Plos ONE: kanabinoide HU210 Ščiti izolirano podganjo želodec proti oslabitve, ki jih serum je povzročil podgane z eksperimentalno akutno Pancreatitis

Povzetek

Akutni pankreatitis (AP), še posebej hudo akutno vnetje trebušne slinavke, pogosto povzroča dodatne, trebušne slinavke zapletov, kot so akutna gastrointestinalne sluznice (AGML), ki je skupaj s precej visoko stopnjo umrljivosti, vendar je patogeneza AP-inducirane AGML še vedno ni povsem jasen. V tem poročilu smo raziskovali spremembe komponent v serumu in želodca, endokrine in exocrine funkcij pri podganah z eksperimentalno akutnega pankreatitisa, in raziskali možne prispevke teh sprememb v patogenezo AGML. Poleg tega smo raziskali intervencijskih učinke agonisti kanabinoidnih receptorjev HU210 in antagonista AM251 na izoliranem in serumu škropili rat želodec. Naši rezultati so pokazali, da AGML prišlo po 5 urah replikacije AP in telo homeostaze je motena v AP podganah, ko se poveča encimov trebušne slinavke, lipopolisaharid (LPS), proinflammtory citokinov in Kemokini v krvi, in neravnovesje želodca funkcija izločanje. Perfundirajo izoliranega podgane želodec s podganjim seruma AP povzročil morfološke spremembe v želodcu, skupaj z velikim prirastkom pepsina in [H ^{+] sproščanje in povečano gastrina in zmanjšano izločanje somatostatinski. HU210 razveljavilo podgana patoloških sprememb AP-serumskih inducirano, vključno z odpravo preoblikovanja želodčni morfologije do določene mere. Rezultati te študije dokazujejo, da so vnetnih in neravnovesje želodčne sekrecije med razvojem AP odgovoren za patogenezo AGML, in predlagamo terapevtski potencial HU210 za AGML, povezanih z akutnim pankreatitisom.}

citat: Cao Mh, Li YY, Xu J, Feng Yj, Lin XH, Li K, et al. (2012) kanabinoide HU210 Ščiti izolirano podganjo želodec proti oslabitve, ki jih serum je povzročil podgane z eksperimentalno akutnega pankreatitisa. PLoS ONE 7 (12): e52921. doi: 10,1371 /journal.pone.0052921

Urednik: Vinod K. Yaragudri, Nathan Kline Inštitut za psihiatrijo raziskave in New York School of Medicine, Združene države Amerike

Prejeto: 9. maj 2012; Sprejeto: 21. november 2012; Objavljeno: 28. december 2012

Copyright: © 2012 Cao et al. To je odprtega dostopa članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

Financiranje:. To delo je podprl Nacionalni Natural Science Foundation Kitajske (Grant No. 81270477 in 81141050 dr Yong-yu Li). http://www.nsfc.gov.cn/. Med financerji imel nobene vloge pri oblikovanju študije, zbiranje in analizo podatkov, sklep, da se objavi, ali pripravi rokopisa

nasprotujočimi si interesi.. Avtorji so izjavili, da ne obstajajo konkurenčni interesi

Uvod

Akutni pankreatitis (AP), še posebej huda AP, je lahko smrtna vnetna bolezen trebušne slinavke, ki pogosto privede do dodatnih-trebušne zaplete, celo več sistemskih disfunkcij organov. Ugotovljeno je bilo, da je 52% bolnikov z akutnim pankreatitisom razvoj akutne gastrointestinalne sluznice (AGML) ali stresni ulkus [1], [2]. Čeprav je endoskopski opazovanja kažejo, da ima večina predmetov zgolj več plitve razjede v prebavnem traktu, optimalna farmakološko posredovanje je še vedno stvar razprave, in patogeneza AGML ostaja nejasna.

Nekateri raziskovalci poročajo, da stresno stanje z akutnim pankreatitisom povzroči zmanjšano prekrvavitev in hipoperfuziji v želodčni sluznici, kot tudi posredno širjenje želodca vodikovih ionov (H ^{+) je pomemben dejavnik za AGML tudi [3], [4]. Druge preiskave ugotovili, da serum in ascitic tekočina iz bolnikov AP in poskusnih živalih vsebuje velike količine strupenih snovi, kot na primer encimov trebušne slinavke, endotoksini, vnetnih mediatorjev [5] [6], ki lahko prispevajo k več motenj od organov v akutni pankreatitis [7], [8].}

že stoletja, konoplja rastlina in njeni ekstrakti so bili uporabljeni za lajšanje simptomov gastrointestinalnih vnetnih bolezni. Ugotovljeno je bilo, da je D ^{9-tetrahidrokanabinol, glavna psihoaktivna sestavina konoplje, doseže svoj primarni celični ukrepe, čeprav sta G-protein povezan receptorji, Kanabinoidni 1 (CB1) in Kanabinoidni 2 (CB2) receptorje [9] - [ ,,,0],11]. Od takrat so bili ti dve receptorji priznana kot glavnih regulatorjev fizioloških in patoloških procesov [12]. Kanabinoidov lahko zmanjšajo gastrointestinalno izločanje [13], in aktivacija CB1 receptorja kaže zaščitno vlogo pred stresom povzročene AGML [14], [15], vendar so mehanizmi njihovega delovanja še vedno nedosegljiva.}

Cilj izmed Diplomsko delo je bil raziskati, ki jih tako in vivo ter in vitro poskusih, spremembe v serumskih komponent, so spremembe v želodčnih endokrinih in exocrine funkcij v rat AP modela, in morebitni prispevki teh sprememb v patogenezo AGML. zaznati tudi bili na interventno učinke CB1 z njenim agonistom HU210 in antagonist AM251, v prizadevanju, da bi bolje razjasni patofiziološke mehanizme AP-povezano AGML in zdravljenje peptične razjede potenciale teh kanabinoidne agentov.

Materiali in metode

živali

Sprague-Dawley (220-250 g) smo pridobili iz poskusnega centra živali za Fudan University, Šanghaj, Kitajska. Pred poskusi so vse živali nastanjene 1 teden pod standardnimi pogoji s prostim dostopom do vode in laboratorijsko večerjo. Spodaj vsi eksperimentalni postopki so bili v dogovoru z mednarodnimi smernicami za nego in uporabo laboratorijskih živali in so bili potrjeni Odbor za živali etiko Tongji University, Šanghaj, Kitajska.

Indukcija akutnega pankreatitisa pri podganah

podgane smo naključno razporejenih v dve skupini: AP in lažno-obratovanje stroja z 24 živali v vsaki skupini. Podgane smo postili preko noči samo z vodo dovoljena pred operacijo. AP model je bil induciran z metodo, ki jo Aho et al [16] razvit. Na kratko, podgane dobil laparotomijo (~3 cm trebuhu-Sredinsko incizijo) po standardni aseptični postopek in v splošni anesteziji z intraperitonealno injekcijo v višini 20% etil karbamata na 10 ml /kg. Biliopancreatic vod je začasno zamašena na hilum jeter s finim mehko mikrovaskularno spone za preprečevanje refluksa infundiramo materiala v jetrih. Retrogradno injekcijo 3% natrijev deoksiholat v biliopancreatic vod smo nato izvedli (0,1 ml /100 g telesne teže). Sponko smo odstranili po injekciji. Sham-operacija je bila ustrezno izvedena brez priliva natrijev deoksiholat, in operacija je bila sklenjena s trebušno stratificiran zapiranje. Na peti uri po operaciji je bila kri, zbrane iz trebušne aorte punkcijo pod anaesthetization. Vse vzorce krvi smo centrifugirali in zberemo supernatantno tekočino (serum), alikvote in shranili pri -20 ° C nadaljnjih aplikacij. Trebušna slinavka smo odstranili, razdeljen na dva dela, in en del je bila dana v TRIzola takoj in shranimo pri -20 ° C za analizo genechip, saj je drugi del pritrjen s 10% paraformaldehid. Želodec je bil odstranjen tudi odprli ob veliki krivulje in omejeno z 10% paraformaldehidom za posledično patološko preiskavo.

histološki Ocena

Histološka preiskava je bila izvedena na rat trebušne slinavke in želodca, ki so bili določeni v 10% paraformaldehid in vdelali v parafin. Nato je bilo 5 mikrometrov debelina sekcije narezan na Leica RM2126 mikrotom (Leica, Šanghaj, Kitajska) in obarvane s hematoksilinom (0,5%) in eozinom (0,5%), nato z opazovanjem pod MOTIC BA300 mikroskopom (MOTIC China Group Co Ltd ., Xiamen, Kitajska). Histološki Točkovanje je bila ocenjena na trebušne slinavke odsekih s spreminjajočim se merila iz Nathan JD, et al [17]. Vrednotenje je bil vložen v desetih naključno izbranih mikroskopskih polj diapozitivov vsaka žival je, in ponavlja v treh podgan /skupine v slepi način. In celotni histološke rezultat (0-9) je bila izražena kot vsota edema (0-3), celične infiltracije vnetnih (0-3), in tkivne nekroze (0-3).

Mikromrežni Hibridizacija Vsebnost

uporabo analize mikromrež smo uporabili za identifikacijo pri prepisovanju profile nekaterih vnetnih indeksi v trebušni slinavki od podgane s akutnega pankreatitisa. Array hibridizacije so bile izvedene na treh bioloških paralelk vzorcev RNA, pridobljenih iz trebušne slinavke AP in kontrolnih podganah. priprava Probe, čip hibridizacija in primarno analizo podatkov smo izvedli Capital Bio Corporation (podjetje licencirano in Affymetrix dovoljenje za delovanje v Pekingu, Kitajska). Polja so skenirane z Genechip Scanner 3000 7G (Affymetrix, Santa Clara, CA, ZDA). Kvantitativna analiza je bila opravljena s pomočjo Affymetric mikromrež Suite 5.0 Posebni pogoji (statističnih algoritmov) gcos (Affymetrix GeneChip operacijskega Software) Verzija 1.4. Različno izražene gene smo identificirali s pomočjo SAM programske opreme (Znaten Analiza mikromrež), in izberejo na podlagi njihovih kratnih sprememb (> 2-krat) v primerjavi s kontrolnimi osebki

Imunohistokemija Analiza
.

Imunohistokemija madeži na parafinskih oddelkih podganjega želodca in trebušne slinavke so bile izvedene s pomočjo zajec poliklonsko anti-CB1 in anti-CB2 protitelesa (Cat št. ALX-210-314 za anti-CB1 in mačka ne. ALX-210-315 za anti-CB2, Enzo, Plymouth Meeting, PA, ZDA), kot smo že prej opisali [18]. Drsniki z oddelki podganjega želodca in trebušne slinavke inkubiramo preko noči pri 4 ° C z anti-CB1 ali anti-CB2 protiteles, in-biotina označeni kozji anti-rabbit IgG obdelovalne tekočine (kat št. SP0023; biosintezo Biotechnology Co Ltd. ., Peking, Kitajska) smo nato nanesli na vsako stekelce in inkubiranih pri 37 ° C za 15 minut, čemur sledi inkubacija s HRP-označenega delovne raztopine streptavidinom pri 37 ° C 15 minut in drsi temeljito splaknemo. Končno, diapozitivi so DAB-obarvajo in jedrske ponovno obarvali s hematoksilinom. Diapozitivi za negativno kontrolo smo obdelali po enakih korakih, vendar primarno protitelo bil nadomeščen s PBS. analiza slik smo izvedli z uporabo digitalnega MOTIC sredozemskega sistema za analizo 6,0 slike. (MOTIC; China Group Co Ltd, Xiamen, Kitajska)

Western blot za merilne CB1 in CB2 Expression

CB1 in CB2 protein izraz v trebušni slinavki in želodcu so bile ocenjene z western blot. Kot je bilo že opisano v [19], po inkubaciji s primarnimi protitelesi v posamezno 1:250 redčenje (kunčje poliklonalno anti-CB1 in anti-CB2 protitelesa, Cat no:.. ALX-210-314 za anti-CB1 in mačka ne: ALX-210-315 anti-CB2, Enzo, Plymouth zasedanju, PA, ZDA), so osušili nitro membrane (Whatman, Dassel, Nemčija) temeljito sprati in ustrezno sekundarno protitelo konjugirano na hrenovo peroksidazo bila inkubirana 1 uro pri sobna temperatura. Za notranjo referenco, smo uporabili poliklonalna zajec anti-mouse β-aktin protitelesa (1:2,000 redčenje) (Abmart, Šanghaj, Kitajska). Končno, protitelesa vezavo bil odkrit z izpostavljenostjo ECL Western blot reagente za odkrivanje (kat št. SC-

• Plos ONE: Pooperativno kemoterapijo v kombinaciji z epirubicina-Based trojček kemoterapije za lokalno napredovalo adenokarcinom želodca ali gastroezofagealnega Junction
• Plos ONE: Analiza želodec in črevesje Microbiomes vzhodnega ostrige (Crassostrea virginica) iz obalnih Louisiana, ZDA