Gene methylering profil af gastrisk kræft væv efter tumor i maven

Gene methylering profil af gastrisk kræft væv efter tumor i maven
Abstract
Baggrund
Der er betydelig information om methylering af promotor-regioner af forskellige gener involveret i gastrisk carcinogenese. Men der er en mangel på information om, hvordan denne epigenetiske proces adskiller sig i tumorer med oprindelse på forskellige steder i maven.
Formålet med denne undersøgelse er at vurdere methylering profiler af MLH1
, MGMT
, og DAPK-1
gener i kræft væv fra forskellige mave sites.
Metoder
Prøverne blev erhvervet fra 81 patienter, der lider mave adenocarcinom, som blev opereret for mavekræft i den litauiske University of Health Sciences Hospital Kaunas Klinikker i 2009 -2012. Gene methylering blev undersøgt med methylering-specifik PCR. Undersøgelsen blev godkendt af det litauiske Biomedical Research etiske komité.
Resultater
Hyppigheden af ​​methylering i kræft væv fra den øverste, midterste og nederste tredjedele af mavesækken var 11,1, 23,1 og 45,4%, henholdsvis for MLH1
; 22,2, 30,8 og 57,6%, henholdsvis for MGMT
; og 44,4, 48,7 og 51,5%, henholdsvis for DAPK-1. MLH1
og MGMT
methylering blev observeret oftere i den nederste tredjedel af maven end i den øverste tredjedel (p
< 0,05). Salg In den midterste tredjedel, DAPK-1
promotor methylering var relateret til mere-fremskreden sygdom i lymfeknuderne (N2-3 sammenlignet med N0-1 [p
= 0,02]) og avancerede tumor (stadium III i stedet for trin i-II [p
= 0,05]). MLH1
og MGMT
methylering korreleret omvendt når tumoren blev placeret i den nederste tredjedel af maven (koefficient, -0,48; p
= 0,01). DAPK-1
og MLH1
methylering korrelerede omvendt i tumorer i midten tredjedel af maven (koefficient, -0,41; p
= 0,01).
Konklusion
genpromotor methylering afhænger mavens tumor placering.
Nøgleord
mavekræft MLH1
DAPK-1
MGMT
Methylering Baggrund
gastrisk kræft er et alvorligt sundhedsproblem. Den skjulte kliniske fremskridt af sygdommen betyder, at denne sygdom typisk diagnosticeres hos sine sene stadier, hvilket fører til dårlige prognoser, trods de nye behandlingsmuligheder, der er dukket nylig.
Mere end 90% af mavekræft er diagnosticeret som adenocarcinom [1 ]. Siden 1965 har gastrisk adenocarcinom blevet opdelt i to hovedtyper, diffus og tarm (ifølge Lauren [2]). Disse to histologiske typer afviger i deres ætiologier og prognoser. Tarm- og mave adenocarcinomer er ofte en konsekvens af kronisk infektion med Helicobacter pylori
, hvor den normale gastriske mucosa transformerer til akut sen kronisk gastritis, intestinal metaplasi og dysplasi [3]. Diffus adenocarcinom er mere aggressive end den intestinale type, fordi dets dannelse ikke afhænger af gastritis eller metaplasi processer [4]. Nyt videnskabelige data viser, at prognosen for gastrisk adenocarcinom afhænger ikke kun af dets histologisk type, men også af den tumor placering i maven. Proksimale tumorer (oprindelse i Cardia), som normalt danner som reaktion på gastroøsofageal syre /galde reflux [5], er nu adskilt som en særskilt og mere aggressiv form for gastrisk adenocarcinom, som adskiller sig fra de distale mave tumorer.
Skal distal mavekræft klassificeres som unik? Kohorteundersøgelser har vist, at risikoen for præmaligne tilstand, kaldet "atrofisk gastritis", udvikler sig til cancer er forskellig alt efter læsionsstedet i maven. Den relative risiko for mavekræft forekommer hos patienter med corpus-fremherskende gastritis er højere end hos patienter med overvejende antrale gastritis [6]. Betyder dette faktum angive forskellige kræftfremkaldende processer i maven antrum og corpus? Der er ingen data til enten udelukke eller bekræfte dette.
Epigenetisk modifikationer spille en central rolle i gastrisk carcinogenese [7]. Disse processer, såsom methylering af CpG-øer i genet promotorregioner, forårsager reversible strukturelle ændringer i DNA, som igen ændrer genekspression [8]. DNA-methylering opstår, når en methylgruppe (-CH 3) overføres til 5 th position cytosin [9].
En tidligere pilotundersøgelse af vores forskning gruppe viste, at hyppigheden af ​​methylering af MLH1
promotor adskiller i corpus og antral mave væv ramt af pangastritis. Vi bemærkede, at denne epigenetiske proces er betydeligt hyppigere i de antrale gastritis væv end i corpus [10], mens graden af ​​atrofisk gastritis er ens i begge regioner. Det er uklart, om denne tendens gælder også for cancervæv.
To grupper af gener blev udvalgt til denne methylering analyse. Den første gruppe (MLH1
og MGMT
) indeholder to gener, der koder proteiner involveret i reparation af mutationer og andre DNA-læsioner før yderligere celledeling, og den anden gruppe indeholder et tumor-undertrykkende gen (DAPK-1
) koder for et protein, som inducerer apoptose i nærværelse af en alvorlig genomisk defekt.
MLH1
(mutL homolog 1, coloncancer, nonpolyposis type 2 (E. coli
)) genet forekommer ved 3p21 .3 locus. Genet-kodet protein identificerer DNA fejl, der vises efter replikation. Hypermethylering af MLH1
promotoren, og ikke mutation-forårsagede ændringer i proteinfunktion, er ansvarlig for mikrosatellit ustabilitet i gastrisk cancer [11]. Ifølge litteraturen, MLH1
methylering er ansvarlig for den intestinale form for mavekræft og den tidlige fase af sygdommen [12-16].
Funktion MGMT (O 6-methylguanin-DNA- methyltransferase) er at fjerne alkylgruppen fra O 6-stillingen i guanin [17]. Forstyrrelse af MGMT funktionen kan medføre, at der opstår mutationer. Videnskabelige publikationer indikerer, at methylering af MGMT
genpromotoren er en af ​​de patogenetiske veje i gastrisk cancer. Især gen methylering tilskrives den fremskredent stadium af sygdommen [18], og er også tilskrives den dårligere sygdom prognose [19].
DAPK-1 Hotel (død-associeret protein kinase 1) gen er en af ​​tre DAPK
familie gener, der koder calcium /calmodulin-afhængig serin-threoninproteinkinaser. Funktionen af ​​DAPK-1-proteinet er tæt forbundet med forskellige apoptoseveje, og DAPK-1
hypermethylering er blevet vist at forekomme i faste og hæmatologiske tumorer.
Mavekræft er ikke en undtagelse. Genpromotoren methylering er også typisk for adenocarcinomer i denne placering. I en tidligere undersøgelse, vores gruppe fundet en omvendt sammenhæng mellem DAPK-1
og MLH1
methylering [20]. Vi tester her den hypotese, at forskellige gen methylering profiler forekommer i ondartede væv i maven efter det sted, hvor tumor (øverste, midten eller nederste tredjedel).
Metoder
Undersøgelsen blev godkendt af det litauiske Regional Biomedical Forskning etiske komité. Alle patienter underskrev et informeret samtykke formular. Patienter, der behandles ved den litauiske University of Health Sciences Hospital (LUHSH) Kaunas Klinikker i 2009-2012 deltaget i undersøgelsen. Mave vævsprøver blev taget fra alle fag med morfologisk bekræftet trin I-III adenocarcinom. Undersøgelsen bestod af 81 patienter (34 mænd og 47 kvinder) med en median alder på 68 år (spændvidde 23-87 år, standardafvigelse [SD] 11,75). Tumorerne af ni patienter var i den øverste tredjedel af maven, de af 39 patienter var i den midterste tredjedel, og de af 33 patienter var i den nederste tredjedel af maven. vævsprøver Maven blev indsamlet fra tumorstederne under operationen. Disse materialer blev straks nedfrosset i flydende nitrogen og opbevaret ved -80 ° C indtil analyse. I løbet af undersøgelsen blev patienternes kliniske data (alder ved diagnose, køn) og morfologiske data (tumor invasion i henhold til TNM klassifikation, histologiske type i henhold til Lauren klassificering, og graden af ​​differentiering ifølge World Health Organization klassifikation) opnået fra medicinske journaler.
methyleringsspecifik polymerasekædereaktion (MSP)
DNA blev ekstraheret fra 25-30 mg af frosset væv under anvendelse af ZS Genomisk DNA ™ tissue Mini Prep Kit (Zymo Research, USA), i henhold til producentens anvisninger. status for methylering af MLH1
, MGMT
, og DAPK-1
promotorer blev bestemt ved at behandle DNA'et med bisulfit, ved hjælp af EZ DNA-methylering Gold Kit ™ (Zymo Research), ifølge producentens instruktioner . Humant genomisk DNA fra perifere blodlymfocytter, behandlet med bisulfit, blev anvendt som negativ kontrol. Humant genomisk DNA behandlet in vitro
med SSSI methyltransferase (New England Biolabs, UK) blev anvendt som positiv kontrol. status methylering af promotorerne blev påvist med MSP.
Primerne for de methylerede og ikke-methylerede DNA-sekvenser er anført i tabel 1. PCR blev udført i et totalt reaktionsvolumen på 20 pi indeholdende 10 pi Maxima® Hot Start PCR Master Mix med Hot Start Taq
DNA Polymerase (Thermo Fisher Scientific, USA) og 10 pM af hver primer (Metabion International AG, Tyskland). MSP blev udført i 38-40 cykler af denaturering ved 94 ° C i 30 s, annealing i 1 minut ved temperaturen passende for den enkelte gen, og forlængelse ved 72 ° C i 1 min. PCR-produkterne blev separeret ved 3,5% agarosegelelektroforese (fig. 1). Når både methylerede og umethylerede signaler optrådte på en gel, blev genet for at være methylated.Table 1 Primere anvendt til MSP
Primer navn
Forward sekvens myHotelVideo.com: Reverse sekvens

Referencenummer
MLH1
denatureret
TATATCGTTCGTAGTATTC [GenBank: NG_0071092]
TCCGACCCGAATAAACC
[40]
MLH1
umethyleret
TTTTGATGTAGATGTTTTATTAGGGT [GenBank: NG_0071092 ]
TACCACCTCATCATAACTACC
[40]
MGMT
denatureret
TTTCGACGTTCGTAGGTTTTCGC [GenBank: NG_000010.11]
GCACTCTTCCGAAAACGAAAC G
[40]
MGMT
umethyleret
TTTGTGTTTTGATGTTTGTAGGTTTTTGT [GenBank: NG_000010.11]
AACTCCACACTCTTCCAAAAACAAAACA
[40]
DAPK-1
methylerede
GGATAGTCGGATCGAGTTAACGTC [GenBank: NG_029883.1]
CCCTCCCAAACGCCG A
[ ,,,0],40]
DAPK-1
umethyleret
GGAGGATAGTTGGATTGAGTTAATGTT [GenBank: NG_029883.1]
CAAATCCCTCCCAAACACCAA
[40]
bp
basepar
fig. 1 Repræsentative prøver af MSP-analyser af DNA-prøver taget fra mavekræft væv
Matematisk-statistisk dataanalyse
Statistisk analyse af data blev udført med SPSS Statistics 19 softwarepakke (IBM SPSS Inc., USA). Kvantitative egenskaber blev beskrevet af det aritmetiske gennemsnit og standardafvigelsen. Students t-test
blev anvendt til at verificere hypotesen af ​​lige midler. Den χ
2 kriterium og Fishers eksakte test blev anvendt til at kontrollere den statistiske hypotese om uafhængighed af to variable. Korrelationer mellem variabler blev vurderet ved at beregne Spearmans koefficient. p
< 0.05 blev anset signifikant.
Resultater
Hyppigheden af ​​promotor methylering i kræft væv fra den øverste, midterste og nederste tredjedele af maven var 11,1, 23,1 og 45,4%, henholdsvis for MLH1
gen; 22,2, 30,8 og 57,6%, henholdsvis for MGMT
gen; og 44,4, 48,7 og 51,5%, henholdsvis for DAPK-1
genet. Methylering af MLH1
og MGMT
gener blev observeret oftere i den nederste tredjedel af maven end i den øverste tredjedel (p
< 0,05).
Den detaljerede data er angivet i tabel 2 . En sex-baserede undergruppe analyse viste, at MLH1
methylering i cancer væv af den nederste tredjedel mave var typisk for den kvindelige befolkning (p
= 0,01), mens MGMT
methylering var kun statistisk signifikant i den mandlige gruppe (p
= 0,03). Årsagerne til disse resultater er uklare, og kræver detaljeret analyse og yderligere undersøgelser. Promotor methylering af de analyserede gener var ikke relateret til patient age.Table 2 Fordeling af MLH1, MGMT
, og DAPK-1
methylering i kræft gastrisk væv i henhold til mave websted
mave øverste tredjedel kræft væv (9 patienter) M /U
mave midt tredjedel kræft væv (39 patienter) M /U
mave lavere tredjedel kræft væv (33 patienter) M /U

p Drømmeholdet værdi
MLH1
1/8
9/30
15/18
0.05
MGMT
2/7
12/27
19/14
0.01
DAPK-1
4/5
19/20
17/16
0,93
M
methylerede allel, U
umethyleret allel
de to hovedkategorier histologisk klassifikation - tarm og diffuse typer af tumorer - afspejler differentieringen af ​​tumoren og tendensen af ​​kræftceller til at formere sig og spredes . Derfor har vi vurderet de mulige associationer mellem frekvensen fordelinger af DAPK-1
, MLH1
, og MGMT
methylering og morfologiske tumor klassificering Lauren. Resultaterne er vist i tabel 3. Fordi kun et lille antal patienter histologisk havde bekræftet blandet typen adenocarcinom ifølge Lauren klassifikation (n
= 7), denne gruppe fik den mere aggressive diffus form af sygdommen. tabel 3 Fordeling af MLH1, MGMT, DAPK-1
methylering ifølge tumorsted og patologiske egenskaber
MLH1 M /U
MGMT M /U


DAPK-1 M /U
Tumor histologiske parametre
mave øverste tredjedel kræft væv
mave midt tredjedel kræft væv

mave lavere tredjedel kræft væv
mave øverste tredjedel kræft væv
mave midt tredjedel kræft væv
mave lavere tredjedel kræft væv
mave øverste tredjedel kræft væv
mave midt tredjedel kræft væv
mave lavere tredjedel kræft væv
Intestinal typen
0/3
6/16
7/10
1/2
5/17
8/11
3/0
12/10
10/7
Diffus typen
1/5
3/14
8/8
1/5
7/10
11/5
1/5
7/10
7 /9
p
value
0.45
0.48
0.61
0.57
0.22
0.21
0.02
0.41
0.39
T1
0/1
1/2
2/4
0/1
1/2
4/2
1/0
2/1
4/2
T2
0/2
2/2
2/3
0/2
1/3
3/2
1/1
0/4
3/2
T3
0/2
5/11
8/9
1/1
4/12
10/7
1/1
6/10
7/10
T4
1/3
1/15
3/2
1/3
6/10
2/3
1/3
11/5
3/2
p
value
0.7
0.17
0.83
0.62
0.88
0.84
0.59
0.06
0.67
N0
0/4
5/9
6/4
2/2
4/10
5/5
3/1
4/10
6/4
N1
0/2
2/4
3/5
0/2
2/4
5/3
0/2
2/4
4/4
N2
0/2
1/6
3/2
0/2
1/6
3/2
1/1
2/5
1/4
N3
1/0
1/11
3/7
0/1
5/7
6/4
0/1
11/1
6/4
p Drømmeholdet værdi
0,29
0,33
0,48
0,36
0,66
0,95
0,27
0.01
0,46
M
methylerede allel , U
umethyleret allel
Ifølge vores data, methylering af DAPK-1
promotor var hyppigere i tarm-typen gastrisk adenocarcinom. Dette var imidlertid blot en tendens, fordi resultaterne ikke var statistisk signifikante (p
= 0,06). En undergruppe analyse ifølge tumor placering afslørede, at hyppigheden af ​​DAPK-1
promotor methylering var signifikant relateret til den intestinale cancervævet når tumoren blev påvist i den øverste tredjedel af maven (p
= 0,02; Tabel 3). Ingen sammenhæng blev identificeret mellem methylering af MLH1
eller MGMT
, og tumoren typen ifølge Lauren klassificering.
Vi analyserede også sammenhængen mellem methylering hyppigheden af ​​de samme gener og tumorinvasion ind i mavevæggen (kategori T). Methylering af gener MLH1 Salg og MGMT
ikke var associeret med T kategori af TNM klassifikation af cancervævet i nogen del af maven. Hyppigere methylering af DAPK-1
blev observeret i fremskredne tumorer i den midterste tredjedel af maven, men dette var ikke statistisk signifikant (p
= 0,06), selv om denne tendens bør undersøges i fremtiden.
sammenhængen mellem gen promoter methylering og lymfe-knude involvering blev analyseret, men viste ingen signifikant sammenhæng mellem methylering af MLH1
og MGMT
initiativtagere og tumor lymfe-knude status. Imidlertid blev apoptose-relaterede gen DAPK-1
oftere methyleret i de ondartede væv i N3 kategori af TNM klassifikationen (når tumormetastase er fundet i ≥ 7 regionale lymfeknuder) end i dem, i N0-2 kategori (p
= 0,05). En undergruppe analyse viste, at denne forening var kun signifikant i de ondartede væv af den midterste tredjedel af maven (p
= 0,01).
Når tumorerne blev klassificeret ifølge TNM systemet, fandt vi ingen sammenhæng mellem methylering af disse gener og tumor fase. en mere præcis analyse af undergrupperne viste dog, at methylering af MLH1
promotoren tendens til at være mere hyppige i cancervæv i den midterste tredjedel af maven i trin I-II tumorer end i fase III tumorer (p
= 0,06). Epigenetiske ændringer i DAPK
genet blev påvist signifikant hyppigere i gastrisk cancervævet fra den midterste tredjedel af maven i trin III tumorer end i trin I-II tumorer (p
= 0,05).
Resultaterne af vores undersøgelse indikerer en omvendt korrelation mellem methylering af MLH1
og MGMT
gener i gastriske cancervæv når tumoren var placeret i den nederste tredjedel af maven (koefficient, -0,48; p
= 0,01 ). En omvendt korrelation mellem methylering af DAPK
og MLH1
blev også vist i cancervævet i den midterste tredjedel af maven (koefficient, -0,41; p
= 0,01).
Diskussion
MLH1
Ifølge litteraturen, hyppigheden af ​​MLH1
methylering i kræft gastrisk væv ligger fra det 14 til 43% [12-16]. Disse store variationer i frekvensen af ​​MLH1
methylering kan tilskrives de forskellige geografiske regioner anses navnlig undersøgelser. Den anatomiske fordeling af mave tumorsites vides at variere i forskellige geografiske regioner. I regioner, hvor forekomsten af ​​H. pylori
infektion er høj (Østeuropa, Østasien), noncardial eller distal mavekræft diagnosticeres oftest. Men i Vest- og Nordeuropa, hvor antallet af H. pylori
smittede er ganske lav, at antallet af proksimale gastriske kræftformer er høj. Den videnskabelige litteratur rapporterer, at methylering af MLH1
promotoren i maven cancervæv signifikant relateret til H. pylori
virulensfaktor kodet af vacs1
genet [21]. Dette gen, som typisk påvises i det bakterielle genom, fremkalder en mere intensiv inflammatoriske respons og er relateret til en forøget risiko for mavecancer hos patienter med atrofisk gastritis [22]. Kronisk gastrisk mucosal inflammation, som er kendetegnet ved den mucosale infiltration af polymorfkernede leukocytter, makrofager og T- og B-lymfocytter, fører til frigivelse af reaktive oxygenarter (ROS) fra aktiverede inflammatoriske celler. ROS inducerer DNA-ødelæggelse og manglen på en ordentlig funktion af fejlparringsreparationssystemet [23]. Dette er en flertrinsproces, der afhænger af intensiteten af ​​betændelse. Den methylering af MLH1
promotor forekommer i et sent stadium af atrofisk gastritis, intestinal metaplasi [10, 24].
Denne konsekvent mønster understøttes også af data fra et studie af patienter fra Vest- og Nordeuropa [13] . Næsten en tredjedel af patienterne blev diagnosticeret med proksimal (cardial) mavekræft, og hyppigheden af ​​MLH1
methylering var 14,2%. Denne epigenetiske forandring er også oftere påvist i distal gastriske kræft væv [13]. Resultaterne af vores undersøgelse viser, at forekomsten af ​​MLH1
methylering i gastrisk cancer væv øges fra den øverste og midterste tredjedel af maven til den nederste tredjedel, og 11,1, 23,1 og 45,4%, henholdsvis. Som i litteraturen viste vi også, at denne epigenetiske forandring forekommer signifikant oftere i den nederste tredjedel af maven end i sin proximale tredjedel, og denne effekt er mere udtalt i den kvindelige befolkning. Årsagen til sex forskelle er uklar, er behov for yderligere undersøgelser.
Nogle data har indikeret, at methylering af MLH1
promotor detekteres signifikant hyppigere i tarm-type kræft mave væv (ifølge Lauren klassifikation) end i den diffuse type, [15, 16]. Vores resultater viser, at fordelingen af ​​denne epigenetiske forandring er ens på tværs tumortyper ifølge Lauren klassifikation.
Vi fandt ingen signifikant sammenhæng mellem methylering af MLH1
og T og N kriterier for cancervæv i nogen del af mave. En separat analyse ifølge tumorstedet viste, at den epigenetiske forandring (MLH1
methylering) tendens til at være mere hyppige i cancervæv fra den midterste tredjedel af maven når i trin I-II tumorer end i fase III tumorer (p
= 0,06). Dette resultat kan ikke have været statistisk signifikant, fordi antallet af patienter med tidlig-stadie sygdommen var relativt lille.
Vi har fundet nogen offentliggjort analyse af forholdet mellem denne epigenetiske forandring og T, N, og kriterier fase i henhold til den tumorsted i maven. Dog publicerede data viser, at der i almindelighed er methylering af MLH1
i cancervæv detekteres oftere, når regionale lymfeknuder ikke er involveret [14].
MGMT
hastigheden af ​​methylering af den MGMT
promotoren i cancervæv steg fra den øvre til den nedre tredjedel af maven (22,2, 30,8, og 57,6%, henholdsvis), og denne virkning er mere udtalt i den mandlige befolkning. Årsagen til sex forskelle er uklar, er behov for yderligere undersøgelser. Ifølge litteraturen, MGMT
methylering i cancerøse mave væv fra 7 til 61% [13, 25-28]. Denne store variation kan forklares ved det faktum, at denne epigenetiske forandring opdages oftere i distal mavekræft væv end ved proksimale steder [18, 29].
Vi fandt ingen signifikante sammenhænge mellem MGMT
promotor methylering og T og N kriterier eller den histologiske type af tumoren ifølge Lauren klassifikation til enhver undersøges maven site. Tabet af MGMT proteinfunktion er relateret til tumor sprede sig til lymfeknuderne [14, 18] og fremskredne stadier af sygdommen [18, 30]. I vores undersøgelse, at antallet af patienter med tidlig-stadie sygdommen var forholdsvis lille, hvilket kunne forklare vores fund.
DAPK-1
I denne undersøgelse, hyppigheden af ​​DAPK-1
promotor methylering korrelerede ikke med tumor placering. Offentliggjorte data viser, at dens frekvens varierer fra ca. 22 til 91% [28, 31-36]. Ifølge vores data, methylering af DAPK-1
promotor var hyppigere i den intestinale type gastrisk adenocarcinom. Men dette var blot en tendens, fordi forskellene ikke var signifikant (p
= 0,06). En undergruppe analyse ifølge tumor placering viste, at hyppigheden af ​​DAPK
promotor methylering var signifikant højere i intestinale cancervæv i den øverste tredjedel af maven. Vi fandt ingen nævnt i litteraturen mellem DAPK-1
promotor methylering og tumor klassificering i henhold til den Lauren foreninger. Vores resultater bør fortolkes kritisk på grund af de få patienter i denne undergruppe.
Vi bemærkede en marginal tendens, hvor DAPK-1
methylering blev fundet oftere i den midterste tredjedel af maven i mere avancerede tumorer, ifølge T kriterium (p
= 0,06). Vi fandt også, at når apoptose-relaterede gen DAPK-1
blev methyleret i cancervæv, tumoren var mere tilbøjelige til at være N3 på TNM klassifikationen (tumormetastaser fundet i ≥ 7 regionale lymfeknuder) end N0-2 ( p
= 0,05) og for at være en avanceret tumor (stadium III og ikke trin i-II; p
= 0,05). En undergruppe analyse viste, at denne forening sker i cancervæv fra den midterste tredjedel af maven (p-0,01), men er ikke signifikant ved andre mave sites. En undersøgelse offentliggjort i 2010 viste, at methylering af pro-apoptotiske gen DAPK-1
i kræft mave væv er relateret til tumor spredning til lymfeknuderne [37], men vi fandt ikke nogen oplysninger i nævnte undersøgelse forbinder disse resultater til forskellige steder i mavekræft lokaliseringer.
Sammenhæng mellem status methylering af de analyserede gener
forholdet mellem promotor methylering af de forskellige gener i mavekræft væv blev undersøgt vores undersøgelse. Er disse korrelationer afhænger tumorstedet? Vi har fundet oplysninger i den videnskabelige litteratur vedrørende korrelationen af ​​MGMT
og MLH1
promotor methylering i maven adenocarcinom væv. Resultaterne af vores undersøgelse viser, at der var en omvendt korrelation mellem methylering af MLH1
og MGMT
i cancervæv når tumoren var placeret i den nederste tredjedel af maven (koefficient, -0,48; p
= 0,01).
Disse resultater er ikke overraskende, fordi methylering af begge genpromotorer er oftere påvist i de lavere mavekræft væv [13, 29]. Men proteinerne kodet handle i forskellige stadier af carcinogenese. MLH1
promotor methylering er oftere opdages i de tidlige stadier og i mindre aggressive gastriske tumorer [12-16], mens MGMT
promotor methylering er mere typisk for sene mave adenokarcinomer og dårlige prognoser [18, 19] .
Flere oplysninger om sammenhængen mellem promotor methylering af MLH1
DAPK-1
. Høj mikrosatellit instabilitet korrelerer omvendt med methylering af DAPK-1
promotoren [12]. Vores forskergruppe identificeret en omvendt, om end svag, sammenhæng mellem promotor methylering af DAPK-1
og MLH1
, regulering mikrosatellit funktion, i kræft mave væv [20].
Vi fandt også, at denne sammenhæng opstår i den midterste tredjedel af maven. En omvendt korrelation mellem methylering af DAPK-1
og MLH1
blev også identificeret i kræft væv stikprøven fra den midterste tredjedel af maven. (Koefficient, -0,41; p
= 0,01)
specifikke begrænsning af denne undersøgelse er, at ingen oplysninger om mRNA-ekspression af de analyserede gener blev leveret. Vores team har planer om at foretage dette med kvantitativ PCR i en kommende undersøgelse. De nuværende resultater er ikke kun vigtigt, fordi de udvide vores forståelse af gastrisk carcinogenese, men også fra den klinisk perspektiv. Der er en voksende mængde af beviser for, at gen-methylering i kræft gastrisk væv er forbundet med differentiale følsomhed over for kemoterapi. Methylering af MLH1
gen er relateret til resistens over for oxaliplatin kemoterapi [38], og patienter med DAPK-1
methylering viser en dårligere respons på fluoropyrimidin kemoterapi [39].
Vi håber, at vores undersøgelse vil føre til en bedre forståelse af de forskellige veje for molekylær carcinogenese i forskellige dele af maven.
Konklusion
vores undersøgelse viser, at en epigenetisk proces, methylering af genpromotorer, i kræft væv afhænger på placeringen af ​​den gastriske tumorer
Forkortelser
bp:.
basepar
DAPK-1
:
død-associeret proteinkinase 1
LUHSH:
litauisk University of Health Sciences Hospital
M:
methylerede allel


MGMT
:
O 6-methylguanin-DNA-methyltransferase
MC:
positiv methylerede kontrol


MC-:
negativ methylerede kontrol
MLH1
:
mutL homolog 1, tyktarmskræft, nonpolyposis type 2 (E. coli
)
mRNA:
messenger RNA
MSP:
methylering-specifik polymerasekædereaktion

PCR:
polymerasekædereaktion
ROS:
reaktive ilt arter
U :
umethyleret allel
UC:
positiv umethyleret kontrol
UC:
negativ umethyleret kontrol

• Clinicopathologic karakteristika og behandlingsresultater af hepatoid adenokarcinom i maven, en sjælden, men unik undertype af gastrisk cancer
• Oprindelse og evolutionær plasticitet af mavens blindtarm i søpindsvin (PIGHUDER: Echinoidea)