le profil génétique de méthylation d'un tissu cancéreux gastrique selon le site de la tumeur dans le profil stomach

gène de méthylation d'un tissu cancéreux gastrique selon le site de la tumeur dans l'estomac
Résumé de l'arrière-plan
Il existe beaucoup d'informations sur la méthylation des régions de promoteurs des différents gènes impliqués dans la carcinogenèse gastrique. Cependant, il y a un manque d'information sur la façon dont ce processus épigénétique diffère dans les tumeurs provenant à différents endroits dans l'estomac.
Le but de cette étude est d'évaluer les profils de méthylation de la
MLH1, MGMT
, les échantillons de méthodes et de DAPK-1
gènes dans les tissus cancéreux provenant de différents sites. estomac ont été acquis auprès de 81 patients souffrant d'adénocarcinome de l'estomac qui a subi une intervention chirurgicale pour un cancer gastrique dans l'Université lituanienne de sciences de la santé Hôpital Kaunas Cliniques en 2009 -2012. La méthylation des gènes a été étudiée avec la PCR spécifique de la méthylation. L'étude a été approuvée par le Comité d'éthique de la recherche biomédicale lituanienne.
Résultats
Les fréquences de la méthylation dans les tissus cancéreux de la partie supérieure, moyenne et tiers inférieur de l'estomac étaient de 11,1, 23,1 et 45,4%, respectivement, pour MLH1
; 22,2, 30,8 et 57,6%, respectivement, pour MGMT
; et 44,4, 48,7 et 51,5%, respectivement, pour DAPK-1. La méthylation de MLH1
et MGMT a été observée plus souvent dans le tiers inférieur de l'estomac que dans le tiers supérieur (p
< 0,05).
Dans le tiers médian, DAPK-1
méthylation du promoteur était lié à une maladie plus avancé dans les ganglions lymphatiques (N2-3 comparativement à N0-1 [p
= 0,02]) et le stade tumoral avancé (stade III plutôt que les stades I-II [p =
0,05]). La méthylation de MGMT et MLH1
inversement corrélée lorsque la tumeur est située dans le tiers inférieur de l'estomac (coefficient -0,48; p = 0,01
). La méthylation de DAPK-1
et MLH1 inversement corrélée dans les tumeurs au milieu tiers de l'estomac (coefficient, -0,41; p
= 0,01).
Conclusion
Gene méthylation du promoteur dépend l'emplacement de la tumeur gastrique.
Mots-clés
DAPK-1
MGMT
méthylation Contexte
cancer de l'estomac MLH1
cancer gastrique est un grave problème de santé. L'évolution clinique cachée de la maladie signifie que cette maladie est généralement diagnostiquée dans ses dernières étapes, menant à un mauvais pronostic, malgré les nouvelles possibilités de traitement qui ont émergé récemment.
Plus de 90% des cancers de l'estomac sont diagnostiqués comme adénocarcinome [1 ]. Depuis 1965, l'adénocarcinome gastrique a été divisé en deux types principaux, diffuse et intestinale (selon Lauren [2]). Ces deux types histologiques diffèrent dans leurs étiologies et les pronostics. adénocarcinomes intestinaux et de l'estomac sont souvent la conséquence d'une infection chronique par Helicobacter pylori
, lorsque la muqueuse gastrique normale se transforme en gastrite aiguë tardive chronique, la métaplasie intestinale et la dysplasie [3]. adénocarcinome Diffuse est plus agressif que le type intestinal, parce que sa formation ne dépend pas de processus de gastrite ou métaplasie [4].
données scientifiques récentes montrent que le pronostic de l'adénocarcinome gastrique dépend non seulement de son type histologique, mais aussi sur la localisation de la tumeur dans l'estomac. tumeurs proximales (originaires du cardia), qui forment habituellement en réponse à gastroesophageal acide /reflux biliaire [5], sont maintenant séparés comme une forme distincte et plus agressive de l'adénocarcinome gastrique, qui diffèrent des tumeurs de l'estomac distales. Pourquoi devriez-distal cancer de l'estomac est classé comme unique? Les études de cohorte ont montré que le risque de la condition précancéreuse, appelée «gastrite atrophique», en développement dans le cancer diffère selon le site de la lésion dans l'estomac. Le risque relatif de cancer gastrique chez des patients avec un corps à prédominance gastrite est plus élevé que chez ceux souffrant de gastrite à prédominance antrale [6]. Est-ce que ce fait indiquer différents processus cancérigènes dans l'antre de l'estomac et du corps? Il n'y a pas de données à exclure ou soit confirmer.
Modifications épigénétiques jouent un rôle central dans la carcinogenèse gastrique [7]. Ces procédés, tels que la méthylation des îlots CpG dans les régions promotrices des gènes provoquent des changements structurels réversibles dans l'ADN, ce qui modifient l'expression génique [8]. Méthylation de l'ADN se produit quand un groupe méthyle (-CH 3) est transférée au 5 ème position de la cytosine [9].
Une étude pilote précédente par notre groupe de recherche a montré que la fréquence de méthylation de la MLH1 de promoteur diffère dans les tissus de corpus et de l'estomac antrale touchés par pangastrite. Nous avons remarqué que ce processus épigénétique est significativement plus fréquente dans les tissus de gastrite antraux que dans le corpus [10], alors que le degré de gastrite atrophique est similaire dans les deux régions. On ne sait pas si cette tendance est également vrai des tissus cancéreux.
Deux groupes de gènes ont été sélectionnés pour cette analyse de la méthylation. Le premier groupe (MLH1 et MGMT

) contient deux gènes codant pour des protéines impliquées dans la réparation des mutations et d'autres lésions de l'ADN avant la division cellulaire, et le second groupe contient un gène suppresseur de tumeur (DAPK-1
) codant pour une protéine qui induit l'apoptose en présence d'un défaut génomique sévère.
la
MLH1 (homologue 1 mutL, le cancer du colon, type 2 sans polypose (E. coli
)), le gène se produit au 3p21 .3 locus. La protéine codée par le gène identifie les erreurs d'ADN qui apparaissent après la réplication. Hyperméthylation du promoteur de la MLH1, et non pas des changements de mutation causée dans la fonction de la protéine, est responsable de l'instabilité des microsatellites dans le cancer gastrique [11]. Selon la littérature, MLH1 de la méthylation est responsable de la forme intestinale du cancer gastrique et le stade précoce de la maladie [12-16].
La fonction de MGMT (O 6-méthylguanine-DNA- méthyltransférase) est de supprimer le groupe alkyle de l'O 6 position guanine [17]. La perturbation de la fonction de MGMT peut provoquer l'apparition de mutations. Les publications scientifiques indiquent que la méthylation du MGMT promoteur de gène est l'une des voies pathogéniques dans le cancer gastrique. En particulier, la méthylation du gène est attribuée à un stade avancé de la maladie [18], et est également attribué au pronostic de la maladie les plus pauvres [19].
Le DAPK-1
(mort-associated protein kinase 1) gène est l'un des trois gènes de la famille
DAPK codant pour calcium /serine threonine protéine-kinases calmoduline-dépendante. La fonction de la protéine DAPK-1 est étroitement liée aux différentes voies de l'apoptose et DAPK-1
hyperméthylation a été démontré que de se produire dans les tumeurs solides et hématologiques.
Cancer gastrique ne sont pas une exception. promoteur de méthylation des gènes est également typique des adénocarcinomes à cet endroit. Dans une étude antérieure, notre groupe a trouvé une association inverse entre DAPK-1
et MLH1 de la méthylation [20]. Nous testons ici l'hypothèse que les profils de méthylation de gènes différents se produisent dans les tissus cancéreux dans l'estomac, selon le site de la tumeur (en haut, au milieu ou tiers inférieur).
Méthodes
L'étude a été approuvée par le Bureau régional Biomedical lituanien Comité d'éthique de la recherche. Tous les patients ont signé un formulaire de consentement éclairé. Les patients traités à l'Université lituanienne de l'Hôpital des sciences de la santé (LUHSH) Kaunas Cliniques en 2009-2012 ont participé à l'étude. des échantillons de tissus de l'estomac ont été prélevés sur tous les sujets avec morphologiquement confirmé adénocarcinome de stade I-III. La population étudiée était composée de 81 patients (34 hommes et 47 femmes) avec un âge médian de 68 ans (extrêmes 23-87 ans; écart-type [SD] 11.75). Les tumeurs des neuf patients étaient dans le tiers supérieur de l'estomac, ceux des 39 patients étaient dans le troisième milieu, et ceux des 33 patients étaient dans le tiers inférieur de l'estomac. Les échantillons de tissus de l'estomac ont été prélevés sur les sites tumoraux pendant la chirurgie. Ces matières ont été immédiatement congelés dans de l'azote liquide et stockés à -80 ° C jusqu'à l'analyse. Au cours de l'étude, les données cliniques des patients (âge au moment du diagnostic, le sexe) et de données morphologiques (invasion tumorale selon la classification TNM, type histologique selon la classification de Lauren, et le degré de différenciation en fonction de la classification de l'Organisation mondiale de la santé) ont été obtenues à partir des dossiers médicaux.
réaction en chaîne par polymérase spécifique de la méthylation (MSP)
ADN a été extrait de 25 à 30 mg de tissu congelé en utilisant l'ADN génomique ZS ™ Tissue Kit Mini-Prep (Zymo Research, USA), selon l' les instructions du fabricant. L'état de méthylation de la
MLH1, MGMT
et DAPK-1
promoteurs a été déterminée en traitant l'ADN avec du bisulfite, en utilisant le système EZ DNA Méthylation or ™ Kit (Zymo Research), selon les instructions du fabricant . L'ADN génomique humain à partir de lymphocytes du sang périphérique, traités par le bisulfite, a été utilisé comme témoin négatif. L'ADN génomique humain traité in vitro avec
SssI méthyltransférase (New England Biolabs, Royaume-Uni) a été utilisé comme témoin positif. L'état de méthylation des promoteurs a été détectée avec MSP.
Les amorces pour les séquences d'ADN méthylés et non méthylés sont répertoriés dans le tableau 1. La PCR a été effectuée dans un volume réactionnel total de 20 ul, contenant 10 ul de PCR Hot Start Maxima® master Mix avec de l'ADN Polymerase de Hot Start Taq (Thermo Fisher Scientific, États-Unis) et 10 uM de chaque amorce (Metabion international AG, Allemagne). MSP a été effectuée pendant 38-40 cycles de dénaturation à 94 ° C pendant 30 s, annelage pendant 1 minute à la température appropriée pour le gène individuel, et extension à 72 ° C pendant 1 min. Les produits de PCR ont été séparés par électrophorèse sur gel d'agarose à 3,5% (Fig. 1). Lorsque les deux signaux méthylés et non méthylés sont apparus sur un gel, le gène a été considéré comme methylated.Table 1 Amorces utilisées pour
séquence Forward Primer de nom de MSP de
inversée séquence

numéro de référence
MLH1
méthylé
TATATCGTTCGTAGTATTC [GenBank: NG_0071092]
TCCGACCCGAATAAACC
[40]
méthylé
TTTTGATGTAGATGTTTTATTAGGGT
MLH1 [GenBank: NG_0071092 ]
TACCACCTCATCATAACTACC
[40]
MGMT
méthylé
TTTCGACGTTCGTAGGTTTTCGC [GenBank: NG_000010.11]
GCACTCTTCCGAAAACGAAAC G
[40]
MGMT
méthylé
TTTGTGTTTTGATGTTTGTAGGTTTTTGT [GenBank: NG_000010.11]
AACTCCACACTCTTCCAAAAACAAAACA
[40]
DAPK-1
méthylé
GGATAGTCGGATCGAGTTAACGTC [GenBank: NG_029883.1]
CCCTCCCAAACGCCG A
[ ,,,0],40]
DAPK-1
méthylé GGAGGATAGTTGGATTGAGTTAATGTT [GenBank: NG_029883.1]
CAAATCCCTCCCAAACACCAA
[40]
pb
paires de bases
Fig. 1 Des échantillons représentatifs de MSP analyses d'échantillons d'ADN prélevés sur les tissus cancéreux de l'estomac
analyse des données mathématiques-statistiques
analyse de données statistique a été réalisée avec le logiciel SPSS Statistics 19 (IBM SPSS Inc., USA). propriétés quantitatives ont été décrites par la moyenne arithmétique et l'écart type. t de Student
-test a été utilisé pour vérifier l'hypothèse de moyens égaux. Le χ
2 critère et le test exact de Fisher ont été utilisés pour vérifier l'hypothèse statistique de l'indépendance de deux variables. Les corrélations entre les variables ont été évaluées par le calcul du coefficient de Spearman. p
< Résultats de 0,05 a été jugé significatif.
Les fréquences de méthylation du promoteur dans les tissus cancéreux de la partie supérieure, moyenne et tiers inférieur de l'estomac étaient de 11,1, 23,1 et 45,4%, respectivement, pour le gène de la MLH1; 22,2, 30,8 et 57,6%, respectivement, pour le gène de MGMT
; et 44,4, 48,7 et 51,5%, respectivement, pour la DAPK-1
gène. Méthylation du
MLH1 et les gènes MGMT de a été observée plus souvent dans le tiers inférieur de l'estomac que dans le tiers supérieur (p
< 0,05).
Les données détaillées sont données dans le tableau 2 . Une analyse de sous-groupe basée sur le sexe ont révélé que MLH1 de la méthylation dans les tissus du cancer du tiers inférieur estomac était typique de la population féminine (p
= 0,01), alors que la méthylation MGMT était seulement statistiquement significative le groupe de sexe masculin (p
= 0,03). Les raisons de ces résultats ne sont pas clairs, et nécessitent une analyse et d'autres études détaillées. La méthylation de promoteur des gènes analysés n'a pas été lié au patient age.Table 2 Distribution de MLH1, MGMT
et DAPK-1
méthylation dans les tissus gastriques cancéreuses selon le site de l'estomac

Estomac tiers supérieur les tissus cancéreux (9 patients) M /U
estomac tissu milieu tiers cancéreux (39 patients) M /U
estomac tiers inférieur tissus cancéreux (33 patients) M /U

p valeur
MLH1
1/8
9/30
15/18
0.05
MGMT
2/7
12/27
19/14
0,01
DAPK-1
4/5
19/20
17/16
0,93
M allèle méthylé, U
allèle non méthylé
les deux principales catégories de classification histologique - types intestinaux et diffuses de tumeurs - refléter la différenciation de la tumeur et la tendance des cellules cancéreuses de proliférer et de propagation . Par conséquent, nous avons évalué les associations possibles entre les distributions de fréquence des DAPK-1
, MLH1
et MGMT de la méthylation et la classification de la tumeur morphologique Lauren. Les résultats sont présentés dans le tableau 3. Parce que seul un petit nombre de patients avait confirmé histologiquement de type mixte adénocarcinome selon la classification Lauren (n
= 7), ce groupe a été affecté à la forme diffuse plus agressive de la maladie. Tableau 3 Répartition des MLH1, MGMT, DAPK-1
méthylation selon le site de la tumeur et les caractéristiques pathologiques

MLH1 M /U
MGMT M /U

tumoraux paramètres histologiques>
de DAPK-1
estomac tiers supérieur des tissus cancéreux
estomac tissu cancéreux milieu tiers

estomac tiers inférieur tissus cancéreux
estomac tissu cancéreux tiers supérieur
estomac milieu tiers tissu cancéreux
estomac tiers inférieur tissus cancéreux
estomac tiers supérieur des tissus cancéreux
estomac tissu cancéreux milieu tiers
estomac tiers inférieur tissus cancéreux
Type Intestinal
0/3
6/16
7/10
1/2
5/17
8/11
3/0
12/10
10/7
diffuse Type
1/5
3/14
8/8 1/5

7/10
11/5
1/5
7/10
7 /9
p
value
0.45
0.48
0.61
0.57
0.22
0.21
0.02
0.41
0.39
T1
0/1
1/2
2/4
0/1
1/2
4/2
1/0
2/1
4/2
T2
0/2
2/2
2/3
0/2
1/3
3/2
1/1
0/4
3/2
T3
0/2
5/11
8/9
1/1
4/12
10/7
1/1
6/10
7/10
T4
1/3
1/15
3/2
1/3
6/10
2/3
1/3
11/5
3/2
p
value
0.7
0.17
0.83
0.62
0.88
0.84
0.59
0.06
0.67
N0
0/4
5/9
6/4
2/2
4/10
5/5
3/1
4/10
6/4
N1
0/2
2/4
3/5
0/2
2/4
5/3
0/2
2/4
4/4
N2
0/2
1/6
3/2
0/2
1/6
3/2
1/1
2/5
1/4
N3
1/0
1/11
3/7
0/1
5/7
6/4
0/1
11/1
6/4
p
valeur
allèle méthylé de 0,29
0,33
0,48
0,36
0,66
0,95
0,27
0,01
0,46
M , U
allèle non méthylé
Selon nos données, la méthylation des DAPK-1
promoteur était plus fréquente dans le type intestinal adénocarcinome gastrique. Cependant, ce fut simplement une tendance parce que les résultats ne sont pas statistiquement significative (p = 0,06
). Une analyse de sous-groupes en fonction de l'emplacement de la tumeur a montré que la fréquence des DAPK-1
méthylation de promoteur est liée de manière significative au tissu cancéreux intestinal lorsque la tumeur a été détectée dans le tiers supérieur de l'estomac (p
= 0,02; Tableau 3). Aucune association n'a été identifiée entre la méthylation de MLH1
ou MGMT
et le type de tumeur selon la classification Lauren.
Nous avons également analysé l'association entre la fréquence de méthylation des mêmes gènes et l'invasion de la tumeur dans la paroi de l'estomac (catégorie T). La méthylation des gènes MLH1
et MGMT
n'a pas été associés à la catégorie T de la classification TNM du tissu cancéreux dans une partie de l'estomac. méthylation plus fréquente de DAPK-1
a été observée dans les tumeurs avancées dans le tiers médian de l'estomac, mais cela n'a pas été statistiquement significative (p = 0,06
), bien que cette tendance devrait être étudiée à l'avenir.
la corrélation entre le promoteur du gène méthylation et l'envahissement ganglionnaire a été analysé, mais n'a révélé aucune association significative entre la méthylation du
MLH1 et MGMT de promoteurs et le statut tumoral ganglionnaire. Cependant, le gène lié à l'apoptose DAPK-1
était plus souvent méthylé dans les tissus cancéreux dans la catégorie N3 de la classification TNM (lorsque les métastases tumorales se trouve dans ≥ 7 ganglions lymphatiques régionaux) que chez ceux du N0-2 catégorie (p
= 0,05). Une analyse de sous-groupes ont montré que cette association était significative dans les tissus cancéreux du tiers moyen de l'estomac (p
= 0,01).
Lorsque les tumeurs ont été classées selon le système TNM, nous avons trouvé aucune association entre le méthylation de ces gènes et le stade de la tumeur. Cependant, une analyse plus précise des sous-groupes a montré que la méthylation du promoteur du MLH1 a eu tendance à être plus fréquentes dans les tissus cancéreux dans le tiers médian de l'estomac dans les tumeurs de stade I-II que dans les tumeurs de stade III (p
= 0,06). changements épigénétiques dans le gène de la DAPK ont été détectés significativement plus fréquemment dans les tissus cancéreux gastrique du tiers médian de l'estomac au stade III tumeurs que dans les tumeurs de stade I-II (p
= 0,05).
Les résultats de notre étude indiquent une corrélation inverse entre la méthylation du
MLH1 et les gènes MGMT dans les tissus du cancer de l'estomac lorsque la tumeur est située dans le tiers inférieur de l'estomac (coefficient -0,48; p = 0,01
). Discussion de et MLH1
a également été démontré dans le tissu cancéreux dans le tiers médian de l'estomac (p = 0,01
coefficient, -0.41).> MLH1

d'après la littérature, la fréquence de MLH1 de la méthylation dans les tissus gastriques cancéreuses varie de 14 à 43% [12-16]. Ces grandes variations dans la fréquence des MLH1 de la méthylation peuvent être attribués aux différentes régions géographiques considérées dans les études particulières. La distribution anatomique des sites tumoraux de l'estomac est connu pour varier dans différentes régions géographiques. Dans les régions où l'incidence de l'infection à H. pylori est élevée (Europe de l'Est, en Asie de l'Est), le cancer gastrique noncardial ou distal est diagnostiqué le plus souvent. Toutefois, en Europe occidentale et du Nord, où le nombre de H. pylori
personnes infectées est très faible, le nombre de cancers gastriques proximales est élevé. La littérature scientifique rapporte que la méthylation du promoteur de MLH1 dans les tissus du cancer de l'estomac est fortement liée au facteur de virulence de la bactérie H. pylori codée par le gène
vacs1 [21]. Ce gène, qui est généralement détectée dans le génome bactérien, provoque une réponse inflammatoire plus forte intensité et est lié à un risque accru de cancer de l'estomac chez les patients souffrant de gastrite atrophique [22]. une inflammation chronique de la muqueuse gastrique, qui est caractérisée par l'infiltration de la muqueuse des leucocytes polynucléaires, les macrophages et les lymphocytes T et B, conduit à la libération d'espèces réactives de l'oxygène (ROS) à partir de cellules inflammatoires activées. ROS induire des dommages de l'ADN et l'absence d'un bon fonctionnement du système de réparation des mésappariements [23]. Ceci est un processus en plusieurs étapes qui dépend de l'intensité de l'inflammation. La méthylation du promoteur du MLH1 se produit dans un stade tardif de la gastrite atrophique, la métaplasie intestinale [10, 24].
Cette constance est également étayée par des données provenant d'une étude des patients en provenance d'Europe de l'Ouest et du Nord [13] . Près d'un tiers des patients ont été diagnostiqués avec proximale (cardia) cancer gastrique, et la fréquence de MLH1 de la méthylation était de 14,2%. Ce changement épigénétique est également plus fréquemment détectée dans les tissus cancéreux gastrique distal [13]. Les résultats de notre étude montrent que l'apparition de MLH1 de la méthylation dans l'estomac augmente de tissus cancéreux du tiers supérieur et au milieu de l'estomac pour le tiers inférieur, et a été de 11,1, 23,1 et 45,4%, respectivement. Comme dans la littérature, nous avons également montré que cette modification épigénétique se produit beaucoup plus souvent dans le tiers inférieur de l'estomac que dans sa troisième proximale, et cet effet est plus prononcé dans la population féminine. La raison de différences liées au sexe ne sait pas, d'autres investigations sont nécessaires.
Certaines données indiquent que la méthylation du promoteur du MLH1 est détecté de manière significative plus fréquemment dans les tissus de l'estomac cancéreuses de type intestinal (selon la classification de Lauren) que dans le type diffus [15, 16]. Nos résultats montrent que la distribution de ce changement épigénétique est similaire pour tous les types de tumeurs selon la classification de Lauren.
Nous avons trouvé aucune association significative entre la méthylation de MLH1
et T et N critères pour les tissus cancéreux dans une partie de la estomac. Une analyse distincte selon le site de la tumeur a montré que le changement épigénétique (MLH1
de méthylation) avaient tendance à être plus fréquentes dans les tissus cancéreux du tiers médian de l'estomac lors de tumeurs de stade I-II que dans la phase III des tumeurs (p
= 0,06). Ce résultat peut ne pas avoir été statistiquement significative parce que le nombre de patients atteints de la maladie à un stade précoce a été relativement faible.
Nous avons trouvé aucune analyse publiée de la relation entre ce changement épigénétique et le T, N, et les critères de scène en fonction de la site de la tumeur dans l'estomac. Toutefois, les données publiées indiquent que, en général, la méthylation de MLH1
dans les tissus cancéreux est détectée plus souvent lorsque les ganglions lymphatiques régionaux ne sont pas impliqués [14].
MGMT
Le taux de méthylation de le promoteur de MGMT dans les tissus cancéreux est passé de la partie supérieure du tiers inférieur de l'estomac (22,2, 30,8 et 57,6%, respectivement), et que cet effet est plus prononcé dans la population masculine. La raison de différences liées au sexe ne sait pas, d'autres investigations sont nécessaires. D'après la littérature, MGMT de méthylation dans les tissus cancéreux de l'estomac varie de 7 à 61% [13, 25-28]. Cette grande variation pourrait être expliquée par le fait que ce changement épigénétique est détecté le plus souvent dans les tissus de cancer de l'estomac distale que sur les sites proximaux [18, 29].
Nous avons trouvé aucune association significative entre le promoteur de la méthylation de MGMT et le T et N critères ou le type histologique de la tumeur selon la classification de Lauren sur un site de l'estomac étudié. La perte de la fonction de la protéine MGMT est liée à une tumeur propagé aux ganglions lymphatiques [14, 18] et les stades avancés de la maladie [18, 30]. Dans notre étude, le nombre de patients atteints de la maladie à un stade précoce a été relativement faible, ce qui pourrait expliquer nos résultats.
DAPK-1
Dans cette étude, la fréquence des DAPK-1
méthylation du promoteur ne sont pas corrélés avec l'emplacement de la tumeur. Les données publiées montrent que la fréquence varie de 22 à 91% [28, 31-36]. Selon nos données, la méthylation des DAPK-1
promoteur était plus fréquente dans le type intestinal de l'adénocarcinome gastrique. Cependant, ce fut simplement une tendance parce que les différences ne sont pas significatives (p = 0,06
). Une analyse de sous-groupes en fonction de l'emplacement de la tumeur a montré que la fréquence du promoteur de la méthylation de DAPK était significativement plus élevé dans les tissus cancéreux intestinaux dans le tiers supérieur de l'estomac. Nous avons trouvé aucune association mentionnés dans la littérature entre DAPK-1
méthylation du promoteur et de la classification de la tumeur selon le Lauren. Nos résultats doivent être interprétés de manière critique en raison des quelques patients de ce sous-groupe.
Nous avons noté une tendance marginale dans laquelle DAPK-1
méthylation a été détectée plus souvent dans le tiers médian de l'estomac dans les tumeurs plus avancées, selon le critère T (p = 0,06
). Nous avons également constaté que, lorsque le rapport avec l'apoptose gène DAPK-1
a été méthylé dans les tissus cancéreux, la tumeur était plus susceptible d'être N3 sur la classification TNM (métastases tumorales trouvés dans ≥ 7 ganglions lymphatiques régionaux) que N0-2 ( p
= 0,05) et d'être une tumeur avancé (stade III plutôt que les stades I-II; p
= 0,05). Une analyse de sous-groupes ont montré que cette association se produit dans les tissus cancéreux du tiers médian de l'estomac (p 0,01), mais ne sont pas significatifs sur d'autres sites de l'estomac. Une étude publiée en 2010 a montré que la méthylation du gène pro-apoptotique DAPK-1
dans les tissus de l'estomac cancéreuses est liée à la propagation de la tumeur aux ganglions lymphatiques [37], mais on n'a pas trouvé d'informations dans l'étude mentionnée reliant ces résultats à différents sites de localisations de cancer de l'estomac.
corrélation entre le statut de méthylation des gènes analysés
les relations entre la méthylation de promoteur des différents gènes dans les tissus du cancer de l'estomac ont été examinés notre étude. Est-ce que ces corrélations dépendent du site de la tumeur? Nous avons trouvé aucune information dans la littérature scientifique concernant la corrélation du promoteur de la méthylation de MGMT
et MLH1 dans les tissus d'adénocarcinome de l'estomac. Les résultats de notre étude indiquent qu'il y avait une corrélation inverse entre la méthylation de MLH1
et MGMT
dans les tissus cancéreux lorsque la tumeur a été localisé dans le tiers inférieur de l'estomac (coefficient, -0,48; p
= 0,01).
Ces résultats ne sont pas surprenants, car la méthylation des deux promoteurs de gènes est plus souvent détectée dans les tissus cancéreux inférieur estomac [13, 29]. Cependant, les protéines codées agissent à différents stades de la cancérogenèse. promoteur de la méthylation de MLH1 est plus souvent détecté dans les premiers stades et dans les tumeurs gastriques moins agressives [12-16], alors que le promoteur de la méthylation de MGMT est plus typique des adénocarcinomes de l'estomac à un stade avancé et un mauvais pronostic [18, 19] .
Plus d'informations sont disponibles sur l'association entre la méthylation du promoteur de MLH1
et DAPK-1
. l'instabilité microsatellite haute corrélation inverse avec la méthylation de l'DAPK-1
promoteur [12]. Notre groupe de recherche a identifié un inverse, quoique faible, corrélation entre la méthylation du promoteur du DAPK-1
et MLH1
, régulation de la fonction microsatellite, dans les tissus de l'estomac cancéreuses [20].
Nous avons également constaté que cette corrélation se produit dans le tiers médian de l'estomac. Une corrélation inverse entre la méthylation de DAPK-1
et MLH1
a également été identifié dans les tissus cancéreux prélevés dans le tiers médian de l'estomac. (Coefficient, -0,41; p = 0,01
)
La spécifique limitation de cette étude est que aucune information sur l'expression de l'ARNm des gènes analysés a été fourni. Notre équipe prévoit d'entreprendre ce par PCR quantitative dans une étude future. Les résultats actuels sont importants non seulement parce qu'ils étendent notre compréhension de la cancérogenèse gastrique, mais aussi du point de vue clinique. Il y a un nombre croissant de preuves que la méthylation des gènes dans les tissus gastriques cancéreuses est associée à une sensibilité différentielle à la chimiothérapie. La méthylation du gène de la MLH1 est liée à la résistance à la chimiothérapie à base d'oxaliplatine [38], et les patients avec DAPK-1
méthylation montrent une réponse pire à la chimiothérapie à base de fluoropyrimidine [39].
Nous espérons que notre étude permettra de mieux comprendre les différentes voies de la cancérogenèse moléculaire dans différentes parties de l'estomac.
Conclusion
Nos résultats de l'étude montrent qu'un processus épigénétique, la méthylation des promoteurs de gènes, dans les tissus cancéreux dépend sur l'emplacement de la tumeur gastrique
abréviations
pb:.
paires de bases
DAPK-1
:
mort-associés protéine kinase 1
LUHSH:
Université lituanienne de l'Hôpital des sciences de la santé
M:
allèle méthylé


MGMT
:
O 6-méthylguanine-ADN-méthyltransférase
MC:
contrôle positif méthylé

MC-:
contrôle méthylé négatif
MLH1
:
mutL homolog 1, le cancer du côlon, le type de polypose 2 (E. coli
)
ARNm:
ARN messager
MSP:
spécifique de la méthylation réaction en chaîne par polymérase

PCR:
réaction en chaîne par polymérase
ROS: espèces réactives de l'oxygène

U :
allèle méthylé
UC:
contrôle positif méthylé
UC-:
négatif non méthylé contrôle

• caractéristiques et les résultats du traitement de l'adénocarcinome hepatoid de l'estomac clinicopathologiques, un sous-type rare mais unique du cancer gastrique
• Origine et plasticité évolutive du caecum gastrique chez les oursins (Echinodermata: Echinoidea)