Profilo Gene metilazione del tessuto canceroso gastrica secondo il sito del tumore allo stomaco

Gene profilo di metilazione di tessuto canceroso gastrica secondo il sito del tumore allo stomaco
Abstract
sfondo
Vi è una notevole informazioni sulla metilazione delle regioni promotrici di diversi geni coinvolti nella carcinogenesi gastrica. Tuttavia, vi è una mancanza di informazioni su come questo processo epigenetico differisce nei tumori provenienti in siti differenti nello stomaco.
Lo scopo di questo studio è valutare i profili di metilazione del
MLH1, MGMT
, e DAPK-1
geni in tessuti tumorali provenienti da diversi siti di stomaco
. Metodi
I campioni sono stati acquisiti da 81 pazienti affetti adenocarcinoma dello stomaco che ha subito un intervento chirurgico per cancro gastrico presso l'Università lituana di Kaunas Health Sciences Hospital Clinics nel 2009 -2012. Gene metilazione è stata studiata con particolare-metilazione PCR. Lo studio è stato approvato dal Comitato Etico della ricerca biomedica lituano.
Risultati
Le frequenze di metilazione nei tessuti cancerosi dal superiore, medio, e terzi inferiore dello stomaco erano 11,1, 23,1 e 45,4%, rispettivamente, per MLH1
; 22,2, 30,8 e 57,6%, rispettivamente, per MGMT
; e 44,4, 48,7 e 51,5%, rispettivamente, per DAPK-1. MLH1
e MGMT
metilazione è stata osservata più spesso nel terzo inferiore dello stomaco che nel terzo superiore (p
< 0,05).
Nel terzo medio, DAPK-1
metilazione del promotore era legato a malattia più avanzato nei linfonodi (N2-3 rispetto a N0-1 [p
= 0.02]) e stadio tumorale avanzato (stadio III piuttosto che stadi i-II [p =
0.05]). MLH1
e MGMT
metilazione correlata inversamente quando il tumore si trovava nel terzo inferiore dello stomaco (coefficiente, -0.48; p
= 0,01). DAPK-1
e MLH1
metilazione correlata inversamente nei tumori a metà terzo dello stomaco (coefficiente, -0.41; p
= 0,01).
Conclusione
Gene metilazione del promotore dipende la localizzazione del tumore gastrico.
Parole
il cancro dello stomaco MLH1
DAPK-1
MGMT
metilazione Sfondo
cancro gastrico è un grave problema di salute. Il progresso clinica scomparsa della malattia significa che questa malattia è di solito diagnosticata nelle sue ultime fasi, che porta alla prognosi poveri, nonostante le nuove opportunità di trattamento che sono emerse di recente.
Più del 90% dei tumori dello stomaco sono diagnosticato come adenocarcinoma [1 ]. Dal 1965, adenocarcinoma gastrico è stato diviso in due tipi principali, diffuso e intestinale (secondo Lauren [2]). Questi due tipi istologici differiscono nella loro eziologia e prognosi. adenocarcinomi intestinali e stomaco sono spesso una conseguenza di infezione cronica da Helicobacter pylori
, quando la mucosa gastrica normale trasforma gastrite acuta cronica avanzata, metaplasia intestinale e displasia [3]. adenocarcinoma Diffuse è più aggressivo del tipo intestinale, perché la sua formazione non dipende gastrite o metaplasia processi [4].
dati scientifici recenti indicano che la prognosi di adenocarcinoma gastrico dipende non solo dal tipo istologico, ma anche dalla localizzazione del tumore allo stomaco. tumori prossimali (originari del cardias), che di solito si formano in risposta a gastroesofageo reflusso acido /biliari [5], sono ora separati come una forma distinta e più aggressiva di adenocarcinoma gastrico, che differiscono da tumori allo stomaco distale.
caso distale il cancro dello stomaco essere classificata come unico? Studi di coorte hanno dimostrato che il rischio della condizione pre-maligne, chiamato 'gastrite atrofica', sviluppando in cancro differisce secondo il sito della lesione nello stomaco. Il rischio relativo di cancro gastrico che si verificano in pazienti con corpo-predominante gastrite è più alto rispetto a quelli con gastrite prevalentemente antrali [6]. Questo fatto indica diversi processi cancerogeni nel antro dello stomaco e del corpus? Non ci sono dati che né escludere o confermare.
Modificazioni epigenetiche svolgono un ruolo centrale nella carcinogenesi gastrica [7]. Questi processi, quali la metilazione di isole CpG in regioni del promotore del gene, causano cambiamenti strutturali reversibili nel DNA, che a loro volta modificano l'espressione genica [8]. La metilazione del DNA si verifica quando un gruppo metilico (-CH 3) viene trasferito al 5 th posizione della citosina [9].
Un precedente studio pilota dal nostro gruppo di ricerca ha dimostrato che la frequenza di metilazione del MLH1
promotore si differenzia nei tessuti corpus e dello stomaco antrale affetti da pangastrite. Abbiamo notato che questo processo epigenetico è significativamente più frequente nei tessuti gastrite antrali rispetto al corpus [10], mentre il grado di gastrite atrofica è simile in entrambe le regioni. Non è chiaro se questa tendenza vale anche per tessuti cancerosi.
Due gruppi di geni sono stati selezionati per questa analisi della metilazione. Il primo gruppo (MLH1
e MGMT
) contiene due geni che codificano proteine ​​coinvolte nella riparazione di mutazioni e di altre lesioni del DNA prima di un ulteriore divisione cellulare, e il secondo gruppo contiene un gene soppressore del tumore (DAPK-1
) che codifica per una proteina che induce l'apoptosi in presenza di un grave difetto genomico.
il MLH1
(mutL omologo 1, cancro del colon, di tipo poliposi 2 (E. coli
)) gene avviene alla 3p21 .3 locus. La proteina gene codifica identifica gli errori di DNA che compaiono dopo la replica. Ipermetilazione del MLH1
promotrice, e non variazioni mutazione causata in funzione delle proteine, è responsabile per l'instabilità dei microsatelliti nel cancro gastrico [11]. Secondo la letteratura, MLH1
metilazione è responsabile della forma intestinale di cancro gastrico e lo stadio precoce della malattia [12-16].
La funzione di MGMT (O 6-methylguanine-DNA metiltransferasi) è di rimuovere il gruppo alchilico da O 6 posizione della guanina [17]. Turbativa della funzione di MGMT può causare la comparsa di mutazioni. pubblicazioni scientifiche indicano che la metilazione del promotore del gene MGMT
è una delle vie patogenetiche nel cancro gastrico. In particolare, metilazione del gene è attribuito alla fase avanzata della malattia [18], ed è attribuito anche la prognosi della malattia peggiore [il 19].
Il DAPK-1
(morte associata proteina chinasi 1) Gene è uno dei tre DAPK
geni che codificano per la famiglia del calcio /calmodulina-dipendenti serina-treonina chinasi proteiche. La funzione della proteina DAPK-1 è strettamente correlato a vari percorsi apoptosi, ed è stato dimostrato DAPK-1
hypermethylation osservato in tumori solidi ed ematologici.
Cancro gastrico non è un'eccezione. Gene metilazione del promotore è anche tipico degli adenocarcinomi in questa posizione. In un precedente studio, il nostro gruppo ha trovato un'associazione inversa tra DAPK-1
e MLH1
metilazione [20]. Ci prova qui l'ipotesi che diversi profili di metilazione del gene avvengono in tessuti cancerosi nello stomaco secondo il sito del tumore (alta, media, bassa o terzo).
Metodi
Lo studio è stato approvato dalla Regione Biomedical lituano Comitato Etico della ricerca. Tutti i pazienti hanno firmato un consenso informato. I pazienti trattati presso l'Università lituana di Hospital Health Sciences (LUHSH) Kaunas cliniche nel periodo 2009-2012 hanno partecipato allo studio. campioni di tessuto dello stomaco sono stati prelevati da tutti i soggetti con morfologicamente confermato adenocarcinoma stadio I-III. La popolazione in studio consisteva di 81 pazienti (34 uomini ed 47 donne) con un'età media di 68 anni (range 23-87 anni; la deviazione standard [SD] 11,75). I tumori di nove pazienti erano nel terzo superiore dello stomaco, quelli di 39 pazienti erano nel terzo medio e quelli di 33 pazienti erano nel terzo inferiore dello stomaco. I campioni di tessuto dello stomaco sono stati raccolti dai siti di tumore durante l'intervento chirurgico. Questi materiali sono stati immediatamente congelati in azoto liquido e conservati a -80 ° C fino all'analisi. Durante lo studio, sono stati ottenuti i dati clinici dei pazienti (età al momento della diagnosi, il sesso) e dati morfologici (invasione tumorale secondo la classificazione TNM, tipo istologico secondo la classificazione Lauren, e grado di differenziazione secondo la classificazione dell'Organizzazione Mondiale della Sanità) dalla cartella clinica.
reazione a catena della polimerasi metilazione-specifica (MSP)
DNA è stato estratto da 25-30 mg di tessuto congelato usando l'ZS Genomic DNA ™ tissue Mini Prep Kit (Zymo Research, USA), secondo il le istruzioni del produttore. Lo stato di metilazione del
MLH1, MGMT
, e DAPK-1
promotori è stata determinata trattando il DNA con bisolfito, utilizzando l'EZ metilazione del DNA Oro Kit ™ (Zymo Research), secondo le istruzioni del produttore . DNA genomico umano da linfociti di sangue periferico, trattato con bisolfito, è stato utilizzato come controllo negativo. DNA genomico umano trattate in vitro con
SSSI metiltransferasi (New England Biolabs, UK) è stato utilizzato come controllo positivo. Lo stato di metilazione dei promotori è stata rilevata con MSP.
I primers per le sequenze di DNA metilato e non metilato sono elencati nella Tabella 1. PCR è stata effettuata in un volume di reazione totale di 20 microlitri, contenente 10 ml di Maxima® Hot Start PCR master Mix con Hot Start Taq
DNA polimerasi (Thermo Fisher Scientific, USA) e 10 micron di ciascun primer (Metabion International AG, Germania). MSP è stata eseguita per 38-40 cicli di denaturazione a 94 ° C per 30 s, ricottura per 1 min alla temperatura appropriata per il gene individuale, ed estensione a 72 ° C per 1 min. I prodotti di PCR sono stati separati da 3,5% gel di agarosio (Fig. 1). Quando i segnali sia metilato e non metilato apparso su un gel, il gene è stato considerato come methylated.Table 1 primer utilizzati per MSP
Primer nome
sequenza di andata

Reverse sequenza

Riferimento
MLH1
metilato
TATATCGTTCGTAGTATTC [GenBank: NG_0071092]
TCCGACCCGAATAAACC
[40]
MLH1
non metilato
TTTTGATGTAGATGTTTTATTAGGGT [GenBank: NG_0071092 ]
TACCACCTCATCATAACTACC
[40]
MGMT metilato

TTTCGACGTTCGTAGGTTTTCGC [GenBank: NG_000010.11]
GCACTCTTCCGAAAACGAAAC G
[40]
MGMT non metilato

TTTGTGTTTTGATGTTTGTAGGTTTTTGT [GenBank: NG_000010.11]
AACTCCACACTCTTCCAAAAACAAAACA
[40]
DAPK-1
metilato
GGATAGTCGGATCGAGTTAACGTC [GenBank: NG_029883.1]
CCCTCCCAAACGCCG A
[ ,,,0],40]
DAPK-1
non metilato
GGAGGATAGTTGGATTGAGTTAATGTT [GenBank: NG_029883.1]
CAAATCCCTCCCAAACACCAA
[40]
bp
paia di basi
Fig. 1 campioni rappresentativi dei MSP analisi di campioni di DNA prelevati da tessuti cancro allo stomaco
analisi dei dati matematico-statistico
l'analisi dei dati statistica è stata effettuata con il software SPSS Statistics 19 (IBM SPSS Inc., USA). proprietà quantitative sono stati descritti per la media aritmetica e la deviazione standard. t di Student
-test è stato utilizzato per verificare l'ipotesi di mezzi uguali. Il χ
2 criterio e il test esatto di Fisher sono stati usati per verificare l'ipotesi statistica di indipendenza di due variabili. Le correlazioni tra le variabili sono state valutate calcolando il coefficiente di Spearman. p
< 0.05 è stato ritenuto significativo
. Risultati
La frequenza di metilazione del promotore nei tessuti tumorali dal superiore, medio, e terzi inferiore dello stomaco erano 11,1, 23,1 e 45,4%, rispettivamente, per il MLH1
gene; 22,2, 30,8 e 57,6%, rispettivamente, per il MGMT
gene; e 44,4, 48,7 e 51,5%, rispettivamente, per il DAPK-1
gene. La metilazione del
MLH1 e MGMT
geni è stata osservata più spesso nel terzo inferiore dello stomaco che nel terzo superiore (p
< 0,05).
I dati dettagliati sono riportati nella tabella 2 . un'analisi per sottogruppi basata sul sesso rivelato che MLH1
metilazione nei tessuti tumorali del basso terzo stomaco era tipico della popolazione femminile (p
= 0.01), mentre MGMT
metilazione era statisticamente significativa solo nei il gruppo maschile (p
= 0.03). Le ragioni di questi risultati non sono chiari, e richiedono analisi e ulteriori studi approfonditi. La metilazione promotore dei geni analizzati non è stata collegata al paziente age.Table 2 Distribuzione di MLH1, MGMT
, e DAPK-1
metilazione nei tessuti cancerosi gastrici secondo il sito stomaco
stomaco terzo superiore tessuto canceroso (9 pazienti) M /U
stomaco tessuto mezza terza cancerose (39 pazienti) M /U
basso ventre terzo tessuto canceroso (33 pazienti) M /U

p
valore
MLH1
1/8
9/30
15/18
0.05
MGMT
2/7
12/27
19/14
0,01
DAPK-1
4/5
19/20
17/16
0.93
m allele metilato, U
allele non metilato
le due principali categorie di classificazione istologica - tipi intestinale e diffuse di tumori - riflettono la differenziazione del tumore e la tendenza delle cellule cancerose di proliferare e diffondersi . Pertanto, abbiamo valutato le possibili associazioni tra le distribuzioni di frequenza di DAPK-1
, MLH1
, e MGMT
metilazione e la classificazione del tumore morfologica Lauren. I risultati sono presentati nella Tabella 3. Poiché solo un piccolo numero di pazienti era confermato istologicamente tipo misto adenocarcinoma secondo la classificazione Lauren (n
= 7), questo gruppo è stato assegnato alla forma diffusa più aggressiva della malattia. Tabella 3 distribuzione di MLH1, MGMT, DAPK-1
metilazione secondo il sito del tumore e le caratteristiche patologiche
MLH1 M /U
MGMT M /U

tumorali parametri istologici>
DAPK-1
parte superiore dello stomaco terzo tessuto canceroso
stomaco tessuto canceroso metà terzo

basso ventre terzo tessuto canceroso
stomaco tessuto canceroso superiore terzo
stomaco mezzo terzo tessuto canceroso
basso ventre terzo tessuto canceroso
parte superiore dello stomaco terzo tessuto canceroso
stomaco mezzo terzo tessuto canceroso
basso ventre terzo tessuto canceroso
tipo intestinale
0/3
6/16
7/10
1/2
5/17 8/11

3/0
12/10
10/7
Diffuse tipo
1/5
3/14
8/8 1/5

7/10
11/5
1/5
7/10
7 /9
p
value
0.45
0.48
0.61
0.57
0.22
0.21
0.02
0.41
0.39
T1
0/1
1/2
2/4
0/1
1/2
4/2
1/0
2/1
4/2
T2
0/2
2/2
2/3
0/2
1/3
3/2
1/1
0/4
3/2
T3
0/2
5/11
8/9
1/1
4/12
10/7
1/1
6/10
7/10
T4
1/3
1/15
3/2
1/3
6/10
2/3
1/3
11/5
3/2
p
value
0.7
0.17
0.83
0.62
0.88
0.84
0.59
0.06
0.67
N0
0/4
5/9
6/4
2/2
4/10
5/5
3/1
4/10
6/4
N1
0/2
2/4
3/5
0/2
2/4
5/3
0/2
2/4
4/4
N2
0/2
1/6
3/2
0/2
1/6
3/2
1/1
2/5
1/4
N3
1/0
1/11
3/7
0/1
5/7
6/4
0/1
11/1
6/4
p valore
0,29
0,33
0.48
0,36
0.66
0.95
0,27
0,01
0.46
m allele metilato , U
allele non metilato
Secondo i nostri dati, la metilazione del DAPK-1
promotore era più frequente nel tipo intestinale adenocarcinoma gastrico. Tuttavia, questo era solo una tendenza perché i risultati non erano statisticamente significative (p = 0,06
). Un'analisi per sottogruppi in base alla posizione del tumore ha rivelato che la frequenza di DAPK-1
metilazione del promotore era significativamente correlata al tessuto canceroso intestinale quando il tumore è stato rilevato nel terzo superiore dello stomaco (p
= 0.02; Tabella 3). Nessuna associazione è stata identificata tra la metilazione di MLH1
o MGMT
e il tipo di tumore, secondo la classificazione Lauren.
Abbiamo anche analizzato l'associazione tra la frequenza di metilazione dei geni stessi e l'invasione del tumore nella parete dello stomaco (categoria T). La metilazione dei geni MLH1
e MGMT
non è stato associato con la categoria T della classificazione TNM del tessuto canceroso in qualsiasi parte dello stomaco. Più frequente metilazione di DAPK-1
è stata osservata nei tumori avanzati nel terzo medio dello stomaco, ma questo non era statisticamente significativa (p = 0,06
), anche se questa tendenza dovrebbe essere esplorato in futuro.
la correlazione tra promotore del gene metilazione e il coinvolgimento dei linfonodi è stato analizzato, ma ha rivelato alcuna significativa associazione tra la metilazione della
MLH1 e MGMT
promotori e lo stato del tumore dei linfonodi. Tuttavia, l'apoptosi legati gene DAPK-1
è stato più spesso metilato nei tessuti cancerosi nella categoria N3 della classificazione TNM (quando tumore metastasi si trova in ≥ 7 linfonodi regionali) che in quelli in N0-2 categoria (p
= 0.05). Un'analisi per sottogruppi ha mostrato che questa associazione è risultata significativa solo nei tessuti cancerosi del terzo medio dello stomaco (p
= 0.01).
Quando i tumori sono stati classificati secondo il sistema TNM, non abbiamo trovato alcuna associazione tra il metilazione di questi geni e lo stadio del tumore. Tuttavia, un'analisi più preciso dei sottogruppi ha mostrato che la metilazione del promotore MLH1
tendeva ad essere più frequenti nei tessuti cancerosi nel terzo medio dello stomaco in fase di tumori I-II che in fase III tumori (p
= 0.06). cambiamenti epigenetici nel DAPK
gene sono stati rilevati con maggiore frequenza nel tessuto canceroso gastrica dal terzo medio dello stomaco in stadio III tumori che in fase di tumori I-II (p = 0,05)
.
I risultati del nostro studio indicano una correlazione inversa tra la metilazione della
MLH1 e MGMT
geni nei tessuti affetti da cancro gastrico quando il tumore si trovava nel terzo inferiore dello stomaco (coefficiente, -0.48; p = 0.01
). Una correlazione inversa tra la metilazione di DAPK
e MLH1
è stata dimostrata anche nel tessuto canceroso nel terzo medio dello stomaco (coefficiente, -0.41; p
= 0,01).
Discussione
MLH1
Secondo la letteratura, la frequenza di MLH1
metilazione nei tessuti gastrici cancerose va dal 14 al 43% [12-16]. Queste ampie variazioni nella frequenza delle MLH1
metilazione possono essere attribuiti alle diverse regioni geografiche considerate in particolare studi. La distribuzione anatomica dei siti di tumore allo stomaco è noto per essere diverso in diverse regioni geografiche. Nelle regioni in cui l'incidenza di H. pylori
infezione è alto (Europa orientale, Asia Orientale), cancro gastrico noncardial o distale viene diagnosticata più spesso. Tuttavia, in Europa Occidentale e del Nord, dove il numero di H. pylori,
persone infette è piuttosto basso, il numero di tumori gastrici prossimali è alto. La letteratura scientifica riporta che la metilazione del promotore MLH1
nei tessuti di cancro allo stomaco è significativamente correlata alla H. pylori
fattore di virulenza codificata dal gene vacs1
[21]. Questo gene, che è tipicamente rilevata nel genoma batterico, provoca una risposta infiammatoria più intensivo ed è relativo a un aumentato rischio di cancro gastrico in pazienti con gastrite atrofica [22]. Cronica infiammazione della mucosa gastrica, che si caratterizza per l'infiltrazione della mucosa di leucociti polimorfonucleati, macrofagi e linfociti T e B, porta al rilascio di specie reattive dell'ossigeno (ROS) da cellule infiammatorie attivate. ROS induce danno del DNA e la mancanza di un corretto funzionamento del sistema di mismatch repair [23]. Questo è un processo multifasico che dipende dall'intensità di infiammazione. La metilazione del promotore MLH1
si verifica in una fase avanzata di gastrite atrofica, metaplasia intestinale [10, 24].
Questo modello coerente è anche supportato da dati provenienti da uno studio su pazienti provenienti dall'Europa occidentale e del Nord [13] . Quasi un terzo dei pazienti sono stati diagnosticati con prossimale (cardiale) cancro gastrico, e la frequenza di MLH1
metilazione è stata del 14,2%. Questo cambiamento epigenetico è anche più frequentemente rilevata nel tessuto canceroso gastrica distale [13]. I risultati del nostro studio mostrano che la presenza di MLH1
metilazione gastrico aumenta tessuto cancro dal terzo superiore e medio dello stomaco al terzo inferiore, ed è stato 11,1, 23,1 e 45,4%, rispettivamente. Come in letteratura, abbiamo anche dimostrato che questo cambiamento epigenetico verifica significativamente più spesso nel terzo inferiore dello stomaco che nel suo terzo prossimale, e questo effetto è più pronunciato nella popolazione femminile. La ragione di differenze di sesso relativo è chiaro, sono necessarie ulteriori indagini.
Alcuni dati hanno indicato che la metilazione del promotore MLH1
viene rilevato con maggiore frequenza nel intestinale-tipo tessuti dello stomaco cancerose (secondo la classificazione di Lauren) rispetto al tipo diffuso [15, 16]. I nostri risultati mostrano che la distribuzione di questa modifica epigenetica è simile tra tipi di tumore secondo la classificazione Lauren.
Abbiamo trovato alcuna significativa associazione tra la metilazione di MLH1 Comprare e T e N criteri per tessuti tumorali in qualsiasi parte del stomaco. Un'analisi separata secondo il sito del tumore ha mostrato che il cambiamento epigenetico (MLH1
metilazione) tendeva ad essere più frequenti nei tessuti cancerosi dal terzo medio dello stomaco, quando in fase di tumori I-II rispetto a fase tumori III (p
= 0.06). Questo risultato non può essere stato statisticamente significativo perché il numero dei pazienti con malattia in stadio precoce era relativamente piccola.
Abbiamo trovato alcuna analisi pubblicata del rapporto tra questo cambiamento epigenetico e la T, N, e criteri di scena secondo la sito del tumore allo stomaco. Tuttavia, i dati pubblicati indicano che, in generale, la metilazione di MLH1
nei tessuti tumorali viene rilevato più spesso quando linfonodi regionali non sono coinvolti [14].
MGMT
Il tasso di metilazione di la MGMT
promotore tessuti cancerosi aumentato dalla tomaia al terzo inferiore dello stomaco (22.2, 30.8 e 57.6%, rispettivamente), e questo effetto è più pronunciato nella popolazione maschile. La ragione di differenze di sesso relativo è chiaro, sono necessarie ulteriori indagini. Secondo la letteratura, MGMT
metilazione nei tessuti dello stomaco cancerose varia da 7 a 61% [13, 25-28]. Questa ampia variazione potrebbe essere spiegato con il fatto che questo cambiamento epigenetico viene rilevata più spesso in distale tessuto del cancro allo stomaco rispetto ai luoghi prossimali [18, 29].
Non abbiamo trovato alcuna associazione significativa tra MGMT
metilazione promotore e il T e criteri N o il tipo istologico del tumore secondo la classificazione Lauren in qualsiasi sito stomaco indagato. La perdita della funzione della proteina MGMT è legato al tumore diffuso ai linfonodi [14, 18] e le fasi avanzate della malattia [18, 30]. Nel nostro studio, il numero di pazienti con malattia in stadio precoce era relativamente piccolo, il che potrebbe spiegare i nostri risultati.
DAPK-1
In questo studio, la frequenza di DAPK-1
metilazione del promotore non ha correlazione con la posizione del tumore. I dati pubblicati mostrano che la sua frequenza varia 22-91% [28, 31-36]. Secondo i nostri dati, la metilazione del DAPK-1
promotore era più frequente nel tipo intestinale di adenocarcinoma gastrico. Tuttavia, questo era solo una tendenza, perché le differenze non erano significative (p = 0,06
). Un'analisi per sottogruppi in base alla posizione del tumore ha mostrato che la frequenza di DAPK
metilazione promotore era significativamente maggiore nei tessuti cancerosi intestinale nel terzo superiore dello stomaco. Abbiamo trovato nessun associazioni citate in letteratura tra DAPK-1
metilazione del promotore e la classificazione del tumore in base alla Lauren. Nostri risultati devono essere interpretati criticamente perché i pochi pazienti in questo sottogruppo.
Abbiamo notato una tendenza marginale, in cui è stato rilevato DAPK-1
metilazione più frequentemente nel terzo medio dello stomaco nei tumori più avanzati, in base alla il criterio di T (p
= 0,06). Abbiamo anche trovato che quando il apoptosi legati gene DAPK-1
è stato metilato nei tessuti cancerosi, il tumore era più probabile che sia N3 sulla classificazione TNM (metastasi tumorali trovano in ≥ 7 linfonodi regionali) che N0-2 ( p
= 0.05) e di essere un tumore avanzato (stadio III e non stadio I-II; p = 0.05
). Un'analisi per sottogruppi ha mostrato che questa associazione si verifica nei tessuti cancerosi del terzo mediano dello stomaco (p-0,01), ma non è significativo in altri siti di stomaco. Uno studio pubblicato nel 2010 ha dimostrato che la metilazione del gene pro-apoptotico DAPK-1
nei tessuti dello stomaco cancerose è legato alla diffusione del tumore ai linfonodi [37], ma non abbiamo trovato alcuna informazione nello studio citato collega questi risultati a diversi siti di localizzazioni cancro allo stomaco.
Correlazione tra lo stato di metilazione dei geni analizzati
i rapporti tra la metilazione promotore dei diversi geni nei tessuti cancro allo stomaco sono stati esaminati il ​​nostro studio. Fare queste correlazioni dipendono dal sito del tumore? Abbiamo trovato alcuna informazione nella letteratura scientifica relativa alla correlazione dei MGMT
e MLH1
metilazione promotore nei tessuti dello stomaco adenocarcinoma. I risultati del nostro studio indicano che non vi era una correlazione inversa tra la metilazione di MLH1
e MGMT
nei tessuti tumorali, quando il tumore era situato nel terzo inferiore dello stomaco (coefficiente, -0.48; p
= 0.01).
Questi risultati non sono sorprendenti perché la metilazione dei due promotori di geni è più spesso rilevato nei tessuti tumorali inferiore dello stomaco [13, 29]. Tuttavia, le proteine ​​codificate atto in diverse fasi della carcinogenesi. MLH1
metilazione promotore è più spesso rilevato nelle fasi iniziali e nei tumori gastrici meno aggressivi [12-16], mentre MGMT
metilazione del promotore è più tipico degli adenocarcinomi stomaco in fase avanzata e prognosi poveri [18, 19] .
Ulteriori informazioni sono disponibili sulla associazione tra la metilazione promotore di MLH1
e DAPK-1
. Alta microsatellite instabilità correla inversamente con la metilazione del DAPK-1
promotore [12]. Il nostro gruppo di ricerca ha identificato un inverso, seppur debole, correlazione tra la metilazione del promotore DAPK-1
e MLH1
, regolazione della funzione microsatellite, nei tessuti dello stomaco cancerose [20].
Abbiamo anche trovato che si verifica questa correlazione nel terzo medio dello stomaco. Una correlazione inversa tra la metilazione di DAPK-1
e MLH1
è stato anche identificato nei tessuti tumorali campionati dal terzo medio dello stomaco. (Coefficiente, -0.41; p = 0,01
)
Il specifica limite di questo studio è che nessuna informazione sulla espressione di mRNA dei geni analizzati è stato fornito. Il nostro team ha in programma di intraprendere questo con PCR quantitativa in un futuro studio. Gli attuali risultati sono importanti non solo perché estendono la nostra comprensione della carcinogenesi gastrica, ma anche dal punto di vista clinico. Vi è un crescente corpo di prove che metilazione del gene nei tessuti cancerosi gastrico è associata con la sensibilità alla chemioterapia differenziale. La metilazione del gene MLH1
è legato alla resistenza alla chemioterapia a base di oxaliplatino [38], e pazienti con DAPK-1
metilazione mostrano una risposta peggiore alla chemioterapia a base di fluoropirimidine [39].
Ci auguriamo che il nostro studio porterà a una migliore comprensione dei diversi percorsi di carcinogenesi molecolare in diverse parti dello stomaco.
Conclusione
i risultati dello studio mostrano che un processo epigenetico, la metilazione dei promotori dei geni, nel tessuto canceroso dipende sulla posizione del tumore gastrico
Abbreviazioni
BP:.
coppie di basi
DAPK-1
:
morte-associati proteina chinasi 1
LUHSH:
Lithuanian University of Health Sciences Hospital
M:
allele metilato


MGMT
:
O 6-methylguanine-DNA-metiltransferasi
MC:
controllo metilato positivo

MC-:
controllo metilato negativo
MLH1
:
mutL omologo 1, il cancro del colon, poliposi tipo 2 (E. coli
)
mRNA:
RNA messaggero
MSP:
metilazione-specifica reazione a catena della polimerasi

PCR:
reazione a catena della polimerasi
ROS: oxygen species
reattive
U :
allele non metilato
UC:
controllo non metilato positivo
UC-:
negativo non metilato controllo

• caratteristiche clinico-patologiche e risultati del trattamento di adenocarcinoma hepatoid dello stomaco, un raro ma unico sottotipo di cancer
• Origine e la plasticità evolutiva del cieco gastrica di ricci di mare (echinodermi: Echinoidea)