PLoS ONE: kannabinoidiannos HU210 Suojaa yksittäisiä Rat Vatsa vastaan ​​heikentävää Serum of Rats kokeellisten Akuutti Pancreatitis

tiivistelmä

Akuutti haimatulehdus (AP), erityisesti vakava akuutti haimatulehdus aiheuttaa usein ulkopuolisia haiman komplikaatioita, kuten akuutti ruoansulatuskanavan limakalvon vaurio (AGML), joka on liitetty huomattavan korkea kuolleisuus, mutta patogeneesin AP aiheuttama AGML ei ole vielä täysin ymmärretty. Tässä raportissa, tutkimme muutoksia seerumin komponenttien ja mahalaukun hormonitoimintaa ja exocrine toimintoja rotilla kokeellisen akuutti haimatulehdus, ja tutki mahdolliset panokset näiden muutosten patogeneesissä AGML. Lisäksi selvitimme väliintulon vaikutukset kannabinoidin reseptoriagonisti HU210 ja antagonisti AM251 eristetty ja seerumi-perfusoitiin rotan vatsaan. Tuloksemme osoittivat, että AGML jälkeistä 5 h AP lisääntymään, ja kehon homeostaasin oli häiriintynyt AP rotta, kohonneeseen haimaentsyymejä, lipopolysakkaridi (LPS), proinflammtory sytokiinien ja kemokiinien veressä, ja epätasapaino mahalaukun eritys funktio. Perfuusio eristetyn rotan vatsaan AP rotan seerumin aiheutti morfologisia muutoksia mahassa, mukana merkittävä lisäys pepsiiniä ja [H ^{+] julkaisu, ja lisääntynyt gastriinin ja laski somatostatiinin eritystä. HU210 päinvastaiseksi AP-seerumi-indusoidun rotan patologisten muutosten, mukaan lukien käänteinen muutosta mahalaukun morfologia jossain määrin. Tulokset tästä tutkimuksesta osoittavat, että tulehduksellinen vastauksia ja epätasapainoa mahahapon eritystä kehittämisen aikana AP vastaavat patogeneesiin AGML, ja ehdottaa terapeuttista potentiaalia HU210 varten AGML liittyvän akuutin haimatulehduksen.}

Citation: Cao Mh, Li Yy, Xu J, Feng Yj, Lin Xh, Li K, et al. (2012) kannabinoidiannos HU210 Suojaa yksittäisiä Rat Vatsa vastaan ​​heikentävää Serum of Rats kokeellisten akuutti haimatulehdus. PLoS ONE 7 (12): e52921. doi: 10,1371 /journal.pone.0052921

Toimittaja: Vinod K. Yaragudri, Nathan Kline instituutti Psychiatric Research ja New Yorkin School of Medicine, Yhdysvallat

vastaanotettu: 9. toukokuuta 2012; Hyväksytty: 21 marraskuu 2012; Julkaistu: 28 joulukuu 2012

Copyright: © 2012 Cao et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukivat National Natural Science Foundation of China (Grant nro 81270477 ja 81141050 tohtori Yong-yu Li). http://www.nsfc.gov.cn/. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Akuutti haimatulehdus (AP), erityisesti vakava AP, on potentiaalisesti tappava tulehdustauti haima, joka johtaa usein ulkopuolisia haiman komplikaatioita, jopa useita systeemistä elimen toimintahäiriöitä. On raportoitu, että 52%: lla potilaista, joilla on akuutti haimatulehdus kehittyy akuutti maha-suolikanavan limakalvon vaurio (AGML) tai stressi haavauma [1], [2]. Vaikka endoskooppinen havainto osoittaa, että suurin osa aiheista vain on useita matalia eroosioita ruoansulatuskanavassa, optimaalinen farmakologinen interventio on edelleen Kiistanalaista, ja patogeneesin AGML jää epäselväksi.

Jotkut tutkijat raportoivat, että stressaava kunnossa haimatulehduksen aiheuttaa heikentynyt verenkierto tai hypoperfuusioon mahalaukun limakalvon, ja vasta-diffuusio mahalaukun vetyionien (H ^{+) on tärkeä tekijä AGML sekä [3], [4]. Muut tutkimukset havaitsivat, että seerumin ja Vesivatsanestettä AP potilaista ja koe-eläimillä sisälsi suuren määrän myrkyllisiä aineita, kuten haiman entsyymien, endotoksiinien, tulehdusvälittäjiä [5], [6], mikä voi edistää useiden elinten toimintahäiriöt akuuteissa haimatulehdus [7], [8].}

vuosisatojen Kannabis kasvi ja sen uutteita on käytetty lievittämään ruoansulatuskanavan tulehdussairauksien. On todettu, että D ^{9-tetrahydrokannabinoli, suuret psykoaktiivisia Cannabis, kykenee sen ensisijainen solu toimia vaikka kaksi G-reseptorit, kannabinoidi 1 (CB1) ja kannabinoidi 2 (CB2) reseptoreihin [9] - [ ,,,0],11]. Sittemmin nämä kaksi reseptorit on tunnustettu merkittävä sääntelyviranomaisten fysiologisten ja patologisten prosessien [12]. Kannabinoidit voivat vähentää ruoansulatuskanavan eritystä [13], ja aktivoituminen CB1 esittelee suojaava rooli vastaan ​​stressin aiheuttama AGML [14], [15], mutta mekanismit niiden toiminnan jäävät hämäräksi.}

Tavoitteena Tässä työssä oli tutkia, sekä in vivo ja in vitro kokeissa muutokset seerumin komponenttien, muutokset mahalaukun hormonitoimintaa ja exocrine toiminnot rotan AP mallissa, ja mahdolliset panokset näiden muutosten patogeneesissä AGML. Myös probed olivat interventionaalisessa vaikutuksia CB1 käyttämällä sen agonistin HU210 ja antagonisti AM251, jolla pyritään paremmin valaista patofysiologisia mekanismeja AP liittyvien AGML ja mahahaavan mahdollisuuksia näiden kannabinoidin aineita.

Materiaalit ja menetelmät

Eläimet

Sprague-Dawley rottia (220-250 g) saatiin Experimental Animal Center of Fudanin yliopiston, Shanghai, Kiina. Ennen kokeita, kaikki Eläimiä pidettiin 1 viikon ajan standardiolosuhteissa vapaasti vettä ja laboratorioruokaa. Kaikki koemenettelyt alla olivat vastaavat kansainvälisiä ohjeita hoidosta ja koe-eläinten käyttöä ja hyväksyttiin eläinten eettisen komitean Tongji yliopiston, Shanghai, Kiina.

induktio haimatulehduksen rotilla

rotat jaettiin satunnaisesti kahteen ryhmään: AP ja sham-operaatio ryhmä 24 eläintä kussakin ryhmässä. Rottia pidettiin paastolla yön yli pelkällä vedellä sallittu ennen leikkausta. AP malli indusoitiin kehittämää menetelmää Aho et ai [16]. Lyhyesti, rotat saivat laparotomy (~ 3 cm vatsan-keskilinjaviilto) noudattaen normaalia aseptista menettelyllä ja nukutettu injektoimalla vatsaonteloon 20% etyylikarbamaatin 10 ml /kg. Biliopancreatic kanava on tilapäisesti tukittiin on maksan siemenarpi hieno pehmeä mikrovaskulaaristen puristin estää palautusjäähdytyslämpötilan infusoida materiaalin maksaan. Taaksepäin injektio 3% natriumdeoksikolaattia osaksi biliopancreatic kanavaan suoritettiin sitten (0,1 ml /100 g paino). Puristin poistettiin pistoksen jälkeen. Sham-operaatio suoritettiin vastaavasti ilman natriumdeoksikolaatti injektio, ja leikkaus tehtiin vatsan kerrostunut sulkeminen. On viidennen tunnin aikana leikkauksen jälkeen, verta kerättiin vatsa-aortasta punktio alle nukutuksen. Kaikki verinäytteet sentrifugoitiin ja supernatantti neste (seerumi) kerättiin, jaettiin eriin ja säilytettiin -20 ° C: ssa myöhempää sovelluksia. Haima poistettiin, jaettu kahteen osaan, ja yksi osa pantiin Trizol välittömästi ja säilytä -20 ° C: ssa GeneChip- analyysiä, koska toinen osa kiinnitettiin 10% paraformaldehydillä. Vatsa poistettiin myös avasi pitkin suuri käyrä, ja kiinnitettiin 10% paraformaldehydillä seurannut patologinen tutkimus.

Histologinen arviointi

Histologinen arviointi suoritettiin rotan haiman ja mahan jotka kiinnitettiin 10% paraformaldehydillä ja upotettiin parafiiniin. Sen jälkeen 5 um paksuus osat leikattiin Leica RM2126 mikrotomi (Leica, Shanghai, Kiina) ja värjättiin hematoksyliinillä (0,5%) ja eosiinilla (0,5%), jonka jälkeen havainto alla Motic BA300 mikroskooppi (Motic China Group Co Ltd ., Xiamen, Kiina). Histologinen Pisteytys arvoksi arvioitiin haiman osissa käyttäen modifioitua kriteeri Nathan JD, et al [17]. Arviointi tehtiin kymmenen satunnaisesti valittu mikroskooppikentäs- kunkin eläimen dioja, ja toistetaan kolme rottaa /ryhmä pidennetyn tavalla. Ja koko histologinen pistemäärä (0-9) ilmaistiin summana turvotus (0-3), tulehdussolujen infiltraatiota (0-3), ja kudosten kuolio (0-3).

Microarray -hvbridisaatioanalvvsi

mikrosiruanalyysi käytettiin tunnistamaan transkription profiileja joitakin inflammatorisia indeksit haimassa rotan kanssa akuutin haimatulehduksen. Array hybridisaatiot suoritettiin käyttäen kolmea biologista rinnakkaisnäytettä RNA-näytteet uutettiin haimasta AP ja kontrollirottien. Probe valmistelu, siru hybridisaatio, ja ensisijainen data-analyysi suoritettiin Capital Bio Corporation (yritys lisensoitu ja lupa Affymetrix toimia Peking, Kiina). Arrays skannattiin käyttäen GeneChip- Scanner 3000 7G (Affymetrix, Santa Clara, CA, USA). Kvantitatiivinen analyysi tehtiin käyttämällä Affymetric microarray Suite 5.0-Specific ehdot (Statistical algoritmit) GCOS (Affymetrix GeneChip Operating Software) versio 1.4. Differentiaalisesti ilmentyvien geenien tunnistettiin käyttämällä SAM (Merkittävä analyysi Microarray) ohjelmistoja, ja valitaan sen perusteella, niiden kertaiseksi muutoksia (> 2-kertainen) verrattuna kontrolliin yksilöitä.

Immunohistokemia Analysis

immunohistokemia värjäys parafiinileikkeillä rotan mahan ja haiman suoritettiin käyttämällä kanin polyklonaalista anti-CB1 ja anti-CB2-vasta-aineita (Cat. no: ALX-210-314 anti-CB1 ja Cat. no: ALX-210-315 anti-CB2, Enzo, Plymouth Meeting, PA, USA), kuten aiemmin on kuvattu [18]. Kalvot, joissa osat rotan mahan ja haiman inkuboitiin yön yli 4 ° C: ssa anti-CB1 tai anti-CB2-vasta-aineita, ja biotiini-leimattu vuohen anti-kani-IgG työneste (Cat. No: SP0023, Biosynthesis Biotechnology Co Ltd ., Peking, Kiina) lisättiin sitten levitettiin kukin dia ja inkuboitiin 37 ° C: ssa 15 minuuttia, minkä jälkeen inkuboimalla HRP-leimatulla streptavidiinilla työliuosta 37 ° C: ssa 15 minuuttia, ja huuhdottiin perusteellisesti. Lopuksi objektilasit DAB-värjättiin ja ydinvoiman uudelleen värjättiin hematoksyliinillä. Kalvot negatiivisen kontrollin käsiteltiin läpi samat vaiheet, mutta ensisijainen vasta-aine oli korvattu PBS: llä. Kuva-analyysi suoritettiin käyttäen digitaalista Motic Med 6.0 kuva-analyysi-järjestelmän (Motic; China Group Co Ltd, Xiamen, Kiina).

Western-blottaus Mittauslaitesulakkeet CB1 ja CB2 Expression

CB1 ja CB2 proteiinin ilmentymistä haimassa ja vatsa arvioitiin western blottauksella. Kuten aiemmin on kuvattu [19], kanssa inkuboinnin jälkeen ensisijaisen vasta-aineiden 1:250 laimennus erikseen (kanin polyklonaalinen anti-CB1 ja anti-CB2-vasta-aineita, Cat. No: ALX-210-314 anti-CB1 ja Cat. No: ALX-210-315 anti-CB2, Enzo, Plymouth Meeting, PA, USA), blotatun nitroselluloosakalvoille (Whatman, Dassel, Saksa) huuhdeltiin perusteellisesti, ja sopivaa sekundaarista vasta-ainetta konjugoituna piparjuuriperoksidaasiin inkuboitiin 1 tunnin ajan huonelämpötila. Sisäisten viittaus, polyklonaalista kanin anti-hiiri-β-aktiini vasta-ainetta (1:2,000 laimennus) (Abmart, Shanghai, Kiina) käytettiin. Lopuksi, vasta-aineen sitoutuminen havaittiin altistuminen ECL Western blotting tunnistus reagenssit (Cat. No: SC-2048, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA) ja tallennettu filmille.

valmistaminen Isolated- vascularly perfusoitiin Rat vatsa

rotta nukutettiin ja eristetty, vascularly perfuusio rotan mahan valmistettiin, kuten aiemmin on kuvattu [20]. Lyhyesti, vatsa avattiin keskiviivan viilto steriileissä kunnossa. Ligaation jälkeen vatsa-aortan yläpuolella haaroittumista sisusvaltimorunko, kanyyli työnnettiin sisusvaltimorunko kautta viilto sijoitetaan aortan. Kaksi millilitraa suolaliuosta, joka sisälsi 600 U hepariinia ruiskutettiin sitten mahalaukun valtimon kautta valtimon kanyylin. Sen jälkeen, lämmin (37 ° C) modifioitu Krebs-Ringer kuplitettiin seokseen, jossa oli 95% O _{2 ja 5% CO 2 otettiin käyttöön. Laskimoiden jätevesi kerättiin portaalin suoneen kanyyli. Polyeteeniputki mahalaukun lumenia perfusaatista työnnettiin ruokatorven ja kärjen sijoitettu luminal osaan vatsaan. Jälkeenpäin mahaportin risteyksessä oli altistunut, ja toinen polyeteeni putki otettiin vatsan kautta viillolla pohjukaissuoli, ja sitten kiinnitetty sidelanka noin pylorus. Perfusoidusta rotan mahassa eristettiin ja sijoitettiin lämpimään (37 ° C) pieni kammio Krebs-Ringer.}

Hoito Isolated Rat Vatsa

Eristetty maha vascularly perfusoitiin muokattu Krebs-Ringer ratkaisu 30 min tasapainotus ennen virallista kokeita. Perfuusio suoritettiin sitten peräkkäin kolme nesteiden ja jokaisen nesteen 20 minuuttia, yhteensä 60 minuutin ajan. Vertailuryhmä sai: 1) Krebs-Ringer ratkaisu, 2) seerumin normaalista Kontrollirotissa 3) Krebs-Ringer ratkaisu. AP ryhmä sai: 1) Krebs-Ringer ratkaisu, 2) seerumia AP rotat, 3) Krebs-Ringer ratkaisu. Ryhmä AP + HU sai: 1) Krebs-Ringer + HU210 (10 ^{-7M), 2) AP seerumi + HU210 (10 -7M), 3) Krebs-Ringer ratkaisu. Ja ryhmä AP + AM saivat: 1) Krebs-Ringer + AM251 (10 -7M), 2) AP seerumi + AM251 (10 -7M), 3) Krebs-Ringer ratkaisu. Mahan luumeniin eristetyn mahalaukun perfusoitiin normaalilla suolaliuoksella (pH 7,0). Kaikki perfuusio nesteitä juoksi tasaisella nopeudella 1 ml /min käyttäen mikro-infuusiopumpuissa. Samaan aikaan ratkaisut ja eristetyt elimet pidettiin 37 ° C: ssa termostaatilla yksiköiden koko kokeen ajan. Näytteet laskimoiden jäteveden tai mahalaukun onteloon jäteveden kerättiin, lopussa 20 minuutin välein, jäähdytettyyn koeputkiin, jotka välittömästi säilytettiin -80 ° C: ssa myöhempää mittaus- kokeissa.}

amylaasi ja Lipopolysaccharide tasot

määrityksissä amylaasin ja (LPS) pitoisuudet seerumissa AP tai valvontaa rottia perusteella suoritetuista valmistajan suosittelemien menettelytapojen (Cat. nro: C016 amylaasin iinianalyysikitissä, Jiancheng Technology, Nanjing, Kiina, ja Cat. No: CE32545 LPS iinianalyysikitissä, kiinalainen molukkirapu Reagent Co Ltd, Xiamen, Kiina).

Analyysit tulehdusvälittäjiä

tasot interleukiini-6 (IL-6 ) ja sytokiinien aiheuttama neutrofiilien kemoatrak- 1 (CINC1 /KC) seerumissa rotan ja laskimoiden jäteveden eristetyistä rotan mahalaukun kvantitoitiin käyttämällä rotan IL-6 ja KC ELISA perustuu valmistajan suosittelemaa protokollien (Cat. no : F01731D rotan interleukiini 6 ELISA; Cat. no: F01723D rotan KC ELISA. H-Y biologista Co Ltd, Shanghai, Kiina). Optinen tiheys määritettiin 490 nm absorbanssi entsyymi-immunoanalyysillä väline (Microplate Reader, Malli Elx800, BioTek, Winooski, VT, USA). Kukin näyte mitattiin kolme kertaa ja mittaus toistettiin 6 rotan näytettä kustakin ryhmästä. Tiedot on laskimoiden effluentti eristetyistä rotan mahan esitettiin ero IL-6 tai KC tason välillä perfuusiota ja jätevesi, voidaan katsoa olevan julkaisun IL-6 ja KC rotan vatsaan.

gastriini ja somatostatiini tasot eläinnäytteitä

gastriini ja somatostatiinin tasot eläinten seerumissa ja eristetyssä mahan laskimon jätevesi mitattiin käyttämällä kaupallisesti saatavilla gastriinin ja somatostatiinin radioimmunomäärityksellä Kit (gastriini Kit: Cat. No. G01PJB Pohjois Institute of biologis Technology, Beijing, Kiina. somatostatiini Kit: Cat. No. S111013, toinen Military Medical University, Shanghai, Kiina). Mittausmenettelyjä perustuivat valmistajien suositukset edellä kuvatulla tavalla [21]. Sama kuin edellä, kustakin näytteestä mitattiin kolme kertaa ja mittaus toistettiin 6 rotan näytettä kustakin ryhmästä. Tiedot on laskimoiden effluentti eristetyistä rotan mahan esitettiin erot gastriinin tai somatostatiinin tason välillä perfuusiota ja jätevesi, voidaan katsoa olevan julkaisun gastriinin ja somatostatiinin rotan mahassa.

Pepsiini ja H + tasot eläinnäytteitä

määritykset pepsiinin tason rotan mahanesteessä ja mahalaukun ontelon jätevesi eristetyistä rotan mahalaukun suoritettiin käyttäen valmistajan suosittelemaa protokollien (Cat. No. A081- 1, Jiancheng Technology, Nanjing, Kiina), koska [H ^{+] näiden näytteiden mitattiin delta 320 pH-mittari (Mettler-Toledo Inc. Zurich, Sveitsi) ja lukemat muunnetaan sitten [H +].}

Ratkaisut ja Chemicals

HU210 [(6aR) -trans-3- (1,1-dimetyyliheptyyli) -6a, 7,10,10a-tetrahydro-1-hydroksi- -6,6-dimetyyli -6H-dibentso [b, d] pyraani-9-metanoli], AM251 [(N- (piperidin-1-yyli) -5- (4-jodifenyyli) -1- (2,4- dikloorifenyyli) - 4-metyyli-1 H-pyratsoli-3-karboksamidi)], hankittiin Tocris (Tocris-Bioscience, Ellisville, MO, USA). Molemmat kemikaalit liuotettiin liuottimeen koostui etanolin, Tween80 ja normaalia suolaliuosta (NS), tilavuuden suhde 01:01:18, ja pitoisuus 10 ^{-2M, 37 ° C: ssa käyttäen ultrasonicator, ja sitten laimennettiin edelleen NS 10 -5 M, ja jälleen 10 -7M kanssa Perfuusioneste juuri ennen käyttöä olosuhteissa, jotka määritettiin pilottitutkimuksessa [22]. Modifioitu Krebs-Ringer liuos koostuu 117,5 mM NaCl, 4,7 mM KCI, 2,4 mM CaCI _{2, 1,1 mM MgCI 2, 1,1 mM NaH 2PO 4, 25 mM NaHCO 3, 11,1 mM glukoosia, 0,05% naudan seerumin albumiinia, ja 4% dekstraania. Muita tekijöitä, jos lähteitä ei ole mainittu edellä, hankittiin Sigmalta (Shanghai, Kiina).}}

Data Analysis

Kaikki tiedot ilmaistaan ​​keskiarvona ± SEM. Studentin t-testiä tai yksittäinen tekijä varianssianalyysi (ANOVA) suoritettiin käyttäen SPSS 13.0 ohjelmistolla (SPSS Co Ltd, Shanghai, Kiina). P-arvot < 0,05 katsottiin tilastollisesti merkitsevä.

Tulokset

Tulokset Koe In vivo

patologiset muutokset haimassa AP rottien .

valomikroskoopilla, oli selvää, että hoidon jälkeen natriumtaurokolaatti, rotat kehittyi vakava akuutti haimatulehdus selviä turvotusta, vakuolisaatiota ja vakavaa nekroosia rakkulasoluissa haiman kudoksista. Ja histologiset tulokset AP rotilla olivat paljon suurempia kuin valvonta rottien (Fig. 1). Yhdessä tehostetun amylaasiaktiivisuuden seerumissa AP rottien, tulokset osoittivat, että AP malli replikointi rotilla oli onnistunut.

patologiset muutokset mahassa AP rottien.

vatsassa rotilla, joilla on akuutti haimatulehdus, vakavia patologisia muutoksia ilmeni, joilla limakalvon turvotusta, eroosio ja verenvuotojen kuten on osoitettu sekä macrography (Fig. 2A ja 2B) ja mikroskooppisten tutkimusten (Fig. 2D); ja näistä vammoista kerääntyivät pääasiassa mahalaukkua.

GeneChip analyysi.

Kuten kuviossa. 3A hajontakaavioiden edustaa geenien kahtalaiset ja korkeamman ilmaisun olivat ylemmässä (punainen) rajan, kun taas geenien kahtalaiset ja alempi ilmaisun alempi (vihreä) rajan; ja muuttuneiden geenit liittyvät läheisesti akuutti haimatulehdus näkyivät klusterointi kuvioita (Fig. 3B). Oli selvää, että ilmaisu profiilin, geenien merkittävästi erilaiseen ilmaisuja (≥2-kertainen, P < 0,05) ovat pääasiassa ne, jotka liittyivät kanssa haiman ruoansulatusentsyymien, tulehdusvälittäjiä ja signaalitransduktioreaktioteiden, joka tuotiin esille ja listattu niiden Gene nimi ja Genebankin ID taulukossa 1.

muutokset IL-6, KC ja LPS tasoilla AP seerumissa.

sekä IL-6 ja KC tasoja seerumissa AP rotille näytetään merkittävästi kasvaa verrattuna kontrollirottien, jossa upsurges 145% ja 186%, vastaavasti (P ​​< 0,05, Fig. 4). Samanlainen mutta merkittävämpi lisäys nähtiin LPS taso seerumissa AP rottien, jossa kiihtyi peräti 231 kertaa, että kontrolliryhmän (P < 0,01; Fig. 4A).

Muutokset gastriini ja somatostatiinin tasoja seerumissa AP rotilla.

seerumissa AP rotilla, gastriinin ja somatostatiini nousivat merkittävästi verrattuna kontrollirottien, jossa upsurges 169% ja 147%, vastaavasti ( molemmissa tapauksissa, P < 0,05; Fig. 4B).

muutokset pepsiiniä tasoilla ja [H ^{+] mahanesteessä AP rottien.}

arvioimiseksi muutokset mahalaukun exocrine toiminto, analyysejä pepsiiniä tason ja [H ^{+] suoritettiin käyttäen mahanesteessä AP ja valvonta rotilla. Sekä pepsiini taso ja [H +] mahanesteessä osoittivat selvä kasvua AP rotilla verrattuna niihin kontrollirottien, jossa upsurges 177% ja 347%: lla (Fig. 4C).}

ilmentäminen CB1 ja CB2-reseptorit rotan haiman ja mahan.

ilmaisu ominaisuudet CB1 ja CB2-reseptorit rotan haiman ja mahan tutkittiin. Tulokset osoittivat, että näytteitä eläimistä kontrolliryhmässä esitetään vain heikkoja immunohistologisilla värjäytymistä CB1 ja CB2-reseptorit haimassa, kun taas yksilöitä AP rotilla oli näytteillä lisääntynyt ilmauksia CB1 ja CB2-reseptoreihin. Pääasiassa, vahva positiivinen merkkejä ruskea värjäys ryhmittyneet haiman acini (Fig. 5 A arrowheads). Ylös-määräykset CB1 ja CB2 reseptorit haiman kudoksissa AP rottia osoitetaan edelleen western blot analyysi ja esitetään kuviossa 5 B. vastaava ilmaisu ominaisuudet CB1 ja CB2-reseptoreja havaittiin myös mahalaukussa AP rottien , kuten on osoitettu sekä immunohistologisilla värjäys ja western blot-määritys (Fig. 5 C ja 5 D). Vahva positiivisia merkkejä ruskea värjäys olivat pääasiassa mahalaukun limakalvon (Fig. 5 C, nuolenkärjet).

Tulokset Koe In vitro

vaikutus kannabinoidit mahalaukun patologisia muutoksia ja gastriinin ja somatostatiinin vapautumista.

vaikutuksen tutkimiseksi CB1 reseptorin agonistin HU210 hormonitoimintaa funktio eristetyn rotan mahan stimuloidaan AP rotan seerumin, tutkimme korjauksilla gastriinin ja somatostatiinin tasot laskimoiden jätevesi mahan kanssa tai ilman väliintuloa CB1 reseptoriagonisti HU210 ja antagonisti AM251. Tulokset osoittivat, että verrattuna kontrolliryhmään, rotta mahan käsitelty AP seerumin provosoi lisääntynyt gastriinin vapautumista (P < 0,05), mutta vähentynyt somatostatiinin vapautumista (P < 0,05), HU210 kääntänyt gastriini ja somatostatiini aiheuttamien muutosten seerumista AP rotat (P < 0,05), kun taas AM251 ei esiintynyt havaittavaa vaikutusta vapauttamaan kaksi hormonia (Fig. 6).

Effects of kannabinoidit on pepsiinitoiminta ja [H ^{+] in mahalaukun lumenin jätevesi.}

vaikutukset aineiden HU210 ja AM251 päälle pepsiiniaktiivisuuden ja [H ^{+] mahan onteloon jäteveden eristetyn rotan mahan esiteltiin kuvassa. 7. Verrattuna kollegansa kontrolliryhmän, AP seerumi stimuloi pepsiinin erittymistä ja hapon tuotanto eristetyssä rotan mahaan (P < 0,05). Väliintulo CB1 /2 reseptoriagonisti HU210 vaimenee AP seerumin aiheuttamiin muutoksiin pepsiinin eritys ja haponerityksen (P < 0,05), kun taas reseptorin antagonisti AM251 jättänyt näytteille ilmeistä vaikutusta näitä kahta muuttujaa.}

Effects kannabinoidit tasoista IL-6 ja KC mahalaukun laskimoiden jäteveden rottia.

Kun rotat saivat hoitoa AP seerumin IL-6 ja KC tasoa merkittävästi koholla laskimoiden jätevesi eristetty rotan mahassa; HU210 päinvastaiseksi IL-6 ja KC aiheuttamia muutoksia seerumin AP rottia (P < 0,05), kun taas AM251 ei ollut havaittavaa vaikutusta tasoilla sytokiinin ja kemokiinin että laskimoiden jäteveden (Fig. 8).

keskustelu

klinikan potilaiden akuutti haimatulehdus, erityisesti vakava akuutti haimatulehdus, kärsivät usein AGML tai stressi haavauma, yhteinen komplikaatio AP. Syis- vatsaan vammoja ovat, mutta eivät rajoitu näihin, stressiä tulehduksellinen stimulaatio, joka voi aktivoituvat säätele- vään tumakkeeseen ja noradrenaliinin /sympaattisen lisämunuaisytimessä järjestelmä ja hypotalamus-aivolisäke-lisämunuaisen kuoren järjestelmä. Salaileva kasvaa katekoliamiinien ja glukokortikoidi hormonit ovat tärkeimpiä tekijöitä kehon stressiä, näiden ainesosien aiheuttaa mahahapon liikaeritystä ja veren virtaus siirtymässä joka aiheuttaa ruoansulatuskanavan limakalvon iskemiaa. Tärkeää on, että iskemia peräkkäin alensi kyky mahalaukun limakalvon hävittää back-hajottavaa happoa, jolloin laskua sisäiset pH ja aktivointi proteaasin, ja myöhemmät haavaumat [3], [4], [23]. Muut mekanismit, kuten happiperäisten vapaiden radikaalien ja joitakin epävarmuustekijöitä, myös rooleja maha vahinko liittyy akuutti haimatulehdus.

Aiemmat tutkimukset ovat havainneet, että AP plasma ja AP liittyvä vesivatsanestesupernatan- sisältävät suuren määrän myrkyllisiä aineita, jotka ovat haitallisia kehon [5], [6], [8], aiheuttaen vahinkoa maksan, munuaisten, keuhkojen ja verenkiertoelimistön, ja maha-suolikanavan toimintahäiriö, jne. [24] - [28]. Meidän ennen tutkimuksessa havaittiin, että haiman tiehytsoluja kärsi kalsiumin ylikuormituksen ja vähennetään elinvoimaa, kun on inkuboitu AP seerumin tai vesivatsanestesupernatan- [8]. Tässä tutkimuksessa ensin aiheuttama kokeellisesti AP rotilla ja osoittautui induktio AP eläinmallissa onnistunut osoittamalla patologinen muutos haiman morfologiaan ja kasvu haimaentsyymi rotan seerumissa jälkeen induktion. Kun sanoo mallin, jatkoimme luoda geeniekspressioprofiili havainnollistaa muuttuneen geeniekspression haiman entsyymien ja tulehduksen välittäjäaineita, joka yrittää jäljittää alleviivaus geenit, jotka häntä kriittisimmät tehtävät patogeneesissä AGML liittyy AP. Ja tulokset AP ja valvonta rottien profiloitu käyttäen geenilastuun analyysi olivat yhdenmukaisia ​​biokemiallisten määritysten. Lisäksi testasimme jos olisi myönteisiä vaikutuksia kannabinoidiantagonisteja ja /tai agonistit eläimillä kokeellisen akuutin haimatulehduksen.

Edellä mainitun tulosten saavuttamiseksi käsitteli kysymystä siitä, mahahapon eritystä sekä hormonitoimintaa tai exocrine toiminnot, olisi muuttunut AP rotilla. On tunnettua, että gastriini stimuloi hapon tuotanto ja pepsiinin erittymistä, kuten somatostatiini kompensoi gastriini. Kun gastriini- tai somatostatiinin eritystä ei pysty ylläpitämään perus tasapaino, ylijäämä pepsiini ja happamat julkaisu suhteettoman, jolloin vahingot ja toimintahäiriöiden vatsan aikana akuutti haimatulehdus. Kuten osoitettiin tässä raportissa, löysimme merkittävästi kohotettu gastriinin taso sekä kohonnut seerumin pepsiiniä ja happotasoja mahanesteessä AP rottia, jotka vahvistivat, että hormonaaliset ja exocrine toimintojen mahassa oli häiriintynyt AP mallissa.

Lisäksi verenkierrossa aktivoitu proteolyyttiset entsyymit, vasoaktiivinen proteiineja ja endotoksiinin erityisiä patogeneesiin akuutti haimatulehdus voi olla vastuussa AGML samoin. Siksi selvitimme vaikutuksia seerumin AP rottien erilliselle ja perfusoiduille rotan vatsaan siten, että elin voi sivuuttaa systeemisen stressin ja vaikutuksia. Eristetty rotan mahassa stimuloida seerumista AP rotan paitsi osoitti silmä-näkyvä limakalvon vaurioita, mutta myös esitti joukon biokemiallisia poikkeavuuksia, mukaan lukien korkeampi gastriini, sytokiinin IL-6, kemokiini KC, ja alemman tason somatostatiinin vuonna mahalaukun laskimoiden jätevesi sekä nostetaan pepsiini ja haponerityksen mahalaukun onteloon jätevesi. On kohtuullista päätellä, että on epätasapainossa aggressiivinen tekijä ja suojaava tekijä mahalaukun limakalvon aikana akuutti haimatulehdus. Erityisesti lisääntynyt gastriinin, mahahapon tuotanto ja pepsiiniä yhdessä merkittäviä rooleja patogeneesissä AGML, pahentaa vaurioita mahan ja käynnistää noidankehiin aikana akuutti haimatulehdus.

Viime vuosikymmenen aikana, useat julkaisut ovat osoittaneet, että anti-inflammatoriset vaikutukset kannabinoidien [29] - [32]. Useat tutkimukset ovat osoittaneet, että kannabinoidit estävät mahahapon eritystä ja vähentävät inflammatoristen sytokiinien ja muiden välittäjänä plasmassa eläinten AP [33], [34]. Tuloksemme ei ainoastaan ​​vahvista nämä aiemmat keksinnöt, mutta osoittavat myös, että kemikaali HU210, oletettavasti kannabinoidireseptorin agonisti, palvelevat toimii samalla tavalla kuin kannabinoidit vähentää inflammatoristen sytokiinien ja muiden välittäjien, siten lievittämään oireita AP liittyvän AGML. Mielenkiintoista, Tämän tutkimuksen tulokset osoittavat, että HU210 voi vaimentaa mahalaukun hormonitoimintaa ja exocrine muutoksia eristetyssä rotan mahan ärtynyt AP seerumi, kääntää epänormaalin täytetyn tasot gastriini-, mahahapon ja pepsiinin ja vaimentaa vaikutuksia näillä vahingollisia tekijöitä. Toisaalta, HU210 nostaa tasoa somatostatiinin, joka estää eritystä gastriini ja mahahapon, joten kiinnostavuus suojaava toimia mahalaukun limakalvon.

Tuloksia Tutkimuksen tarjoavat harmoninen yhtenäisyys geenin-sirun analyysi ja biokemialliset koetulokset käyttäen näytteitä eläinmallissa, mikä viittaa siihen, uudella mekanismilla, joka puhkeamista AGML on, ainakin osittain, koska gastriini, ja mahahapon /somatostain epätasapaino laukaisi toksiinien AP seerumi; ja kannabinoidiagonisti HU210 palauttaa tasapaino, joten suojaa. Havainnot tukevat tätä HU210 on hyötyä hoitoon haimatulehduksen, koska sen anti-tulehdus asemaa ja estää vaikutus AGML liittyvät akuutin haimatulehduksen. Tulokset, että CB1 antagonisti AM251 ei minkäänlaista roolia AP aiheuttamaa mahalaukun vaurioita tukea meidän olettamukselle, mikä vahvistaa myönteistä roolit CB1 /2-reseptoreihin.

Prospektiivisessa kokeessa tutkia, protonipumpun estäjät (PPI) saa suojella eläimiä kokeellisen akuutti haimatulehdus, me annettiin omepratsolia (OME, ip, 40 mg /kg paino), edustavan PPI agentti, ryhmälle rottia samaan aikaan, kun AP induktio suoritettiin. Alustavat tulokset osoittivat, että OME kasvoi eloonjäämisaste AP rotilla (tuloksia ei ole esitetty). Se voi kuitenkin pitää monikeskustutkimus valottaa jos PPI-lääkkeet ovat hyödyllisiä terapeuttisena vaihtoehtona akuutin haimatulehduksen ihmisten.

Kun kaikki edellä tulokset meidän kokeellinen tutkimus paljastaa, että tulehdusvasteet ja häiriöt mahan eritys, sekä hormonitoimintaa ja eksokriinisessä toiminnot, ovat tulosta akuutti haimatulehdus, ja ne vuorostaan ​​edistävät patogeneesiä AGML. Lisäksi tulokset viittaavat siihen, että kannabinoidin HU210, CB1 /2-reseptorin agonisti, on terapeuttista potentiaalia AGML akuutin haimatulehduksen se vaimentaa tulehdusta ja palauttaa gastriini /somatostatiini tasapaino, ja sitten vähentää mahahapon eritystä ja pepsiiniä.

• PLoS ONE: Leikkauksen jälkeiset kemosädehoito Yhdistettynä epirubisiini-Based Tripletin Kemoterapia paikallisesti Advanced Adenokarsinooma Maha tai Ruokatorven Junction
• PLoS ONE: Analyysi Vatsa ja Gut Microbiomes Itä (Crassostrea virginica) Coastal Louisiana, USA