PLoS ONE: cannabinoidtest HU210 Beskytter Isolert Rat mage mot verdifall forårsaket av Serum fra Rotter med eksperimentell Akutt Pancreatitis

Abstract

Akutt pankreatitt (AP), forårsaker spesielt alvorlig akutt pankreatitt ofte ekstra bukspyttkjertelen komplikasjoner, for eksempel akutt gastrointestinale slimhinne lesjon (AGML) som er ledsaget av en betydelig høy dødelighet, men patogenesen av AP-indusert AGML er fortsatt ikke fullstendig forstått. I denne rapporten har vi undersøkt endringer i serumkomponenter og mage endokrine og eksokrine funksjoner i rotter med eksperimentell akutt pankreatitt, og studerte mulige bidrag fra disse endringene i patogenesen av AGML. I tillegg, vi utforsket intervensjons effektene av cannabinoid reseptor agonist HU210 og antagonist AM251 på isolert og serum-dynket rotte magen. Våre resultater viste at AGML skjedde etter 5 timer med AP replikering, og kroppen homeostase ble forstyrret i AP rotte, med økte nivåer av pankreas enzymer, lipopolysakkarid (LPS), proinflammtory cytokiner og chemokiner i blodet, og en ubalanse i mage sekresjon funksjon. Perfusert den isolerte rotte magen med AP rotte serum forårsaket morfologiske forandringer i magen, akkompagnert med en betydelig økning av pepsin og [H ^{+] release, og økt gastrin og redusert somatostatin sekresjon. HU210 reverserte AP-serum-indusert rotte patologiske forandringer, herunder reversering av transformasjon av mage morfologi til viss grad. Resultatene fra denne studien viser at betennelsesresponser og ubalanse i gastrisk sekresjon under utviklingen av AP er ansvarlig for patogenesen av AGML, og foreslå det terapeutiske potensialet i HU210 for AGML forbundet med akutt pankreatitt.}

Citation: Cao Mh, Li åå, Xu J, Feng Yj, Lin Xh, Li K, et al. (2012) cannabinoidtest HU210 Beskytter Isolert Rat mage mot verdifall forårsaket av Serum fra Rotter med eksperimentell akutt pankreatitt. PLoS ONE 7 (12): e52921. doi: 10,1371 /journal.pone.0052921

Redaktør: Vinod K. Yaragudri, Nathan Kline Institutt for Psykiatrisk Forskning og New York School of Medicine, USA

mottatt: 9. mai 2012; Godkjent: 21 november 2012; Publisert: 28.12.2012

Copyright: © 2012 Cao et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres

Finansiering:. Dette arbeidet ble støttet av Natural Science Foundation National of China (Grant nr 81270477 og 81141050 Dr. Yong-yu Li). http://www.nsfc.gov.cn/. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer

Innledning

Akutt pankreatitt (AP), spesielt alvorlig AP, er en potensielt dødelig betennelsessykdom i bukspyttkjertelen som ofte fører til ekstra-bukspyttkjertel komplikasjoner, og med flere systemiske organ dysfunksjoner. Det er blitt rapportert at 52% av pasientene med akutt pankreatitt utvikler akutt gastrointestinal mucosal lesjon (AGML) eller stressmavesår [1], [2]. Selv om endoskopisk observasjon viser at flertallet av personene bare har flere grunne erosjoner i mage-tarmkanalen, fortsetter optimal farmakologisk intervensjon for å være et spørsmål om debatt, og patogenesen av AGML fortsatt uklart.

Noen forskere rapporterer at stressende tilstand med akutt pankreatitt forårsaker redusert blodtilførsel eller hypoperfusjon i den gastriske slimhinne, og telleren-diffusjon av mave hydrogenion (H ^{+) er en viktig faktor for AGML så vel [3], [4]. Andre undersøkelser funnet at serum og ascitesvæske fra AP pasienter og eksperimentelle dyr som inneholdt en stor mengde av giftige stoffer, så som pankreas enzymer, endotoksiner, inflammatoriske mediatorer [5], [6], noe som kan bidra til de flere organ dysfunksjoner hos akutt pankreatitt [7], [8].}

i århundrer Cannabis planten og dens ekstrakter har vært brukt til å lindre symptomer på gastrointestinale inflammatoriske sykdommer. Det har blitt fastslått at D ^{9-tetrahydrocannabinol, den store psykoaktive komponenten av Cannabis, utøver sin primære cellulære handlinger skjønt to G-protein-koblede reseptorer, cannabinoid-1 (CB1), og cannabinoid-2 (CB2-reseptorer) [9] - [ ,,,0],11]. Siden da har disse to reseptorene blitt anerkjent som de viktigste regulatorer av fysiologiske og patologiske prosesser [12]. Cannabinoider kan redusere mage-sekresjon [13], og aktivering av CB1-reseptoren oppviser beskyttende rolle mot stress-indusert AGML [14], [15], men mekanismene for deres virkning forblir unnvikende.}

Formålet med fore~~POS=TRUNC liggende~~POS=HEADCOMP arbeid var å utforske, både in vivo og in vitro forsøk, endringer i serumkomponenter, de endringer av mage endokrine og eksokrine funksjon i rotte-AP-modellen, og de mulige bidrag fra disse forandringer i patogenesen av AGML. Også undersøkt var de intervensjons effektene av CB1 ved hjelp av sin agonist HU210 og antagonist AM251, i et forsøk på å bedre belyse patofysiologiske mekanismer for AP-forbundet AGML og mot ulcus potensialene av disse cannabinoid agenter.

Materialer og metoder

Dyr

Sprague-Dawley rotter (220-250 g) ble innhentet fra Experimental Animal Center of Fudan University, Shanghai, Kina. Før forsøkene ble alle dyrene plassert for en uke under standardbetingelser med fri tilgang til vann og laboratorium chow. Alle eksperimentelle prosedyrer under var i samsvar med internasjonale retningslinjer for omsorg og bruk av forsøksdyr, og ble godkjent av dyreetikk komité Tongji University, Shanghai, Kina.

Induksjon av akutt pankreatitt i Rats

rottene ble tildelt tilfeldig i to grupper: AP og humbug-drift gruppe med 24 dyr i hver gruppe. Rottene ble fastet over natten med bare vann tillates før kirurgi. AP-modellen ble indusert ved fremgangsmåten som er utviklet av Aho et al [16]. I korthet, ble rottene fikk laparotomi (~3 cm abdominal-midtlinjesnitt) ved å følge standard aseptiske prosedyre og under generell anestesi med intraperitoneal injeksjon av 20% etyl-karbamat i 10 ml /kg. Den biliopankreatisk kanalen ble midlertidig tilstoppet på leveren hilum med en fine myke mikrovaskulær klemme for å hindre tilbakeløp av tilført materiale til leveren. Et retrograd injeksjon av 3% natriumdeoksycholat inn i biliopankreatisk kanalen ble så utført (0,1 ml /100 g kroppsvekt). Klemmen ble fjernet etter injeksjonen. Sham-operasjon ble utført tilsvarende uten natrium deoxycholate injeksjon, og operasjonen ble avsluttet med mage stratifisert stengetid. På den femte time etter operasjonen, ble blod samlet fra abdominal aorta punktering etter anestesi. Alle blodprøver ble sentrifugert og den overliggende væske (serum) ble oppsamlet, delt i porsjoner og lagret ved -20 ° C for etterfølgende bruk. Bukspyttkjertelen ble fjernet, delt i to deler, og en del ble satt inn i TRIzol umiddelbart og oppbevar ved -20 ° C for analyse Genechip, som den andre delen ble fiksert med 10% paraformaldehyd. Magen ble også fjernet, åpnet langs den store kurven, og festes med 10% paraformaldehyde for påfølgende patologisk undersøkelse.

Histologisk Evaluering

Histologisk evaluering ble utført på rotter bukspyttkjertel og mage som ble løst i 10% paraformaldehyde og dyppet i parafin. Deretter ble 5 mikrometer tykkelse deler skiver på en Leica RM2126 mikrotom (Leica, Shanghai, Kina) og farget med hematoksylin (0,5%) og eosin (0,5%), etterfulgt av observasjon under en Motic BA300 mikroskop (Motic China Group Co Ltd ., Xiamen, Kina). Histologisk Scoring ble utbygd på bukspyttkjertelen seksjoner ved hjelp av en modifisert kriterium fra Nathan JD, et al [17]. Evalueringen ble gjort i ti tilfeldig valgte mikroskopiske felt av hver dyrets lysbilder, og gjentatt i tre rotter /gruppe i en blindet måte. Og den totale histologiske score (0-9) ble uttrykt som summen av ødem (0-3), inflammatorisk celleinfiltrasjon (0-3), og vevsnekrose (0-3).

Mikromatrise hvbridiserinasassav

Microarray analyse ble brukt for å identifisere transkripsjons profiler av noen provoserende indekser i bukspyttkjertelen fra rotter med akutt pankreatitt. Array-hybridiseringer ble utført ved anvendelse av tre biologiske replikater av RNA prøver ekstrahert fra pankreas fra AP og kontrollrotter. Probe forberedelse, chip hybridisering, og primære dataanalyse ble utført av Capital Bio Corporation (en fast lisensiert og godkjent av Affymetrix til å operere i Beijing, Kina). Arrays ble skannet med Genechip Scanner 3000 7G (Affymetrix, Santa Clara, CA, USA). Kvantitativ analyse ble utført ved hjelp av Affymetric microarray Suite 5.0-Konkrete vilkår (Statistiske Algoritmer) GCOS (Affymetrix Genechip kjøreprogramvare) versjon 1.4. De differensielt uttrykte gener ble identifisert ved hjelp av SAM (Significant Analyse av Mikromatrise) programvare, og valgt på grunnlag av deres fold endringer (> 2 ganger) sammenlignet med kontrollprøver

Immunohistochemistry Analyse
.

Immunohistokjemi flekker på parafinsnitt av rotte magen og bukspyttkjertelen ble utført ved hjelp av kanin polyklonale anti-CB1 og anti-CB2 antistoffer (kat. nr: ALX-210-314 for anti-CB1 og Cat nr.: ALX-210-315 for anti-CB2, Enzo, Plymouth Meeting, PA, USA) som beskrevet tidligere [18]. Skinnene med delene av rotte mage og bukspyttkjertel ble inkubert over natten ved 4 ° C med anti-CB1 og CB2 anti-antistoffer, og biotin-merket geit-anti-kanin-IgG arbeidsfluid (Cat nr.: SP0023; Biosyntese Bioteknologi Co Ltd ., Beijing, Kina) ble deretter påført på hvert objektglass og inkubert ved 37 ° C i 15 minutter, fulgt av inkubering med et HRP-merket streptavidin arbeidsoppløsning ved 37 ° C i 15 minutter, og ble objektglassene skylt grundig. Endelig lysbildene ble DAB-farget og kjernefysisk re-farget med hematoksylin. De lysbilder av den negative kontrollen ble bearbeidet gjennom trinnene identiske, men det primære antistoff ble erstattet med PBS. Bildeanalyse ble utført ved hjelp av digital Motic Med 6,0 ​​bildeanalyse system. (Motic; Kina Group Co Ltd, Xiamen, Kina)

Western blotting for måling CB1 og CB2 Expression

CB1 og CB2 protein ekspresjon i bukspyttkjertelen og magesekken ble undersøkt ved western blotting. Som beskrevet tidligere [19], etter inkubasjon med de primære antistoffer i en 1:250 fortynning individuelt (kanin polyklonale anti-CB1 og anti-CB2 antistoffer, Katt nr.:. ALX-210-314 for anti-CB1 og Cat no: ALX-210-315 for anti-CB2, Enzo, Plymouth Meeting, PA, USA), de utslettet nitrocellulosemembranene (Whatman, Dassel, Tyskland) ble skylt grundig, og den aktuelle sekundære antistoff konjugert til pepperrotperoksidase ble inkubert i en time ved romtemperatur. For intern referanse, ble polyklonale kanin anti-mus β-actin antistoff (1:2,000 fortynning) (Abmart, Shanghai, Kina) brukes. Endelig antistoff binding ble detektert ved eksponering for ECL Western blotting gjenkjenning reagenser (Kat. Nr: SC-2048, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA) og spilt inn på film

Utarbeidelse av isolert-vascularly. perfusert rotte mage

rotte ble bedøvet og det isolerte, vascularly perfusert rottemagesekken ble fremstilt som tidligere beskrevet [20]. I korte trekk ble buken åpnet med et et midtlinjesnitt under sterile tilstand. Etter ligering av den abdominale aorta like over forgreningen av cøliaki arterien, ble en kanyle satt inn i cøliaki arterien via et snitt lagt på aorta. To ml av saltoppløsning inneholdende 600 U av heparin ble deretter injisert inn i den gastriske arterie via den arterielle kanyle. Deretter ble en varm (37 ° C) modifisert Krebs-Ringer-løsning boblet med en blanding av 95% O _{2 og 5% CO 2 ble innført. Den venøs Avløpet ble oppsamlet via en portal vene kanyle. Et polyetylenrør for magelumen Perfusatet ble innført i spiserøret og spissen plassert i den luminale delen av magen. Etterpå ble den pyloroduodenal krysset eksponert, og en annen polyetylenrør ble ført inn i magen gjennom et innsnitt i tolvfingertarmen, og deretter løst ved en ligatur rundt pylorus. Den perfusert rottemagesekken ble isolert og plassert i en varm (37 ° C) lite kammer med Krebs-Ringer-løsning.}

Behandling av den i isolert rottemage

Det isolerte magesekken ble vascularly perfusert med modifisert Krebs-Ringer løsning for 30 min stabilisering før de formelle eksperimenter. Perfusjonen ble så utført i rekkefølge med tre fluider og hver fluid i 20 minutter, totalt 60 minutter. Kontrollgruppen fikk: 1) Krebs-Ringer-oppløsning, 2) serum fra normale kontrollrotter, 3) Krebs-Ringer-løsning. AP gruppe fikk: 1) Krebs-Ringer løsning, 2) serum fra AP rotter, 3) Krebs-Ringer løsning. Gruppen av AP + HU fikk: 1) Krebs-Ringer løsning + HU210 (10 ^{7M), 2) AP serum + HU210 (10 7M), 3) Krebs-Ringer løsning. Og gruppen av AP + AM fikk: 1) Krebs-Ringer løsning + AM251 (10 7M), 2) AP serum + AM251 (10 7M), 3) Krebs-Ringer løsning. De gastriske lumen i den isolerte magesekken ble perfusert med normal saltløsning (pH 7,0). Alle perfusjon fluider fors ved en konstant hastighet på 1 ml /min ved hjelp av mikro-infusjonspumper. I mellomtiden ble oppløsningene og de isolerte organer ble holdt ved 37 ° C ved termostatstyrte enheter i hele eksperimentet. Prøvene fra vene avløpet eller fra magelumen avløpet ble oppsamlet ved slutten av hver 20 minutter, inn kjølt prøverør som ble umiddelbart lagret ved -80 ° C for etterfølgende måleeksperimenter.}

amylase og lipopolysakkarid Levels

analysene av amylase og lipopolysakkarid (LPS) nivåer i serum fra AP eller kontrollrotter ble utført basert på produsentens anbefalte prosedyrer (Cat No: C016 for amylase analysen kit, Jiancheng Technology, Nanjing, Kina, og. . Cat. No: CE32545 for LPS analysesett, kinesisk Horseshoe Crab Reagens Co Ltd, Xiamen, Kina)

Analyser for inflammatoriske mediatorer

nivåene av interleukin-6 (IL-6 ) og cytokin-indusert nøytrofil kjemotiltrekkende 1 (CINC1 /KC) i serum hos rotte og i den venøse avløpet fra det isolerte rottemagesekken ble kvantifisert ved anvendelse av rotte-IL-6 og KC ELISA-sett basert på produsentens anbefalte protokoller (Cat. no : F01731D for rotte interleukin 6 ELISA kits, Cat. nr: F01723D for rotte KC ELISA kits. H-Y biologisk Co Ltd, Shanghai, Kina). Den optiske tetthet ble bestemt ved 490 nm for absorpsjon i en enzym-bundet immunoabsorbans måling instrument (Microplate Reader Model Elx800; BioTek, Winooski, VT, USA). Hver prøve ble målt tre ganger, og målingen ble gjentatt i 6 rotte prøver av hver gruppe. Dataene i den venøse avløpet fra det isolerte rottemagesekken ble presentert med den forskjell av IL-6 eller KC nivå mellom perfusjon og avløpet, blir vurdert som frigivelsen av IL-6 og KC fra rottemagesekken.

gastrin og somatostatin Levels i dyr eksemplarer

gastrin og somatostatin nivåer i dyr serum og i isolerte magen venøse avløpet ble målt ved hjelp av kommersielt tilgjengelige gastrin og somatostatin radioimmunoanalysekits (gastrin Kit. Cat No. G01PJB , Nord Institute of Biologisk Technology, Beijing, Kina Somatostatin Kit:.. Nei Cat S111013, Second Military Medical University, Shanghai, Kina). Måleprosedyrer var basert på produsentens anbefalinger som beskrevet tidligere [21]. Som samme som ovenfor, ble hver prøve målt tre ganger, og målingen ble gjentatt i 6 rotte prøver av hver gruppe. Dataene i den venøse avløpet fra det isolerte rottemagesekken ble presentert med forskjellene i gastrin eller somatostatin nivå mellom perfusjon og avløpet, blir vurdert som frigjøring av gastrin og somatostatin fra rottemagesekken.

Pepsin og H + nivåer i dyr eksemplarer

analysene av pepsin nivå i rottemagesaften og i mage lumen avløpet fra det isolerte rotte magen ble utført ved hjelp av produsentens anbefalte protokoller (kat. nr A081- 1, Jiancheng Technology, Nanjing, Kina), som [H ^{+] i disse prøvene ble målt ved delta 320 pH-meter (Mettler-Toledo Inc. Zürich, Sveits) og målingene ble deretter omgjort til [H +].}

Solutions and Chemicals

HU210 [(6aR) -trans-3- (1,1-dimetylheptyl) -6a, 7,10,10a-tetrahydro-1-hydroksy -6,6-dimetyl-6H-dibenzo [b, d] pyran-9-metanol], AM251 [(N- (piperidin-1-yl) -5- (4-jodfenyl) -1- (2,4- diklorfenyl) - 4-metyl-1H-pyrazol-3-karboksamid)], ble anskaffet fra Tocris (Tocris-Bioscience, Ellisville, MO, USA). Begge kjemikaliene ble oppløst i et oppløsningsmiddel bestod av etanol, Tween80 og normalt saltvann (NS), volumforhold 01:01:18, til konsentrasjon 10 ^{-2M, ved 37 ° C ved hjelp av en ultrasonicator, og deretter ble ytterligere fortynnet i NS til 10 -5 M, og igjen til 10 7M med perfusjon væske rett før bruk på de vilkår som ble fastsatt i pilotstudie [22]. Den modifiserte Krebs-Ringer løsning var sammensatt av 117,5 mM NaCl, 4,7 mM KCl, 2,4 mM CaCl _{2, 1,1 mM MgCl 2, 1,1 mM NaH 2PO 4, 25 mM NaHCO 3, 11,1 mM glukose, 0,05% bovint serumalbumin, og 4% dekstran. Andre agenter, hvis kildene ikke ble nevnt ovenfor, ble kjøpt fra Sigma (Shanghai, Kina).}}

Data Analysis

Alle data er uttrykt som gjennomsnitt ± SEM. T-test eller enkelt faktor variansanalyse (ANOVA) ble utført ved hjelp av SPSS 13.0 programvare (SPSS Co Ltd, Shanghai, Kina). P-verdier for < 0,05 ble ansett som statistisk signifikant

Resultater

Resultater fra Experiment In Vivo

patologiske forandringer i bukspyttkjertelen av AP rotter. .

Under lysmikroskopi, var det tydelig at etter behandling med natriumtaurocholat, rotter utviklet alvorlig akutt pankreatitt med åpenbare ødem, vacuolization og alvorlige nekroser i akinærceller av bukspyttkjertelen vev. Og de histologiske score i AP rotter var mye høyere enn for kontrollrottene (Fig. 1). Kombinert med økt nivå av amylase-aktivitet i serum hos rotter AP, resultatene viste at AP modellen replikasjon hos rotter var vellykket.

patologiske forandringer i magen hos rotter AP.

I magen hos rotter med akutt pankreatitt, alvorlige patologiske forandringer fremkom, oppviser mucosal ødem, erosjon og blødninger som demonstrert ved både macrography (fig 2A og 2B.) og mikroskopiske undersøkelser (figur 2D.); og disse skadene vuvuzelaer hovedsakelig i mage antrum.

Genechip analyse.

Som vist i fig. 3A, er spredningsplott representert gener med to-ganger og høyere ekspresjon var i den øvre (rød) grense, mens gener med to-ganger og lavere ekspresjon i den nedre (grønn) grense; og de endrede gener nært knyttet til akutt pankreatitt ble vist i clustering mønstre (fig. 3B). Det var åpenbart at i uttrykket profil, gener med vesentlig forskjells uttrykk (≥2-fold, P < 0,05) er i hovedsak de som var i slekt med pancreatic fordøyelsesenzymer, inflammatoriske mediatorer og signaloverføringsveier, som ble skilt ut og oppført med deres Gene navn og Genebank ID i tabell 1.

endringer av IL-6, KC og LPS nivåer i AP serum.

Både IL-6 og KC nivåer i serum av AP rottene viste en signifikant økning sammenlignet med de fra kontrollrotter, med upsurges av 145% og 186%, henholdsvis (P < 0,05, fig. 4). En lignende, men mer fremtredende økning ble sett i den LPS-nivået i serum av AP rotter, med et oppsving så mye som 231 ganger av den for kontrollgruppen (P < 0,01, Fig. 4A)

endringer. av gastrin og somatostatin-nivåer i serumet til AP rotter.

i serum hos rotter AP, gastrin og somatostatin-nivåene økte signifikant sammenlignet med de fra kontrollrotter, med upsurges av 169% og 147%, henholdsvis ( i begge tilfeller, P < 0,05;. fig. 4B)

endringer av pepsin nivåer og [H ^{+] i magesaft fra AP rotter}

for å vurdere endringer av mage. eksokrin funksjon, analyser for pepsin nivå og [H ^{+] ble utført ved hjelp av magesaften av AP og kontrollrotter. Både pepsin nivå og [H +] i magesaften viste en tydelig økning i AP rotter sammenlignet med de fra kontrollrotter, med upsurges av 177% og 347%, henholdsvis (fig. 4C).}

uttrykk for CB1 og CB2 reseptorene i rotte bukspyttkjertel og mage.

uttrykket karakteristikker av CB1 og CB2 reseptorene i rotte bukspyttkjertel og mage ble undersøkt. Resultatene viste at prøver fra dyr i kontrollgruppen present svak immunhistokjemi farging for CB1 og CB2 reseptorene i bukspyttkjertelen, mens prøver fra AP rottene hadde utstilt økt uttrykk av CB1 og CB2 reseptorene. Hovedsakelig, de sterke positive tegn på brun farging gruppert i bukspyttkjertelen acini (Fig. 5 A pilspisser). Opp-forskrift av CB1 og CB2-reseptorer i de pankreatiske vev av AP-rotter ble videre demonstrert ved Western blot analyse og presentert i figur 5 B. liknende ekspresjonskarakteristikkene til CB1 og CB2-reseptorer ble også funnet i magesekken av AP rotter , som demonstrert av både immunhistokjemi farging og western blot-analyse (fig. 5 C og 5 D). De sterke positive tegn på brun farging var hovedsakelig i mageslimhinnen (Fig. 5 C, pilspisser).

Resultater fra Experiment In Vitro

Effekt av cannabinoider på mage patologiske forandringer og på gastrin og somatostatin utgivelsen.

for å undersøke effekten av CB1 reseptor agonist HU210 på endokrine funksjon av den isolerte rotte magen stimulert med AP rotte serum, undersøkte vi de endringer av gastrin og somatostatin nivåer i venøs utstrømning av magen, med eller uten innblanding av CB1 reseptor-agonist HU210 og antagonist AM251. Resultatene viste at sammenlignet med kontrollgruppen, rottemage behandlet med AP serum provosert en øket gastrin frigivelse (P 0,05), men en redusert somatostatin frigivelse (P 0,05), HU210 reversert gastrinreseptorene og somatostatin endringer indusert av serumet AP rotter (P < 0,05) (Fig. 6)., mens AM251 ikke utviser påviselig innvirkning på utgivelsen av de to hormonene

Effekter av cannabinoider på pepsin aktivitet og [H ^{+] i gastrisk lumen avløpet.}

virkningene av midlene HU210 og AM251 på pepsin aktivitet og [H ^{+] i den gastriske lumen avløpet fra det isolerte rottemagesekken ble presentert i fig. 7. Sammenlignet med motstykker i kontrollgruppen, AP serum stimulerte pepsin sekresjon og syreproduksjonen i det isolerte rottemagesekken (P 0,05). Intervensjonen av CB1 /2 reseptor agonist HU210 svekkede AP serum-induserte endringer av pepsin sekresjon og syreproduksjonen (P < 0,05)., Mens reseptor antagonist AM251 ikke klarte å stille tydelig effekt på disse to parametrene}

Effekter av cannabinoider på nivåene av IL-6 og KC i det venøse gastrisk avløpet fra rotter.

Etter at rottene mottok behandling av AP serum, IL-6 og KC nivåene betydelig forhøyet i den venøse avløpet fra isolert rotte magen; HU210 reverserte IL-6 og KC endringer indusert av serum fra AP-rotter (P 0,05)., Mens AM251 hadde ingen påvisbar effekt på nivået av cytokin og chemokin i den venøse avløpet (Fig. 8)

diskusjon

i klinikk, pasienter med akutt pankreatitt, spesielt med alvorlig akutt pankreatitt, ofte lider AGML eller stress sår, en vanlig komplikasjon av AP. De forårsakende faktorer for mageskade inkluderer, men er ikke begrenset til, stress fra den inflammatoriske stimuli som kan indusere aktivering av locus ceruleus-noradrenalin /sympatisk-adrenal medulla system og hypothalamus-hypofyse-adrenal cortex system. Den hemmelighetsfulle økninger av katekolaminer og glukokortikoid hormoner er de viktigste faktorene for kroppen stress, for disse komponentene provosere magesyre hyper-sekresjon og blod-flow giring som forårsake mage mucosal iskemi. Viktigere, nedgradert den iskemi sekvensielt evne gastrisk mucosa å avhende tilbake-diffuserende syre, noe som resulterer i en reduksjon av pH-verdien utført og aktivering av protease og etterfølgende sårdannelse [3], [4], [23]. Andre mekanismer, inkludert oksygen-avledede frie radikaler og noen usikre faktorer, også spiller roller i den gastrointestinale skaden forbundet med akutt pankreatitt.

Tidligere undersøkelser har funnet at AP plasma og AP-relaterte ascitesvæske inneholde en stor mengde giftige stoffer som er skadelig for kroppen [5], [6], [8], forårsaker skade av lever, nyre, lunge og sirkulasjonssystemet, og gastrointestinal dysfunksjon, etc. [24] - [28]. Vår tidligere studie oppdaget at bukspyttkjertelen akinærceller led kalsium overbelastning og redusert vitalitet, som blir inkubert med AP serum eller ascitesvæske [8]. I denne studien vi først indusert eksperimentelt AP hos rotter og viste induksjon av AP dyremodell var vellykket ved å demonstrere den patologiske forandring av pankreatisk morfologi og økning av pankreas-enzym i rotteserum etter induksjon. Ved aksept av modellen, fortsatte vi å etablere et genuttrykk profil for å illustrere endret genuttrykk av bukspyttkjertelen enzymer og inflammatoriske mediatorer, i et forsøk på å spore av understrekning gener som spilte mest kritiske roller i patogenesen av AGML knyttet til AP. Og resultatene fra AP og kontrollrotter profilert bruker genet chip analyse var i samsvar med de biokjemiske analyser. I tillegg har vi undersøkt om det var fordelaktige virkninger av cannabinoid-antagonister og /eller agonister i dyr med eksperimentelt akutt pankreatitt.

Basert på de ovennevnte resultater, vi opp spørsmålet om gastrisk sekresjon, både det endokrine og eksokrine funksjoner, vil bli endret i AP rotter. Det er kjent at gastrin stimulerer syreproduksjonen og pepsin sekresjon, som somatostatin motvirker virkningene av gastrin. Når gastrin eller somatostatin sekresjon ikke klarer å opprettholde en basis likevekt, overskuddet pepsin og syre frigivelse uforholdsmessig, noe som resulterer i skader og dysfunksjoner i magen i løpet av akutt pankreatitt. Som vist i denne rapporten, fant vi en betydelig hevet gastrin nivå i serum, og forhøyede pepsin og syrenivået i magesyren av AP rotter, som bekreftet at de endokrine og eksokrine funksjoner i magen ble forstyrret i AP modell.

Videre har de sirkulerende aktiverte proteolytiske enzymer, vasoaktive proteiner og endotoksiner spesifikke til patogenesen av akutt pankreatitt kan være ansvarlig for AGML også. Derfor utforsket vi effektene av serum fra AP rotter på det isolerte og perfusert rottemagesekken, slik at organet kan se bort fra den systemiske stress og virkninger. Det isolerte rottemage stimulert av serum fra AP rotte viste ikke bare øyet synlig mucosal skade, men også presentert en rekke biokjemiske abnormiteter, inkludert høyere nivåer av gastrin, cytokin IL-6, kjemokin KC, og lavere nivå av somatostatin i gastrisk venøs utstrømning, samt heves pepsin og syreproduksjonen i den gastriske lumen avløpet. Det er rimelig å slutte at det er en ubalanse mellom aggressive faktor og den beskyttende faktor av mageslimhinnen under akutt pankreatitt. Spesielt den økte gastrin, magesyre produksjon og pepsin i fellesskap spiller viktige roller i patogenesen av AGML, skjerpende skader i magen og utløser ondskapsfulle sykluser under akutt pankreatitt.

I løpet av det siste tiåret, en rekke publikasjoner har vist at de anti-inflammatoriske effekter av cannabinoider [29] - [32]. Flere studier har vist at cannabinoider hemmer mavesyresekresjon og reduserer de inflammatoriske cytokiner og andre mediator i plasma hos dyr med AP [33], [34]. Våre resultater ikke bare bekrefte disse tidligere funnene, men også vise at en kjemisk HU210, antagelig et cannabinoid-reseptor-agonist, tjene funksjoner på samme måte som cannabinoider for å redusere de inflammatoriske cytokiner og andre mediatorer, og dermed bedre symptomene på AP-assosierte AGML. Interessant, Resultatene fra denne studien viser at HU210 kan svekke den gastriske endokrine og eksokrine endringer i det isolerte rottemagesekken irritert av AP serum, reversere unormalt oppblåste nivåer av gastrin, magesyre og pepsin og dempe effekten av disse skadelige faktorer. På den andre siden, hever HU210 nivået av somatostatin som inhiberer sekresjonen av gastrin og magesyre, og dermed utøver beskyttende virkning på maveslimhinnen.

Resultatene av studien tilveie harmoniske koherens av gen-chip analyse og biokjemiske analysedata ved bruk av prøver fra dyremodell, noe som tyder på en ny mekanisme som utbruddet av AGML er, i det minste delvis, på grunn av gastrin, og mavesyre /somatostain ubalanse utløst av giftstoffer i AP serum; og cannabinoid agonist HU210 gjenoppretter likevekt, derav beskyttelse. Funnene støtter som HU210 er fordelaktig for behandling av akutt pankreatitt på grunn av sin anti-inflammasjon rolle og den hemmende virkning på AGML forbindelse med akutt pankreatitt. Resultatene at CB1 reseptoren antagonist AM251 ikke klarer å spille noen rolle i AP gastrisk skade støtte vår postulering, bekrefter de positive roller CB1 /2-reseptorer.

I en prospektiv eksperiment for å undersøke om de protonpumpehemmere (PPI) kan beskytte dyr med eksperimentelt akutt pankreatitt, vi administrert omeprazol (OME, ip, 40 mg /kg vekt), en representant PPI middel, til en gruppe av rotter på samme tid når AP-induksjon ble utført. De foreløpige resultatene viste at OME økte overlevelsen av AP rotter (data ikke vist). Imidlertid kan det være behov multisenterstudie for å belyse om PPIs er gunstig som en terapeutisk alternativ i akutt pankreatitt hos mennesker.

Tar alt ovenfor, resultatene fra vår eksperimentell undersøkelse avslører at betennelsesreaksjoner og forstyrrelser av mage sekresjon, både endokrine og eksokrine funksjoner, er utfallet av akutt pankreatitt, og de i sin tur bidrar til patogenesen av AGML. Videre tyder disse resultatene på at cannabinoid HU210, CB1 /2 reseptor agonist, har det terapeutiske potensiale for AGML i akutt pankreatitt ved å dempe betennelse og gjenopprette gastrin /somatostatin likevekt, og deretter redusere sekresjonen av magesyre og pepsin.

• PLoS ONE: Postoperativ kjemoradioterapi Kombinert med Epirubicin basert Triplet Kjemoterapi for lokalavansert Adenokarsinom i magen eller gastroøsofageal Junction
• PLoS ONE: Analyse av magen og tarmen Microbiomes i det østlige Oyster (Crassostrea virginica) fra Coastal Louisiana, USA