Gene metylaatio profiilia mahalaukun syöpäkudoksen mukaan kasvaimen sivuston vatsassa

Gene metylaatio profiilia mahalaukun syöpäkudoksen mukaan tuumorikohtaan vatsassa
Abstract
tausta
on huomattavaa tietoa metylaatio promoottorialueiden eri geenien mahasyövän. On kuitenkin riittävästi tietoa siitä, miten tämä epigeneettiset prosessi eroaa kasvaimia peräisin eri sivustoja vatsassa.
Tämän tutkimuksen tarkoituksena on arvioida metylaation profiilit MLH1
, MGMT
, ja DAPK-1
geenien syöpäkudokset eri vatsaan sivustoja. Tool menetelmät
Näytteet hankittiin 81 kärsivien potilaiden mahan adenokarsinooman, joka leikattiin mahasyövän liettualaisessa yliopistossa Health Sciences sairaalan Kaunas Clinics vuonna 2009 -2012. Gene metylaatio tutkittiin metylaatiospesifistä PCR. Tutkimuksen hyväksyi Liettuan Biomedical Research eettisen komitean.
Tulokset
taajuudet metylaation syöpä- kudoksissa ylemmästä, keski- ja alemman kolmasosaa vatsaan olivat 11,1, 23,1 ja 45,4%, vastaavasti, MLH1
; 22,2, 30,8, ja 57,6%, vastaavasti, MGMT
; ja 44,4, 48,7 ja 51,5%, vastaavasti, DAPK-1. MLH1
ja MGMT
metylaatio havaittiin useammin alin kolmannes mahan kuin ylempään kolmannekseen (p
< 0,05).
Keskellä kolmannen, DAPK-1
promoottori metylaatio liittyi enemmän kehittyneiden taudin imusolmukkeet (N2-3 verrattuna N0-1 [p
= 0,02]) ja kehittyneiden kasvain (vaihe III sijasta vaiheissa I-II [p
= 0,05]). MLH1
ja MGMT
metylaation korreloi käänteisesti kun kasvain sijaitsi alin kolmannes mahan (kerroin, -0,48; p
= 0,01). DAPK-1
ja MLH1
metylaation korreloi käänteisesti kasvaimissa keskellä kolmannes mahan (kerroin, -0,41; p
= 0,01).
Päätelmä
Gene promoottorin metylaation riippuu mahalaukun kasvain sijainti.
avainsanat
Mahasyöpä MLH1
DAPK-1
MGMT
metylointi Background
mahalaukun syöpä on vakava terveysongelma. Piilossa kliininen sairauden etenemisestä tarkoittaa, että tämä tauti diagnosoidaan tyypillisesti sen loppuvaiheissa, mikä johtaa huonoon ennusteiden huolimatta uusia hoitomahdollisuuksia, jotka ovat nousseet viime aikoina.
Yli 90% mahasyöpä on diagnosoitu adenokarsinooma [1 ]. Vuodesta 1965, mahalaukun adenokarsinooman on jaettu kahteen päätyyppiin, hajanainen ja suoliston (mukaan Lauren [2]). Nämä kaksi histologista tyyppiä eroavat etiologies ja ennusteet. Suoliston ja mahan adenokarsinooman ovat usein seurausta kroonisesta infektion Helicobacter pylori
, kun normaali mahalaukun limakalvon muuntuu akuutti myöhään krooninen gastriitti, suoliston metaplasiaa, ja dysplasia [3]. Diffuusi adenokarsinooma on aggressiivisempi kuin suoliston tyyppi, koska sen muodostumista ei riipu gastriittia tai metaplasiaa prosesseja [4].
Viimeaikaiset tieteelliset tiedot osoittavat, että ennusteeseen mahalaukun adenokarsinoomaa ei riipu ainoastaan ​​sen histologinen tyyppi, mutta myös kasvain sijainti vatsassa. Proksimaalinen kasvaimet (peräisin cardia), jotka liittyvät yleensä vastauksena ruokatorven happo /sapen refluksi [5], on nyt erotettu erillisenä ja aggressiivisempi muoto mahalaukun adenokarsinoomaa, jotka eroavat distaalisesta vatsaan kasvaimia.
Jos distaalinen mahasyöpä luokitellaan ainutlaatuinen? Kohortti tutkimukset ovat osoittaneet, että riski premalignien ehdon, kutsutaan atrofinen gastriitti ", kehittymässä syöpä vaihtelee paikalle vaurion vatsassa. Suhteellinen mahalaukun syövän riski esiintyy potilailla, joilla korpuksen-hallitseva gastriitti on suurempi kuin niillä, joilla on pääasiassa antraaligastriitin [6]. Onko tämä seikka osoittaa erilaisia ​​karsinogeenisia prosesseja mahalaukussa antrumissa ja corpus? Ei ole olemassa tietoja joko sulkea tai vahvistavat tämän.
Epigeneettiset muutokset keskeisessä asemassa mahasyövän [7]. Nämä prosessit, kuten metylaatio CpG-saarekkeiden geeni- promoottori alueilla, aiheuttaa palautuvia rakenteellisia muutoksia DNA, joka puolestaan ​​muuttaa geenien ilmentyminen [8]. DNA: n metylaatio tapahtuu, kun metyyliryhmää (-CH 3) siirretään 5 sijalle sytosiinin [9].
Aiemmassa pilottitutkimus meidän tutkimusryhmä osoitti, että taajuus metylointi MLH1
promoottori eroaa corpus ja antral mahan kudoksissa vaikuttaa pangastriitti. Huomasimme, että tämä epigeneettisellä prosessi on huomattavasti yleisempää antraaligastriitin kudosten kuin Korpuksen [10], kun taas aste atrofinen gastriitti on samanlainen molemmilla alueilla. On epäselvää, onko tämä suuntaus koskee myös syöpäkudokset.
Kaksi ryhmää geenejä valittiin tähän metylointianalyysi. Ensimmäinen ryhmä (MLH1
ja MGMT
) sisältää kaksi geeniä, jotka koodaavat proteiineja, jotka liittyvät korjaus mutaatioiden ja muiden DNA vauriot ennen solunjakautumisen, ja toinen ryhmä sisältää kasvaimen estävä geeni (DAPK-1
), joka koodaa proteiinia, joka indusoi apoptoosia, kun läsnä on vakava genomisen vika.
MLH1
(mutL homologi 1, paksusuolen syöpä, polypoottinen tyypin 2 (E. coli
)) geenin tapahtuu 3p21 0,3 locus. Geeni-koodaama proteiini tunnistaa DNA virheitä, jotka näkyvät jälkeen replikointi. Hypermetylaatiota MLH1
promoottori, ei mutaatio aiheuttamia muutoksia proteiinin funktion, on vastuussa mikrosatelliittimerkki epävakauden mahasyövän [11]. Kirjallisuuden mukaan, MLH1
metylaatio vastaa suoliston muodossa mahasyövän ja varhaisessa vaiheessa tauti [12-16].
Toiminta MGMT (O 6-metyyliguaniini-DNA- metyylitransferaasi) on poistaa alkyyliryhmä alkaen O 6 asemaa guaniinin [17]. Häiriöt MGMT toiminto saattaa syntyä mutaatioita. Tieteelliset julkaisut osoittavat, että metylaatio ÄLYPELIT
geenin promoottori on yksi patogeeniset reittejä mahasyövän. Erityisesti geeni metylaatio johtuu pitkälle edenneen taudin [18], ja on myös johtuvan huonompi sairauden ennusteen [19].
DAPK-1
(kuolemaan liittyvä proteiinikinaasi 1) geeni on yksi kolmesta DAPK
perheen geenejä, jotka koodaavat kalsium /kalmoduliinista riippuvainen seriini-treoniiniproteiinikinaaseja. Funktio DAPK-1-proteiini on läheistä sukua eri apoptoosin polkuja, ja DAPK-1
hypermetylaation on osoitettu tapahtuvan kiinteiden ja hematologiset kasvaimet.
Mahalaukun syöpä ei ole poikkeus. Gene promoottori metylaatio on myös tyypillistä adenokarsinoomia kyseisessä paikassa. Aiemmassa tutkimuksessa ryhmämme löysi käänteinen yhdistyksen välillä DAPK-1
ja MLH1
metylaatio [20]. Testaamme täällä hypoteesia, jonka mukaan eri geenin metylaatio profiileja esiintyä syöpäkudokset vatsassa mukaan sivuston kasvaimen (ylä-, keski- tai alemman kolmas). Tool Menetelmät
Tutkimuksen hyväksyi Liettuan alueellinen Biomedical tutkimus eettinen komitea. Kaikki potilaat allekirjoittivat tietoon perustuvan suostumuksen muodossa. Potilaita hoidettiin Liettuan yliopiston Health Sciences Hospital (LUHSH) Kaunas Clinics vuosina 2009-2012 osallistui tutkimukseen. Vatsa kudosnäytteet otettiin kaikilla potilailla, joilla morfologisesti vahvistettu vaiheen I-III adenokarsinooma. Tutkimus koostui 81 potilasta (34 miestä ja 47 naista), ja iän mediaani 68 vuotta (vaihteluväli 23-87 vuotta; keskihajonta [SD] 11,75). Kasvaimet yhdeksän potilasta olivat ylin kolmannes mahan, ne 39 potilasta oli keskellä kolmannen ja ne 33 potilasta oli alin kolmannes vatsaan. Vatsa kudosnäytteitä kerättiin tuumorikohdat leikkauksen aikana. Nämä materiaalit jäädytettiin välittömästi nestemäisessä typessä ja säilytettiin -80 ° C: ssa analyysiin asti. Tutkimuksen aikana potilaiden kliiniset tiedot (ikä diagnoosin, sukupuoli) ja morfologiset tiedot (kasvain invaasio mukaan TNM luokittelu, histologinen tyyppi mukaan Lauren luokitusta, ja eriytyminen mukaan Maailman terveysjärjestön luokitus) saatiin alkaen potilastietoja.
Metylaatiospesifinen polymeraasiketjureaktio (MSP) B DNA uutettiin 25-30 mg jäädytettyä kudosta käyttäen ZS Perimän DNA ™ Tissue Mini Prep Kit (Zymo Research, USA), mukaan valmistajan ohjeita. Metylaatiostatuksen on MLH1
, MGMT
, ja DAPK-1
promoottorit määritettiin käsittelemällä DNA bisulfiitin kanssa, käyttäen EZ DNA Metylointi Gold Kit ™ (Zymo Research), mukaisesti valmistajan ohjeiden . Ihmisen genomista DNA: perifeerisen veren lymfosyytit, käsiteltiin bisulfiitti, käytettiin negatiivisena kontrollina. Ihmisen genomista DNA käsiteltiin in vitro
kanssa SSSI metyylitransferaasin (New England Biolabs, UK) käytettiin positiivisena kontrollina. Metylaatiostatuksen promoottorien havaittiin MSP.
Alukkeet metyloitujen ja metyloimattomien DNA-sekvenssit on lueteltu taulukossa 1. PCR suoritettiin reaktion kokonaistilavuus on 20 ui, joka sisälsi 10 ui Maxima® Hot Start PCR Master Mix Hot Start Taq
DNA Polymerase (Thermo Fisher Scientific, USA) ja 10 uM kutakin aluketta (Metabion International AG, Saksa). MSP suoritettiin 38-40 sykliä, denaturointi 94 ° C: ssa 30 s, pariutuminen 1 min lämpötilassa kyseisen yksittäisen geenin, ja pidennys 72 ° C: ssa 1 min. PCR-tuotteet erotettiin 3,5% agaroosigeelielektroforeesilla (Fig. 1). Kun sekä metyloidun ja metyloitumattoman signaalit esiintyi geelissä, geeni pidettiin methylated.Table 1 käytetyt alukkeet MSP
Primer nimi
Forward sekvenssin

Käänteinen sekvenssi

viitenumero
MLH1
denaturoidulla
TATATCGTTCGTAGTATTC [GenBank: NG_0071092]
TCCGACCCGAATAAACC
[40]
MLH1
metyloimaton
TTTTGATGTAGATGTTTTATTAGGGT [GenBank: NG_0071092 ]
TACCACCTCATCATAACTACC
[40]
MGMT
denaturoidulla
TTTCGACGTTCGTAGGTTTTCGC [GenBank: NG_000010.11]
GCACTCTTCCGAAAACGAAAC G
[40]
MGMT
metyloimaton
TTTGTGTTTTGATGTTTGTAGGTTTTTGT [GenBank: NG_000010.11]
AACTCCACACTCTTCCAAAAACAAAACA
[40]
DAPK-1
metyloiduksi
GGATAGTCGGATCGAGTTAACGTC [GenBank: NG_029883.1]
CCCTCCCAAACGCCG
[ ,,,0],40]
DAPK-1
metyloimaton
GGAGGATAGTTGGATTGAGTTAATGTT [GenBank: NG_029883.1]
CAAATCCCTCCCAAACACCAA
[40]
emäsparin
emäsparia
Fig. 1 edustavia näytteitä MSP analyysit DNA otettujen näytteiden mahasyöpä kudoksista
Matemaattinen-tilastollisen datan
Tilastotiedot analyysi suoritettiin SPSS Statistics 19 ohjelmistopaketti (IBM SPSS Inc., USA). Quantitative ominaisuudet kuvataan aritmeettinen keskiarvo ja keskihajonta. Studentin t
-testiä käytettiin tarkistaa hypoteesi yhtäläisen keinoin. Χ
2 kriteeri ja Fisherin testiä käytettiin tarkistaa tilastollisen hypoteesin riippumattomuus kaksi muuttujaa. Korrelaatiot muuttujia arvioitiin laskemalla Spearmanin kertoimella. p
< 0,05 katsottiin merkittäväksi.
Tulokset
taajuudet promoottorin metylaation syöpäkudokset ylemmästä, keski- ja alemman kolmasosaa vatsaan olivat 11,1, 23,1 ja 45,4%, vastaavasti, että MLH1
geeni; 22,2, 30,8, ja 57,6%, vastaavasti, että MGMT
geeni; ja 44,4, 48,7 ja 51,5%, vastaavasti, että DAPK-1
geeni. Metylointi MLH1
ja MGMT
geenien havaittiin useammin alin kolmannes mahan kuin ylempään kolmannekseen (p
< 0,05).
Yksityiskohtaiset tiedot esitetään taulukossa 2 . sukupuoleen perustuva alaryhmä analyysi paljasti, että MLH1
metylaatio syövän kudoksissa alemman kolmas vatsa oli tyypillistä naisista (p
= 0,01), kun taas MGMT
metylaatio oli ainoa tilastollisesti merkitsevä miehen ryhmä (p
= 0,03). Syyt Näiden löydösten ovat epäselviä, ja edellyttävät yksityiskohtaisia ​​analysointi ja lisätutkimuksia. Promoottori metylaatio analysoitu geeneistä ei liittynyt potilaaseen age.Table 2 jakauma MLH1, MGMT
, ja DAPK-1
metylaation syöpä- mahalaukun kudoksissa mukaan vatsan päällä
Vatsa ylempi kolmas syöpäkudoksen (9 potilasta) M /U
Vatsa keski-kolmas syöpäkudoksen (39 potilasta) M /U
Vatsa alempi kolmannes syöpäkudoksen (33 potilasta) M /U

p
arvo
MLH1
1/8
9/30
15/18
0,05
MGMT
2/7
12/27
19/14
0,01
DAPK-1
4/5
19/20
17/16
0,93
M
metyloitu alleeli, U
metyloimaton alleeli
kaksi tärkeintä histologinen luokista - suoliston ja hajanainen tyyppisiä kasvaimia - heijastavat erilaistumista kasvain ja taipumus syöpäsolujen lisääntyä ja levitä . Siksi arvioimme mahdollisimman assosiaatioita frekvenssijakaumat DAPK-1
, MLH1
, ja MGMT
metylaation ja Lauren morfologiset kasvain luokitusta. Tulokset on esitetty taulukossa 3. Koska vain pieni määrä potilaita oli histologisesti varmennettu mixed-tyyppinen adenokarsinooma mukaan Lauren luokittelu (n
= 7), tämä ryhmä määrättiin aggressiivisempia diffuusi muoto taudista. Taulukko 3 jakautuminen MLH1, MGMT, DAPK-1
metylointi mukaan kasvaimen kohdalle ja patologiset ominaisuudet
MLH1 M /U
MGMT M /U


DAPK-1 M /U
Kasvain histologisia parametreja
Vatsa ylemmän kolmanneksen syöpäkudoksen
Vatsa keski-kolmas syöpäkudokseen

Vatsa alempi kolmannes syöpäkudoksen
Vatsa ylemmän kolmanneksen syöpäkudoksen
Vatsa keski-kolmas syöpäkudoksen
Vatsa alempi kolmannes syöpäkudokseen
Vatsa ylempi kolmannes syöpäkudoksen
Vatsa keski-kolmas syöpäkudoksen
Vatsa alempi kolmannes syöpäkudoksen
Suoliston tyyppi
0/3
6/16
7/10
1/2
5/17
8/11
3/0
12/10
10/7
Diffuusi tyyppi
1/5
3/14
8/8
1/5
7/10
11/5
1/5
7/10
7 /9
p
value
0.45
0.48
0.61
0.57
0.22
0.21
0.02
0.41
0.39
T1
0/1
1/2
2/4
0/1
1/2
4/2
1/0
2/1
4/2
T2
0/2
2/2
2/3
0/2
1/3
3/2
1/1
0/4
3/2
T3
0/2
5/11
8/9
1/1
4/12
10/7
1/1
6/10
7/10
T4
1/3
1/15
3/2
1/3
6/10
2/3
1/3
11/5
3/2
p
value
0.7
0.17
0.83
0.62
0.88
0.84
0.59
0.06
0.67
N0
0/4
5/9
6/4
2/2
4/10
5/5
3/1
4/10
6/4
N1
0/2
2/4
3/5
0/2
2/4
5/3
0/2
2/4
4/4
N2
0/2
1/6
3/2
0/2
1/6
3/2
1/1
2/5
1/4
N3
1/0
1/11
3/7
0/1
5/7
6/4
0/1
11/1
6/4
p
arvo
0,29
0,33
0,48
0,36
0,66
0,95
0,27
0,01
0,46
M
metyloitu alleeli U
metyloimaton alleeli
Saamiemme tietojen, metylaatio DAPK-1
promoottori oli yleisempää suoliston-tyypin mahalaukun adenokarsinoomaa. Tämä oli kuitenkin vain suuntaus, koska tulokset eivät olleet tilastollisesti merkitseviä (p
= 0,06). Alaryhmäanalyysi mukainen kasvaimen sijainti paljastivat, että taajuus DAPK-1
promoottorin metylaation merkittävästi liittyvät suoliston syöpäkudokseen kun kasvain havaittiin ylempään kolmannekseen vatsan (p
= 0,02; taulukko 3). No association välillä havaittiin metyloinnin MLH1
tai MGMT
ja kasvaintyyppi mukaan Lauren luokitusta.
Analysoimme myös yhdistyksen välillä metylaatio taajuus samat geenit ja kasvainten invaasio vatsaan seinään (luokka T). Metylointi geenien MLH1
ja MGMT
ei liittynyt T luokka TNM luokittelu syöpäkudoksen missään osassa vatsaan. Useammin metylointi DAPK-1
havaittiin kehittyneen kasvaimia keskellä kolmannes mahan, mutta tämä ei ollut tilastollisesti merkitsevä (p
= 0,06), vaikka tämä suuntaus olisi tutkittava jatkossa.
korrelaatio geenin promoottorin metylaation ja imusolmukkeiden osallistumista analysoitiin, mutta ei paljastanut mitään merkittävää yhdistyksen välillä metylaatio MLH1
ja MGMT
promoottoreita ja kasvain imusolmukkeiden tila. Kuitenkin apoptoosin liittyvän geenin DAPK-1
oli useammin metyloitavaa cancerous kudosten N3 luokka TNM luokituksen (kun kasvain etäpesäke esiintyy ≥ 7 imusolmukkeisiin) kuin ne, jotka N0-2 luokka (p
= 0,05). Alaryhmäanalyysi osoitti, että tämä yhdistys oli merkittävä vain syöpäkudokset keskimmäisen kolmanneksen mahaan (p
= 0,01).
Kun kasvaimia luokitellaan TNM järjestelmä, löysimme ei assosiaatio metylaatio näiden geenien ja tuumorin vaihe. Kuitenkin tarkempi analyysi alaryhmien osoitti, että metylaatio MLH1
promoottori taipumus olla yleisempiä syöpäkudokset keskellä kolmannes mahan vaiheessa I-II kasvaimia kuin vaiheessa III kasvaimet (p
= 0,06). Epigeneettisiä muutoksia DAPK
geenin havaittiin merkittävästi useammin mahalaukun syöpäkudoksen keskeltä kolmannen mahan vaiheessa III kasvaimia kuin vaiheessa I-II kasvaimet (p
= 0,05).
Tulokset Tutkimuksemme osoittavat käänteinen korrelaatio metylaatio MLH1
ja MGMT
geenien mahasyövän kudoksissa kun kasvain sijaitsi alin kolmannes mahan (kerroin, -0,48; p
= 0,01 ). Käänteinen korrelaatio metyloinnin DAPK
ja MLH1
osoitettiin myös syöpäkudoksen keskimmäiseen kolmannekseen mahan (kerroin, -0,41; p
= 0,01).
Keskustelu
MLH1
kirjallisuuden mukaan, taajuus MLH1
metylaation syöpäsoluissa mahalaukun kudoksissa vaihteli 14 ja 43% [12-16]. Nämä suuret vaihtelut taajuus MLH1
metylaatio voidaan katsoa johtuvan eri maantieteellisillä alueilla katsoi erityisesti tutkimuksiin. Anatominen jakauma mahatuumori sivustojen tiedetään eroavat eri maantieteellisillä alueilla. Alueilla, joilla ilmaantuvuus helikobakteeri
infektio on korkea (Itä-Eurooppa, Itä-Aasia), noncardial distaalipinnoille mahalaukun syöpä diagnosoidaan useimmiten. Kuitenkin Länsi- ja Pohjois-Euroopassa, jossa määrä H. pylori
tartunnan saaneita ihmisiä on varsin pieni määrä proksimaalisen mahasyövistä on korkea. Tieteellinen kirjallisuus raportoi, että metylaatio on MLH1
promoottorin mahasyöpä kudoksissa merkittävästi liittyy H. pylori
virulenssitekijä koodaa vacs1
geenin [21]. Tämä geeni, joka on tyypillisesti havaitaan bakteerigenomissa, provosoi enemmän vaativia tulehdusvastetta ja liittyy lisääntynyt riski mahasyövän potilaalla on atrofinen gastriitti [22]. Krooninen mahalaukun limakalvon tulehdus, jolle on tunnusomaista, että limakalvon tunkeutumisen polymorfonukleaaristen leukosyyttien, makrofagit ja T- ja B-lymfosyyttien, johtaa vapautumisen reaktiivisia happiradikaaleja (ROS) aktivoiduista tulehdussolujen. ROS aiheuttaa DNA-vaurioita ja puute asianmukainen toiminta yhteensopimattomuuden korjausjärjestelmä [23]. Tämä on monivaiheinen prosessi, joka riippuu intensiteetti tulehdus. Metylointi on MLH1
promoottori tapahtuu myöhäisessä vaiheessa atrofinen gastriitti, suoliston metaplasiaa [10, 24].
Johdonmukaista tukee myös dataa tutkimuksessa potilaita Länsi- ja Pohjois-Euroopan [13] . Lähes kolmannes potilaista oli diagnosoitu proksimaalinen (sydän-) mahasyövän, ja taajuus MLH1
metylaatio oli 14,2%. Tämä epigeneettiset muutos on myös useammin havaittavissa distaalisessa mahalaukun syöpäkudoksen [13]. Tulokset Tutkimuksemme osoittavat, että esiintyminen MLH1
metylaation mahasyövän kudosta kasvaa ylemmästä ja keskimmäisen kolmanneksen vatsan alalaitaan, ja oli 11,1, 23,1 ja 45,4%, tässä järjestyksessä. Kuten kirjallisuudessa, myös osoitti, että tämä epigeneettisellä muutos tapahtuu merkitsevästi useammin alin kolmannes mahan kuin noin kolmanneksen, ja tämä vaikutus on selvempi naisia. Syynä sukupuoli liittyviä eroja on epäselvä, lisätutkimukset ovat tarpeen.
Jotkin tiedot ovat osoittaneet, että metylaatio MLH1
promoottori havaitaan merkittävästi useammin suoliston-tyyppinen syöpä mahan kudoksissa (mukaan Lauren luokitus) kuin hajanainen tyyppi [15, 16]. Tuloksemme osoittavat, että jakelu tämä epigeneettiset muutos on samanlainen kaikkialla kasvaintyyppeihin mukaan Lauren luokituksen.
Ei löytynyt Merkitsevä yhteys metyloinnin MLH1
ja T- ja N-kriteerit syöpäkudokset missään osassa vatsa. Erillinen analyysi mukaan tuumoripaikkaan osoitti, että epigeneettiset muutos (MLH1
metylaatio) taipumus olla yleisempiä syöpäkudoksen keskeltä kolmanneksen mahaan, kun vaiheessa I-II kasvaimia kuin vaiheessa III kasvaimet (p
= 0,06). Tämä tulos ei ehkä ollut tilastollisesti merkitsevä, koska potilaiden määrä varhaisvaiheen tauti oli suhteellisen pieni.
Olemme löytäneet mitään julkaissut analyysin suhdetta epigeneettiset muutos ja T, N, ja vaihe kriteerit mukaan tuumorikohta vatsassa. Kuitenkin julkaistut tiedot osoittavat, että yleisesti ottaen metylointi MLH1
syöpäsoluissa kudoksissa on havaittu useammin silloin, kun alueellisiin imusolmukkeisiin eivät osallistu [14].
ÄLYPELIT
nopeus metylaation Mgmt
promoottori syöpäkudokset kasvoi ylemmästä alempaan kolmannes mahan (22,2, 30,8, ja 57,6%, tässä järjestyksessä), ja tämä vaikutus on selvempi miespuolisesta väestöstä. Syynä sukupuoli liittyviä eroja on epäselvä, lisätutkimukset ovat tarpeen. Kirjallisuuden mukaan, MGMT
metylaation syöpä- vatsassa kudoksissa vaihtelee 7-61% [13, 25-28]. Tämä suuri vaihtelu voi selittyä sillä, että tämä epigeneettisellä muutos havaitaan useammin distaalinen mahasyöpä kudosta kuin proksimaalisessa sivustoja [18, 29].
Ei löytynyt merkittäviä assosiaatioita MGMT
promoottorin metylaation ja T ja N kriteereitä tai histologinen tyyppi kasvaimen mukaan Lauren luokittelua tahansa tutkitaan vatsan päällä. Menetys ÄLYPELIT proteiinin toiminto liittyy kasvaimen levinnyt imusolmukkeisiin [14, 18], ja myöhemmissä vaiheissa taudin [18, 30]. Tutkimuksessamme potilaiden määrä, joilla varhaisvaiheen tauti oli verrattain pieni, mikä voi selittää havaintoja.
DAPK-1
Tässä tutkimuksessa taajuus DAPK-1
promoottori metylointi ei korreloinut kasvaimen sijainti. Julkaistut tiedot osoittavat, että sen esiintymistiheys vaihtelee 22-91% [28, 31-36]. Saamiemme tietojen, metylaatio DAPK-1
promoottori oli yleisempää suoliston tyyppi mahalaukun adenokarsinoomaa. Tämä oli kuitenkin vain suuntaus, sillä erot eivät olleet merkittäviä (p
= 0,06). Alaryhmäanalyysi mukaan kasvaimen sijainti osoittivat, että taajuus DAPK
promoottorin metylaation oli merkitsevästi suurempi suoliston syöpäkudokset ylempään kolmannekseen vatsaan. Emme löytäneet yhdistysten mainittu kirjallisuudessa välillä DAPK-1
promoottorin metylaation ja kasvaimen luokittelussa Lauren. Tuloksemme tulisi tulkita kriittisesti, koska muutamat potilaat tässä alaryhmässä.
Havaitsimme marginaalinen suuntaus, jossa DAPK-1
metylaatio havaittiin useammin keskellä kolmannes mahan kehittyneempien kasvaimia, mukaan T kriteeri (p
= 0,06). Olemme myös havainneet, että kun apoptoosin liittyvän geenin DAPK-1
oli metyloitavaa syöpäkudokset, kasvain oli todennäköisemmin N3 on TNM luokittelu (kasvainetäispesäkkeiden löytyy ≥ 7 imusolmukkeisiin) kuin N0-2 ( p
= 0,05) ja olla kehittynyt kasvain (vaiheen III sijasta vaiheissa I-II; p
= 0,05). Alaryhmäanalyysi osoitti, että tämä yhdistys tapahtuu syöpäkudokset keskeltä kolmanneksen mahaan (p-0,01), mutta ei ole merkittävä muissa mahan sivustoja. Tutkimus julkaistiin vuonna 2010 osoitti, että metylaatio proapoptoottisten geeni DAPK-1
syöpäsoluissa vatsassa kudoksissa liittyy kasvaimen levisi imusolmukkeisiin [37], mutta emme löytäneet mitään tietoja mainitun tutkimuksen yhdistävät näiden havaintojen eri paikoissa mahasyöpä lokalisoinneissa.
Korrelaatio metylaatiostatuksen analysoitujen geenien
suhteita promoottorin metylaation eri geenien mahasyöpä kudoksissa tutkittiin tutkimuksemme. Ovatko nämä korrelaatiot riippuvat kasvaimen sivustolla? Olemme löytäneet mitään tietoja tieteellisessä kirjallisuudessa koskien korrelaatio MGMT
ja MLH1
promoottori metylaatio vatsassa adenokarsinooma kudoksissa. Tulokset Tutkimuksemme osoittavat, että oli olemassa käänteinen korrelaatio metyloinnin MLH1
ja MGMT
syövän kudoksissa kun kasvain sijaitsi alin kolmannes mahan (kerroin, -0,48; p
= 0,01).
Nämä tulokset eivät ole yllättäviä, koska metylointi kummankin geenin promoottorit useammin havaitaan alemman mahasyöpä kudoksissa [13, 29]. Kuitenkin proteiinien koodattu toimivat eri vaiheissa syövän synnyn. MLH1
promoottori metylaatio useammin havaitaan varhaisessa vaiheessa ja vähemmän aggressiivisia mahalaukun kasvaimet [12-16], kun taas MGMT
promoottori metylaatio on tyypillinen myöhäisen vaiheen mahan adenokarsinooman ja huono ennusteet [18, 19] .
Lisätietoja on saatavissa järjestöstä promoottorin metyloinnin MLH1
ja DAPK-1
. Korkea mikrosatelliittimarkkereita epävakaus korreloi käänteisesti metylaatio DAPK-1
promoottori [12]. Tutkimusryhmämme tunnistettu käänteinen, vaikkakin heikko, korrelaatio promoottorin metylaation DAPK-1
ja MLH1
säännellään mikrosatelliitti toiminto, syöpäsoluissa mahan kudoksissa [20].
Huomasimme myös, että tämä korrelaatio tapahtuu keskimmäiseen kolmannekseen vatsaan. Käänteinen korrelaatio metyloinnin DAPK-1
ja MLH1
tunnistettiin myös syövän kudoksissa näytteet keskimmäisen kolmanneksen vatsaan (kerroin, -0,41; p
= 0,01).
Erityiset rajoitus tässä tutkimuksessa on se, että mitään tietoa mRNA ilmentymistä analysoitiin geenien annettiin. Tiimimme aikoo toteuttaa tätä kvantitatiivinen PCR tulevassa tutkimuksessa. Nykyinen havainnot ovat tärkeitä paitsi siksi ne ulottuvat ymmärrystämme mahasyövän, mutta myös kliinisestä näkökulmasta. On yhä enemmän todisteita siitä, että geenin metylaatio syöpäsoluissa mahalaukun kudoksiin liittyy ero herkkyys kemoterapiaa. Metylointi MLH1
geeni liittyy vastustuskykyä oksaliplatiinipohjaisen kemoterapiaa [38], ja potilailla, joilla on DAPK-1
metylointi osoittavat huonompi vaste fluoropyrimidiinipohjaisen kemoterapiaa [39].
Toivomme, että tutkimus johtaa paremmin ymmärtämään erilaisia ​​reittejä molekyyli syövän syntymistä eri puolilla vatsaan.
Päätelmä
Tutkimuksemme tulokset osoittavat, että epigeneettisestä prosessi, metyloinnin geenin promoottorit, syöpäkudoksessa riippuu sijainnin mahalaukun kasvain.
lyhenteet
bp:
emäsparia
DAPK-1
:
kuolemaan liittyvän proteiinikinaasi 1
LUHSH:
liettua University of Health Sciences sairaalan
M:
metyloitu alleeli


MGMT
:
O 6-metyyliguaniini-DNA-metyylitransferaasi
MC:
positiivinen denaturoidulla kontrolli


MC-:
negatiivinen denaturoidulla kontrolli
MLH1
:
mutL- homologi 1, paksusuolen syöpä, polypoottinen tyypin 2 (E. coli
)
mRNA:
lähetti-RNA
MSP:
metylaatiospesifistä polymeraasiketjureaktio

PCR:
polymeraasiketjureaktio
ROS:
reaktiivisia happiradikaaleja
U :
metyloimaton alleeli
UC:
positiivinen metyloimaton kontrolli
Uc-:
negatiivinen metyloimaton kontrolli

• Ennusteeseen viittaavia ominaisuuksia ja hoitotuloksia sekä hepatoid adenokarsinooma mahalaukussa, harvinainen mutta ainutlaatuinen alatyyppi mahalaukun cancer
• Alkuperä ja evoluution plastisuus mahalaukun umpisuolen vuonna merisiilejä (Echinodermata: Echinoidea)