Gene metylering profilen til mage kreftvev i henhold til tumorstedet i stomach

Gene metylering profilen til mage kreftvev i henhold til tumorstedet i magen
Abstract
Bakgrunn
Det er betydelig informasjon om metylering av promotorområdene av forskjellige gener som er involvert i mave karsinogenese. Men det er en mangel på informasjon om hvordan dette epigenetisk prosessen er forskjellig i svulster med opprinnelse på forskjellige steder i magen.
Målet med denne studien er å vurdere metylering profiler av MLH1
, MGMT
, og DAPK-1
gener i kreft vev fra ulike mage nettsteder.
Metoder
Prøver ble kjøpt fra 81 pasienter som lider mage adenokarsinom som gjennomgikk kirurgi for magekreft i det litauiske University of Health Sciences Hospital Kaunas klinikker i 2009 -2012. Gene metylering ble undersøkt med metylering spesifikke PCR. Studien ble godkjent av den litauiske Biomedical forskningsetiske komité. Search Results
Frekvensen av metylering i kreftvevet fra den øvre, midtre og nedre tredjedeler av magen var 11,1, 23,1 og 45,4%, henholdsvis for MLH1
; 22,2, 30,8 og 57,6%, henholdsvis, for MGMT
; og 44,4, 48,7 og 51,5%, henholdsvis, for DAPK-1. MLH1 Hotell og MGMT
metylering ble observert oftere i nedre tredjedel av magen enn i øvre tredjedel (p
< 0,05).
I midten tredje, DAPK-en
promoter metylering var knyttet til mer fremskredet sykdom i lymfeknutene (N2-3 sammenlignet med N0-1 [p
= 0,02]) og avansert tumor (trinn III i stedet for trinn i-II [p =
0,05]). MLH1 Hotell og MGMT
metylering korrelert omvendt når svulsten ble plassert i nedre tredjedel av magen (koeffisient, -0,48; p
= 0,01). DAPK-1 Hotell og MLH1
metylering korrelert omvendt i svulster i midten tredjedel av magen (koeffisient, -0,41; p
= 0,01).
Konklusjon
Gene promoter metylering avhenger mage svulst plassering.
nøkkelord
mage~~POS=TRUNC kreft~~POS=HEADCOMP MLH1
DAPK-en
MGMT
Metylering Bakgrunn
mage~~POS=TRUNC kreft~~POS=HEADCOMP er et alvorlig helseproblem. Den skjulte klinisk fremdriften av sykdom betyr at denne sykdommen er vanligvis diagnostisert i sin sene stadier, som fører til dårlige prognoser, til tross for de nye behandlingsmulighetene som har dukket opp nylig.
Mer enn 90% av magekreft er diagnostisert som adenokarsinom [1 ]. Siden 1965 har adenokarsinom i ventrikkel blitt delt inn i to hovedtyper, diffus og tarm (i henhold til Lauren [2]). Disse to histologiske typer varierer i sine årsaker og prognoser. Tarm og mage adenokarsinomer er ofte en konsekvens av kronisk infeksjon med Helicobacter pylori
, når den normale gastriske slimhinne transformeres til akutt sen kronisk gastritt, intestinal metaplasi, dysplasi og [3]. Diffuse adenokarsinom er mer aggressiv enn tarmtypen, fordi dens dannelse er ikke avhengig av gastritt eller metaplasi fremgangsmåter [4].
Nylige vitenskapelige data viser at prognosen av gastrisk adenokarsinom avhenger ikke bare av dens histologisk type, men også på den svulst sted i magen. Proksimale svulster (opprinnelse i Cardia), som vanligvis dannes i reaksjon på gastroøsofageal syre /galle reflux [5], er nå skilt ut som en tydelig og mer aggressiv form for adenokarsinom i ventrikkel, som skiller seg fra distale mage svulster.
Bør distalt magekreft bli klassifisert som unik? Kohortstudier har vist at risikoen for forstadier tilstand som kalles "atrofisk gastritt ', utvikle seg til kreft varierer i henhold til området av lesjonen i magen. Den relative risikoen for magekreft oppstår hos pasienter med corpus-dominerende gastritt er høyere enn i de med overveiende antrum gastritt [6]. Betyr dette faktum indikerer ulike kreftfremkallende prosesser i magen antrum og corpus? Det finnes ingen data til enten utelukke eller bekrefte dette.
Epigenetiske modifikasjoner spille en sentral rolle i magekreftutvikling [7]. Disse fremgangsmåter, som for eksempel CpG metylering av øyene i genet promotorområdene, forårsaker reversibel strukturelle endringer i DNA, som i sin tur endrer genekspresjon [8]. DNA-metylering oppstår når en metylgruppe (CH 3) overføres til den 5 th stilling av cytosin [9]., En tidligere pilotstudie av vårt forskningsgruppe viste at hyppigheten av metylering av MLH1
promoter forskjellig i corpus og antrum mage vev berørt av pangastritis. Vi la merke til at dette epigenetisk prosessen er betydelig hyppigere i antrum gastritt vev enn i corpus [10], mens graden av atrofisk gastritt er lik i begge regioner. Det er uklart om denne tendensen gjelder også for kreftvevet.
To grupper av gener ble valgt for denne metylering analyse. Den første gruppen (MLH1
og MGMT
) inneholder to gener som koder for proteiner involvert i reparasjon av mutasjoner og andre DNA-lesjoner før ytterligere celledeling, og den andre gruppen inneholder et tumor-genet (DAPK-1
) som koder for et protein som induserer apoptose i nærvær av en alvorlig defekt genom.
MLH1 plakater (mutL homolog 1, tykktarmskreft, nonpolyposis type 2 (E. coli
)) gen skjer ved 3p21 .3 locus. Genet-kodet protein identifiserer DNA-feil som vises etter replikering. Hypermethylation av MLH1
promoter, og ikke mutasjons forårsaket endringer i proteinfunksjonen, er ansvarlig for mikro ustabilitet i magekreft [11]. Ifølge litteraturen, er MLH1
metylering ansvarlig for tarm form av magekreft og den tidlige fasen av sykdommen [12-16].
Funksjon av MGMT (O 6-metylguanin-DNA- metyltransferase) er å fjerne alkylgruppen fra O 6-posisjon av guanin [17]. Forstyrrelse av MGMT funksjonen kan føre til fremveksten av mutasjoner. Vitenskapelige publikasjoner indikerer at metylering av den MGMT
genpromoteren er en av de patogenetiske baner i magekreft. Spesielt er genet metylering tilskrives avansert stadium av sykdommen [18], og er også knyttet til den dårligere sykdomsprognosen [19].
DAPK-1 plakater (død-assosiert proteinkinase 1) -genet er en av tre DAPK
familie gener som koder for kalsium /calmodulin-avhengige serin-treonin proteinkinaser. Funksjonen til DAPK-1-proteinet er nært knyttet til ulike apoptose trasé, og DAPK-1
hypermethylation har vist seg å forekomme i faste og hematologiske svulster.
Magekreft er ikke et unntak. Gene promoter metylering er også typisk for adenokarsinomer i denne plasseringen. I en tidligere studie, vår gruppe funnet en invers sammenheng mellom DAPK-1 Hotell og MLH1
metylering [20]. Vi tester her en hypotese om at forskjellige gen metylering profiler skje i kreftvevet i magen ifølge nettstedet av svulsten (øvre, midtre eller nedre tredjedel).
Metoder
Studien ble godkjent av den litauiske Regional Biomedical forskningsetiske komité. Alle pasienter inngikk et informert samtykkeskjema. Pasienter som behandles ved den litauiske University of Health Sciences Hospital (LUHSH) Kaunas klinikker i 2009-2012 deltok i studien. Mage vevsprøver ble tatt fra alle fag med morfologisk bekreftet stadium I-III adenokarsinom. Studiepopulasjonen besto av 81 pasienter (34 menn og 47 kvinner) med en median alder på 68 år (23-87 år; standardavvik [SD] 11,75). Tumorene av ni pasienter var i den øvre tredjedel av magesekken, av de 39 pasientene var i den midtre tredjedel, og de av 33 pasienter var i den nedre tredjedel av magen. Vevsprøver mage ble samlet inn fra tumor områder under operasjonen. Disse materialene ble umiddelbart frosset i flytende nitrogen og lagret ved -80 ° C inntil analyse. I løpet av studien ble pasientenes kliniske data (alder ved diagnose, kjønn) og morfologiske data (tumorinvasjon i henhold til TNM klassifisering, histologisk type i henhold til Lauren klassifisering, og grad av differensiering ifølge Verdens helseorganisasjon klassifisering) fås fra medisinske journaler.
Metylering spesifikke polymerase chain reaction (MSP)
DNA ble ekstrahert 25-30 mg av frossen vev bruke ZS Genomisk DNA ™ tissue Mini Prep Kit (Zymo Research, USA), i henhold til produsentens instruksjoner. Metyleringen status for MLH1
, MGMT
, og DAPK-1
promotorer ble bestemt ved behandling av DNA med bisulfitt, ved hjelp av DNA-EZ Metylering Gold Kit ™ (Zymo Research), i henhold til produsentens instruksjoner . Humant genomisk DNA fra perifere blodlymfocytter, behandlet med bisulfitt, ble anvendt som den negative kontroll. Humant genomisk DNA ble behandlet in vitro med
SSSI metyltransferase (New England Biolabs, UK) ble anvendt som positiv kontroll. Metyleringen status av promotorene ble påvist med MSP.
Den primere for de metylerte og unmethylated DNA-sekvenser er listet i tabell 1. PCR ble utført i et totalt reaksjonsvolum på 20 ul, inneholdende 10 mL av Maxima® varmstart PCR Master Mix med Hot start-Taq
DNA Polymerase (Thermo Fisher Scientific, USA) og 10 mm av hver primer (Metabion International AG, Tyskland). MSP ble utført i 38-40 sykluser med denaturering ved 94 ° C i 30 sekunder, annealing i 1 min ved den temperatur som passer for den enkelte genet, og forlengelse ved 72 ° C i 1 min. PCR-produktene ble separert ved 3,5% agarose-gel-elektroforese (fig. 1). Når både denaturert og unmethylated signaler dukket opp på en gel, ble genet anses å være methylated.Table 1 Primere som brukes til MSP
Primer navn
Forward sekvens

omvendt rekkefølge

Referansenummer nummer~~POS=HEADCOMP
MLH1
metylert
TATATCGTTCGTAGTATTC [GenBank: NG_0071092]
TCCGACCCGAATAAACC product: [40]
MLH1
unmethylated
TTTTGATGTAGATGTTTTATTAGGGT [GenBank: NG_0071092 ]
TACCACCTCATCATAACTACC product: [40]
MGMT
metylert
TTTCGACGTTCGTAGGTTTTCGC [GenBank: NG_000010.11]
GCACTCTTCCGAAAACGAAAC G product: [40]
MGMT
unmethylated
TTTGTGTTTTGATGTTTGTAGGTTTTTGT [GenBank: NG_000010.11]
AACTCCACACTCTTCCAAAAACAAAACA product: [40]
DAPK-en
metylert
GGATAGTCGGATCGAGTTAACGTC [GenBank: NG_029883.1]
CCCTCCCAAACGCCG A product: [ ,,,0],40]
DAPK-en
unmethylated
GGAGGATAGTTGGATTGAGTTAATGTT [GenBank: NG_029883.1] Hotell CAAATCCCTCCCAAACACCAA product: [40] Hotell bp
basepar
fig. 1 Representative prøver av MSP analyser av DNA-prøver tatt fra mage kreft vev
Matematisk-statistisk dataanalyse
Statistiske data analyse ble utført med SPSS statistikk 19 programvarepakke (IBM SPSS Inc., USA). Kvantitative egenskaper ble beskrevet av aritmetisk gjennomsnitt og standardavvik. Student t
-test ble brukt til å bekrefte hypotesen om lik måte. Den χ
2 kriterium og Fishers eksakte test ble brukt til å kontrollere den statistiske hypotesen om uavhengighet av to variabler. Sammenhenger mellom variabler ble vurdert ved å beregne Spearmans koeffisient. p
< 0,05 ble ansett som signifikant.
Resultater
Frekvensen av arrangøren metylering i kreftvevet fra den øvre, midtre og nedre tredjedeler av magen var 11,1, 23,1 og 45,4%, henholdsvis for MLH1
genet; 22,2, 30,8 og 57,6%, henholdsvis, for den MGMT
-genet; og 44,4, 48,7 og 51,5%, henholdsvis, for den DAPK-1
genet. Metylering av den MLH1
og MGMT
gener ble observert oftere i den nedre tredjedel av magen enn i den øvre tredjedel (p
< 0,05).
Den detaljerte data er gitt i tabell 2 . En sex-baserte subgruppeanalyse viste at MLH1
metylering i kreftvevet i nedre tredjedel magen var typisk for den kvinnelige befolkningen (p
= 0,01), mens MGMT
metylering var bare statistisk signifikant i den mannlige gruppen (p
= 0,03). Årsakene til disse funnene er uklar, og krever detaljerte analyser og videre studier. Arrangøren metylering av de analyserte genene var ikke relatert til pasient age.Table 2 Fordeling av MLH1, MGMT
, og DAPK-en
metylering i kreft mage vev ifølge magen nettstedet
Magen øvre tredjedel kreftvev (9 pasienter) M /U
magen middel tredje kreftvev (39 pasienter) M /U
mage nedre tredjedel kreftvev (33 pasienter) M /U

p
verdi
MLH1
1/8
9/30
15/18
0,05
MGMT
2/7
12/27
19/14
0,01
DAPK-en
4/5
19/20
17/16
0,93
M
denaturert allel, U
unmethylated allel
de to viktigste histologiske klasser - tarm og diffuse typer svulster - reflekterer differensiering av svulsten og tendensen av kreftceller til å spre seg og spre seg . Derfor vurderte vi de mulige sammenhenger mellom frekvensfordelingene av DAPK-en
, MLH1
, og MGMT
metylering og Lauren morfologiske svulst klassifisering. Resultatene er presentert i tabell 3. Fordi bare et lite antall pasienter hadde histologisk bekreftet blandet-type adenocarcinoma i henhold til klassifiseringen Lauren (n
= 7), er denne gruppen ble tilordnet til den mer aggressive diffus form av sykdommen. Tabell 3 Fordeling av MLH1, MGMT, DAPK-en
metylering i henhold til tumorstedet og patologiske egenskaper
MLH1 M /U
MGMT M /U


DAPK-1 M /U
Tumor histologiske parametre
mage øvre tredjedel kreftvev
magen middel tredje kreftvev

magen nedre tredjedel kreftvev
mage øvre tredjedel kreftvev
magen middel tredje kreftvev
mage nedre tredjedel kreftvev
magen øvre tredjedel kreftvev
magen middel tredje kreftvev
mage nedre tredjedel kreftvev
Tarm typen
0/3
6/16
7/10
1/2
5/17
8/11
3/0
12/10
10/7
Diffus typen
1/5
3/14
8/8
1/5
7/10
11/5
1/5
7/10
7 /9
p
value
0.45
0.48
0.61
0.57
0.22
0.21
0.02
0.41
0.39
T1
0/1
1/2
2/4
0/1
1/2
4/2
1/0
2/1
4/2
T2
0/2
2/2
2/3
0/2
1/3
3/2
1/1
0/4
3/2
T3
0/2
5/11
8/9
1/1
4/12
10/7
1/1
6/10
7/10
T4
1/3
1/15
3/2
1/3
6/10
2/3
1/3
11/5
3/2
p
value
0.7
0.17
0.83
0.62
0.88
0.84
0.59
0.06
0.67
N0
0/4
5/9
6/4
2/2
4/10
5/5
3/1
4/10
6/4
N1
0/2
2/4
3/5
0/2
2/4
5/3
0/2
2/4
4/4
N2
0/2
1/6
3/2
0/2
1/6
3/2
1/1
2/5
1/4
N3
1/0
1/11
3/7
0/1
5/7
6/4
0/1
11/1
6/4
p
verdi
0,29
0,33
0,48
0,36
0,66
0,95
0,27
0,01
0,46
M
metylert allelet U
unmethylated allelet
Ifølge våre data, metylering av DAPK-en
arrangøren var hyppigere i intestinal-type adenokarsinom i ventrikkel. Men dette var bare en trend fordi resultatene ikke var statistisk signifikant (p
= 0,06). En undergruppe analyse i henhold til tumoren plassering viste at hyppigheten av DAPK-1
promoteren metylering var signifikant relatert til tarm kreftvev når tumoren ble detektert i den øvre tredjedel av magesekken (p
= 0,02; Tabell 3). Det ble ikke identifisert mellom metylering av MLH1
eller MGMT
og tumortype i henhold til klassifiseringen Lauren.
Vi analyserte assosiasjonen mellom metylering frekvensen av de samme genene og tumorinvasjon i magesekken (kategori T). Den metylering av gener MLH1 Kjøpe og MGMT
ble ikke knyttet til T kategorien av TNM klassifisering av kreftvev i noen del av magen. Hyppigere metylering av DAPK-1
ble observert i avanserte tumorer i den midtre tredjedel av magen, men dette var ikke statistisk signifikant (p
= 0,06), selv om denne trenden skal bli undersøkt i fremtiden.
korrelasjonen mellom genet promoter metylering og lymfe-node engasjement ble analysert, men viste ingen signifikant sammenheng mellom metylering av MLH1 Hotell og MGMT
arrangører og svulsten lymfe-node status. Men apoptose-relatert gen DAPK-en
ble oftere metylert i kreftvevet i N3 kategorien av TNM klassifisering (når metastase er funnet i ≥ 7 regionale lymfeknuter) enn i de i N0-2 kategori (p
= 0,05). En subgruppeanalyse viste at denne foreningen var bare signifikant i kreftvevet i midtre tredjedel av magen (p
= 0,01).
Når svulstene ble klassifisert i henhold til TNM-systemet, fant vi ingen sammenheng mellom metylering av disse gener og tumorstadiet. Imidlertid er en mer nøyaktig analyse av undergruppene viste at metylering av den MLH1
promoteren tendens til å være hyppigere i cancervev i den midtre tredjedel av magen i stadium I-II svulstene, enn i stadium III tumorer (p
= 0,06). Epigenetiske forandringer i DAPK
genet ble påvist signifikant hyppigere i mage kreftvev fra midten tredje i magen i fase III svulster enn i stadium I-II svulster (p
= 0,05).
Resultatene av vår studie tyder på en invers korrelasjon mellom metylering av MLH1 Hotell og MGMT
gener i mage kreft vev når svulsten ble plassert i nedre tredjedel av magen (koeffisient, -0,48; p
= 0,01 ). En invers korrelasjon mellom metylering av DAPK Hotell og MLH1
ble også demonstrert i kreftvev i midtre tredjedel av magen (koeffisient, -0,41; p
= 0,01).
Diskusjon
MLH1
i henhold til litteraturen, hyppigheten av MLH1
metylering i kreft gastrisk vev i området 14-43% [12-16]. Disse store variasjoner i hyppigheten av MLH1
metylering kan tilskrives de ulike geografiske regioner vurderes i spesielle studier. Den anatomisk fordeling av magekreft nettsteder er kjent for å være forskjellig i ulike geografiske områder. I områder der forekomsten av H. pylori
infeksjon er høy (Øst-Europa, Øst-Asia), noncardial eller distal magekreft er diagnostisert oftest. Men i Vest- og Nord-Europa, der antallet H. pylori-
smittede mennesker er ganske lav, er antall proksimale mage kreft høy. Den vitenskapelige litteraturen rapporterer at metylering av MLH1
arrangøren i magen kreft vev er signifikant relatert til H. pylori
virulens faktor kodet av vacs1
genet [21]. Dette gen, som vanligvis detekteres i bakteriegenomet, provoserer en mer intensiv-inflammatorisk respons, og er knyttet til en økt risiko for magekreft hos pasienter med atrofisk gastritt [22]. Kronisk gastrisk slimhinnebetennelse, som er kjennetegnet ved slimhinne infiltrasjon av polymorfonukleære leukocytter, makrofager, og T og B-lymfocytter, som fører til frigjøring av reaktive oksygenarter (ROS) fra aktiverte inflammatoriske celler. ROS indusere DNA-skade og mangelen på en skikkelig funksjon av misparringssystemet [23]. Dette er en flertrinns prosess som avhenger av intensiteten av betennelse. Metylering av MLH1
promoter skjer i et sent stadium av atrofisk gastritt, intestinal metaplasi [10, 24].
Denne konsekvent mønster er også støttet av data fra en studie av pasienter fra Vest- og Nord-Europa [13] . Nesten en tredel av pasientene ble diagnostisert med proksimale (cardial) magekreft, og hyppigheten av MLH1
metylering var 14,2%. Dette epigenetisk endring er også oftere påvist i distal gastrisk kreftvev [13]. Resultatene fra vår studie viser at forekomsten av MLH1
metylering i mage kreft vev øker fra øvre og midtre tredjedel av magen til den nedre tredjedel, og var 11,1, 23,1 og 45,4%, henholdsvis. Som i litteraturen, viser vi også at denne epigenetisk endringen skjer betydelig oftere i den nedre tredjedel av magen enn i sin proksimale tredjedel, og denne effekten er mer uttalt i den kvinnelige befolkning. Årsaken til kjønnsforskjeller er uklar, er videre undersøkelser nødvendig.
Noen data har indikert at metylering av den MLH1
promoteren blir detektert betydelig hyppigere i intestinal-type kreftmage vev (i henhold til Lauren klassifisering) enn i den diffuse typen [15, 16]. Våre resultater viser at fordelingen av denne epigenetisk endringen er lik på tvers av tumortyper i henhold til Lauren klassifisering.
Vi fant ingen signifikant sammenheng mellom metylering av MLH1
og T, og N kriterier for cancervev i en hvilken som helst del av mage. En separat analyse i henhold til tumorstedet viste at epigenetisk endring (MLH1
metylering) hadde en tendens til å være hyppigere i kreftvev fra den midtre tredjedel av magen når i stadium I-II-tumorer enn i stadium III tumorer (p
= 0,06). Dette resultatet kan ikke ha vært statistisk signifikant fordi antall pasienter med tidlig stadium sykdommen var relativt liten.
Vi har ikke funnet publisert analyse av forholdet mellom denne epigenetisk endring og T, N, og scene kriterier i henhold til tumorstedet i magen. Men publiserte data tyder på at, generelt, er metylering av MLH1
i kreftvevet oppdaget oftere når regionale lymfeknuter ikke er involvert [14].
MGMT
frekvensen av metylering av den MGMT
promoteren i cancervev økte fra den øvre til den nedre tredjedel av magen (22,2, 30,8 og 57,6%, henholdsvis), og denne effekten er mer uttalt i den mannlige befolkning. Årsaken til kjønnsrelaterte forskjeller er uklart, er videre undersøkelser nødvendig. I henhold til litteraturen, MGMT
metylering i kreftmage vev varierer 7-61% [13, 25-28]. Denne store variasjoner kan forklares ved det faktum at denne epigenetisk forandring detekteres oftere i distal magekreft vev enn ved proksimale sider [18, 29].
Vi fant ingen signifikant sammenheng mellom MGMT
promoter metylering og T og N kriterier eller histologisk type tumor i henhold til Lauren klassifiseringen til enhver undersøkt mage område. Tapet av den MGMT-proteinet funksjon er knyttet til tumor spre seg til lymfeknuter [14, 18] og fremskredne stadier av sykdommen [18, 30]. I vår studie, antall pasienter med tidlig stadium sykdommen var forholdsvis liten, noe som kan forklare våre funn.
DAPK-en
I denne studien, hyppigheten av DAPK-en
promoter metylering korrelerte ikke med svulst plassering. Publiserte data viser at dens frekvens varierer 22-91% [28, 31-36]. Ifølge våre data, metylering av DAPK-en
arrangøren var hyppigere i tarm typen adenokarsinom i ventrikkel. Dette var imidlertid bare en trend fordi forskjellene ikke var signifikante (p
= 0,06). En undergruppe analyse i henhold til tumoren plassering viste at hyppigheten av DAPK
promoter metylering var signifikant høyere i tarm cancervev i den øvre tredjedel av magen. Vi fant ingen assosiasjoner nevnt i litteraturen mellom DAPK-en
promoter metylering og tumor klassifisering i henhold til Lauren. Våre resultater må tolkes kritisk på grunn av de få pasienter i denne undergruppen.
Vi merket en marginal utvikling der DAPK-en
metylering ble påvist oftere i midtre tredjedel av magen i mer avanserte svulster, ifølge T kriteriet (p
= 0,06). Vi fant også at når apoptose-relatert gen DAPK-en
ble metylert i kreftvevet, svulsten var mer sannsynlig å være N3 på TNM klassifisering (tumor metastaser funnet i ≥ 7 regionale lymfeknuter) enn N0-2 ( p
= 0,05) og til å være en avansert tumor (trinn III i stedet for trinn i-II; p
= 0,05). En undergruppe analyse viste at denne forbindelsen forekommer i cancervev fra den midtre tredjedel av magesekken (p-0,01), men er ikke signifikant på andre mage områder. En studie publisert i 2010 viste at metylering av den pro-apoptotiske genet DAPK-en
i kreft magen vev er relatert til tumor spredning til lymfeknuter [37], men vi fant ikke noe informasjon i den nevnte studien knytter disse funnene til ulike områder av magekreft lokaliseringer.
Sammenheng mellom metylering status for de analyserte genene
Sammenhengene mellom arrangøren metylering av de ulike genene i magen kreft vev ble undersøkt vår studie. Har disse korrelasjonene avhenger av svulststedet? Vi har ikke funnet informasjon i den vitenskapelige litteraturen om sammenhengen av MGMT Hotell og MLH1
promoter metylering i magen adenokarsinom vev. Resultatene fra vår studie tyder på at det var en invers korrelasjon mellom metylering av MLH1 Hotell og MGMT
i kreftvevet når svulsten ble plassert i nedre tredjedel av magen (koeffisient, -0,48; p
= 0,01).
Disse resultatene er ikke overraskende fordi metylering av begge gense arrangører blir oftere påvist i de lavere magekreft vev [13, 29]. Men proteiner kodet handle i ulike stadier av kreftutvikling. MLH1
promoter metylering er oftere oppdages på et tidlig stadium, og i mindre aggressive magesvulster [12-16], mens MGMT
promoter metylering er mer typisk for sent stadium mage adenokarsinomer og dårlige prognoser [18, 19] .
Mer informasjon er tilgjengelig om sammenhengen mellom arrangøren metylering av MLH1 Hotell og DAPK-en
. Høy ustabilitet mikro korrelerer inverst med metylering av den DAPK-1
promoteren [12]. Vår forskningsgruppe identifisert en invers, om enn svak, sammenheng mellom arrangøren metylering av DAPK-en
og MLH1
, regulerer mikro funksjon, i kreftmage vev [20].
Vi fant også at denne sammenhengen oppstår i den midtre tredjedel av magen. En invers korrelasjon mellom metylering av DAPK-1 Hotell og MLH1
ble også identifisert i kreftvev samplet fra midten tredjedel av magen. (Koeffisient, -0,41; p
= 0,01)
spesifikke begrensning av denne studien er at ingen informasjon om mRNA uttrykk av de analyserte genene ble gitt. Vårt team har planer om å gjennomføre dette med kvantitativ PCR i en fremtidig studie. De aktuelle resultatene er viktig ikke bare fordi de strekker seg vår forståelse av gastrisk carcinogenese, men også fra et klinisk perspektiv. Det er en økende mengde bevis for at genet metylering i kreft mage vev er assosiert med forskjellig sensitivitet til kjemoterapi. Metylering av MLH1
genet er knyttet til motstand mot oksaliplatinbasert kjemoterapi [38], og pasienter med DAPK-en
metylering viser en dårligere respons på fluoropyrimidin-basert kjemoterapi [39].
Vi håper at vår studie vil føre til bedre forståelse av de ulike veier for molekylær kreftutvikling i ulike deler av magesekken.
Konklusjon
våre resultatene fra denne undersøkelsen viser at en epigenetisk prosessen, metylering av genet arrangører, i kreftvev avhenger på plasseringen av mage svulst
Forkortelser
bp.
basepar
DAPK-en
:
død-forbundet protein kinase en
LUHSH:
Lithuanian University of Health Sciences Hospital
M:
metylert allel


MGMT
:
O 6-metylguanin-DNA-metyltransferase
MC:
positiv metylert kontroll
<.no> MC-:
negativ metylert kontroll
MLH1
:
mutL homolog 1, tykktarmskreft, nonpolyposis type 2 (E. coli
)
mRNA:
messenger RNA
MSP:
metylering spesifikke polymerase chain reaction

PCR:
polymerase chain reaction
ROS:
reaktive oksygenforbindelser
U :
unmethylated allel
UC:
positiv unmethylated kontroll
UC-:
negativ unmethylated kontroll

• Clinicopathologic egenskaper og behandlingsresultater av hepatoid adenokarsinom i magen, en sjelden, men unik subtype av magekreft
• Opprinnelse og evolusjonær plastisitet av mage blindtarm i kråkeboller (Echinodermata: Echinoidea)