Spearman je. p
< 0.05 se je zdelo pomembno.
Rezultati
frekvencah promotorja metilacije v rakastih tkiv zgornje, srednje in spodnje tretjini želodca je bila 11,1, 23,1 in 45,4%, v tem zaporedju, za MLH1
gena; 22.2, 30.8 in 57.6%, v tem zaporedju, za MGMT
gena; in 44,4, 48,7 in 51,5%, oziroma za
gena DAPK-1. Metilacije v MLH1
in MGMT
genov opazili pogosteje v spodnji tretjini želodca kot zgornja tretjina (p
< 0,05).
Podrobne informacije so podane v tabeli 2 ., ki temelji sex analiza podskupin je pokazala, da je bil MLH1
metilacije v tkivih raka v spodnjem tretji želodec tipično ženske populacije (p
= 0,01), medtem ko je MGMT
metilacija le statistično pomembna moški skupina (p
= 0,03). Razlogi za te ugotovitve so nejasni in zahtevajo podrobno analizo in nadaljnje raziskave. Promotor metilacija analiziranih genov ni bil povezan z bolnika age.Table 2 Porazdelitev MLH1, MGMT
in DAPK-1
metilacije v rakastih želodčnih tkivih po samem želodcu
Želodec zgornjo tretjino rakasto tkivo (9 bolnikov) M /U
Želodec srednja tretjina rakasto tkivo (39 bolnikov), M /U
želodec nižje tretjina rakasto tkivo (33 bolnikov), M /U

p
vrednost
MLH1
1/8
30/09
15/18
0,05
MGMT
2/7
27/12
19/14
0,01
DAPK-1
4/5
19/20
17/16
0.93
M
metilnega alel, U
nemetiliran alel
dve glavni kategoriji histološko razvrščanja - črevesno in razpršenih vrste tumorjev - odražajo diferenciacijo tumorja ter težnjo rakavih celic razmnožujejo in širjenja . Zato smo ocenili možne povezave med frekvenčnih distribucij iz DAPK-1
, MLH1
in MGMT
metilacije in Lauren razvrstitvi morfološka tumorja. Rezultati so predstavljeni v tabeli 3. Ker je le majhno število bolnikov histološko potrjeno mešanega tipa adenokarcinom po klasifikaciji Lauren (n
= 7), ta skupina je bila dodeljena bolj agresiven obliko razpršenega bolezni. Tabela 3 Porazdelitev MLH1, MGMT, DAPK-1
metilacija glede na mesto tumorja in patoloških značilnosti
MLH1 M /U
MGMT M /U


DAPK-1 M /U
bula histološke parametre
Želodec zgornja tretjina rakavo tkivo
Želodec srednja tretjina rakasto tkivo

Želodec nižji tretjina rakasto tkivo
Želodec zgornja tretjina rakasto tkivo
Želodec srednja tretjina rakasto tkivo
želodec nižje tretjina rakasto tkivo
želodec zgornja tretjina rakavo tkivo
Želodec srednja tretjina rakasto tkivo
želodec nižje tretjina rakasto tkivo
Črevesne tip
0/3
6/16
7/10
1/2
5/17
8/11
3/0
12/10
07/10
razpršenega tipa
1/5
3/14
8/8
1/5
7/10
05/11
1/5
7/10
7 /9
p
value
0.45
0.48
0.61
0.57
0.22
0.21
0.02
0.41
0.39
T1
0/1
1/2
2/4
0/1
1/2
4/2
1/0
2/1
4/2
T2
0/2
2/2
2/3
0/2
1/3
3/2
1/1
0/4
3/2
T3
0/2
5/11
8/9
1/1
4/12
10/7
1/1
6/10
7/10
T4
1/3
1/15
3/2
1/3
6/10
2/3
1/3
11/5
3/2
p
value
0.7
0.17
0.83
0.62
0.88
0.84
0.59
0.06
0.67
N0
0/4
5/9
6/4
2/2
4/10
5/5
3/1
4/10
6/4
N1
0/2
2/4
3/5
0/2
2/4
5/3
0/2
2/4
4/4
N2
0/2
1/6
3/2
0/2
1/6
3/2
1/1
2/5
1/4
N3
1/0
1/11
3/7
0/1
5/7
6/4
0/1
11/1
6/4
p
vrednost
0,29
0,33
0,48
0,36
0,66
0,95
0,27
0,01
0,46
M
metiliranega alel U
nemetiliran alel
po naših podatkih je bila metilacija od DAPK-1
promotor pogostejši pri črevesnih tipa adenokarcinomom želodca. Vendar pa je to le gibanje, ker rezultati niso bili statistično pomembna (p
= 0,06). Analizo podskupin glede na lokacijo tumorja pokazala, da je pogostost DAPK-1
promotorja metilacije močno povezana s črevesno rakasto tkivo, ko je tumor odkrita v zgornji tretjini želodca (p
= 0.02; tabeli 3). Ne zveza je bila ugotovljena med metitiranjem MLH1
ali MGMT
in tipu tumorja po klasifikaciji Lauren.
Analizirali smo tudi povezavo med pogostostjo metilacije istih genov in tumorske invazije v stene želodca (kategorija T). Metiliranje genov MLH1
in MGMT
niso povezane s skupino T klasifikacije TNM v rakasto tkivo v katerem koli delu trebuha. Pogostejše metilacija od DAPK-1
opazili v razvitih tumorjev v srednji tretjini želodca, vendar to ni bila statistično značilna (p
= 0,06), čeprav je treba ta trend raziskati v prihodnje.
korelacija med gen promotorja metilacije in sodelovanja limfna vozlišča smo analizirali, vendar ni pokazala značilne pridružitvi med metilacije v MLH1
in MGMT
promotorjev in status tumor limfna vozlišča. Vendar pa je v zvezi z apoptoza gen DAPK-1
pogosteje metiliramo v rakastih tkivih v kategoriji N3 klasifikacije TNM (ko je tumor metastaze najdemo v stari 7 regionalnih bezgavkah), kot v tistih, v N0-2 kategorija (p
= 0,05). Analiza podskupin je pokazala, da je ta povezava pomembna samo v rakastih tkivih srednji tretjini želodca (p
= 0,01).
Ko so tumorji razvrščene po sistemu TNM, smo našli nobene povezave med metilacija teh genov in stopnji tumorja. Vendar, bolj natančna analiza podskupin pokazala, da metilacija v MLH1
promotor nagibale k pogostejši pri rakavih tkiv v srednji tretjini želodca v fazi tumorji I-II kot v fazi III tumorjev (p
= 0,06). Epigenetske spremembe in v DAPK
gena so želodčnega rakasto tkivo iz srednji tretjini želodca v fazi bistveno pogosteje zaznali tumorji III kot v fazi tumorji I-II (p
= 0,05).
Rezultate v naši raziskavi kažejo inverzno korelacijo med metilacije v MLH1
in MGMT
genov v želodcu tkivih rakom, ko je tumor nahaja v spodnji tretjini želodca (koeficient, -0,48; p
= 0,01 ). Obratno sorazmerje med metitiranjem DAPK
in MLH1
se je pokazala tudi v rakasto tkivo v srednji tretjini želodca (koeficient, -0,41; p
= 0,01).
Razprava
MLH1
po literaturi, pogostost MLH1
metilacije v rakastih želodca tkiv se giblje od 14 do 43% [12-16]. Te velike razlike v pogostosti MLH1
metilacije lahko pripišemo različne geografske regije, ki štejejo zlasti študije. Anatomska razdelitev tumorjev straneh želodčne Znano je, da se razlikujejo v različnih geografskih regijah. V regijah, kjer je incidenca H. pylori
okužbe visoka (Vzhodna Evropa, Vzhodna Azija), je noncardial ali distalni želodčni rak diagnosticiran najpogosteje. Vendar pa v zahodni in severni Evropi, kjer je število H. pylori-
okuženih ljudeh precej nizko število proksimalnih želodca raka je visoka. Znanstvena literatura poroča, da je metilacija v MLH1
promotor v raka želodca tkivih bistveno, povezanih s H. pylori
virulentni dejavnik, ki ga kodira vacs1
gena [21]. Ta gen, ki je navadno zaznan v bakterijskega genoma, izzove bolj intenzivno vnetnega odziva in je povezan s povečanim tveganjem za raka želodca pri bolnikih z atrofičnega gastritisa [22]. Kronično vnetje sluznice želodca, ki je značilna infiltracijo sluznice s polimorfonuklearnih levkocitov, makrofagov in limfocitov T in B, vodi do sproščanja reaktivnih kisikovih vrst (ROS) iz aktiviranih vnetnih celic. ROS povzroči poškodbe DNK in pomanjkanje ustreznega delovanja sistema popravljanja neujemanja [23]. To je večstopenjski proces, ki je odvisna od intenzivnosti vnetja. Metitiranjem MLH1
promotor pojavlja v pozni fazi atrofični gastritis, intestinalno metaplazijo [10, 24].
Ta usklajen vzorec podpirajo tudi podatki iz študije pri bolnikih iz zahodne in severne Evrope [13] . Skoraj tretjina bolnikov so ugotovili s proksimalno (kardialne) raka želodca in pogostost MLH1
metilacije je bila 14,2%. Ta epigenetsko spremembe pogosteje odkrita v distalnem želodca rakasto tkivo [13]. Rezultati naše raziskave kažejo, da je pojav MLH1
metilacije v želodcu poveča rak tkiv zgornji in srednji tretjini želodca do spodnje tretjine, 11,1, 23,1 in 45,4%, v tem zaporedju. Kot v literaturi, smo tudi pokazali, da se pojavi ta epigenetsko sprememba bistveno bolj pogosto v spodnji tretjini želodca kot v njegovem proksimalnem tretjino in ta učinek je bolj izražen v populaciji žensk. Razlog za povezane razlik med spoloma ni jasno, so potrebne nadaljnje preiskave.
Nekateri podatki so pokazale, da je metilacija v MLH1
promotor zaznati bistveno pogosteje črevesnih tipa rakastih želodčne tkiv (v skladu s klasifikacijo Lauren) kot v razpršenega tipa [15, 16]. Naši rezultati kažejo, da je distribucija tega epigenetske spremembe podobna v vseh vrstah tumorjev po klasifikaciji Lauren.
Nismo ugotovili pomembno povezavo med metitiranjem MLH1
in T in N merila za rakastih tkiv v nobenem delu želodec. Ločena analiza po mestu tumorja je pokazala, da je epigenetsko sprememba (MLH1
metilacija) so bile bolj pogoste v rakasto tkivo iz srednji tretjini želodca, ko je v fazi tumorji I-II, kot v fazi tumorji III (p
= 0,06). Ta rezultat morda ni bila statistično značilna, saj je bilo število bolnikov v zgodnji fazi bolezni relativno majhen.
Ugotovili smo nimajo objavljenih analizo odnosa med tem epigenetske spremembe in T, N, in merila fazi glede na tumor mestu v želodcu. Vendar pa objavljeni podatki kažejo, da je na splošno, se zazna metilacija MLH1
in rakavih tkivih bolj pogosto, ko so regionalne bezgavke niso vključeni [14].
MGMT
stopnja metilacije v MGMT
promotor v rakavih tkiv povečal iz zgornjega v spodnji tretjini želodca (22,2, 30,8 in 57,6%, oziroma) in ta učinek je bolj izrazit pri moških. Razlog za povezane razlik med spoloma ni jasno, so potrebne nadaljnje preiskave. Glede na literaturo, MGMT
metilacije v rakastih želodcu tkiv se giblje od 7 do 61% [13, 25-28]. Ta velike razlike je mogoče pojasniti z dejstvom, da je ta epigenetsko sprememba odkrita bolj pogosto v oddaljenem tkivu raka želodca kot v bližnjih mestih [18, 29].
Nismo ugotovili pomembnih povezav med MGMT
promotorja metilacije in T in merila N ali histološko vrsto tumorja po klasifikaciji Lauren v vsakem preiskati želodčne mestu. Izguba funkcije MGMT beljakovin se nanaša na tumor razširil na bezgavke [14, 18] in naprednih fazah bolezni [18, 30]. V naši raziskavi, je število bolnikov v zgodnji fazi bolezni je bil razmeroma majhen, ki bi lahko pojasnili naše ugotovitve.
DAPK-1
V tej študiji je bila pogostnost DAPK-1
promotorja metilacije ni bilo povezano z lokacijo tumorja. Objavljeni podatki kažejo, da je njegova frekvenca se giblje od 22 do 91% [28, 31-36]. Po naših podatkih je metiliranje DAPK-1
promotor pogostejši v črevesni vrsto adenokarcinomom želodca. Vendar pa je to samo trend, saj so razlike niso bile pomembne (p
= 0,06). Analizo podskupin glede na lokacijo tumorja pokazala, da je pogostnost DAPK
promotor metilacije bistveno višja črevesne rakavih tkiv v zgornji tretjini želodca. Ugotovili smo, ne združenja, navedenih v literaturi med DAPK-1
promotorja metilacije in razvrstitev tumorja po Lauren. Naši rezultati je treba razlagati kritično zaradi majhnega števila bolnikov v tej podskupini.
Smo ugotovili mejno trend, v katerem je bila DAPK-1
metilacija pogosteje odkrili v srednji tretjini želodca v bolj razvitih tumorjev, v skladu s merilo T (p
= 0,06). tudi Ugotovili smo, da je bil, ko je bil v zvezi z apoptoza gen DAPK-1
metiliramo v rakastih tkivih tumor bolj verjetno, da bo N3 o klasifikaciji TNM (tumor metastaze najdemo v stari 7 regionalnih bezgavkah), kot N0-2 ( p
= 0,05) in da so napredni tumor (stadij III namesto stopnje I-II; p
= 0,05). Analiza podskupin je pokazala, da se to zgodi združenje rakavih tkiv srednji tretjini želodca (p-0,01), vendar pa ni pomembna pri drugih želodčnih mestih. Študija, objavljena leta 2010, je pokazala, da je metilacija v pro-apoptotično gena DAPK-1
v rakastih želodčne tkivih, povezane z tumorja razširijo na bezgavkah [37], vendar nismo našli vse informacije v omenjene študije, ki povezuje te ugotovitve na različnih lokacijah raka na želodcu lokalizacije.
Korelacija med metilacijskega statusa analiziranih genov
odnose med promotorja metilacije različnih genov v želodcu rakavih tkivih so bile pregledane našo raziskavo. Ali te korelacije so odvisne na mestu tumorja? Ugotovili smo, da ni nobenih podatkov v znanstveni literaturi glede korelacije MGMT
and MLH1
promotorja metilacije v želodcu adenokarcinom tkivih. Rezultati naše raziskave kažejo, da obstaja inverzna korelacija med metitiranjem MLH1
in MGMT
in tumorskih tkivih, ko je tumor, ki se nahajajo v spodnji tretjini želodca (koeficient -0,48; p
= 0,01).
Ti rezultati niso presenetljivi, saj je metilacija obeh promotorjev genov pogosteje odkrita v tkivih rakavih nižje želodčne [13, 29]. Vendar pa so proteini kodiran delujejo v različnih fazah rakotvornosti. MLH1
promotor metilacija se bolj pogosto odkrijejo v zgodnji fazi in v manj agresivnih želodčnih tumorjev [12-16], medtem ko je MGMT
promotor metilacija bolj značilna za pozno fazi želodčne adenokarcinome in slabe napovedi [18, 19] .
Več informacij je na voljo o pridružitvi med promotorja metitiranjem MLH1
in DAPK-1
. Visoka mikrosatelitskih nestabilnost povezana obratno z metitiranjem DAPK-1
promotor [12]. Naša raziskovalna skupina ugotovila obratne, čeprav šibka, korelacijo med promotorja metitiranjem DAPK-1
in MLH1
, ki ureja delovanje mikrosatelitnega v rakastih želodčne tkiva [20].
Prav tako smo ugotovili, da se ta korelacija v srednji tretjini želodca. Obratno sorazmerje med metitiranjem DAPK-1
in MLH1
Ugotovljeno je bilo tudi v tumorskih tkivih, vzeto iz srednje tretjine želodca. (Koeficient -0,41; p
= 0,01)
Posebni omejitev te raziskave je, da je bila predložena nobena informacija o mRNA izražanja analiziranih genov. Naša ekipa načrtuje, da bo to zavezujeta s kvantitativno PCR v prihodnje študije. Sedanje ugotovitve so pomembne ne samo zato, ker razširiti naše razumevanje želodca rakotvornosti, ampak tudi iz kliničnega vidika. Obstaja vse več dokazov, da je gen metilacija v rakastih želodčnih tkivih povezana z diferencialno občutljivost na kemoterapijo. Metilacija MLH1
gena je povezana z odpornostjo na podlagi oksaliplatina kemoterapijo [38], in bolniki z DAPK-1
metilacije kažejo slabši odziv na osnovi fluoropirimidina kemoterapijo [39].
upamo, da bo naša raziskava vodi k boljšemu razumevanju različnih poteh molekularne rakotvornosti v različnih delih želodcu.
Zaključek
Naši študijski rezultati kažejo, da je epigenetsko proces je metilacija promotorjev genov v rakasto tkivo odvisna na lokacijo tumorja želodca
Kratice
bp.
baznih parov
DAPK-1
:
smrt povezano protein kinaza 1
LUHSH:
Litvanski University of Health Sciences bolnišnice
M:
methylated alel


MGMT
:
O 6-metilgvanin-DNA-metiltransferaze
MC:
pozitivna methylated nadzor


MC-:
negativna methylated nadzor
MLH1
:
mutL homolog 1, raka debelega črevesa, nonpolyposis tipa 2 (E. coli
)
mRNA:
messenger RNA
MSP:
metilacije specifične verižne reakcije s polimerazo

PCR:
verižna reakcija s polimerazo
ROS:
reaktivne kisikove vrste
U :
nemetiliran alel
UC:
pozitivna nemetiliran nadzor
UC-:
negativna nemetiliran nadzor

• Clinicopathologic značilnosti in rezultati obdelave hepatoid adenokarcinomom želodca, redek, a edinstven podtip raka želodca
• Izvor in evolucijski plastičnosti želodčne cekum v morskih ježkov (Echinodermata: Echinoidea)